「식품의 기준 및 규격」개정 고시(안)

2008. 3. 19

식품의약품안전청

1. 개정이유

조미건어포류에 대한 황색포도상구균의 특성, 제조공정, 식품의 특성, 위해정도 등을 감안하여 정량규격으로 설정하고자 하며 농산물의 안전성 확보를 위한 농약잔류허용기준을 개정하고 동물용의약품 기준적용 대상을 명확히 하여 적용대상범위의 혼란을 방지하고 수족관물에 사용되는 소포제 및 이끼제거제 등의 사용물질에 대한 안전성을 확보하여 국민에게 안전한 식품을 제공하고자 함

2. 주요내용

가. 조미건어포류 중 황색포도상구균 정량규격 신설

〔제5. 28. 5) (3) 및 제5. 28. 6) (3), 제 10. 8. 1) 및 14) 〕

(1) 더 이상의 가공, 가열조리 없이 그대로 섭취하는 식품에 대해서는 불검출 기준을 정하고 있으나 균의 특성, 제조공정, 식품의 특성, 위해정도 등을 감안하여 정량규격으로 설정이 필요함

(2) 정량규격 g 당 100 이하로 신설됨

(3) 과학적인 위생관리

나. 싸이플루쓰린 등의 13종 농약 중 대상농산물 21종의 잔류허용기준 추가〔제2. 5. 10) (2)의 [별표 4] 및 제2. 5. 10) (3)의 [별표 5]〕

(1) 농약관리법에 따라 신규농약으로 사용등록이 되거나, 이미 사용등록이 이루어진 농약들에 대한 농산물중 농약잔류허용기준 설정이 필요함

(2) 싸이플루쓰린 등 농약 13종에 대해 잔류허용기준 설정

(3) 농약으로 인한 농산물의 안전성확보

다. 수족관물의 관리기준 개정〔제8. 2. 2-2. 1)〕

(1) 횟집에서 이끼제거제, 소포제 등 관상어용으로 사용되는 각종 화학약품의 무분별 사용으로 인해 관리 필요성이 있음

(2) 식품원료로 사용가능한 것이거나, 식품첨가물 중 이산화염소, 이산화규소 및 규소수지의 성분규격에 적합한 것으로 한정

(3) 횟집판매 수산물에 대한 안전성확보

라. 동물용의약품 기준적용 대상식품 명확화 〔제2. 5. 11). (1)〕

(1) 동물용의약품에 대한 불검출 기준의 적용범위를 명확히 하고자 함

(2) 식품 중 검출되어서는 아니 되는 물질의 적용범위를 축산물 및 동물성 수산물과 그 가공품으로 한정

(3) 합리적이고 과학적인 위생관리

마. 동물용의약품 잔류시험법 및 황색포도상구균 시험법 제․개정

〔제10. 15. 2) ～ 4)〕

(1) 동물용의약품에 대한 잔류허용기준 등 신설에 따른 시험법 신설

(2) 황색포도상구균 등 정량시험법 신설

(3) 과학적인 분석업무 수행

식품의약품안전청공고 제2008-49호

「식품위생법」 제7조 제1항의 규정에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2008-6호, 2008. 1. 16)을 다음과 같이 개정합니다.

2008년 3월 19일

식품의약품안전청장

「식품의 기준 및 규격」일부개정고시(안)

「식품의 기준 및 규격」을 다음과 같이 개정한다.

제2. 5. 10), (1) 농산물의 잔류농약 기준적용 중 “이 공전에서 잔류허용기준이 정하여지지 아니한 경우에는 아래에 따라 적용한다.”를 “농산물에 잔류한 농약에 대하여 「식품의 기준 및 규격」에 별도로 잔류허용기준을 정하지 않은 경우 다음 각 항의 기준을 순차적으로 적용한다.”로 하고 ①～③ 항을 다음과 같이 한다.

① 당해 농산물에 대한 CODEX 기준

② 「식품의 기준 및 규격」중〔별표 4〕 “농산물의 농약 잔류허용기준”의 그 농약 기준 중 당해농산물과 ④에 정한 동일 대분류군(단, 견과종실류, 과실류 및 채소류에 한해서는 소분류를 우선 적용)에 속한 농산물의 최저기준

③ 「식품의 기준 및 규격」중〔별표 4〕 “농산

물의 농약 잔류허용기준”의 그 농약 기준 중 최저기준

제2. 5. 10), (5) “우리나라의 농약잔류허용기준중 기준이 설정되어 있지 아니한 가공식품중 농약 검출시 적․부 판정에 대한 기준은 다음과 같이 한다.”를 “가공식품에 잔류한 농약에 대하여 「식품의 기준 및 규격」에 별도로 잔류허용기준을 정하지 않은 경우 다음 각 항의 기준을 순차적으로 적용한다.”로 한다.

제2. 5. 11), (1) 잔류동물용의약품의 기준 적용 중 ① 항을 다음과 같이 한다.

① 관련법령에서 안전성 및 유효성에 문제가 있는 것으로 확인되어 제조 또는 수입 품목허가를 하지 아니하는 동물용의약품(대사물질 포함)은 검출되어서는 아니 된다. 이에 해당되는 주요 물질은 아래와 같으며, 아래에 명시하지 않은 물질에 대해서도 관련법령에 근거하여 본 항을 적용할 수 있다.

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
1	니트로푸란{푸라졸리돈(Furazolidone), 푸랄타돈(Furaltadone), 니트로푸라존(Nitrofurazone), 니트로푸란토인(Nitrofurantoine), 니트로빈(Nitrovin) 등} 제제 및 대사물질*2
2	클로람페니콜(Chloramphenicol)
3	말라카이트 그린(Malachite green) 및 대사물질
4	디에틸스틸베스트롤(Diethylstilbestrol, DES)
5	디메트리다졸(Dimetridazole)
6	클렌부테롤(Clenbuterol)
7	반코마이신(Vancomycin)
8	클로르프로마진(Chlorpromazine)
9	티오우라실(Thiouracil)
10	콜치신(Colchicine)
11	피리메타민(Pyrimethamine)
12	메드록시프로게스테론 아세테이트(Medroxyprogesterone acetate, MPA)

*주1. 축산물 및 동물성 수산물과 그 가공식품에 한한다.

*주2. 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(Semicarbazide, SEM)는 비가열 축산물 및 동물성 수산물(단순절단 포함)에 한하여 적용한다.

제5. 21-6. 3) (2)을 다음과 같이 한다.

(2) 고추 또는 고춧가루 함유한 향신료조제품 제조시 홍국색소를 사용할 수 없으며 또한 시트리닌이 검출되어서는 아니된다.

제5. 28. 5) (3)을 다음과 같이 신설한다.

(3) 황색포도상구균 : 1 g 당 100 이하(다만, 조미건어포류에 한한다)

제5. 28. 6) (3)을 다음과 같이 신설한다.

(3) 황색포도상구균

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 14) 황색포도상구균 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

제8. 2. 2-2. 1) (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 수족관물은 위생적으로 관리되어야 한다.

제8. 2. 2-2. 1) (2)를 다음과 같이 신설한다.

(2) 다만, 불가피하게 거품제거, 정수 등의 목적으로 사용되는 물질은 식품원료로 사용가능한 것이거나, 식품첨가물 중 이산화염소, 이산화규소 및 규소수지의 성분규격에 적합한 것이어야 한다.

제 10. 8. 1) (2)에 를 다음과 같이 신설한다.

Baird-Parker Agar

Tryptone	10 g
Beef extract	5 g
Yeast extract	1 g
Sodium pyruvate	10 g
Glycine	12 g
Lithium Chloride 6H2O	5 g
Agar	20 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 48-50°C로 식힌 다음 50% Egg Yolk Tellurite 용액 50 mL을 첨가한다.

제 10. 8. 14) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)을 다음과 같이 한다.

14) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

(1) 정성시험법

① 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 10% NaCl을 첨가한 TSB배지(배지23)에 가한 후 35~37℃에서 16시간 증균 배양한다

② 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지14) 또는 Baird-Parker 한천평판배지(배지59)에 접종하여 37℃에서 16~24시간 배양한다. 배양결과 난황첨가만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락(만니톨분해)을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환(난황반응 양성)이 있는 집락 또는 Baird-Parker 한천평판배지에서 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.

③ 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지8)에 옮겨 37℃에서 18~24시간 배양한후 그람염색을  실시하여 포도상배열을 갖는 그람양성 구균을 확인한다. 포도상의 배열을 갖는 그람양성구균이 확인된 것은 coagulase시험을 실시한다. 토끼혈청(신선혈청은 5%, 건조혈청의 용액은 10%)을 가한 생리식염수를 멸균한 시험관에 0.5~1 mL씩 무균적으로 분주한다. 여기에 분리배지상의 집락에서 직접 또는 보통한청배지에서 순수배양시킨 균 1백금이를 접종하여 37℃에서 배양한다. 배양 후 3, 6, 24 시간의 각시간의 응고의 유무를 판정하여 어느 시간 후에도 응고 또는 섬유(fibrin)가 석출되는 것은 모두 coagulase 양성으로 하며 이상과 같이 확인된 것은 황색포도상구균 양성으로 판정한다. 시간에 있어서는 coagulase 양성균 및 균주접종의 음성대조군을 둔다.

(2) 정량시험법

① 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 멸균 인산 완충 희석액에 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 한다. 멸균 인산 완충 희석액을 사용하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 Baird-Parker 한천평판배지(배지59) 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35℃에서 45~48시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다.

② 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지에 접종하고 37℃에서 18～24시간 배양한 후 14) 황색포도상구균 (1)정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.

③ 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다.

제 10. 15. 2), (2), ① 중  스피라마이신(Spiramycin) 다음에  반코마이신(Vancomycin)을 다음과 같이 신설한다.

반코마이신(Vancomycin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료중의 반코마이신을 20% 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 반코마이신 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 증류수로 희석하여 사용한다.

㉤ 강 양이온교환 폴리머 칼럼 카트리지 : X-C(styrene-divinylbenzene polymer surfaced with a strong cation exchanger group) 또는 MCX(Mixed Mode Cation Exchange) 칼럼 카트리지(60 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

㉥ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 20% 아세토니트릴 15 mL를 가한 후 20분간 균질화한 후, 7,600 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 50 mL 원심 분리관에 옮긴다. 남은 액에 20% 아세토니트릴 10 mL를 가하여 위의 과정을 반복한 후 상층액을 합한다. 이 상층액에 헥산 10 mL를 가하고 10분간 균질화한 후, 7,600 G에서 원심분리하고 하층액을 취한다. 위의 과정을 반복하여 하층액을 합하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 3 mL와 증류수 3 mL 그리고 0.1% 개미산 3 mL로 활성화시킨 X-C 카트리지에 추출용액을 흡착시킨다. 증류수 3 mL로 카트리지를 세척하여 버리고 메탄올 : 수산화암모늄 (97 : 3) 혼합용액 3mL로 용출시킨다. 이 용출액을 50℃에서 질소로 농축시킨 시험관에 증류수 1 mL를 넣고 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 40℃

- 이동상 : 10% 아세토니트릴 (0.1% 초산 함유)

- 유속 : 0.2 mL/min

- 주입량 : 10 μL

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary Temperature : 320℃

- Collision gas : Ar

- Collision energy : 20 V

㉡ 정량

- 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 반코마이신은 m/z 1305 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 반코마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
반코마이신 (분자량 1449)	725	144, 1305

- 정량한계 : 0.001 mg/kg

제 10. 15. 2), (2), ① 중  밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)을 다음과 같이 신설한다.

밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 밤버마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 밤버마이신(플라보마이신) 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

㉥ 칼럼 카트리지 : C18 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	50	50
20.0	90	10
20.1	50	50
25.0	50	50

- 유속 : 0.2 mL/min

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(negative)

- Spray Voltage : 4.5 kV

- Capillary Temperature : 280℃

- Sheath gas : N2(50 psi)

- Auxiliary gas : N2(10 psi)

- SIM ion : m/z 1580

㉡ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 밤버마이신의 함량을 구한다.

제 10. 15. 2), (2), ① 중  아프라마이신(Apramycin), 콜리스틴(Colistin)을 다음과 같이 신설한다.

아프라마이신(Apramycin), 콜리스틴(Colistin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 아프라마이신 및 콜리스틴을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 콜리스틴 및 아프라마이신 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

㉥ 칼럼 카트리지 : Florisil 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

㉠ 유(乳)

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취한 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL를 가하여 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 혼합한 후 아세토니트릴 6 mL를 가하고 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 4 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉡ 알(卵)

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가하여 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉢ 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 아세톤을 2% 포함한 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C8(2.0 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
19.0	100	0

․ 유속 : 0.4 mL/min

- 질량분석기 조건

․ Ionization : ESI(positive)

․ Spray Voltage : 5 kV

․ Capillary Temperature : 280℃

․ Sheath gas : N2(50 psi)

․ Auxiliary gas : N2(10 psi)

․ SIM ion : m/z 540(아프라마이신), m/z 585.5(콜리스틴)

㉡ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아프라마이신 및 콜리스틴의 함량을 구한다.

제 10. 15. 2), (2), ① 기기분석법 중  엔라마이신(Enramycin)을 다음과 같이 신설한다.

엔라마이신(Enramycin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 엔라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 엔라마이신 표준품(엔두라시딘)을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

㉥ 강 양이온교환 폴리머 칼럼 카트리지 :

X-C(styrene-divinylbenzene polymer surfaced with a strong cation exchanger group) 또는 MCX(Mixed Mode Cation Exchange) 칼럼 카트리지(60 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가하여 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 1 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 칼럼 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 개미산 수용액 3 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 2 mL 및 5% 수산화암모늄 함유 메탄올 용액 2 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C8(2.0 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
18.0	100	0

- 유속 : 0.4 mL/min

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Spray Voltage : 5 kV

- Capillary Temperature : 280℃

- Sheath gas : N2(50 psi)

- Auxiliary gas : N2(10 psi)

- SIM ion : m/z 786

㉡ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 엔라마이신의 함량을 구한다.

제 10. 15. 3), (2) 중  클로르프로마진(Chlorpromazine)을 다음과 같이 신설한다.

클로르프로마진(Chlorpromazine)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 클로르프로마진을 에틸아세테이트와 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 클로르프로마진 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 강 양이온교환 칼럼 카트리지 : SPE용 SCX(benzenesulfonic acid) 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 에틸아세테이트 25 mL와 4 M 탄산칼륨용액 1 mL를 넣어 20분간 균질화한 후 6,000 G에서 10분간 원심분리하여 상등액을 농축 플라스크에 취한다. 에틸아세테이트 25 mL로 위 과정을 한 번 반복하여 앞의 상등액과 합하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 아세토니트릴 30 mL와 아세토니트릴포화 헥산 30 mL에 녹여 분액깔대기에 옮긴다. 강하게 진탕한 후 층이 분리될 때까지 정치하여 하층(아세토니트릴층)을 취하고 아세토니트릴 30 mL로 위 과정을 한 번 반복한 후 앞의 아세토니트릴층과 합한다. 이 용액을 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 메탄올 : 1.2% 메타인산 수용액(2 : 3) 혼합액 10 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 SCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후, 메탄올:0.1 M 제이인산칼륨용액(9:1) 혼합액 15 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상 : 아세토니트릴:개미산:물(500:1:500)

ⓓ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 330℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 20 V

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 m/z 86의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 클로르프로마진의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
클로르프로마진	319	58, 86

㉡ 정량한계 : 0.001 mg/kg

제 10. 15. 3), (2) 중  티오우라실(Thiouracil)을 다음과 같이 신설한다.

티오우라실(Thiouracil)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 티오우라실을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 2-thiouracil, 6-methyl-2-thiouracil, 6-propyl-2-thiouracil 및 6-phenyl-2-thiouracil 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 무수황산나트륨 함유 실리카 겔 칼럼 카트리지 : SPE용 Silica gel 카트리지(500 ㎎, 10 mL)에 무수황산나트륨 1 g을 가한 것 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL를 가한 후 5분간 균질화 한다.  균질화한 용액을 3,000 G에서 5분간 원심분리하고 상등액 중 5 mL를 취하여 시험관에 옮긴 후 이를 60℃ 이하에서 질소 농축한다. 디클로로메탄 0.5 mL에 충분히 녹인 후 5분간 초음파 추출한다. 이 추출액을 디클로로메탄 2 mL로 미리 활성화시킨 무수황산나트륨 함유 실리카 겔 칼럼 카트리지에 흡착시키고 디클로르메탄 0.5 mL로 추출액을 담았던 시험관에 가하여 초음파 추출하여 카트리지에 흡착시킨다. 추출액이 흡착된 카트리지를 디클로르메탄 2 mL로 씻어주고, 시험관에 다시 메탄올 : 디클로르메탄 (25 : 75) 혼합용액 2 mL를 가하고 1분간 초음파 추출한 용액으로 용출한다. 용출액을 60℃ 이하에서 질소 농축하고 메탄올 200 μL와 0.1% 개미산 400 μL를 가하여 충분히 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(4.6 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산

- 이동상 B : 개미산:아세토니트릴:메탄올(1:500:500)

ⓓ 유속 : 0.5 mL/min

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	93	7
6.0	93	7
20.0	20	80
23.0	20	80
25.0	93	7
28.0	93	7

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 330℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 21～25 V

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 각각의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 2-thiouracil, 6-methyl-2-thiouracil, 6-propyl-2-thiouracil 및 6-phenyl-2-thiouracil의 함량을 각각 구한다. 각각의 함량을 합하여 검체 중 티오우라실의 함량으로 한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
2-Thiouracil	129	84, 112
6-Methyl-2-thiouracil	143	126, 84
6-Propyl-2-thiouracil	171	154, 112
6-Phenyl-2-thiouracil	205	188, 146

㉡ 정량한계 : 0.025 mg/kg

제 10. 15. 3), (2) 중  피리메타민(Pyrimethamine)을 다음과 같이 신설한다.

피리메타민(Pyrimethamine)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 피리메타민을 메탄올로 추출하고 헥산으로 지방성분을 제거한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 피리메타민 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) : 500 mL 용량플라스크에 1 M 인산일수소칼륨(K2HPO4) 용액 6.6 mL와 1 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 용액 43.4 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

Ⓕ 강 양이온교환 칼럼 카트리지 : SPE용 SCX(benzenesulfonic acid) 카트리지(200 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓖ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 20 mL를 넣어 균질화한 후 6,000 G에서 10분간 원심분리하여 상등액을 농축플라스크에 취한다. 위 과정을 한 번 반복하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물을 메탄올 20 mL에 녹인 후 50 mL 원심분리관에 옮기고 헥산 20 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 하층(메탄올층)을 농축 플라스크에 취하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물을 0.2 M 인산완충액(pH 6.0) 10 mL에 녹여 미리 메탄올 2 mL, 0.5 M 염산용액 2 mL, 물 2 mL로 활성화시킨 SCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고 5% 메탄올용액 2 mL와 2% 아세트산을 포함하는 5% 메탄올용액 2 mL로 세척한다. 메탄올 2 mL와 2% 수산화암모늄을 포함하는 95% 메탄올용액 2 mL로 용출하고 용출액은 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(2.0 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상 : 아세토니트릴:개미산:물(400:1:600)

ⓓ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 350℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 25 V

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 m/z 233의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 피리메타민의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
피리메타민	249	177, 233

㉡ 정량한계 : 0.5 μg/kg

제 10. 15. 3), (2) 중  니트로빈(Nitrovin)을 다음과 같이 신설한다.

니트로빈(Nitrovin)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 니트로빈을 디클로로메탄과 메탄올과 암모니아수 혼합용액으로 추출하고 메탄올과 아세트산과 부틸아민 혼합용액으로 재분산한 후 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 니트로빈 표준품을 정밀히 달아 2% 암모니아수를 함유한 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 Ⓐ과정[디클로로메탄:메탄올:암모니아수(900:50:1) 혼합용액 20 mL를 가한 후 균질화하고 30분간 진탕한다. 이를 2,500 G에서 10분간 원심분리하고 하층을 취함]을 실시한다. Ⓐ과정을 반복하여 하층을 합친 후 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물을 이동상 1 mL에 녹인다. 이를 다시 4,000 G에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취하고 여기에 헥산 1 mL를 가하여 혼합한 후 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 하층액을 취한다. 이를 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 칼럼 : CN(4.6 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉡ 이동상 : 메탄올:물:아세트산:부틸아민(2500:50:10:1)

㉢ 유속 : 1.0 mL/min

㉣ 측정파장 : 365 nm

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 니트로빈의 함량을 구한다.

㉡ 정량한계 : 0.05 mg/kg

제 10. 15. 3), (2) 중  나라신(Narasin), 린코마이신(Lincomycin)을 다음과 같이 신설한다.

나라신(Narasin), 린코마이신(Lincomycin)

㉮ 정량법의 원리

시료 중 나라신 및 린코마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 나라신 및 린코마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓕ 칼럼 카트리지 : C18 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL)와 Florisil 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓖ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

균질화한 시료 2 g에 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화니트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 알(卵)

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓒ 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

- 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
7.0	10	90
13.0	10	90
14.0	100	0
22.0	100	0

ⓒ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Spray Voltage : 5 kV

ⓒ Capillary Temperature : 280℃

ⓓ Sheath gas : N2(50 psi)

ⓔ Auxiliary gas : N2(10 psi)

ⓕ SIM ion : m/z 407.2(린코마이신), m/z 787.5(나라신)

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 린코마이신 및 나라신의 함량을 구한다.

㉡ 나라신 정량한계 : 0.02 mg/kg(알)

제 10. 15. 3), (2) 중  라살로시드(Lasalocid), 아빌라마이신(Avilamycin)을 다음과 같이 신설한다.

라살로시드(Lasalocid), 아빌라마이신(Avilamycin)

㉮ 정량법의 원리

시료 중 라살로시드 및 아빌라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 라살로시드 A 및 아빌라마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 라살로시드 A는 아세토니트릴에 아빌라마이신은 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓕ 칼럼 카트리지 : C18 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓖ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

균질화한 시료 2 g에 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 알(卵)

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓒ 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

㉡ 이동상

ⓐ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

ⓑ 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	60	40
5.0	10	90
20.0	10	90
21.0	60	40
30.0	60	40

㉢ 유속 : 0.2 mL/min

㉣ 측정파장 : 254 nm(라살로시드 A), 210 nm(아빌라마이신)

Ⓑ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아빌라마이신 및 라살로시드 A의 함량을 각각 구한다. 이때 라살로시드 A의 함량을 라살로시드 함량으로 한다.

제 10. 15. 3), (2) 중  마두라마이신(Maduramycin), 샘두라마이신(Semduramicin), 티아물린(Tiamulin)을 다음과 같이 신설한다.

마두라마이신(Maduramycin), 샘두라마이신(Semduramicin), 티아물린(Tiamulin)

㉮ 정량법의 원리

시료 중 마두라마이신, 샘두라마이신 및 티아물린을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 마두라마이신, 샘두라마이신 및 티아물린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 칼럼 카트리지 : Florisil 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 알(卵)

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 알(卵)외 식품

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

- 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	80	20
15.0	0	100
17.0	0	100
18.0	80	20
25.0	80	20

ⓒ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Spray Voltage : 5 kV

ⓒ Capillary Temperature : 210℃

ⓓ Sheath gas : N2(10 psi)

ⓔ Auxiliary gas : N2(10 psi)

ⓕ SIM ion : m/z 934(마두라마이신), m/z 890(샘두라마이신),

m/z 494(티아물린)

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 마두라마이신, 샘두라마이신 및 티아물린의 함량을 구한다.

㉡ 정량한계

ⓐ 마두라마이신 : 0.002 mg/kg

ⓑ 샘두라마이신 : 0.005 mg/kg

제 10. 15. 3), (2) 중  엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)을 다음과 같이 신설한다.

엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀을 물에 녹인 후 산성화하고 아세토니트릴로 잔류되어 있는 엔로플록사신 및 시프로플록사신을 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 엔로플록사신 및 시프로플록사신 표준품을 각각 정밀히 달아 아세트니트릴로 녹여 100 ㎎/L농도가 되게 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산 아세토니트릴 용액에 희석하여 사용한다.

Ⓔ 황산나트륨 카트리지 : 0.45 μm 폴리프로필렌 필터가 장착된 튜브에 무수황산나트륨이 1.5 g 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

벌꿀 2.5 g을 50 mL 원심분리관(A)에 취하고 물 5 mL을 넣은 후 벌꿀이 모두 물에 녹을 때까지 흔들어 준다. 이 벌꿀 희석액에 아세토니트릴 10 mL와 아세트산 200 μL를 넣고 30초간 흔들어 준 후 염화나트륨 2 g을 넣고 다시 15초간 흔들어 준다. 이 혼합용액을 2,400 G에서 5분간 원심분리한 후 아세토니트릴층(상층액)을 황산나트륨 카트리지에 통과시켜 새로운 50 mL 원심분리관(B)에 모은다. 처음 벌꿀을 담았던 50 mL 원심분리관(A)에 다시 아세토니트릴 10 mL를 넣고 30초간 흔들어 준 후 2,400 G에서 5분간 원심분리하고 아세토니트릴층(상층액)을 황산나트륨 카트리지에 통과시켜 앞의 아세토니트릴과 합한다(원심분리관 B). 원심분리관 B의 아세토니트릴 용액을 질소농축한 후 0.1% 개미산 아세토니트릴 용액 2.5 mL에 녹여 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

- 이동상 B : 0.1% 개미산 아세토니트릴용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	85	15
5.0	85	15
8.0	20	80
10.0	20	80
10.1	85	15
20.0	85	15

ⓓ 유속 : 0.2 mL/min

ⓔ 주입량 : 10 μL

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 350℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 20 V

Ⓑ 정량

㉠ 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 엔로플록사신은 m/z 316 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 엔로플록사신의 함량을 구한다. 시프로플록사신은 m/z 288 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 시프로플록사신의 함량을 구한다. 앞서 구한 엔로플록사신과 시프로플록사신의 함량을 합하여 검체의 엔로플록사신 함량으로 한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
엔로플록사신	360	316, 342, 245
시프로플록사신	332	288, 314, 231

㉡ 정량한계 : 0.005 mg/kg

제 10. 15. 4)  중 “(1) 제라놀 및 디에틸스틸베스트롤”을 “(1) 제라놀(Zeranol)”로 하고 “(2) 디에틸스틸베스트롤(Diethylstilbestrol, DES)”을 다음과 같이 신설하며 기존의 “(1) 제라놀 및 디에틸스틸베스트롤” 내용 중 디에틸스틸베스트롤과 관련된 내용은 삭제한다.

(2) 디에틸스틸베스트롤(Diethylstilbestrol, DES)

① 정량법의 원리

시료중의 디에틸스틸베스트롤을 분해효소제를 사용하여 조직에서 분해한 후 냉동 및 카트리지를 이용하여 지방 및 단백질을 제거한 후 유도체화 하여 가스크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

② 측정기기

가스크로마토그래프/질량분석기

③ 시약 및 시액

㉮ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

㉯ 표준원액 : 디에틸스틸베스트롤 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉰ 표준용액 : 표준곡선을 작성하기 위하여 5가지 농도로 표준원액을 메탄올로 희석한 후 각각 시험관에 100 μL를 취하고 내부 표준물질 용액 100 μL를 가한 후 농축 및 건조시킨다. 시험관에 유도체화 용액 100 μL를 넣고 밀봉하여 60℃에서 20분간 반응시킨 후 원심분리하여 상층액을 각각의 표준용액으로 한다.

㉱ 내부 표준물질 표준원액 : 디에틸스틸베스트롤 D8 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉲ 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 100 μg/L가 되도록한다.

㉳ 분해효소제 : β□글루쿠로니다제/아릴설파타제

(β-glucuronidase/arylsulfatase)

㉴ 유도체화용액 : BSTFA(N, O-Bistrimethyl-trifluoroacetamide)와 TMSI (N-Trimethyl silylimidazole)의 혼합액 (98 : 2)

㉵ 칼럼 카트리지 : C8 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL)와 NH2 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

㉶ 기타시약 : 특급

④ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 증류수 5 mL를 가한 후 microwave로 30초간 추출한다. 이 추출액에 분해효소제 80 μL를 가하고 균질화시켜 인큐베이터에 넣고 52℃에서 15시간 이상 반응시킨다. 실온으로 냉각한 후 내부 표준물질 용액 100 μL와 메탄올 30 mL 가한 후 20분간 초음파 추출한다. 이 추출용액을 -20℃의 냉동고에 30분 이상 넣어두어 지질을 응고시킨 후 상층액을 취한다. 이 때 석출된 지방질을 거름종이로 제거하고 용기를 메탄올로 씻어 준다. 상층액과 세척액을 합한 후 40℃에서 감압 농축하여 메탄올을 휘발시킨다. 미리 메탄올 5 mL와 증류수 5 mL로 활성화시킨 C8 카트리지에 농축 후 남은 액을 10% 메탄올 수용액 15 mL에 녹여 흡착시킨다. 증류수 5 mL로 용기와 카트리지를 세척하여 버리고 메탄올 5 mL로 용출시킨다. 이 용출액을 60℃에서 질소로 농축시킨 후 에틸아세테이트 : 메탄올 (80 : 20) 혼합용액 2 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 포화에틸아세테이트 5 mL와 에틸아세테이트 : 메탄올 (80:20) 혼합용액 5 mL로 활성화시킨 NH2 카트리지에 추출액을 흡착시키고 에틸아세테이트 : 메탄올 (80 : 20) 혼합용액 6 mL로 용출시킨다. 이 용출액을 60℃에서 질소로 농축시키고 완전히 농축시킨 시험관에 유도체화 용액 100 μL를 넣고 밀봉한 후 60℃에서 20분간 반응시킨다. 반응액을 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 상층액을 취하여 시험용액으로 한다.

⑤ 시험조작

㉮ 측정조건

Ⓐ 기체크로마토그래프 조건

㉠ 칼  럼 : Ultra 2, DB 5(5%-phenyl-methylpolysiloxane)(50 m × 0.2 mm, 0.33㎛) 또는 이와 동등한 것

㉡ 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

㉢ 시료주입부 : Split(5:1)

㉣ 주입부온도 : 280℃

㉤ 오븐온도 : 초기온도 160℃에서 10℃/분 비율로 270℃까지 승온한 후 10분간 유지하고 5℃/분 비율로 315℃까지 승온한 후 10분간 유지

㉥ 시료주입량 : 1 μL

Ⓑ 질량분석기 조건

㉠ 이온 mode : EI

㉡ 이온에너지 : 70 eV

㉢ Interface 온도 : 350℃

㉣ SIM ion : m/z 412(디에틸스틸베스트롤),

m/z 420(디에틸스틸베스트롤 D8)

㉯ 정량

Ⓐ 유도체화한 시험용액 및 표준용액을 질량분석기에 주입한 후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여 내부표준물질 디에틸스틸베스트롤 D8의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합에 대한 디에틸스틸베스트롤의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합의 비를 구하여 검량선을 작성하여 검체 중 디에틸스틸베스트롤의 함량을 구한다.

※ 시험용액 중 디에틸스틸베스트롤의 함량

=

이온 412의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합

이온 420의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합

Ⓑ 정량한계 : 0.5 μg/kg

제 10. 15. 4) 중 (3) 메드록시프로게스테론 아세테이트(Medroxyprogesterone acetate, MPA)를 다음과 같이 신설한다.

(3) 메드록시프로게스테론 아세테이트(Medroxyprogesterone acetate, MPA)

① 정량법의 원리

시료중의 메드록시프로게스테론 아세테이트를 트리스완충액 및 디에틸 에테르로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

② 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

③ 시약 및 시액

㉮ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉯ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉰ 표준원액 : 메드록시프로게스테론 아세테이트 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉱ 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 사용한다.

㉲ 0.1 M 트리스완충용액(pH 9) : 0.1 M Tris(hydroxymethyl) amino-methane에 염산을 넣어 pH 9로 한다.

㉳ 기타시약 : 특급

④ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 1 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1 M 트리스완충용액(pH 9) 5 mL 가한후 5분간 초음파추출을 한다. 이 추출액에 디에틸 에테르 5 mL를 가하고 5분간 균질화한 후 3,000 G에서 5분간 원심분리하고 상층액을 농축수기에 옮긴다. 남은 액에 디에틸 에테르 5 mL를 가하여 위의 과정을 두 번 더 반복한다. 모아진 상층액을 45℃에서 감압농축한 후 메탄올 1 mL에 녹여 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

⑤ 시험조작

㉮ 측정조건

Ⓐ 액체크로마토그래프 조건

㉠ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉡ 칼럼온도 : 20℃

㉢ 이동상

- 이동상 A : 물

- 이동상 B : 5 mM ammonium formate/메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
11.0	20	80
12.0	20	80
13.0	80	20

㉣ 유속 : 0.6 mL/min

㉤ 주입량 : 5 μL

Ⓑ 질량분석기 조건

㉠ Ionization : ESI(positive)

㉡ Capillary Temperature : 350℃

㉢ Collision gas : Ar

㉣ Collision energy : 20 V

㉯ 정량

Ⓐ 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, m/z 327 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 메드록시프로게스테론 아세테이트 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
메드록시프로게스테론 아세테이트	387	327, 285

Ⓑ 정량한계 : 0.005 mg/kg

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)중 다음 항목을  신설한다.

시금치	0.1

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (81) 에세폰(Ethephon)중 다음 항목을 신설한다.

감	5.0

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (112) 카벤다짐(Carbendazim)중 다음 항목을 신설한다.

참나물	2.0

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (132) 클로르피리포스-메틸(Chlorpyrifos-methyl)중 다음 항목을 신설한다.

배추             0.2

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (227) 아세타미프리드(Acetamiprid)중 다음 항목을 신설한다.

차              3.0

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎	5.0

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (231) 클로르플루아주론(Chlorfluazuron)중 다음 항목을 신설한다.

시금치	1.0

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (236) 피리프록시펜(Pyriproxyfen)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추             0.7

피망             0.7

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)중 다음 항목을 각각 신설한다.

들깻잎            0.05

딸기              0.05

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (291) 족사마이드(Zoxamide)중 다음 항목을  신설한다.

부추             3.0

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (332) 크로치아니딘(Clothianidin)중 다음 항목을 각각 신설한다.

구기자(건조)       1.0

파                0.3

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (358) 이프로발리카브(Iprovalicarb)중 다음 항목을 신설한다.

부추             0.3

제2. 5. 10) (2), [별표 4], (391) 만디프로파미드(Mandipropamid)중 기타농산물 “0.1”을 “0.05”로 하고 다음 항목을 각각 신설한다.

감자             0.1

배추             2.0

토마토           0.3

포도             5.0

피망             5.0

제2. 5. 10) (3), [별표 5], (25) 티플루자마이드* (Thifluzamide)중 “홍삼”을 “인삼농축액”으로 한다.

제2. 5. 10) (3), [별표 5], (35)를 다음과 같이 신설한다.

(35) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

수삼             0.1

건삼              0.7

홍삼               0.5

인삼농축액         1.0

홍삼농축액         0.3

부 칙

① (시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

② (경과조치) 이 고시 시행 당시 접수되어 검사가 진행중인 사항에 대하여는 종전의 규정을 적용한다.

신․ 구조문 대비표

현   행

개   정 (안)

제 1. (생  략)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1.~4. (생  략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1)～9) (생  략)

10)농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 잔류농약 기준적용

이 공전에서 잔류허용기준이 정하여지지 아니한 경우에는 아래에 따라 적용한다.

① CODEX 기준을 적용

② ①항에 적용되지 아니한 경우, 농약이 검출된 농산물은 우리나라 농약 잔류허용기준에서 해당 농약 잔류기준 중 유사한 농산물(유사농산물은 ④ 농산물의 분류중 동일 대분류군에 속한 품목을 말한다. 다만, 견과종실류, 과실류 및 채소류에 한해서는 소분류를 우선 적용한다)의 최저기준을 적용

③ ①, ②항에 적용되지 아니한 경우, 검출된 농약은 우리나라 농약 잔류허용기준 중 해당 농약의 최저기준을 적용

④ (생  략)

(2) ～ (4) (생  략)

(5) 가공식품의 잔류농약 잠정기준적용

우리나라의 농약잔류허용기준중 기준이 설정되어 있지 아니한 가공식품중 농약 검출시 적․부 판정에 대한 기준은 다음과 같이 한다.

① (생  략)

② (생  략)

(6) ～ (7) (생  략)

11) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 잔류동물용의약품의 기준 적용

① 관련법령에서 --------- 관련법령에 근거하여 본 항을 적용할 수 있다.

번호	식품 중 검출되어서는 아니 되는 물질
1	니트로푸란{푸라졸리돈(Furazolidone), 푸랄타돈(Furaltadone), 니트로푸라존(Nitrofurazone), 니트로푸란토인(Nitrofurantoine), 니트로빈(Nitrovin) 등} 제제 및 대사물질
2	(생 략)
3	(생 략)
4	(생 략)
5	(생 략)
6	(생 략)
7	(생 략)
8	(생 략)
9	(생 략)
10	(생 략)
11	(생 략)
12	(생 략)

(2) (생  략)

12) ～ 15) (생  략)

6. (생  략)

제 3 ~ 제 4. (생략)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 21-5. (생 략)

21-6 향신료가공품

1) ～ 2) (생 략)

3) 제조․가공기준

(1) (생 략)

(2) 향신료조제품 제조시 홍국색소를 사용할 수 없으며 또한 시트리닌이 검출되어서는 아니된다.

21-7 ～ 27 (생 략)

28. 건포류

1) ~ 4) (생 략)

5) 규격

(1) ~ (2) (생 략)

<신  설>

6) 시험방법

(1) ~ (2) (생 략)

<신  설>

제 6. ~ 제 7. (생략)

제 8. 식품접객업소의 조리판매 등에 대한 기준 및 규격

1. (생  략)

2. 규격

2-1. (생략)

2.2. 접객용 음용수(식품접객업소 등에서 손님에게 제공되는 음용수), 수족관물, 조리용구 등

1) 관리기준

(1) 수족관물은 위생적으로 관리되어야 하고 거품제거, 정수 등의 목적으로 사용되는 물질은 식품 및 식품첨가물의 기준 및 규격에 적합한 것이어야 한다.

<신 설>

2) ~ 3) (생 략)

제 10. 일반시험법

1～7 (생 략)

8. 미생물시험법

1) 일반사항

(1) (생 략)

(2) 배지

①~ (생 략)

<신   설>

2)~13) (생 략)

14) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

<신  설>

(1) 증균배양

(생 략)

(2) 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지14)에 접종하여 37℃에서 16~24시간 배양한다. 배양결과 난황첨가 만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락(만니톨분해)을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환(난황반응 양성)이 있는 집락은 확인시험을 실시한다.

(3) 확인시험

(생 략)

<신  설>

<신  설>

9. ~ 14. (생  략)

15. 식품중의 잔류물질시험법

1) (생  략)

2) 항생물질

(1) (생  략)

(2) 정량시험법

① 기기분석법

㉮～(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

② (생  략)

3) 합성항균제

(1) (생  략)

(2) 정량시험법

①~ (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

4) 성장호르몬제

(1) 제라놀 및 디에틸스틸베스트롤

① 정량법의 원리

이 방법은 -------제라놀과 디에틸스틸베스트롤을 측정한다.

② (생  략)

③ 시약, 시액

㉮~㉰ (생  략)

㉱ 내부표준물질

Ⓐ (생  략)

Ⓑ D8디에틸스틸베스트롤(Diethyl□1,1,1'□1'□d4□stilbestrol□3,3',5,5'□d4, D8Diethylstilbestrol：D8DES)：디에틸스틸베스트롤(Diethylstilbestrol：DES)의 내부표준물질

㉲ 표준원액：제라놀, 제랄란 및 탈레라놀(Taleranol) 각 20 mg, 디에틸스틸베스트롤 및 D8디에틸스틸베스트롤 각 10 mg을 ------ 메탄올에 녹인다(이 용액 각 1 mL는 제라놀, 제랄란 및 탈레라놀 200 μg, DES 및 D8 DES는 100 μg에 상당).

㉳ 표준용액：표준원액의 제라놀, 제랄란, DES 및 D8 DES 각각 ------ 희석한다(이 용액 1 mL는 제라놀 및 제랄란 0.2 μg, DES 및 D8 DES 0.1 μg, 탈레라놀 0.4 μg에 상당).

㉴ DES□MG표준원액：디에틸스틸베스트롤모노글루쿠로나이드(Diethylstilbestrol mono glucuronide DES□MG) L 앰플(DES 1 mg 상당량)을 100 mL 메스플라스크에 넣고 메탄올로 녹인다(이 용액 1 mL는 DES 10 μg에 상당).

㉵ DES□MG 표준용액：표준원액 1 mL를 100 mL 메스플라스크에 취하여 메탄올로 희석한다(이 용액 1 mL는 DES 0.1 μg에 상당).

㉶  (생  략)

④ 시험조작

㉮ 추출

분쇄한 시료 -----(Control sample：제라놀과 디에틸스틸베스트롤이 함유되지 않은 시료) 5±0.1 g을 달아 각각 50 mL 폴리프로필렌 원심관에 넣고 내부표준물질인 제랄란과 D8 DES 또는 DES, Zeranol 표준용액 각각 50 μL를 넣는다. 따로 4개의 대조시료에 제라놀, 디에틸스틸베스트롤 모노글루쿠로나이드 및 탈레라놀 표준용액을 아래의 표와 같이 0, 25.0, 50.0, 100.0 μL를 첨가한다.

표준용액 첨가량(μL)	농도(ppb)
	제라놀	디에틸스틸베스트롤	탈레라놀
0.0 25.0 50.0 100.0	0.00 1.00 2.00 4.00	0.00 0.50 1.00 2.00	0.00 2.00 4.00 8.00

각 시료에 --------  .

㉯ 정제

위의 액을 --------다시 메탄올 2.5～3.0 mL를 넣어 제라놀과 디에틸스틸베스트롤을 회수용수기에 용출시킨다. ----------.

㉰  (생  략)

㉱ 정성 및 정량 시험

위의 잔류물을 ----- 주입한다.

위 조건에서의 머무름시간 및 특정이온

물질	머무름시간	물질	특정이온
cis 디에틸스틸베스트롤 trans 디에틸스틸베스트롤 제랄란 제라놀 탈레라놀	7.3 8.0 10.3 12.6 12.8	제랄란 제라놀 D8DES 디에틸스틸베스트롤 탈레라놀	435 538, 523, 433, 379 420 412, 397, 383 538, 523, 433, 379

㉲ 계산

Ⓐ  (생  략)

Ⓑ ---------

디에틸스틸베스트롤 ＝ 이온 412의 Cis 및 Trans 면적 또는 높이의 합/이온 420의 Cis 및 Trans 면적 또는 높이의 합

Ⓒ 다음의 회귀방정식을 사용하여 제라놀 또는 디에틸스틸베스트롤의 이온농도 대 제라놀 또는 디에틸스틸베스트롤의 이온비에 대한 표준곡선을 작성한다.

---------

Ⓓ 기울기와 ------ 제라놀 및 디에틸스틸베스트롤의 농도를 계산한다.

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

제 11. ~ 제 12. (생략)

[별표 1] ~ [별표 3] (생 략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ～ (66) (생 략)

(67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

--- 호박 2.0

(68) ～ (80) (생 략)

(81) 에세폰(Ethephon)

--- 호박 0.1

(82) ～ (111) (생 략)

(112) 카벤다짐(Carbendazim) (생 략)

--- 호프 50.0

(113) ~ (131) (생 략)

(132) 클로르피리포스-메틸 (Chlorpyrifos-methyl)

--- 옥수수 6.0

(133) ～ (226) (생 략)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

--- 피망 5.0

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

--- 호박 0.1

(229) ～ (230) (생 략)

(231) 클로르플루아주론(Chlorfluazuron)

--- 피망  0.5

(232) ～ (235) (생 략)

(236) 피리프록시펜(Pyriproxyfen)

--- 토마토 2.0

(237) ～ (248) (생 략)

(249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

--- 호박 0.05

(250) ～ (290) (생 략)

(291) 족사마이드(Zoxamide)

--- 피망 0.3

(292) ～ (331) (생 략)

(332) 크로치아니딘(Clothianidin)

--- 피망 2.0

(333) ～ (357) (생 략)

(358) 이프로발리카브(Iprovalicarb)

--- 포도 2.0

(359) ～ (390) (생 략)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

--- 고추 0.5, 기타농산물 0.1

(392) ～ (398) (생 략)

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ～ (24) (생 략)

(25) 티플루자마이드* (Thifluzamide)

수삼 1.0, 홍삼 2.0 ---

(26) ～ (34) (생 략)

<신  설>

[별표 6] ~ [별표 8] (생 략)

제 1.  (현행과 같음)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1.~4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1)～9) (현행과 같음)

10) 농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 잔류농약 기준적용

농산물에 잔류한 농약에 대하여 「식품의 기준 및 규격」에 별도로 잔류허용기준을 정하지 않은 경우 다음 각 항의 기준을 순차적으로 적용한다.

① 당해 농산물에 대한 CODEX 기준

② 「식품의 기준 및 규격」중〔별표 4〕 “농산물의 농약 잔류허용기준”의 그 농약 기준 중  당해농산물과 ④에 정한 동일 대분류군(단, 견과종실류, 과실류 및 채소류에 한해서는 소분류를 우선 적용)에 속한 농산물의 최저기준

③ 「식품의 기준 및 규격」중〔별표 4〕 “농산물의 농약 잔류허용기준”의 그 농약 기준 중 최저기준

④ (현행과 같음)

(2) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 가공식품의 잔류농약 잠정기준적용

가공식품에 잔류한 농약에 대하여 「식품의 기준 및 규격」에 별도로 잔류허용기준을 정하지 않은 경우 다음 각 항의 기준을 순차적으로 적용한다.

① (현행과 같음)

② (현행과 같음)

(6) ～ (7) (생  략)

11) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 잔류동물용의약품의 기준 적용

① 관련법령에서 --------- 관련법령에 근거하여 본 항을 적용할 수 있다.

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
1	니트로푸란{푸라졸리돈(Furazolidone), 푸랄타돈(Furaltadone), 니트로푸라존(Nitrofurazone), 니트로푸란토인(Nitrofurantoine), 니트로빈(Nitrovin) 등} 제제 및 대사물질*2
2	(현행과 같음)
3	(현행과 같음)
4	(현행과 같음)
5	(현행과 같음)
6	(현행과 같음)
7	(현행과 같음)
8	(현행과 같음)
9	(현행과 같음)
10	(현행과 같음)
11	(현행과 같음)
12	(현행과 같음)

*주1. 축산물 및 동물성 수산물과  그 가공식품에 한한다.

*주2. 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(Semicarbazide, SEM)는 비가열 축산물 및 동물성 수산물에 한하여 적용한다.

(2) (현행과 같음)

12) ～ 15) (현행과 같음)

6. (현행과 같음)

제 3 ~ 제 4. (현행과 같음)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 22-5. (현행과 같음)

21-6 향신료가공품

1) ～ 2) (생 략)

3) 제조․가공기준

(1) (생 략)

(2) 고추 또는 고춧가루 함유한 향신료조제품 제조시 홍국색소를 사용할 수 없으며 또한 시트리닌이 검출되어서는 아니된다.

21-7 ～ 27 (현행과 같음)

28. 건포류

1) ~ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ~ (2) (현행과 같음)

(3) 황색포도상구균 : 1 g 당 100 이하  (다만, 조미건어포류에 한한다)

6) 시험방법

(1) ~ (2) (현행과 같음)

(3) 황색포도상구균

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 14) 황색포도상구균 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

제 6. ~ 제 7. (현행과 같음)

제 8. 식품접객업소의 조리판매 등에 대한 기준 및 규격

1. (현행과 같음)

2. 규격

2-1. (현행과 같음)

2.2. 접객용 음용수(식품접객업소 등에서 손님에게 제공되는 음용수), 수족관물, 조리용구 등

1) 관리기준

(1) 수족관물은 위생적으로 관리되어야 한다.

(2) 다만, 불가피하게 거품제거, 정수 등의 목적으로 사용되는 물질은 식품원료로 사용가능한 것이거나, 식품첨가물 중 이산화염소, 이산화규소 및 규소수지의 성분규격에 적합한 것이어야 한다.

2) ~ 3) (현행과 같음)

제 10. 일반시험법

1～7 (현행과 같음)

8. 미생물시험법

1) 일반사항

(1) (현행과 같음)

(2) 배지

①~ (현행과 같음)

Baird-Parker Agar

Tryptone	10 g
Beef extract	5 g
Yeast extract	1 g
Sodium pyruvate	10 g
Glycine	12 g
Lithium Chloride 6H2O	5 g
Agar	20 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 48-50°C로 식힌 다음 50% Egg Yolk Tellurite 용액 50 mL을 첨가한다.

2)~13) (현행과 같음)

14)황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

(1) 정성시험법

① 증균배양

(현행과 같음)

② 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지14) 또는 Baird- Parker 한천평판배지(배지59)에 접종하여 37℃에서 16~24시간 배양한다. 배양결과 난황첨가 만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락(만니톨분해)을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환(난황반응 양성)이 있는 집락 또는 Baird-Parker 한천평판배지에서 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.

③ 확인시험

(현행과 같음)

(2) 정량시험법

① 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 멸균 인산 완충 희석액에 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 한다. 멸균 인산 완충 희석액을 사용하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 Baird-Parker 한천평판배지(배지59) 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35℃에서 45~48시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다.

② 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지에 접종하고 37℃에서 18～24시간 배양한 후 14) 황색포도상구균 (1) 정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.

③ 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다.

9. ~ 14. (현행과 같음)

15. 식품중의 잔류물질시험법

1) (현행과 같음)

2) 항생물질

(1) (현행과 같음)

(2) 정량시험법

① 기기분석법

㉮～ (현행과 같음)

반코마이신(Vancomycin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료중의 반코마이신을 20% 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 반코마이신 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 증류수로 희석하여 사용한다.

㉤ 강 양이온교환 폴리머 칼럼 카트리지 : X-C(styrene-divinylbenzene polymer surfaced with a strong cation exchanger group) 또는 MCX(Mixed Mode Cation Exchange) 칼럼 카트리지(60 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

㉥ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 20% 아세토니트릴 15 mL를 가한 후 20분간 균질화한 후, 7,600 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 50 mL 원심 분리관에 옮긴다. 남은 액에 20% 아세토니트릴 10 mL를 가하여 위의 과정을 반복한 후 상층액을 합한다. 이 상층액에 헥산 10 mL를 가하고 10분간 균질화한 후, 7,600 G에서 원심분리하고 하층액을 취한다. 위의 과정을 반복하여 하층액을 합하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 3 mL와 증류수 3 mL 그리고 0.1% 개미산 3 mL로 활성화시킨 X-C 카트리지에 추출용액을 흡착시킨다. 증류수 3 mL로 카트리지를 세척하여 버리고 메탄올 : 수산화암모늄 (97 : 3) 혼합용액 3mL로 용출시킨다. 이 용출액을 50℃에서 질소로 농축시킨 시험관에 증류수 1 mL를 넣고 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 40℃

- 이동상 : 10% 아세토니트릴 (0.1% 초산 함유)

- 유속 : 0.2 mL/min

- 주입량 : 10 μL

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary Temperature : 320℃

- Collision gas : Ar

- Collision energy : 20 V

㉡ 정량

- 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 반코마이신은 m/z 1305 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 반코마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
반코마이신 (분자량 1449)	725	144, 1305

- 정량한계 : 0.001 mg/kg

밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 밤버마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 밤버마이신(플라보마이신) 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

㉥ 칼럼 카트리지 : C18 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	50	50
20.0	90	10
20.1	50	50
25.0	50	50

- 유속 : 0.2 mL/min

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(negative)

- Spray Voltage : 4.5 kV

- Capillary Temperature : 280℃

- Sheath gas : N2(50 psi)

- Auxiliary gas : N2(10 psi)

- SIM ion : m/z 1580

㉡ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 밤버마이신의 함량을 구한다.

아프라마이신(Apramycin), 콜리스틴(Colistin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 아프라마이신 및 콜리스틴을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 콜리스틴 및 아프라마이신 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

㉥ 칼럼 카트리지 : Florisil 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

㉠ 유(乳)

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취한 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL를 가하여 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 혼합한 후 아세토니트릴 6 mL를 가하고 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 4 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉡ 알(卵)

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가하여 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉢ 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 아세톤을 2% 포함한 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C8(2.0 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
19.0	100	0

․ 유속 : 0.4 mL/min

- 질량분석기 조건

․ Ionization : ESI(positive)

․ Spray Voltage : 5 kV

․ Capillary Temperature : 280℃

․ Sheath gas : N2(50 psi)

․ Auxiliary gas : N2(10 psi)

․ SIM ion : m/z 540(아프라마이신), m/z 585.5(콜리스틴)

㉡ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아프라마이신 및 콜리스틴의 함량을 구한다.

엔라마이신(Enramycin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 엔라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 엔라마이신 표준품(엔두라시딘)을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

㉥ 강 양이온교환 폴리머 칼럼 카트리지 :

X-C(styrene-divinylbenzene polymer surfaced with a strong cation exchanger group) 또는 MCX(Mixed Mode Cation Exchange) 칼럼 카트리지(60 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가하여 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 1 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 칼럼 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 개미산 수용액 3 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 2 mL 및 5% 수산화암모늄 함유 메탄올 용액 2 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C8(2.0 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
18.0	100	0

- 유속 : 0.4 mL/min

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Spray Voltage : 5 kV

- Capillary Temperature : 280℃

- Sheath gas : N2(50 psi)

- Auxiliary gas : N2(10 psi)

- SIM ion : m/z 786

㉡ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 엔라마이신의 함량을 구한다.

② (현행과 같음)

3) 합성항균제

(1) (현행과 같음)

(2) 정량시험법

①~ (현행과 같음)

클로르프로마진(Chlorpromazine)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 클로르프로마진을 에틸아세테이트와 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 클로르프로마진 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 강 양이온교환 칼럼 카트리지 : SPE용 SCX(benzenesulfonic acid) 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 에틸아세테이트 25 mL와 4 M 탄산칼륨용액 1 mL를 넣어 20분간 균질화한 후 6,000 G에서 10분간 원심분리하여 상등액을 농축 플라스크에 취한다. 에틸아세테이트 25 mL로 위 과정을 한 번 반복하여 앞의 상등액과 합하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 아세토니트릴 30 mL와 아세토니트릴포화 헥산 30 mL에 녹여 분액깔대기에 옮긴다. 강하게 진탕한 후 층이 분리될 때까지 정치하여 하층(아세토니트릴층)을 취하고 아세토니트릴 30 mL로 위 과정을 한 번 반복한 후 앞의 아세토니트릴층과 합한다. 이 용액을 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 메탄올 : 1.2% 메타인산 수용액(2 : 3) 혼합액 10 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 SCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후, 메탄올:0.1 M 제이인산칼륨용액(9:1) 혼합액 15 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상 : 아세토니트릴:개미산:물(500:1:500)

ⓓ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 330℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 20 V

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 m/z 86의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 클로르프로마진의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
클로르프로마진	319	58, 86

㉡ 정량한계 : 0.001 mg/kg

티오우라실(Thiouracil)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 티오우라실을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 2-thiouracil, 6-methyl-2- thiouracil, 6-propyl-2-thiouracil 및 6-phenyl-2-thiouracil 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 무수황산나트륨 함유 실리카 겔 칼럼 카트리지 : SPE용 Silica gel 카트리지(500 ㎎, 10 mL)에 무수황산나트륨 1 g을 가한 것 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL를 가한 후 5분간 균질화 한다.  균질화한 용액을 3,000 G에서 5분간 원심분리하고 상등액 중 5 mL를 취하여 시험관에 옮긴 후 이를 60℃ 이하에서 질소 농축한다. 디클로로메탄 0.5 mL에 충분히 녹인 후 5분간 초음파 추출한다. 이 추출액을 디클로로메탄 2 mL로 미리 활성화시킨 무수황산나트륨 함유 실리카 겔 칼럼 카트리지에 흡착시키고 디클로르메탄 0.5 mL로 추출액을 담았던 시험관에 가하여 초음파 추출하여 카트리지에 흡착시킨다. 추출액이 흡착된 카트리지를 디클로르메탄 2 mL로 씻어주고, 시험관에 다시 메탄올 : 디클로르메탄 (25 : 75) 혼합용액 2 mL를 가하고 1분간 초음파 추출한 용액으로 용출한다. 용출액을 60℃ 이하에서 질소 농축하고 메탄올 200 μL와 0.1% 개미산 400 μL를 가하여 충분히 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(4.6 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산

- 이동상 B : 개미산:아세토니트릴:메탄올(1:500:500)

ⓓ 유속 : 0.5 mL/min

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	93	7
6.0	93	7
20.0	20	80
23.0	20	80
25.0	93	7
28.0	93	7

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 330℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 21～25 V

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 각각의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 2-thiouracil, 6-methyl-2-thiouracil, 6-propyl-2-thiouracil 및 6-phenyl-2-thiouracil의 함량을 각각 구한다. 각각의 함량을 합하여 검체 중 티오우라실의 함량으로 한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
2-Thiouracil	129	84, 112
6-Methyl-2-thiouracil	143	126, 84
6-Propyl-2-thiouracil	171	154, 112
6-Phenyl-2-thiouracil	205	188, 146

㉡ 정량한계 : 0.025 mg/kg

피리메타민(Pyrimethamine)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 피리메타민을 메탄올로 추출하고 헥산으로 지방성분을 제거한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 피리메타민 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) : 500 mL 용량플라스크에 1 M 인산일수소칼륨(K2HPO4) 용액 6.6 mL와 1 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 용액 43.4 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

Ⓕ 강 양이온교환 칼럼 카트리지 : SPE용 SCX(benzenesulfonic acid) 카트리지(200 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓖ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 20 mL를 넣어 균질화한 후 6,000 G에서 10분간 원심분리하여 상등액을 농축플라스크에 취한다. 위 과정을 한 번 반복하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물을 메탄올 20 mL에 녹인 후 50 mL 원심분리관에 옮기고 헥산 20 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 하층(메탄올층)을 농축 플라스크에 취하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물을 0.2 M 인산완충액(pH 6.0) 10 mL에 녹여 미리 메탄올 2 mL, 0.5 M 염산용액 2 mL, 물 2 mL로 활성화시킨 SCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고 5% 메탄올용액 2 mL와 2% 아세트산을 포함하는 5% 메탄올용액 2 mL로 세척한다. 메탄올 2 mL와 2% 수산화암모늄을 포함하는 95% 메탄올용액 2 mL로 용출하고 용출액은 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(2.0 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상 : 아세토니트릴:개미산:물(400:1:600)

ⓓ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 350℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 25 V

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 m/z 233의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 피리메타민의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
피리메타민	249	177, 233

㉡ 정량한계 : 0.5 μg/kg

니트로빈(Nitrovin)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 니트로빈을 디클로로메탄과 메탄올과 암모니아수 혼합용액으로 추출하고 메탄올과 아세트산과 부틸아민 혼합용액으로 재분산한 후 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 니트로빈 표준품을 정밀히 달아 2% 암모니아수를 함유한 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 Ⓐ과정[디클로로메탄:메탄올:암모니아수(900:50:1) 혼합용액 20 mL를 가한 후 균질화하고 30분간 진탕한다. 이를 2,500 G에서 10분간 원심분리하고 하층을 취함]을 실시한다. Ⓐ과정을 반복하여 하층을 합친 후 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물을 이동상 1 mL에 녹인다. 이를 다시 4,000 G에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취하고 여기에 헥산 1 mL를 가하여 혼합한 후 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 하층액을 취한다. 이를 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 칼럼 : CN(4.6 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉡ 이동상 : 메탄올:물:아세트산:부틸아민(2500:50:10:1)

㉢ 유속 : 1.0 mL/min

㉣ 측정파장 : 365 nm

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 니트로빈의 함량을 구한다.

㉡ 정량한계 : 0.05 mg/kg

나라신(Narasin), 린코마이신(Lincomycin)

㉮ 정량법의 원리

시료 중 나라신 및 린코마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 나라신 및 린코마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓕ 칼럼 카트리지 : C18 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL)와 Florisil 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓖ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

균질화한 시료 2 g에 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화니트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 알(卵)

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓒ 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

- 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
7.0	10	90
13.0	10	90
14.0	100	0
22.0	100	0

ⓒ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Spray Voltage : 5 kV

ⓒ Capillary Temperature : 280℃

ⓓ Sheath gas : N2(50 psi)

ⓔ Auxiliary gas : N2(10 psi)

ⓕ SIM ion : m/z 407.2(린코마이신), m/z 787.5(나라신)

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 린코마이신 및 나라신의 함량을 구한다.

㉡ 나라신 정량한계 : 0.02 mg/kg(알)

라살로시드(Lasalocid), 아빌라마이신(Avilamycin)

㉮ 정량법의 원리

시료 중 라살로시드 및 아빌라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 라살로시드 A 및 아빌라마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 라살로시드 A는 아세토니트릴에 아빌라마이신은 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) : 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓕ 칼럼 카트리지 : C18 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓖ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

균질화한 시료 2 g에 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 알(卵)

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓒ 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

㉡ 이동상

ⓐ 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

ⓑ 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	60	40
5.0	10	90
20.0	10	90
21.0	60	40
30.0	60	40

㉢ 유속 : 0.2 mL/min

㉣ 측정파장 : 254 nm(라살로시드 A), 210 nm(아빌라마이신)

Ⓑ 정량

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아빌라마이신 및 라살로시드 A의 함량을 각각 구한다. 이때 라살로시드 A의 함량을 라살로시드 함량으로 한다.

마두라마이신(Maduramycin), 샘두라마이신(Semduramicin), 티아물린(Tiamulin)

㉮ 정량법의 원리

시료 중 마두라마이신, 샘두라마이신 및 티아물린을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 마두라마이신, 샘두라마이신 및 티아물린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 칼럼 카트리지 : Florisil 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 알(卵)

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 알(卵)외 식품

균질화한 시료 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 Florisil 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

- 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	80	20
15.0	0	100
17.0	0	100
18.0	80	20
25.0	80	20

ⓒ 유속 : 0.2 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Spray Voltage : 5 kV

ⓒ Capillary Temperature : 210℃

ⓓ Sheath gas : N2(10 psi)

ⓔ Auxiliary gas : N2(10 psi)

ⓕ SIM ion : m/z 934(마두라마이신), m/z 890(샘두라마이신), m/z 494(티아물린)

Ⓑ 정량

㉠ 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 마두라마이신, 샘두라마이신 및 티아물린의 함량을 구한다.

㉡ 정량한계

ⓐ 마두라마이신 : 0.002 mg/kg

ⓑ 샘두라마이신 : 0.005 mg/kg

엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀을 물에 녹인 후 산성화하고 아세토니트릴로 잔류되어 있는 엔로플록사신 및 시프로플록사신을 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 엔로플록사신 및 시프로플록사신 표준품을 각각 정밀히 달아 아세트니트릴로 녹여 100 ㎎/L농도가 되게 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산 아세토니트릴 용액에 희석하여 사용한다.

Ⓔ 황산나트륨 카트리지 : 0.45 μm 폴리프로필렌 필터가 장착된 튜브에 무수황산나트륨이 1.5 g 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

벌꿀 2.5 g을 50 mL 원심분리관(A)에 취하고 물 5 mL을 넣은 후 벌꿀이 모두 물에 녹을 때까지 흔들어 준다. 이 벌꿀 희석액에 아세토니트릴 10 mL와 아세트산 200 μL를 넣고 30초간 흔들어 준 후 염화나트륨 2 g을 넣고 다시 15초간 흔들어 준다. 이 혼합용액을 2,400 G에서 5분간 원심분리한 후 아세토니트릴층(상층액)을 황산나트륨 카트리지에 통과시켜 새로운 50 mL 원심분리관(B)에 모은다. 처음 벌꿀을 담았던 50 mL 원심분리관(A)에 다시 아세토니트릴 10 mL를 넣고 30초간 흔들어 준 후 2,400 G에서 5분간 원심분리하고 아세토니트릴층(상층액)을 황산나트륨 카트리지에 통과시켜 앞의 아세토니트릴과 합한다(원심분리관 B). 원심분리관 B의 아세토니트릴 용액을 질소농축한 후 0.1% 개미산 아세토니트릴 용액 2.5 mL에 녹여 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

- 이동상 B : 0.1% 개미산 아세토니트릴용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	85	15
5.0	85	15
8.0	20	80
10.0	20	80
10.1	85	15
20.0	85	15

ⓓ 유속 : 0.2 mL/min

ⓔ 주입량 : 10 μL

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 350℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 20 V

Ⓑ 정량

㉠ 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 엔로플록사신은 m/z 316 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 엔로플록사신의 함량을 구한다. 시프로플록사신은 m/z 288 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 시프로플록사신의 함량을 구한다. 앞서 구한 엔로플록사신과 시프로플록사신의 함량을 합하여 검체의 엔로플록사신 함량으로 한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
엔로플록사신	360	316, 342, 245
시프로플록사신	332	288, 314, 231

㉡ 정량한계 : 0.005 mg/kg

4) 성장호르몬제

(1) 제라놀

① 정량법의 원리

이 방법은 -------제라놀과 디에틸스틸베스트롤을 측정한다.

② (현행과 같음)

③ 시약, 시액

㉮~㉰ (현행과 같음)

㉱ 내부표준물질

Ⓐ (현행과 같음)

Ⓑ <삭  제>

㉲ 표준원액：제라놀, 제랄란 및 탈레라놀(Taleranol) 각 20 mg을 ------ 메탄올에 녹인다(이 용액 각 1 mL는 제라놀, 제랄란 및 탈레라놀 200 μg에 상당).

㉳ 표준용액：표준원액의 제라놀, 제랄란 각각 ------ 희석한다(이 용액 1 mL는 제라놀 및 제랄란 0.2 μg, 탈레라놀 0.4 μg에 상당).

<삭 제>

<삭  제>

㉴  (현행과 같음)

④ 시험조작

㉮ 추출

분쇄한 시료 -----(Control sample：제라놀이 함유되지 않은 시료) 5±0.1 g을 달아 각각 50 mL 폴리프로필렌 원심관에 넣고 내부표준물질인 제랄란과 Zeranol 표준용액 각각 50 μL를 넣는다. 따로 4개의 대조시료에 제라놀,  탈레라놀 표준용액을 아래의 표와 같이 0, 25.0, 50.0, 100.0 μL를 첨가한다.

표준용액 첨가량(μL)	농도(ppb)
	제라놀	<삭 제>	탈레라놀
0.0 25.0 50.0 100.0	0.00 1.00 2.00 4.00	<삭 제> <삭 제> <삭 제> <삭 제>	0.00 2.00 4.00 8.00

각 시료에 --------  .

㉯ 정제

위의 액을 --------다시 메탄올 2.5～3.0 mL를 넣어 제라놀을 회수용수기에 용출시킨다. ----------.

㉰  (현행과 같음)

㉱ 정성 및 정량 시험

위의 잔류물을 ----- 주입한다.

위 조건에서의 머무름시간 및 특정이온

물질	머무름시간	물질	특정이온
<삭 제> <삭 제> 제랄란 제라놀 탈레라놀	<삭제> <삭제> 10.3 12.6 12.8	제랄란 제라놀 <삭 제> <삭 제> 탈레라놀	435 538, 523, 433, 379 <삭제> <삭제> 538, 523, 433, 379

㉲ 계산

Ⓐ  (생  략)

Ⓑ ---------

<삭  제>

Ⓒ 다음의 회귀방정식을 사용하여 제라놀의 이온농도 대 제라놀 의 이온비에 대한 표준곡선을 작성한다.

---------

Ⓓ 기울기와 ------ 제라놀의 농도를 계산한다.

(2) 디에틸스틸베스트롤(Diethylstilbestrol, DES)

① 정량법의 원리

시료중의 디에틸스틸베스트롤을 분해효소제를 사용하여 조직에서 분해한 후 냉동 및 카트리지를 이용하여 지방 및 단백질을 제거한 후 유도체화 하여 가스크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

② 측정기기

가스크로마토그래프/질량분석기

③ 시약 및 시액

㉮ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

㉯ 표준원액 : 디에틸스틸베스트롤 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉰ 표준용액 : 표준곡선을 작성하기 위하여 5가지 농도로 표준원액을 메탄올로 희석한 후 각각 시험관에 100 μL를 취하고 내부 표준물질 용액 100 μL를 가한 후 농축 및 건조시킨다. 시험관에 유도체화 용액 100 μL를 넣고 밀봉하여 60℃에서 20분간 반응시킨 후 원심분리하여 상층액을 각각의 표준용액으로 한다.

㉱ 내부 표준물질 표준원액 : 디에틸스틸베스트롤 D8 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉲ 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 100 μg/L가 되도록 한다.

㉳ 분해효소제 : β□글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase /arylsulfatase)

㉴ 유도체화용액 : BSTFA(N, O-Bistrimethyl -trifluoroacetamide)와 TMSI (N-Trimethyl silylimidazole)의 혼합액 (98 : 2)

㉵ 칼럼 카트리지 : C8 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL)와 NH2 칼럼 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

㉶ 기타시약 : 특급

④ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 증류수 5 mL를 가한 후 microwave로 30초간 추출한다. 이 추출액에 분해효소제 80 μL를 가하고 균질화시켜 인큐베이터에 넣고 52℃에서 15시간 이상 반응시킨다. 실온으로 냉각한 후 내부 표준물질 용액 100 μL와 메탄올 30 mL 가한 후 20분간 초음파 추출한다. 이 추출용액을 -20℃의 냉동고에 30분 이상 넣어두어 지질을 응고시킨 후 상층액을 취한다. 이 때 석출된 지방질을 거름종이로 제거하고 용기를 메탄올로 씻어 준다. 상층액과 세척액을 합한 후 40℃에서 감압 농축하여 메탄올을 휘발시킨다. 미리 메탄올 5 mL와 증류수 5 mL로 활성화시킨 C8 카트리지에 농축 후 남은 액을 10% 메탄올 수용액 15 mL에 녹여 흡착시킨다. 증류수 5 mL로 용기와 카트리지를 세척하여 버리고 메탄올 5 mL로 용출시킨다. 이 용출액을 60℃에서 질소로 농축시킨 후 에틸아세테이트 : 메탄올 (80 : 20) 혼합용액 2 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 포화에틸아세테이트 5 mL와 에틸아세테이트 : 메탄올 (80:20) 혼합용액 5 mL로 활성화시킨 NH2 카트리지에 추출액을 흡착시키고 에틸아세테이트 : 메탄올 (80 : 20) 혼합용액 6 mL로 용출시킨다. 이 용출액을 60℃에서 질소로 농축시키고 완전히 농축시킨 시험관에 유도체화 용액 100 μL를 넣고 밀봉한 후 60℃에서 20분간 반응시킨다. 반응액을 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 상층액을 취하여 시험용액으로 한다.

⑤ 시험조작

㉮ 측정조건

Ⓐ 기체크로마토그래프 조건

㉠ 칼  럼 : Ultra 2, DB 5(5%-phenyl -methylpolysiloxane)(50 m × 0.2 mm, 0.33㎛) 또는 이와 동등한 것

㉡ 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

㉢ 시료주입부 : Split(5:1)

㉣ 주입부온도 : 280℃

㉤ 오븐온도 : 초기온도 160℃에서 10℃/분 비율로 270℃까지 승온한 후 10분간 유지하고 5℃/분 비율로 315℃까지 승온한 후 10분간 유지

㉥ 시료주입량 : 1 μL

Ⓑ 질량분석기 조건

㉠ 이온 mode : EI

㉡ 이온에너지 : 70 eV

㉢ Interface 온도 : 350℃

㉣ SIM ion : m/z 412(디에틸스틸베스트롤), m/z 420(디에틸스틸베스트롤 D8)

㉯ 정량

Ⓐ 유도체화한 시험용액 및 표준용액을 질량분석기에 주입한 후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여 내부표준물질 디에틸스틸베스트롤 D8의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합에 대한 디에틸스틸베스트롤의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합의 비를 구하여 검량선을 작성하여 검체 중 디에틸스틸베스트롤의 함량을 구한다.

※ 시험용액 중 디에틸스틸베스트롤의 함량 =

이온 412의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합

이온 420의 Cis 및 Trans 피이크 면적 또는 높이의 합

Ⓑ 정량한계 : 0.5 μg/kg

(3) 메드록시프로게스테론 아세테이트(Medroxyprogesterone acetate, MPA)

① 정량법의 원리

시료중의 메드록시프로게스테론 아세테이트를 트리스완충액 및 디에틸 에테르로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

② 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

③ 시약 및 시액

㉮ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉯ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉰ 표준원액 : 메드록시프로게스테론 아세테이트 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉱ 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 사용한다.

㉲ 0.1 M 트리스완충용액(pH 9) : 0.1 M Tris(hydroxymethyl) amino-methane에 염산을 넣어  pH 9가 되도록 한다.

㉳ 기타시약 : 특급

④ 시험용액의 조제

균질화 한 시료 1 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1 M 트리스완충용액(pH 9) 5 mL 가한후 5분간 초음파추출을 한다. 이 추출액에 디에틸 에테르 5 mL를 가하고 5분간 균질화한 후 3,000 G에서 5분간 원심분리하고 상층액을 농축수기에 옮긴다. 남은 액에 디에틸 에테르 5 mL를 가하여 위의 과정을 두 번 더 반복한다. 모아진 상층액을 45℃에서 감압농축한 후 메탄올 1 mL에 녹여 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

⑤ 시험조작

㉮ 측정조건

Ⓐ 액체크로마토그래프 조건

㉠ 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉡ 칼럼온도 : 20℃

㉢ 이동상

- 이동상 A : 물

- 이동상 B : 5 mM ammonium formate/메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
11.0	20	80
12.0	20	80
13.0	80	20

㉣ 유속 : 0.6 mL/min

㉤ 주입량 : 5 μL

Ⓑ 질량분석기 조건

㉠ Ionization : ESI(positive)

㉡ Capillary Temperature : 350℃

㉢ Collision gas : Ar

㉣ Collision energy : 20 V

㉯ 정량

Ⓐ 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, m/z 327 이온에 대한 면적을 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 메드록시프로게스테론 아세테이트 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
메드록시프로게스테론 아세테이트	387	327, 285

Ⓑ 정량한계 : 0.005 mg/kg

제 11. ~ 제 12. (생략)

[별표 1] ~ [별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ～ (66) (현행과 같음)

(67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

--- 호박 2.0, 시금치 0.1

(68) ～ (80) (현행과 같음)

(81) 에세폰(Ethephon)

--- 호박 0.1, 감 5.0

(82) ～ (111) (현행과 같음)

(112) 카벤다짐(Carbendazim) (현행과 같음)

--- 호프 50.0, 참나물 2.0

(113) ~ (131) (현행과 같음)

(132) 클로르피리포스-메틸 (Chlorpyrifos-methyl)

--- 옥수수 6.0, 배추 0.2

(133) ～ (226) (현행과 같음)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

--- 피망 5.0, 차 3.0

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

--- 호박 0.1, 들깻잎 5.0

(229) ～ (230) (현행과 같음)

(231) 클로르플루아주론(Chlorfluazuron)

--- 피망  0.5, 시금치 1.0

(232) ～ (235) (현행과 같음)

(236) 피리프록시펜(Pyriproxyfen)

--- 토마토 2.0, 고추 0.7, 피망 0.7

(237) ～ (248) (현행과 같음)

(249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

--- 호박 0.05, 들깻잎 0.05, 딸기 0.05

(250) ～ (290) (현행과 같음)

(291) 족사마이드(Zoxamide)

--- 피망 0.3, 부추 3.0

(292) ～ (331) (현행과 같음)

(332) 크로치아니딘(Clothianidin)

--- 피망 2.0, 구기자(건조) 1.0, 파 0.3

(333) ～ (357) (현행과 같음)

(358) 이프로발리카브(Iprovalicarb)

--- 포도 2.0, 부추 0.3

(359) ～ (390) (현행과 같음)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

--- 고추 0.5, 기타농산물 0.05, 감자 0.1, 배추 2.0, 토마토 0.3, 포도 5.0, 피망 5.0

(392) ～ (398) (현행과 같음)

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ～ (24) (현행과 같음)

(25) 티플루자마이드* (Thifluzamide)

수삼 1.0, 인삼농축액 2.0 ---

(26) ～ (34) (현행과 같음)

(35) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

수삼 0.1, 건삼 0.7, 홍삼  0.5, 인삼농축액  1.0, 홍삼농축액 0.3

[별표 6] ~ [별표 8] (현행과 같음)