식품의약품안전청 고시 제 2008-15호

「식품의 기준 및 규격」개정 고시

2008. 3. 24

식품의약품안전청

식품의약품안전청 고시 제 2008-15호

「식품의 기준 및 규격」일부개정고시

「식품의 기준 및 규격」중 일부를 다음과 같이 개정한다.

제 1. 2. 34)를 다음과 같이 신설한다.

34) “건삼”(태극삼 포함)은 수삼을 햇볕․열풍 또는 기타의 방법으로 익히지 아니하고 말린 것, “홍삼”은 수삼을 증기 또는 기타의 방법으로 쪄서 익혀 말린 것, “인삼농축액 및 홍삼농축액”은 수삼․건삼 및 홍삼으로부터 물이나 주정 또는 물과 주정을 혼합한 용매로 추출, 여과하여 그대로 농축한 것을 말한다.

제 2. 5. 4)를 다음과 같이 한다.

4) 식중독균

식육(제조, 가공용원료는 제외한다), 살균 또는 멸균처리 하였거나 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공식품에서는 특성에 따라 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 대장균 O157:H7(Escherichia coli O157:H7), 캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni), 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 등 식중독균이 검출되어서는 아니되며, 또한 식육 및 식육제품에 있어서는 결핵균, 탄저균, 브루셀라균이 검출되어서는 아니된다. 다만, ‘제 5. 식품별 기준 및 규격’에서 식중독균에 대한 규격이 정하여진 식품에는 해당식품의 규격을 적용하며, 그 외의 가공식품 중 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 다음과 같이 적용한다.

(1) 장류(메주 제외) 및 소스류, 복합조미식품, 절임식품, 조림식품 : g 당 10,000 이하(단 멸균제품은 음성이어야 한다).

(2) 위 (1) 이외의 식품 및 개별규격이 정하여지지 아니한 식품 중 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공식품 : g 당 1,000 이하(단 멸균제품은 음성이어야 한다).

제 2. 5. 10), (1), ④ 농산물의 분류 중 견과 종실류내 종실류에 “흑임자(검정깨)”를 삭제하고, 채소류내 엽채류에 “겨자채”를 추가하고, 과실류내 장과류에 “오미자”를 추가한다.

제5. 2. 6), (4) 황색포도상구균 중 “14) 황색포도상구균시험법”을 “14) 황색포도상구균 (1) 정성시험법”으로 한다.

제 5. 18. 18-1 중 5)의 (8)과 6)의 (7)을 삭제한다.

제 5. 20. 5)의 (5)를 삭제하고 (6)을 (5)로 하고, 6)의 (5)를 삭제하고 (6)을 (5)로 한다.

제 5. 21. 21-2 중 5)의 (5)와 6)의 (5)를 각각 삭제한다.

제 5. 21. 21-7 중 5)의 (4)와 6)의 (4)를 각각 삭제한다.

제 5. 25. 5)의 (6)과 6)의 (6)을 각각 삭제한다.

제 5. 26. 5)의 (5)와 6)의 (5)를 각각 삭제한다.

제 5. 29. 29-18 중 5), “(3) 황색포도상구균 : 음성이어야 한다.”를 “(3) 황색포도상구균 : 1 g 당 100 이하“로 한다.

제5. 29. 29-18 중 6), (3)황색포도상구균 중 “14) 황색포도상구균시험법”을 “14) 황색포도상구균 (2) 정량시험법”으로 한다.

제 10. 8. 1) (2)에  다음에 를 다음과 같이 신설한다.

Baird-Parker Agar

Tryptone	10 g
Beef extract	5 g
Yeast extract	1 g
Sodium pyruvate	10 g
Glycine	12 g
Lithium Chloride 6H2O	5 g
Agar	20 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 48-50°C로 식힌 다음 50% Egg Yolk Tellurite 용액 50 mL을 첨가한다.

제 10. 8. 14) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)을 다음과 같이 한다.

(1) 정성시험법

① 증균배양

검체 25g 또는 25ml를 취하여 225ml의 10% NaCl을 첨가한 TSB배지(배지23)에 가한 후 35～37℃에서 16시간 증균 배양한다

② 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지14) 또는 Baird-Parker 한천평판배지(배지59)에 접종하여 37℃에서 16～24시간 배양한다. 배양결과 난황첨가만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락(만니톨분해)을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환(난황반응 양성)이 있는 집락 또는 Baird-Parker 한천평판배지에서 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.

③ 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지8)에 옮겨 37℃에서 18～24시간 배양한후 그람염색을  실시하여 포도상배열을 갖는 그람양성 구균을 확인한다. 포도상의 배열을 갖는 그람양성구균이 확인된 것은 coagulase시험을 실시한다. 토끼혈청(신선혈청은 5%, 건조혈청의 용액은 10%)을 가한 생리식염수를 멸균한 시험관에 0.5～1ml씩 무균적으로 분주한다. 여기에 분리배지상의 집락에서 직접 또는 보통한청배지에서 순수배양시킨 균 1백금이를 접종하여 37℃에서 배양한다. 배양 후 3, 6, 24 시간의 각시간의 응고의 유무를 판정하여 어느 시간 후에도 응고 또는 섬유(fibrin)가 석출되는 것은 모두 coagulase 양성으로 하며 이상과 같이 확인된 것은 황색포도상구균 양성으로 판정한다. 시간에 있어서는 coagulase 양성균 및 균주접종의 음성대조군을 둔다.

(2) 정량시험법

① 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 멸균 인산 완충 희석액에 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 한다. 멸균 인산 완충 희석액을 사용하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 Baird-Parker 한천평판배지(배지59) 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35℃에서 45～48시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다.

② 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지에 접종하고 37℃에서 18～24시간 배양한 후 14) 황색포도상구균 (1)정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.

③ 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다.

제 10. 8. 15) 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus) (1)의 증균시험 중 “225ml의 펩톤수(배지 16) 10ml에”를 “225 mL의 펩톤수(배지 16)를”로 한다.

제 10. 8. 21)바실러스 세레우스 (2)정량시험 ② 확인시험 중 “(1) 정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.”를 “(1) 정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다. 단 최종 계산된 전형적인 집락의 개수가 규격치 이하일 경우 확인시험을 생략할 수 있다.”로 한다.

제 10. 8. 21)바실러스 세레우스 (2)정량시험의 ② 확인시험 중 “(1) 정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.”를 “(1) 정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다. 단 최종 계산된 전형적인 집락의 개수가 규격치 이하일 경우 확인시험을 생략할 수 있다.”로 한다.

제 10. 9. 중 “6) 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 델타메쓰린(Deltamethrin) 및 퍼메쓰린(Permethrin) 시험법”을 삭제하고 “6) 델타메쓰린(Deltamethrin), 바이오레스메쓰린(Bioresmethrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이플루쓰린(Cyfluthrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 트라로메쓰린(Tralomethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로패쓰린(Fenpropathrin)' 푸르발리네이트(Fluvalinate), 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 및 퍼메쓰린(Permethrin) 시험법”을 다음과 같이 신설한다.

6) 델타메쓰린(Deltamethrin), 바이오레스메쓰린(Bioresmethrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이플루쓰린(Cyfluthrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 트라로메쓰린(Tralomethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로패쓰린(Fenpropathrin). 푸르발리네이트(Fluvalinate), 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 및 퍼메쓰린(Permethrin) 시험법

(1) 장치

가스크로마토그래프 : 전자포획검출기(ECD)를 사용한다.

단, 바이오레스메쓰린은 가스크로마토그래프․질량분석기(MS)만을 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물：증류수 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실(Florisil) 카트리지：후로리실(500 ㎎) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

④ 표준원액：델타메쓰린, 바이오레스메쓰린, 싸이할로쓰린, 싸이플루쓰린, 싸이퍼메쓰린, 트라로메쓰린, 펜발러레이트, 펜프로패쓰린. 푸르발리네이트, 푸르시트리네이트 및 퍼메쓰린을 각각 아세톤에 녹여 500 mg/L로 한다.

⑤ 표준용액：표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 20 g, 채소류, 과실류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 20 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣는다(곡류 및 콩류는 시료에 물 20 mL를 넣고 1시간 방치). 여기에 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 상기 여액과 합친 후 1 L 분액깔대기로 옮기고 헥산 100 mL, 포화염화나트륨 용액 50 mL 및 물 450 mL를 가한 후 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 수용액 층을 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨칼럼에 통과시켜 탈수한다. 이액을 40℃ 이하에서 감압농축하여 건고시킨 후 잔류물을 헥산 10 mL에 용해한다. 용해액 10 mL 중 4 mL 를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL 를 가하여 합친다. 곡류, 두류 및 고추 등 지방성 시료의 경우 상기 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 30 mL로 녹이고 250 mL 분액깔때기로 옮기고 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배추출 하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축 하여 건고시키고 헥산 10 mL에 용해한다. 용해액 10 mL 중 4 mL 를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL 를 가하여 합친다.

② 정제

미리 후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 여기에 위의 헥산 용해액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 버린다. 여기에 디클로로메탄/헥산 혼합액 (5/95, v/v) 10 mL로 씻어서 버리고 디클로로메탄/헥산 혼합액 (40/60, v/v) 10 mL로 용출시켜 시험관에 받는다. 용출액은 40℃이하의 수욕조 중에서 질소를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 즉시 이소옥탄 4 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : DB-5, DB-17 및 SPB-1701(30 m × 0.53 mm ID, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 15 mL/분

㉰ 오븐온도：210℃에서 시료를 주입하고 40분간 유지(DB-5)

230℃에서 시료를 주입하고 40분간 유지(DB-17)

225℃에서 시료를 주입하고 40분간 유지(SPB-1701)

㉱ 주입부：Splitless

㉲ 주입부 온도 : 260℃

㉳ 검출기의 온도：280℃

㉴ 주입량 : 2 μL(직접주입법)

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 가스크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그람상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 가스크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-5)

1 : 델타메쓰린 및 트라로메쓰린(37.2분) 0.2 ng, 2 : 바이오레스메쓰린(18.2분), 0.1 ng, 3 : 싸이할로쓰린(9.4분, 10.1분), 0.2 ng 4 : 싸이플루쓰린(16.9분, 17.8분, 18.2분, 18.6분) 0.3 ng, 5 : 싸이퍼메쓰린(19.1분, 20.1분, 20.5분, 21.0분) 0.5 ng , 6 : 펜발러레이트(25.7분, 29.5분) 0.3 ng, 7 : 펜프로패쓰린(6.8분) 0.1 ng, 8: 푸르발리네이트(30.1분, 32.4분) 0.3 ng, 9 : 푸르시트리네이트(21.3분, 23.3분) 0.3 ng, 10 : 퍼메쓰린(13.0분, 13.7분) 0.3 ng.

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계

분석성분	처리농도 (mg/kg)	회수율(%)						정량한계 (mg/kg)
		쌀	대두	사과	고추	배추	감자
바이오레스메쓰린*	0.5	91.3±5.6	93.0±2.1	90.0±2.1	85.3±1.1	88.2±3.5	90.3±3.1	0.05
	2.5	100.1±2.3	98.9±5.6	95.7±6.3	92.6±2.5	90.2±5.6	97.1±2.6
싸이할로쓰린	0.03	95.2±6.8	90.3±8.0	96.5±7.0	102.6±5.2	99.1±2.4	104.7±3.5	0.003
	0.15	90.0±4.8	83.2±2.9	85.3±6.0	103.6±4.6	91.7±3.1	105.2±6.3
싸이플루쓰린	0.1	88.2±8.9	87.0±5.7	90.1±7.8	103.2±8.1	100.7±6.1	98.7±7.8	0.01
	0.5	95.3±5.6	96.5±5.5	93.0±2.0	100.3±2.3	90.0±8.8	87.9±5.8
싸이퍼메쓰린	0.1	87.9±0.7	98.7±8.8	95.3±5.2	98.6±7.4	85.6±4.8	97.7±8.3	0.01
	0.5	95.0±8.8	101.3±9.0	103.5±4.3	96.1±2.9	93.1±2.3	90.4±4.5
델타메쓰린	0.05	100.1±5.9	103.2±5.9	102.5±2.6	98.9±7.8	89.6±2.3	101.8±3.5	0.005
	1.0	105.7±2.2	101.5±4.1	100.1±2.3	105.2±1.3	100.5±9.1	95.8±4.2
펜발러레이트	0.1	87.5±3.2	82.7±8.0	83.5±8.9	88.1±6.3	98.2±2.9	89.3±2.9	0.001
	0.5	94.5±6.9	91.0±2.1	90.3±5.8	89.7±8.8	91.2±5.2	89.5±7.4
펜프로패쓰린	0.03	103.2±5.1	99.3±4.7	93.1±5.6	100.0±5.9	96.4±7.9	90.6±8.4	0.003
	0.15	105.5±1.0	101.0±6.9	100.9±5.7	107.1±2.1	92.9±4.1	103.4±3.1
푸르시트리네이트	0.1	103.2±5.6	105.6±4.0	102.9±3.2	94.2±1.0	92.6±6.3	101.9±7.0	0.01
	0.5	101.5±8.0	100.1±2.9	96.7±3.2	99.3±0.8	91.5±6.4	90.1±6.3
푸르발리네이트	0.1	90.0±4.3	92.9±5.3	93.5±6.3	103.7±3.2	97.2±8.6	101.8±2.7	0.01
	0.5	88.9±6.7	83.6±5.7	97.8±5.9	105.1±7.6	93.0±1.7	98.5±4.7
퍼메쓰린	0.1	85.3±4.8	84.7±2.2	22.5±4.8	99.9±6.5	91.6±8.9	82.5±4.9	0.01
	0.5	89.7±7.1	88.7±6.1	90.0±2.1	101.3±5.8	88.0±7.1	85.7±6.4

* : 가스크로마토그래프․질량분석기 SIM 모드 분석 결과

③ 가스크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : DB-5MS 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 2 ml/분

㉰ 칼럼온도：80°에서 시료를 주입하고 2분간 유지한 후 25°/분의 비율로 220° 로 상승시키고 5분간 유지하고, 2°/분의 비율로 280°로 상승 시킨 후 5분간 유지한다.

㉱ 주입부：Splitless mode(purge time 0.9분)

㉲ 주입부 온도 : 260℃

㉳ Interface 온도 : 300℃

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵  주입량 : 2 μL

표 2. 가스크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 fragment ions

분석성분	머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored(m/z)
바이오레스메쓰린	18.2	338.4	171*, 143**, 128, 123, 166
싸이할로쓰린	22.1, 22.7	449.9	181, 197, 209, 141, 449
싸이플루쓰린	27.8, 28.3, 28.5, 28.7	434.3	163, 206, 226, 127
싸이퍼메쓰린	29.6, 29.8, 30.0, 30.8	416.3	163, 181, 127, 209
델타메쓰린 (트라로메쓰린)	36.4	505.2	181, 253, 209, 172, 152
펜발러레이트	32.8, 33.8	34.9.4	125, 167, 152, 181, 225, 419
펜프로패쓰린	20.0	349.4	181, 265, 125, 141, 208
푸르시트리네이트	30.0, 30.8	451.5	451, 199, 157, 181, 225
푸르발리네이트	33.6, 34.0	502.9	250, 181, 208, 152, 502, 234
퍼메쓰린	25.5, 26.1	391.9	183, 163, 127, 115

* : 정량 이온, ** : 확인 이온

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 가스크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. 중 “7) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin) 및 푸루발리네이트(Fluvalinate) 시험법”을 삭제하고 “7) 디노테푸란(Dinotefuran), 아세타미프리드(Acetamiprid), 이미다클로프리드(Imidacloprid), 크로치아니딘(Clothianidin), 티아크로프리드(Thiacloprid), 티아메톡삼(Thiamethoxam) 시험법”을 다음과 같이 신설한다.

7) 디노테푸란(Dinotefuran), 아세타미프리드(Acetamiprid), 이미다클로프리드(Imidacloprid), 크로치아니딘(Clothianidin), 티아크로프리드(Thiacloprid), 티아메톡삼(Thiamethoxam) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV detector)를 사용한다.

② 고속액체크로마토그래프․질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실(Florisil) : 칼람크로마토그라피용 후로리실을 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 하이드로매트릭스(Hydromatrix) 카트리지 : 20 mL 용량

④ Carboxylic acid(CBA) 카트리지 : 500 mg, 10 mL 용량

⑤ 표준원액 : 디노테푸란, 아세타미프리드, 이미다크로프리드, 크로치아니딘, 티아크로프리드, 티아메톡삼을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L으로 한다.

⑥ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑦ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 25 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Homogenizer)컵에 넣는다(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치). 아세토니트릴/물 혼합액 (80/20, v/v)을 가하고(쌀의 경우는 아세토니트릴 80 mL를 넣는다) 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 흡인여과하고, 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여액과 합친다. 합친 여액을 40℃에서 감압 농축하여 아세토니트릴을 모두 날려 보낸 후 남은 농축액을 미리 염화나트륨 14 g을 달아 넣은 50 mL 용량플라스크에 옮긴다. 소량의 물로 농축플라스크 내부 벽면을 씻어 합치고 염화나트륨을 완전히 용해시켜 정확하게 정용한다.

② 분배

㉮ 액-액 분배법

추출액 50 mL 중 시료 10 g에 해당하는 20 mL를 정확히 취하여 50 mL 마개시험관에 옮기고 헥산 20 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 헥산 층을 버린다. 다시 헥산 20 mL를 가하여 위의 세척과정을 반복한다. 수용액 층을 100 mL 분액깔대기에 옮기고 시험관내부를 디클로로메탄 20 mL로 씻어 위의 수용액과 합친 다음 1분간 격렬하게 진탕한다. 두 층이 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한다. 여기에 다시 디클로로메탄 20 mL를 가하여 위의 과정을 반복하고 디클로로메탄 추출액을 합친 다음 40℃에서 감압농축, 건고한다. 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

㉯ 하이드로매트릭스(Hydromatrix) 분배법

추출액 50 mL 중 시료 10 g에 해당하는 20 mL를 정확히 취하여 입상규조토가 충진 된 하이드로매트릭스 카트리지에 가하고 10분간 방치하여 충분히 침투시킨다. 이 카트리지에 헥산 50 mL로 흘려버리고 여기에 디클로로메탄 100 mL로 용출시켜 받는다. 용출 액을 40℃에서 감압농축, 건고하고 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

※ 분배법은 액-액 분배법과 하이드로매트릭스 분배법 모두 가능함.

④ 정제

안지름 11 mm, 길이 40 cm의 칼럼 관에 후로리실 5 g과 그 위에 2 cm 높이로 무수황산나트륨을 차례로 건식충전하고 25 mL의 디클로로메탄으로 씻어서 버린다. 무수황산나트륨 층이 노출되기 직전에 위의 디클로로메탄으로 녹인 액 10 mL를 칼럼에 가하고 여분의 디클로로메탄 5 mL로 칼럼벽면을 씻어버린다. 표면이 노출되기 직전 50 mL의 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (4/96, v/v)을 가하여 씻어 버리고, 여기에 50 mL의 아세톤/디클로로메탄 (45/55, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃에서 감압농축, 건고한 후 잔류물을 10 mL의 아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다. 단, 밀감 시료의 경우는 잔류물을 10 mL의 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v)으로 녹인 다음 CBA 카트리지를 이용하여 아래와 같은 추가 정제과정을 거친다.

※ 추가 정제(밀감)

위의 디클로로메탄/헥산 혼합액 10 mL를 미리 헥산 5 mL로 활성화한 CBA 카트리지에 가하고 1 mL/min 속도로 씻어 버린다. 여기에 다시 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL로 씻어 버리고 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v) 5 mL로 용출시켜 받는다. 이 분획을 40℃에서 감압농축, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v) 10 mL로 녹인 후 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 오븐온도 : 40℃

㉰ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (258 nm)

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액 (40/60, v/v)으로 35분간 농도 구배한다.

㉲ 이동상 유량 : 1 mL/min

㉳ 시료 주입량 : 40 μL

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1 : 디노테푸란 (9.1분), 2: 티아메톡삼 (15.3분), 3 : 크로치아니딘 (18.1분), 4 : 이미다크로프리드 (19.3분), 5 : 아세타미프리드 (21.5분), 6 : 티아크로프리드 (25.4분). (각 20 ng 주입)

표 1. 농산물 중 회수율 및 정량한계

화합물	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	감자	사과	밀감	포도
아세타미프리드	0.2	88.5±2.8	90.0±1.4	90.1±1.0	83.7±4.6	89.8±7.9	0.02
	1.0	93.4±1.6	94.4±1.2	93.7±2.1	89.0±2.5	85.0±2.1
크로치아니딘	0.2	92.7±2.1	93.2±1.2	94.2±1.1	88.4±3.0	93.9±3.8	0.02
	1.0	96.6±0.8	96.2±1.1	96.9±2.4	93.9±3.1	92.9±1.5
디노테푸란	0.2	86.2±2.1	86.4±1.0	86.9±1.2	73.6±2.5	88.8±1.8	0.02
	1.0	91.3±0.6	89.8±0.7	89.8±1.8	82.5±1.5	88.8±0.6
이미다크로프리드	0.2	97.2±2.1	94.1±1.9	95.7±1.5	92.5±3.8	90.4±7.2	0.02
	1.0	98.9±0.3	98.2±0.7	97.7±2.3	96.9±3.9	86.1±2.3
티아크로프리드	0.4	87.0±2.1	88.1±1.1	91.9±0.8	81.5±4.2	85.5±8.3	0.03
	2.0	88.4±4.3	90.3±0.7	91.9±2.5	82.9±7.5	80.3±3.7
티아메톡삼	0.2	86.4±4.6	87.7±3.0	88.0±0.9	77.2±3.5	87.2±6.9	0.02
	1.0	94.0±0.8	93.5±1.5	92.9±2.2	92.8±1.0	83.9±1.8

표 1. 농산물 중 회수율 및 정량한계 (계속)

화합물	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		토마토	오이	참외	배추	상추
아세타미프리드	0.2	86.0±1.5	93.0±1.9	90.8±1.0	96.1±4.4	85.0±0.9	0.02
	1.0	91.6±0.9	95.7±0.3	96.1±0.8	90.8±0.8	92.3±0.9
크로치아니딘	0.2	89.9±1.7	99.1±2.1	96.0±1.0	98.6±0.9	95.0±1.1	0.02
	1.0	95.4±1.0	99.2±0.5	99.4±0.5	94.6±0.4	98.0±0.5
디노테푸란	0.2	84.3±2.3	91.5±1.8	89.8±0.8	85.3±0.6	88.8±2.2	0.02
	1.0	89.3±1.9	93.6±0.7	94.2±0.2	87.3±0.6	92.2±0.5
이미다크로프리드	0.2	90.8±2.8	97.6±1.0	97.3±1.3	94.0±2.8	94.1±0.9	0.02
	1.0	96.1±2.0	99.6±0.7	100.1±0.8	93.5±0.3	99.8±0.9
티아크로프리드	0.4	87.2±3.4	92.6±1.9	91.4±0.5	78.5±1.2	88.2±0.2	0.03
	2.0	91.3±2.4	94.1±0.3	94.4±1.3	81.0±0.4	92.4±0.9
티아메톡삼	0.2	83.6±2.1	92.9±1.5	88.3±0.6	83.7±2.1	83.5±0.6	0.02
	1.0	94.2±1.9	96.3±0.5	97.7±1.8	87.2±1.9	91.7±1.9

③ 고속액체크로마토그래프 ․ 질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (100 mm × 2.0 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상：아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액 (40/60, v/v)으로 35분간 농도 구배한다.

㉱ 이동상 유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료 주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～350

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : 77 V

표 3. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored (m/z)
아세타미프리드	6.5	202	203
크로치아니딘	12.4	291	292
디노테푸란	15.1	249	250
이미다크로프리드	16.3	255	256
티아크로프리드	18.4	222	223
티아메톡삼	22.1	253	253

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. “10) 디크로프루아니드(Dichlofluanid) 및 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 시험법”을  “10) 디크로프루아니드(Dichlofluanid) 시험법”으로 하고, (2)의 “⑤표준원액 : 디크크로프루아니드 및 푸르시트리네이트를 각각 헥산에 녹여 100㎎/㎏이 되게 한다”를 “⑤표준원액 : 디크크로프루아니드를 각각 헥산에 녹여 100 ㎎/L가 되게 한다”로 하고, (4)의 ① 중 “㉰ 시험용액 주입부 및 검출기의 온도 : 디크로프루아니드는 210°, 프루시트리네이트는 270°”를 “㉰ 시험용액 주입부 및 검출기의 온도 :  210℃”로 하고, (4)의 ① 중 “㉱ 캐리어가스 및 유량 : 질소(디크로프루아니드는 약 14분 10초, 프루시트리네이트는 약 18분에서 유출하는 유속으로 조정한다)”를 “㉱ 캐리어가스 및 유량 : 질소(약 14분에 유출하는 유속으로 조정한다)” 로 한다.

제 10. 9. 중 “13) 트라로메쓰린(Tralomethrin) 및 펜발러레이트(Fenvalerate) 시험법”을 삭제하고 “13) 펜치온(Fenthion), 포레이트(Phorate) 및 터브포스(Terbufos)  시험법”을 다음과 같이 신설한다.

13) 펜치온(Fenthion), 포레이트(Phorate) 및 터브포스(Terbufos) 시험법

(1) 장치

① 가스크로마토그래프 : 염광광도검출기(FPD : 인용 간섭필터, 파장 526 nm)를 사용한다.

② 가스크로마토그래프․질량분석기(GC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 표준원액 : 펜치온 옥손 설폰, 포레이트 옥손 설폰 및 터브포스 옥손 설폰을 아세톤에 녹여 500 mg/L로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로  혼합, 희석한다.

⑤ m-클로로퍼벤조익에시드(m-Chloroperbenzoic acid)액 : 사용직전에 디클로로메탄에 녹여 준비한다.

* m-클로로퍼벤조익에시드액 첨가량 결정 : 시료 추출부터 분배까지의 추출물량 측정한 후 추출물 무게의 2배량을 가하여 산화반응을 시킨다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출 및 분배

시료 [곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 30 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 30 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL와 물 450 mL를 가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 (콩시료는 약하게) 흔들어 섞은 후 정치한다. 유기용매 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 수용액 층에 다시 50 mL의 디클로로메탄을 가하여 위의 분배과정을 되풀이 한다. 위의 여액을 합쳐 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축하여 m-클로로퍼벤조익에시드액에 의한 산화과정을 거치며, 고추, 쌀, 대두 등 지방성 시료는 헥산/아세토니트릴 분배과정과 m-클로로퍼벤조익에시드액에 의한 산화과정을 거친다.

② 산화반응(m-클로로퍼벤조익에시드액 산화반응)

위의 건고물을 헥산/아세토니트릴 10 mL에 녹이고 10% m-클로로퍼벤조익에시드액 3 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 실온에서 30분간 방치하여 옥손설폰 형태로 변환한다. 반응물을 250 mL의 분액깔대기에 옮기고 디클로로메탄 25 mL로 용기를 씻어 위의 반응물과 합친다. 분액깔대기에 포화 sodium sulfite용액 25 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 (대두 시료는 약하게) 섞은 후 정치하여 디클로로메탄 층을 여분의 분액깔대기에 옮긴다. 다시 디클로로메탄 층에 포화 중탄산나트륨(sodium bicarbonate) 수용액 25 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이 한다. 디클로로메탄층을 증류플라스크에 옮기고 아세톤에 녹인 10% 폴리에틸렌글리콜 용액 50 μL를 가하여 40℃에서 감압농축 한다. 잔류물에 아세톤 2 mL (터브포스 및 대사체) 또는 4 mL (펜치온, 포레이트 및 대사체)로 녹여 시험용액으로 한다.

※ 고추, 쌀, 대두 등 지방성 시료(헥산/아세토니트릴 분배 추가)

위의 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 30 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 30 mL을 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 아세토니트릴 층을 125 mL 용량의 증류플라스크에 옮기고 다시 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이한다. 합친 여액에 아세톤에 녹인 10% 폴리에틸렌글리콜 용액 50 μL를 가한 후 40℃에서 감압농축하여 위의 m-클로로퍼벤조익에시드액에 의한 산화과정을 거친다.

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 및 온도:

- DB-1701 및 DB-17캐필러리 칼럼(30 m × 0.53 mm ID, 0.5 ㎛) : 펜치온 옥손 설폰 220℃, 포레이트 옥손 설폰 190℃, 터브포스 옥손 설폰 215℃

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 15 mL/분

㉰ 주입부 온도 : 260℃

㉱ 검출기의 온도：240℃,

㉲ 주입량 : 2 μL (직접 주입법)

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 가스크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 가스크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-1701, 30 m × 0.53 mm ID)

1 : 펜치온 옥손 설폰(6.5분) , 2 : 포레이트 옥손 설폰(6.4분), 3 : 터브포스 옥손 설폰(7.5분) (각 3 ng 주입)

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	콩	감자	사과	고추
펜치온	0.2	78.6±8.9	77.1±9.4	73.9±7.2	80.1±5.6	75.9±3.7	0.02
	1.0	75.3±6.9	74.5±5.6	72.3±2.0	79.5±7.4	75.1±2.5
펜치온 설폭사이드	0.2	73.6±9.7	75.1±5.1	74.6±9.3	80.6±6.2	74.7±2.6	0.02
	1.0	74.8±4.2	78.6±7.2	73.3±7.3	81.2±9.7	77.1±6.5
펜치온 설폰	0.2	79.2±9.7	72.9±5.6	77.4±8.3	74.1±2.9	78.0±6.2	0.02
	1.0	78.3±8.1	73.3±8.3	71.2±5.9	75.6±8.5	79.8±4.7
펜치온 옥손	0.2	90.4±2.3	97.3±2.3	99.9±7.3	96.3±2.3	78.2±0.2	0.02
	1.0	95.2±5.1	93.5±1.4	98.8±2.8	101.6±7.5	76.7±3.3

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계 (계속)

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	콩	감자	사과	고추
포레이트	0.2	91.3±5.6	93.0±2.1	90.0±2.1	102.6±5.2	99.1±2.4	0.02
	1.0	100.1±2.3	98.9±5.6	95.7±6.3	103.6±4.6	91.7±3.1
포레이트 설폭사이드	0.2	95.2±6.8	90.3±8.0	96.5±7.0	103.2±8.1	100.7±6.1	0.02
	1.0	90.0±4.8	83.2±2.9	85.3±6.0	100.3±2.3	90.0±8.8
포레이트 설폰	0.2	88.2±8.9	87.0±5.7	90.1±7.8	98.6±7.4	85.6±4.8	0.02
	1.0	95.3±5.6	96.5±5.5	93.0±2.0	96.1±2.9	93.1±2.3
포레이트 옥손	0.2	87.9±0.7	98.7±8.8	95.3±5.2	98.9±7.8	89.6±2.3	0.02
	1.0	95.0±8.8	101.3±9.0	103.5±4.3	105.2±1.3	100.5±9.1
포레이트 옥손 설폭사이드	0.2	100.1±5.9	103.2±5.9	102.5±2.6	88.1±6.3	98.2±2.9	0.02
	1.0	105.7±2.2	101.5±4.1	100.1±2.3	89.7±8.8	91.2±5.2
포레이트 옥손 설폰	0.2	87.5±3.2	82.7±8.0	83.5±8.9	100.0±5.9	96.4±7.9	0.02
	1.0	94.5±6.9	91.0±2.1	90.3±5.8	107.1±2.1	92.9±4.1

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계 (계속)

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	콩	감자	사과	고추
터브포스	0.1	82.5±1.6	94.9±5.9	104.3±3.8	98.4±0.3	96.4±7.8	0.01
	1.0	87.6±5.8	94.5±0.6	93.3±5.1	98.2±1.2	88.7±5.1
터브포스 설폭사이드	0.1	84.4±0.9	88.8±2.1	95.2±2.9	89.4±2.1	98.0±2.2	0.01
	1.0	80.9±7.0	82.6±1.2	93.2±1.6	82.4±0.5	87.2±3.6
터브포스 설폰	0.1	77.3±2.9	90.4±3.4	93.4±1.7	95.7±2.3	94.5±0.2	0.01
	1.0	77.8±2.3	88.1±4.0	92.3±0.7	83.0±0.5	86.4±2.4

③ 가스크로마토그래프 ․ 질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : DB-17MS 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 2 mL/분

㉰ 칼럼온도：초기의 온도 45℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 40℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 230℃에서 2분간 유지한다. 그때 5℃/분의 비율로 재차 온도를 상승시켜 260℃에서 2분간 유지한다.

㉱ 주입부：Splitless mode(purge time 1.0분)

㉲ 주입부 온도 : 270℃

㉳ Interface 온도 : 300℃

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵  주입량 : 1 μL

표 2. 가스크로마토그래프 ․ 질량분석기 분석을 위한 fragment ions

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored(m/z)
펜치온 옥손 설폰	15.2	294	294, 215, 279, 230
포레이트 옥손 설폰	10.6	276	183, 169, 155, 139, 127
터브포스 옥손 설폰	11.2	304	183, 169, 156, 140, 128

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 가스크로마토그래프 질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. 중 “22) 크로펜테진(Clofentezine) 시험법”을 삭제하고 “22) 아바멕틴(Abamectin) 및 밀베멕틴(Milbemectin)  시험법”을 다음과 같이 신설한다.

22) 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

② 고속액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그라피용 후로리실을 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 식힌다

④ 아미노프로필(Aminopropyl) 카트리지：아미노프로필(0.5 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

⑤ 표준원액 : 아바멕틴 및 밀베멕틴을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

⑥ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑦ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 20 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고 메탄올 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L용량의 분액깔대기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL의 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 분배과정을 되풀이 하고 추출된 용액을 합친다.

② 정제

안지름 11 mm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 1g을 충전한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 디클로로메탄 추출액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충전제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/디클로로메탄 혼합액 (10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 다시 메탄올/초산에칠 혼합액 (0.5/99.5, v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 감압농축하여 건고하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.  미리 아미노프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 카트리지에 위의 추출액 10 mL를 가한 후 2 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 카트리지의 필터 표면이 노출되기 직전 톨루엔 3 mL, 디클로로메탄 5 mL로 통과시켜 버리고, 다시 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (20/80, v/v) 6 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 질소가스로 완전히 날려 보낸 후 아세토니트릴/메탄올/물 혼합액 (52.5/22.5/25, v/v/v) 2 mL 에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18, (150 mm × 3.9 mm, 4 ㎛)

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/물 (52.5/22.5/25, v/v/v)

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 246 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1 : 아바멕틴 B1a (10.9분) 18.8 ng, 2 : 아바멕틴 B1b (8.1분) 1.2 ng, 3 : 밀베멕틴 A3 (9.7분) 8.5 ng, 밀베멕틴 A4 (13.2분) 19.5 ng.

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계

화합물	처리수준 (mg/kg)	회수율 (%)		정량한계 (mg/kg)
		사과	감귤
아바멕틴 B1a	0.047	86.8±2.8	87.0±6.5	0.003
	0.235	87.1±1.1	84.8±3.9
아바멕틴 B1b	0.003	-	-	0.003
	0.015	85.6±3.1	82.1±4.6
밀베멕틴 A3	0.021	98.6±2.2	94.1±6.8	0.003
	0.105	92.9±0.9	89.6±4.6
밀베멕틴 A4	0.049	91.3±1.8	86.2±3.6	0.003
	0.245	95.1±1.4	86.9±3.8

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계 (계속)

화합물	처리수준 (mg/kg)	회수율 (%)		정량한계 (mg/kg)
		고추	배추
아바멕틴 B1a	0.094	93.0±3.0	87.4±1.3	0.005
	0.470	91.7±0.7	91.5±1.2
아바멕틴 B1b	0.006	-	-	0.005
	0.030	82.9±2.1	77.6±3.2
밀베멕틴 A3	0.042	94.0±5.8	85.9±8.2	0.005
	0.210	94.7±1.0	91.9±1.0
밀베멕틴 A4	0.098	87.7±2.9	95.4±4.9	0.005
	0.490	89.3±0.8	88.6±2.0

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18, (150 mm × 2.1 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상 : 아세토니트릴/물 (70/30, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 0.2 mL/min

㉲ 이온화 : ESI negative-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 300～1000

㉵  주입량 : 10 μL

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored (m/z)
아바멕틴 B1b	8.0	858	857
아바멕틴 B1a	9.8	872	871
밀베멕틴 A3	10.6	528	527
밀베멕틴 A4	13.6	542	541

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 고속액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. 중 “31) 펜부타틴옥사이드(Fenbutatin oxide) 시험법”을 삭제하고 “31) 벤족시메이트(Benzoximate), 클로펜테진(Clofentezine), 페나자퀸(Fenazaquin), 훼노치오카브(Fenothiocarb), 펜피록시메이트(Fenpyroximate), 헥시치아족스 (Hexythiazox), 피리다벤(Pyridaben) 및 테부펜피라드(Tebufenpyrad) 시험법”을 다음과 같이 신설한다.

31) 벤족시메이트(Benzoximate), 클로펜테진(Clofentezine), 페나자퀸(Fenazaquin), 훼노치오카브(Fenothiocarb), 펜피록시메이트(Fenpyroximate), 헥시치아족스 (Hexythiazox), 피리다벤(Pyridaben) 및 테부펜피라드(Tebufenpyrad) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

② 고속액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한것

③ 아미노프로필(Aminopropyl) 카트리지：아미노-프로필(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실카트리지 : 후로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL용량) 또는 이와 동등한 것

④ 표준원액 : 벤족시메이트, 클로펜테진, 페나자퀸, 훼노치오카브, 펜피록시메이트, 헥시치아족스, 피리다벤, 테부펜피라드를 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 25g, 채소류 및 과실류는 약 1kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치) 메탄올 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 내려 위의 여액과 합친다. 합친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들어 정치한다. 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 40℃의 수욕 상에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

㉮ 클로펜테진, 페나자퀸, 훼노치오카브, 펜피록시메이트, 헥시치아족스, 피리다벤, 테부펜피라드

미리 아미노-프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 위의 녹인 액 10 mL 중 2 mL을 카트리지 상단에 가한다. 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 버리고 여분의 헥산 2 mL을 가하여 씻어버린다. 표면이 노출되기 직전 다시 헥산 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산 혼합액 (35/65, v/v) 5 mL를 가하여 용출한다. 용출액을 헥산 5 mL로 미리 활성화시킨 후로리실 카트리지에 가하고 디클로로메탄 10 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 질소가스로 날려 보낸 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v) 4 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

㉯ 벤족시메이트

미리 후로리실카트리지에 헥산 10 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 위의 녹인 액 10 mL 중 2 mL을 카트리지 상단에 가한다. 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 버리고 여분의 헥산 2 mL를 가하여 씻어버린다. 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL를 가하여 용출한다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 질소가스로 날려 보낸 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v) 5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (150 mm × 3.9 mm, 4 ㎛)

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상

Ⓐ 클로펜테진, 페나자퀸, 훼노치오카브, 펜피록시메이트, 헥시치아족스, 피리다벤, 테부펜피라드 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)으로 30분간 농도균배한 후 5분이상 흘려보낸다.

Ⓑ 벤족시메이트

아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 228 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1 : 훼노치오카브 (7.8분) 20 ng, 2 : 클로펜테진 (12.1분) 20 ng, 3 : 벤족시메이트 (14.2분) 10 ng, 4 : 테부펜피라드 (15.2분) 20 ng, 5 : 헥시치아족스 (20.4분) 20 ng, 6 : 펜피록시메이트 (23.3분) 20 ng, 7 : 페나자퀸 (24.3분) 20 ng, 8 : 피리다벤 (27.8분) 20 ng .

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	고추	배추	사과	감귤
벤족시메이트	0.2	82.5±1.6	94.9±5.9	104.3±3.8	98.4±0.3	96.4±7.8	0.02
	1.0	87.6±5.8	94.5±0.6	93.3±5.1	98.2±1.2	88.7±5.1
클로펜테진	0.4	84.4±0.9	88.8±2.1	95.2±2.9	89.4±2.1	98.0±2.2	0.04
	2.0	80.9±7.0	82.6±1.2	93.2±1.6	82.4±0.5	87.2±3.6
페나자퀸	0.4	77.3±2.9	90.4±3.4	93.4±1.7	95.7±2.3	94.5±0.2	0.04
	2.0	77.8±2.3	88.1±4.0	92.3±0.7	83.0±0.5	86.4±2.4
훼노치오카브	0.4	90.9±1.7	92.9±1.7	98.7±0.5	95.0±1.0	89.1±1.0	0.05
	2.0	89.1±6.7	86.0±3.2	95.1±0.7	88.7±0.8	89.8±2.7
펜피록시메이트	0.4	91.8±3.5	96.8±5.0	98.7±0.6	101.5±3.9	101.2±1.0	0.04
	2.0	84.6±3.5	81.1±1.5	95.0±0.7	90.0±5.9	88.3±1.7
헥시치아족스	0.4	75.9±0.5	90.0±0.9	100.2±1.1	97.0±2.1	97.1±1.9	0.04
	2.0	84.2±1.7	83.9±2.7	96.9±0.7	90.1±0.6	89.9±1.0
피리다벤	0.4	70.7±0.5	90.5±2.1	100.3±0.9	93.3±2.5	98.4±1.6	0.04
	2.0	73.8±4.9	83.5±2.6	98.5±1.6	88.4±2.0	88.8±3.0
테부펜피라드	0.4	86.0±1.0	91.3±0.6	99.8±1.6	99.6±5.8	102.9±3.2	0.04
	2.0	81.1±1.2	85.3±4.1	96.1±1.1	99.3±1.0	88.0±1.9

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18(100 mm × 2.1 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상 : 아세토니트릴/물 (55/45, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 0.2 mL/min

㉲ 이온화 : ESI positive mode(클로펜테진의 경우 ESI negative mode)

㉳ 분자량 범위 : 50～500

㉴  주입량 : 10 μL

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored(m/z)
벤족시메이트	12.5	363	364, 366
클로펜테진	9.6	302	302
페나자퀸	19.7	306	307
훼노치오카브	6.4	253	254
펜피록시메이트	22.4	421	422
헥시치아족스	19.3	352	353
피리다벤	32.7	364	365, 367
테부펜피라드	12.4	333	334, 336

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 고속액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. 중 “42) 포레이트(Phorate) 시험법”을 삭제하고 “42) 아조싸이클로틴 (Azocyclotin) 및 싸이헥사틴 (Cyhexatin) 시험법”을 다음과 같이 신설한다.

42) 아조싸이클로틴 (Azocyclotin) 및 싸이헥사틴 (Cyhexatin) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 실리카겔 (Silica gel) : 칼럼크로마토그라피용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 표준원액 : 아조싸이클로틴, 싸이헥사틴 각각 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [채소류 및 과실류는 약 1 kg을 브렌더에 넣고 균질화한 후 검체 25 g]를 삼각플라스크에 정밀히 달아 넣고 아세톤 80 mL와 브롬산 5 mL를 차례로 가하여 5분간 진탕 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 용기를 아세톤 20 mL를 가하여 세척하고 앞서의 여액과 합한다. 합 친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들어 정치한다. 유기용매 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시키고 40℃의 수욕 상에서 감압 농축한다. 잔류물을 아세토니트릴 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 11 mm의 칼럼관에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충진 시키고 아세토니트릴 25 mL를 흘려보낸다. 아세토니트릴로 녹이 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 아세토니트릴 5 mL로 씻어버린다. 칼럼에 다시 아세토니트릴 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세토니트릴/초산 혼합액(100/0.2, v/v) 30 mL를 가하여 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 감압 농축하여 잔류물을 5 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴/염산 1 mM 혼합액 (85/15, v/v) 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (150 mm × 3.9 mm, 4 ㎛)

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상 : 염화나트륨 5 mM이 함유된 아세토니트릴/염산 1 mM (85/15, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 214 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

싸이헥사틴 (9.9분) 50 ng

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)			정량한계 (mg/kg)
		감자	사과	감귤
아조싸이클로틴	0.4	76.8±1.2	84.4±3.5	87.3±3.7	0.04
	2.0	81.3±1.6	86.6±1.9	91.3±0.5
싸이헥사틴	0.4	82.4±2.3	79.6±3.9	84.3±4.1	0.04
	2.0	87.2±2.9	77.5±0.6	78.6±3.7

③ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

④ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. 중 “49) 터브포스(Terbufos) 시험법”을 삭제하고 “49) 펜부타틴옥사이드 (Fenbutatin oxide) 시험법”을 다음과 같이 신설한다.

49) 펜부타틴옥사이드 (Fenbutatin oxide) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 실리카겔 (Silica gel) : 칼럼크로마토그라피용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 표준원액 : 펜부타틴옥사이드 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료(채소류 및 과실류는 브렌더에 넣고 균질화한 후 검체 25 g)를 삼각플라스크에 정밀히 달아 넣고 아세톤/초산 혼합액 (100/1, v/v) 80 mL를 가하여 30분간 진탕 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 아세톤 20 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 합친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들고 난 후 정치한다. 유기용매 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키고 40℃의 수욕 상에서 감압농축 한다. 건고물을 디클로로메탄 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 11 mm의 칼럼관에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충진 시키고 디클로로메탄 25 mL를 흘려보낸다. 디클로로메탄 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 디클로로메탄 5 mL로 씻어버린다. 칼럼에 다시  디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/초산 혼합액 (100/1, v/v) 60 mL를 가하여 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 감압농축하고 건고물은 5 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴/메탄올/염산 1 mM 혼합액 (50/35/15, v/v/v) 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (150 mm × 3.9 mm, 4㎛)

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상 : 염화나트륨 5 mM이 함유된 아세토니트릴/메탄올/염산 1 mM (50/35/15, v/v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 214 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율(%)			정량한계 (mg/kg)
		감자	사과	밀감
펜부타틴옥사이드	0.4	77.3±2.9	74.5±2.5	73.1±2.2	0.04
	2.0	73.0±2.2	76.8±2.3	73.3±0.6

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

펜부타틴옥사이드 (12.5분) 50 ng.

③ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

④ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. 중 “57) 바미도티온(Vamidothion) 시험법”을 삭제하고 “57) 펜틴아세테이트 (Fentin acetate), 펜틴클로라이드 (Fentin chloride) 및 펜틴하이드록사이드 (Fentin hydroxide) 시험법”을 다음과 같이 신설한다.

57) 펜틴아세테이트 (Fentin acetate), 펜틴클로라이드 (Fentin chloride) 및 펜틴하이드록사이드 (Fentin hydroxide) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 실리카겔 (Silica gel) : 칼럼크로마토그라피용 실리카겔(70～230mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 표준원액 : 펜틴아세테이트, 펜틴클로라이드, 펜틴하이드록사이드를 각각 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 25 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 삼각플라스크에 넣고(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치) 아세톤 80 mL와 브롬산 5 mL를 차례로 가하여 5분간 진탕 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 아세톤 20 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 합친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들고 난 후 정치한다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 20 g에 통과 시키고 수용액 층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 추출한 후 합친다. 추출액을 40℃의 수욕 상에서 감압농축하고 건고물을 아세토니트릴 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 11 mm의 칼럼관에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충진시키고 아세토니트릴 25 mL를 흘려보낸다. 아세토니트릴 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 아세토니트릴 5 mL로 씻어버린다. 칼럼에 다시 아세토니트릴 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 아세토니트릴/초산 혼합액(100/0.2, v/v) 50 mL를 가하여 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 감압농축하고 건고물을 40 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴/염산 3 mM 혼합액 (45/55, v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다(채소류 및 과일류의 경우 10 mL에 녹이고 곡류 및 콩류는 4 mL에 녹인다.)

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (150 mm × 3.9 mm, 4 ㎛)

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상 : 염화나트륨 5 mM이 함유된 아세토니트릴/염산 3 mM (45/55, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 214 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율(%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	감자	콩	사과	밀감
펜틴하이드록사이드	0.2	88.3±7.9	94.6±3.2	94.4±3.6	90.3±0.3	94.5±1.5	0.02
	1.0	88.9±1.8	97.6±0.9	93.0±1.7	93.8±2.1	92.3±0.8
*펜틴아세테이트 및 펜틴클로라이드는 분석시 펜틴하이드록사이드로 전환됨.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

펜틴하이드록사이드 (12.7분) 20 ng.

③ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

④ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 10. 9. 중 “58)의 브로모프로필레이트(Bromopropylate), 클로르단(chlordane), 디페닐아민(Diphenylamine), 디클로란(Dichloran), 페나미포스(Fenamiphos), 푸루실라졸(Flusilazole), 포모치온(Formothion), 헵타크로(Heptachlor), 헥사코나졸(Hexaconazole), 이프로디온(Iprodion), 이소펜포스(Isofenphos), 메카밤(Mecarbam), 메치오카브(Methiocarb), 메빈포스(Mevinphos), 모노크로토포스(Monocrothophos), 파클로부트라졸(Paclobutrazole), 페노트린(Phenothrin), 포스파미돈(Phosphamidone), 프로클로라즈(Prochloraz), 프로폭서(Propoxur), 퀸토젠(Quintozene), 테크나젠(Technazene), 치오메톤(Thiometon), 토릴푸르아니드(Tolylfluanid), 빈클로졸린(Vinclozolin) 등 다종다성분농약 동시시험법(Multi class pesticide multiresidue methods)”을 “58) 다종농약다성분 시험법(Multi class pesticide multiresidue methods)”으로 한다.

제 10. 9. 중 “62) 펜틴아세테이트(Fentin acetate), 펜틴클로라이드(Fentin chloride), 펜틴하이드록사이드(Fentinhydroxide), 아조싸이클로틴(Azocyclotin), 싸이헥사틴(Cyhexatin), 펜부타틴옥사이드(Fenbutatin oxide) 시험법”을 삭제한다.

제 10. 9. 중 “75) 펜프로패쓰린(Fenpropathrin) 및 바이오레스메쓰린(Bioresmethrin) 시험법”을 삭제한다.

제 10. 9. 중 “77) 헥시치아족스(Hexythiazox) 시험법”을 삭제한다.

제 10. 9. 중 “78) 이미다크로프리드(Imidacloprid) 시험법”을 삭제한다.

제 10. 9. 중 “83) 이소프로치오란(Isoprothiolane), 이프로벤포스(Iprobenfos), 클로르훼나피르(Chlorfenapyr), 테부페노자이드(Tebufenozide), 테부펜피라드(Tebufenpyrad), 테프루벤주론(Teflubenzuron), 페나자퀸(Fenazaquin), 프로치오포스(Prothiofos), 플루페녹수론(Flufenoxuron), 피라크로포스(Pyraclofos), 피리다벤(Pyridaben), 피프로닐(Fipronil), 훼노부카브(Fenobucarb), 디메칠빈포스(Dimethylvinphos), 디메토모르프(Dimethomorph), 아세타미프리드(Acetamiprid) 등 동시다성분 시험법”을 “83) 다종농약다성분 시험법(Multi class pesticide multiresidue methods)”으로 하고, (3), ②, “㉯ HPLC 측정농약” 다음에 주를 다음과 같이 신설한다.

주. 곡류, 두류, 종실류 등 지방성 시료의 경우 위의 용매를 날려버린 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴 층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔사를 20% 아세톤 함유 헥산 2 mL(GC 측정농약), 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(HPLC 측정농약)로 녹인다.

(4), ④ 정량시험 다음의 “주. 이 시험법의 분석대상 농약”을 삭제하고 “ (5) 이 시험법의 분석 대상농약 목록 및 검출기”를 다음과 같이 신설한다.

(5) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

① GC 분석 대상(150종)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39	Acrinathrin(ECD) Aldrin(ECD) Anilofos(NPD) Azinphos-methyl(ECD, NPD) α, β, γ, δ-BHC(ECD) Bifenthrin(ECD) Bromacil(ECD) Bromopropylate(ECD) Cadusafos(NPD, FPD) Captafol(ECD) Captan(ECD) Carbophenothion(ECD, NPD) Chinomethionat(ECD) Chlordane(ECD) Chlorfenapyr(NPD, FPD) Chlorobenzilate(ECD) Chlorothalonil(ECD) Chlorpyrifos(ECD, NPD) Chlorpyrifos-methyl(ECD, NPD) Cycloprothrin(ECD, NPD) Cyflufenamid(ECD) Cyfluthrin(ECD)* Cyhalothrin(ECD)* Cypermethrin(ECD)* Cyproconazole(NPD) Cyprodinil(NPD) DDT(ECD) Deltamethrin(ECD)* Diazinon(ECD, NPD) Dichlofluanid(ECD, NPD) Dicloran(ECD) Dicofol(ECD) Dieldrin(ECD) Diethofencarb(NPD) Dimepiperate(ECD, NPD, FPD) Dimethenamid(NPD) Dimethoate(ECD, NPD) Dimethylvinphos(NPD, FPD) Diniconazole(ECD)	40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78	Diphenamid(NPD) Diphenylamine(NPD) Dithiopyr(ECD) Edifenphos(ECD, NPD) α-Endosulfan(ECD) β-Endosulfan(ECD) Endosulfan-sulfate(ECD) Endrin(ECD) EPN(ECD, NPD) Esprocarb(ECD, NPD) Ethion(ECD, NPD) Ethoprophos(ECD, NPD) Etoxazole(NPD) Etrimfos(ECD, NPD) Fenamidone(ECD, NPD) Fenarimol(ECD, NPD)* Fenazaquin(NPD, FPD)* Fenbuconazole(ECD)* Fenitrothion(ECD, NPD) Fenobucarb(NPD) Fenothiocarb(NPD)* Fenoxanil(ECD, NPD) Fenoxycarb(NPD, UVD) Fenpropathrin(ECD, NPD)* Fenthion(ECD, NPD)* Fenvalerate(ECD)* Fipronil(NPD, FPD) Flonicamid(ECD) Fluazinam(ECD) Fludioxonil(NPD) Flupyrazofos(NPD, FPD) Flusilazole(NPD) Flusulfamide(ECD) Flutolanil(ECD) Fluvalinate(ECD)* Folpet(ECD) Fosthiazate(NPD, FPD) Fthalide(ECD) Furathiocarb(NPD)	79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117	Heptachlor epoxide(ECD) Heptachlor(ECD) Imazalil(ECD) Indanofan(ECD) Indoxacarb(ECD) Iprobenfos(NPD, FPD) Iprodione(ECD) Iprovalicarb(ECD) Isazofos(NPD) Isofenphos(NPD) Isoprothiolane(NPD, FPD) Kresoxim-methyl(NPD) Malathion(ECD, NPD) Mecarbam(ECD, NPD) Mefenacet(ECD) Mepronil(NPD) Metconazole(NPD) Methidathion(ECD) Methoxychlor(ECD) Molinate(NPD) Myclobutanil(ECD, NPD)* Nitrapyrin(ECD) Nonachlor(ECD) Nuarimol(ECD)* Ofurace(ECD) Oxadixyl(ECD) Paclobutrazol(ECD, NPD)* Parathion(ECD, NPD) Parathion-methyl(ECD, NPD) Penconazole(ECD, NPD) Pendimethalin(ECD, NPD) Permethrin(ECD)* Phenthoate(ECD) Phosalone(ECD, NPD) Phosmet(ECD) Phosphamidone(ECD, NPD) Pirimicarb(NPD) Pirimiphos-ethyl(NPD) Pirimiphos-methyl(NPD)

118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128	Probenazole(ECD) Prochloraz(ECD) Procymidone(ECD, NPD) Profenofos(ECD, NPD) Propisochlor(ECD, NPD) Prothiofos(NPD) Pyraclofos(NPD) Pyrazophos(ECD, NPD) Pyridaben(NPD)* Pyridalyl(ECD, NPD, FPD) Pyrimidifen(ECD)	129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139	Pyriminobac-methyl(NPD) Quinalphos(NPD) Quintozene(ECD) Simeconazole(NPD) Tebufenpyrad(NPD)* Tebupirimfos(ECD, NPD, FPD) Tefluthrin(ECD) Terbufos(NPD)* Terbutylazine(ECD, NPD) Tetradifon(ECD) Thiazopyr(ECD, NPD)	140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150	Thifluzamid(ECD, NPD) Thiometon(ECD, NPD) Tolclofos-methyl(ECD, NPD) Tolylfluanid(ECD, NPD) Tralomethrin(ECD) Triadimefon(ECD, NPD) Triazophos(NPD) Triflumizole(ECD, NPD) Triflumuron(ECD) Vinclozoline(ECD, NPD) Zoxamide(ECD, NPD)

② HPLC 분석 대상(60종)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15	Acetamiprid(HPLC-UVD)* Azafenidin(HPLC-UVD) Azoxystrobin(HPLC-UVD) Benzoximate(HPLC-UVD)* Boscalid(HPLC-UVD) Cinosulfuron(HPLC-UVD) Clothianidin(HPLC-UVD)* Cyazofamid(HPLC-UVD) Cyhalofop-butyl(HPLC-UVD) Cymoxanil(HPLC-UVD) Dimethomorph(HPLC-UVD) Ethaboxam(HPLC-UVD, 310nm) Fenpyroximate(HPLC-UVD)* Fenhexamid(HPLC-UVD) Flufenacet(HPLC-UVD)	16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30	Flufenoxuron(HPLC-UVD) Fluquinconazole(HPLC-UVD) Flumioxazine(HPLC-UVD) Forchlorfenuron(HPLC-UVD) Ferimzone(HPLC-UVD) Fluacrypyrim(HPLC-UVD) Hexaflumuron(HPLC-UVD) Imibenconazole(HPLC-UVD) Lufenuron(HPLC-UVD) Mepanipyrim(NPD, HPLC-UVD) Methabenzthiazuron(HPLC-UVD) Methoxyfenozide(HPLC-UVD) Novaluron(HPLC-UVD) Oxaziclomefon(HPLC-UVD) Pentoxazone(HPLC-UVD)	31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45	Pyraclostrobin(HPLC-UVD) Pyrazolate(HPLC-UVD) Pyrimethanil(HPLC-UVD) Pyributicarb(HPLC-UVD) Pyriproxyfen(HPLC-UVD) Pyroquilon(HPLC-UVD) Spirodiclofen(HPLC-UVD) Tebufenozide(HPLC-UVD) Teflubenzuron(HPLC-UVD) Tiadinil(HPLC-UVD) Thenychlor(HPLC-UVD) Thiacloprid(HPLC-UVD)* Thiamethoxam(HPLC-UVD)* Tricyclazole(NPD,HPLC-UVD) Trifloxystrobin(HPLC-UVD)
1 2 3 4 5	Aldicarb(HPLC-FLD) Bendiocarb(HPLC-FLD) Butocarboxim(HPLC-FLD) Carbaryl(HPLC-FLD) Ethiofencarb(HPLC-FLD)	6 7 8 9 10	Isoprocarb(HPLC-FLD) Methiocarb(HPLC-FLD) Methomyl(HPLC-FLD)* Metolcarb(HPLC-FLD) Oxamyl(HPLC-FLD)*	11 12 13 14 15	Promecarb(HPLC-FLD) Propoxur(HPLC-FLD) Thiodicarb(HPLC-FLD) 2,3,5-Trimethacarb(HPLC-FLD) 3,4,5-Trimethacarb(HPLC-FLD)

주. 이 시험법을 이용하여 위의 분석대상 성분 중 * 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 정량분석은 아래의 시험법에 따른다.

6) 델타메쓰린(Deltamethrin), 바이오레스메쓰린(Bioresmethrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이플루쓰린(Cyfluthrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 트라로메쓰린(Tralomethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로패쓰린(Fenpropathrin). 푸르발리네이트(Fluvalinate), 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 및 퍼메쓰린(Permethrin) 시험법

7) 디노테푸란(Dinotefuran), 아세타미프리드(Acetamiprid), 이미다클로프리드(Imidacloprid), 크로치아니딘(Clothianidin), 티아크로프리드(Thiacloprid), 티아메톡삼(Thiamethoxam) 시험법

13) 펜치온(Fenthion), 포레이트(Phorate) 및 터브포스(Terbufos) 시험법

31) 벤족시메이트(Benzoximate), 클로펜테진(Clofentezine), 페나자퀸(Fenazaquin ), 훼노치오카브(Fenothiocarb), 펜피록시메이트(Fenpyroximate), 헥시치아족스 (Hexythiazox), 피리다벤(Pyridaben) 및 테부펜피라드(Tebufenpyrad) 시험법

39) 메소밀(Methomyl) 및 옥사밀(Oxamyl) 시험법

71) 디페노코나졸(Difenoconazole), 페나리몰(Fenarimol), 펜부코나졸(Fenbuconazole), 헥사코나졸(Hexaconazole), 마이클로부타닐(Myclobutanil), 누아리몰 (Nuarimol), 파클로부트라졸(Paclobutrazol) 시험법

158) 퀴날포스(Quinalphos) 시험법

제 10. 9. 중 “89) 아바멕틴(Abamectin) 시험법”을 삭제한다.

제 10. 9. 중 “105) 밀베멕틴(Milbemectin) 시험법”을 삭제한다.

제 10. 9. 중 “122) 디노테푸란(Dinotefuran) 시험법”을 삭제한다.

제 10. 9. 141) 치펜설푸론 메칠(Thifensulfuron-methyl) 시험법 (3)의 ① 중 “추출 : 검체를 ---. 여기에 포화염화나트륨용액 30 mL와 물 350 mL를 차례로 넣고 잘 흔들어 썩은 후 디클로로메탄 50 mL씩으로 2회 추출하고 헥산 50 mL씩 2회 씻고 헥산층은 버린다. 물 층을 0.1 M HCl로 pH 3.0으로 조정한 후 분액깔대기에 옮기고 이에 디클로로메탄 50 mL씩으로 3회 세게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄을 무수황산나트륨으로 탈수하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압 하에 용매를 날려 버리고 잔류물을 아세토니트릴 5 mL에 녹인다”를   “추출 : 검체를 ---. 여기에 포화염화나트륨용액 30 mL와 물 350 mL를 차례로 넣고 헥산 50 mL씩 2회 분배하여 씻어버린다. 물 층을 0.1 M 염산으로 pH 3.0으로 조정한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한다. 수용액 층에 다시 50 mL의 디클로로메탄을 가하여 위의 분배과정을 되풀이 한다. 위의 여액을 합친 후 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축하고 잔류물을 아세토니트릴 5 mL에 녹인다”로 한다.

제 10. 9. 151)의 다음에 152) 내지 159)를 다음과 같이 신설한다.

152) 만디프로파미드(Mandipropamid) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 만디프로파미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(채소류 및 과실류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 컵에 정밀히 달아 넣고 메탄올 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한다. 여지가 깔려 있는 부크너 깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 위의 여액에 합한다. 여액은 분액 깔대기에 옮겨 물 300 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 물층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물을 헥산 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 100 mL의 초산에칠/헥산 혼합액 (50/50, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 잔류물을 10 mL의 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (226 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

만디프로파미드 (11.0분) 10 ng

표 1. 고추 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.4	98.5±2.0	0.04
2.0	98.9±2.8

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18칼럼(100 m × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 5 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～500

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : 14 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored(m/z)
6.3	411	412

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

153) 메소트리온(Mesotrione) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 실리카겔 : 칼럼 크로마토그래프용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 메소트리온 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g)를 호모게나이저 컵에 정밀히 달아 넣고 0.2 M 염화암모늄(NH4Cl ) 수용액(pH 2.0) 20 mL를 가하여 10분간 습윤화 하고 아세토니트릴 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한다. 여지가 깔려 있는 부크너 깔대기로 흡인 여과하고 잔류물 은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여액에 합한다. 합친 여액을 40℃에서 감압농축하고 건고물에 40 mL의 2% 인산이칼륨(K2HPO4)수용액을 가한 후 1 M의 염산으로 pH를 6.0±0.2로 조절한다. pH 조절액을 250 mL용량의 분액깔대기로 옮기고 50 mL 헥산을 가하여 분배 후 헥산층을 씻어버린다. 수용액 층은 100 mL용량의 비이커에 받아서 6 M 염산과 1 M의 염산을 이용하여 pH를 2.0±0.2로 조절하고 여분의 분액깔대기로 옮긴다. 분액깔대기에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 아세톤 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 실리카겔 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 아세톤 25 mL을 가하여 상단에 소량의 아세톤이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 아세톤에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 50 mL의 메탄올/아세톤 혼합액 (7/93, v/v) 가하여 유출시켜 버리고, 50 mL의 메탄올/아세톤 혼합액 (20/80, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축하고 건고물은 아세토니트릴/50 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4) 혼합액 (30/70, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (258 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/50 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4)혼합액 (30/70, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 50 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메소트리온 (11.9분) 10 ng

표 1. 쌀 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.1	74.3±0.6	0.01
0.5	79.1±4.8

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18칼럼(100 mm × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물/Formic acid 혼합액 (25/75/0.1, v/v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI negative-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : : -31V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
12.0	339	338

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

154) 메트알데하이드(Metaldehyde) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 실리카겔 : 칼럼 크로마토그래프용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 메트알데하이드 표준품을 디클로로메탄에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 클로로포름에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 2,4-디니트로페닐하이드라진(2,4-Dinitrophenylhydrazine, 2,4-DNPH) : 6 N 염산용액 200 mL에 2,4-DNPH 0.5 g을 녹여 조제한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출(1차)

검체(채소류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 컵에 정밀히 달아 넣고 디클로로메탄 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너 깔대기로 흡인 여과하고 잔류물을 디클로로메탄 40 mL로 씻어 내려 위의 여액과 합친 후 1 L 분액깔대기로 옮기고 2% Na2S2O5 수용액 100 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 수용액 층은 버리고 다시 디클로로메탄 층에 2% Na2S2O5 수용액 100 mL를 가하여 앞서의 과정을 되풀이 한다. 디클로로메탄층에 추가로 증류수 100 mL를 가하여 1분간 결렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리된 후 수용액 층은 버린다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한 후 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축한다.

② 유도체화

위의 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 가하여 잔류물을 녹이고 2,4-디니트로페닐하이드라진 염산용액 10 mL을 넣어 40℃ 수욕조에서 20분간 교반하여 유도체 반응을 거친다.

③ 추출(2차)

20분이 경과한 반응액을 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴 후 디클로로메탄 20 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 10 g에 통과시켜 탈수한다. 다시 수용액 층에 디클로로메탄 20 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 앞서의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축하여 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

④ 정제

안지름 15 mm, 길이 40 cm의 칼럼관에 실리카겔 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL를 유출하여 버린다. 상기 용해액  10 mL을 넣은 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 건고물은 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

※ 주 : 실험용기 세척시 주로 사용되는 아세톤은 일부의 아세트알데하이드를 포함하고 있어 분석에 방해가 됨으로 상기시험법 이용시 사용되는 용기는 디클로로메탄으로 세척 후 사용하여야 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (360 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아세트알데하이드 - 2,4-DNPH (9.3분) 10 ng

표 1. 배추 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.1	95.2±6.7	0.01
1.0	98.4±3.5

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 1 mL/min

㉲ 시료주입량 : 5 μL

㉳ 이온화 : APCI negative-ion mode

㉳ 분자량 범위 : 100～300

㉴ Capillary temperature : 275

㉵ Cone voltage : -55 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
9.3	224	223

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

155) 비스트리플루론(Bistrifluron) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 비스트리플루론 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(채소류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 넣고 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한다. 여지가 깔려 있는 부크너 깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 합친 여액은 분액깔대기에 옮겨 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들고 난 후 정치시킨다. 수용액 층은 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨 15 g으로 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 100 mL의 초산에칠/헥산 혼합액 (40/60, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축하고 잔류물은 아세토니트릴/물 혼합액 (70/30, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (256 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (70/30, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

비스트리플루론 (10.0분) 8 ng

표 1. 배추 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	105.6±3.5	0.02
1.0	103.5±4.0

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (100 mm × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (70/30, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI negative-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100 ～ 500

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : -39 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored(m/z)
5.7	446	445

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

156) 에티클로제이트(Ethychlozate) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 형광검출기(Fluorescence Detector) 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 표준원액 : 에티클로제이트산 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(과실류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 넣고 아세톤 80 mL와 6N 염산 1 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액에 합한다. 여액을 40℃ 수욕 상에서 감압농축한 후 인산이수소칼륨(KH2PO4) 수용액 40 mL를 가하고 pH를 2.0±0.2로 조절한다. 조절된 용액을 250 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 250 mL 용량의 증류플라스크에 받고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 메탄올 5 mL와 4 N 수산화칼륨용액 4 mL을 첨가하여 실온에서 30분간 가수분해 시킨다. 용액에 인산이칼륨(K2HPO4) 수용액 40 mL를 가하고 pH를 8.0±0.2로 조절 후 헥산 50 mL를 가하여 2분배 심하게 흔들어 정치한다. 수용액 층을 100 mL의 비이커로 옮기고 pH를 2.0±0.2로 조절후 여분의 분액깔대기에 옮긴다. 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 250 mL 용량의 증류플라스크에 받고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 5 mL의 아세토니트릴/메탄올/물/포름산 (15/20/65/0.1, v/v/v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 형광검출기 (여기파장 300 nm, 형광파장 330 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/물/포름산 혼합액 (15/20/65/0.1, v/v/v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에티클로제이트산 (12.6분) 8 ng

표 1. 밀감 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	84.5±0.5	0.02
1.0	89.9±5.6

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18칼럼(100 mm × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물/포름산 혼합액 (25/75/0.1, v/v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～300

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : : 79 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 fragment ions

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
10.4	238	239

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

157) 옥사디아길(Oxadiargyl) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 옥사디아길 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 물 20 mL를 넣고 습윤화 한다. 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 여액은 분액깔대기에 옮겨 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 수용액 층은 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (2/98, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (7/93, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축하고 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (220 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

옥사디아길 (12.9분) 8 ng

표 1. 쌀 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	86.3±1.7	0.02
1.0	85.1±2.8

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 1.0 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : APCI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵ Capillary temperature : 275℃

㉶ Cone voltage : 78 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
13.5	340	341

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

158) 퀴날포스(Quinalphos) 시험법

(1) 장치

가스크로마토그래프 : 염광광도계(FPD)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 퀴날포스 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(곡류 약 1kg을 잘 혼합하여 표준체 420㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 물 20 mL를 넣고 습윤화 한다. 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과  합친다. 합친 여액을 분액깔대기로 옮겨 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 수용액 층은 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (2/98, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (5/95 v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 건고물을 아세톤 5 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : DB-5 캐필러리 칼럼(30 m × 0.53 mm ID, 0.5 ㎛)

㉯ 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 15 mL/min

㉰ 오븐온도 : 180℃

㉱ 주입부 : 240℃

㉲ 검출기온도 : 240℃

㉳ 주입량 : 2 μL (직접주입법)

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 가스크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 가스크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 (DB-5)

퀴날포스 (6.7분) 2 ng

표 1. 쌀 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.1	85.8±1.6	0.01
1.0	85.8±3.4

③ 가스크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : DB-5MS 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 1 mL/분

㉰ 칼럼온도：200℃

㉱ 주입부：Split mode 5:1 (purge time 1.0분)

㉲ 주입부 온도 : 260℃

㉳ Interface 온도 : 280℃

㉴ 분자량 범위 : 100～350

㉵  주입량 : 1 μL

표 2. 가스크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 fragment ions

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
9.2	298	298, 157, 146

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

159) 플루오피콜라이드(Fluopicolide) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 플루오피콜라이드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(과실류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 넣고 메탄올 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어  위의 여액과 합친다. 합친 여액은 분액깔대기로 옮겨 물 300 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 수용액 층은 버리고 디클로로메탄/헥산 혼합액 층을 무수황산나트륨 15g에 통과시켜 탈수한다. 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물을 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (7/93, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 건고물을 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)(269 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 50 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루오피콜라이드 (12.7분) 50 ng

표 1. 토마토 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	92.5±8.2	0.02
1.0	85.4±2.3

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18칼럼(100 m × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～500

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : 78 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored(m/z)
7.3	382	383

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

부 칙

① (시행일) 이 고시는 날로 부터 시행한다.

② (경과조치) 이 고시 시행 전에 종전의 기준 및 규격 등에 따라 제조․가공․판매 또는 수입하였던 식품은 종전의 규정에 의한다. (단, 제29-18 5), (3)항에 대해서는 이 고시 시행 전 접수되어 검사가 진행 중인 사항도 이 고시를 적용한다)

신․구조문 대비표

현  행

개  정

제 1. 총칙

1. (생  략)

2. 용어의 풀이

1)～ 33) (생  략)

<신 설>

3. (생  략)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1.～4.  (생  략)

5. 기준 및 규격의 적용

1)～3) (생  략)

4) 식중독균

식육(제조, 가공용원료는 제외한다), 살균 또는 멸균처리하였거나 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공식품에서는 특성에 따라 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) -------장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), ----------------- 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 등 식중독균이 검출되어서는 아니된다. 다만 ‘제 5. 식품별 기준 및 규격’에서 식중독균에 대한 규격이 정량적으로 정하여진 식품에는 정량규격을 적용한다. 또한 식육 및 식육제품에 있어서는 결핵균, 탄저균, 브루셀라균이 검출되어서는 아니된다.

5) ～ 9) (생  략)

10) 농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 잔류농약 적용기준

①～③ (생  략)

대분류	소분류	품 목
곡류	-	생략
서류	-	생략
콩류	-	생략
견과 종실류	견과류	생략
	종실류	참깨, --- 흑임자(검정깨), --- 홍화씨 등
과실류	이과류	생략
	감귤류	생략
	핵과류	생략
	장과류	포도, --- 구기자 등
	열대과일류	생략
채소류	엽채류	배추, --- 우엉잎 등
	엽경채류	생략
	근채류	생략
	과채류	생략
버섯류	-	생략
차	-	생략
인삼	-	생략
호프	-	생략
기타식물류	-	생략

④ 농산물의 분류

11)～15) (생  략)

6. (생  략)

제3. ～ 제4. (생  략)

제 5. 식품별 기준 및 규격

2. 빵 또는 떡류

1)～5) (생  략)

6) 시험방법

(1)～(3) (생  략)

(4) 황색포도상구균

크림을 도포 또는 충전한 제품의 크림 10 g을 무작위로 취한 후 멸균생리식염수 90 mL를 넣어 균질화한 것을 시험용액으로 하여 제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 14) 황색포도상구균시험법에 따라 시험한다.

(5) (생  략)

2. ～ 18 (생  략)

18. 음료류

18-1 과일․채소류음료

1)～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(7) (생  략)

(8) 바실러스 세레우스 : 1 mL 당 1,000 이하(비가열제품 또는 비가열 함유제품에 한한다)

6) 시험방법

(1)～(6) (생  략)

(7) 바실러스 세레우스

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 21) 바실러스세레우스 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

19. (생  략)

20. 장류

1)～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(4) (생  략)

(5) 바실러스 세레우스 : 1 g 당 10,000 이하(메주, 간장제품은 제외)

(6) (생  략)

6) 시험방법

(1)～(4) (생  략)

(5) 바실러스 세레우스

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 21) 바실러스세레우스 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

(6) (생  략)

21. 조미식품

21-1. (생  략)

21-2 소스류

1)～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(4) (생  략)

(5) 바실러스 세레우스 : 1 g 당 10,000 이하(멸균제품 제외)

6) 시험방법

(1)～(4) (생  략)

(5) 바실러스 세레우스

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 21) 바실러스세레우스 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

21-3～21-6 (생  략)

21-7 복합조미식품

1)～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(3) (생  략)

(4) 바실러스 세레우스 : 1 g 당 10,000 이하

6) 시험방법

(1)～(3) (생  략)

(4) 바실러스 세레우스

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 21) 바실러스세레우스 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

22～24 (생  략)

25. 절임식품

1)～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(5) (생  략)

(6) 바실러스 세레우스 : 1 g 당 10,000 이하(멸균제품 제외)

6) 시험방법

(1)～(5) (생  략)

(6) 바실러스 세레우스

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 21) 바실러스세레우스 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

26. 조림식품

1)～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(4) (생  략)

(5) 바실러스 세레우스 : 1 g 당 10,000 이하(멸균제품 제외)

6) 시험방법

(1)～(4) (생  략)

(5) 바실러스 세레우스

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 21) 바실러스세레우스 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

27.～ 29-17 (생  략)

29-18 즉석섭취․편의식품류

1)～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(2) (생  략)

(3) 황색포도상구균 : 음성이어야 한다.

(4)～(5) (생  략)

6) 시험방법

(1)～(2) (생  략)

(3) 황색포도상구균

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 14) 황색포도상구균시험법에 따라 시험한다.

(4)～(5) (생  략)

제 6. ～ 9. (생  략)

제 10. 일반시험법

1～7 (생  략)

8. 미생물시험법

1) 일반사항

(1) (생  략)

(2) 배지

①～ (생  략)

<신   설>

2)～13) (생  략)

14) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

<신  설>

(1) 증균배양

(생  략)

(2) 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지14)에 접종하여 37℃에서 16～24시간 배양한다. 배양결과 난황첨가 만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락(만니톨분해)을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환(난황반응 양성)이 있는 집락은 확인시험을 실시한다.

(3) 확인시험

(생  략)

<신  설>

<신   설>

15) 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus)

(1) 증균시험

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 펩톤수(배지 16) 10 mL에 가한 후 35°에서 18～24 시간 증균배양한다.

16)～20) (생  략)

21) 바실러스 세레우스

(2) 정량시험법

② 확인시험법

계수한 평판에서 ----- 확인시험을 실시한다.

22)～23) (생  략)

9. 식품중 농약잔류시험법

1)～5) (생  략)

6) 싸이할로쓰린, 싸이퍼메쓰린, 델타메쓰린 및 퍼메쓰린 시험법

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신   설>

<신  설>

7) 싸이플루쓰린 및 푸루발리네이트 시험법

<신  설>

<신  설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신  설>

<신  설>

<신   설>

8)～9) (생  략)

10) 디크로프루아니드 및 푸르시트리네이트 시험법

(1) (생  략)

(2) 시약 및 시액

⑤ 표준원액 : 디크크로프루아니드 및 푸르시트리네이트를 각각 헥산에 녹여 100㎎/㎏이 되게 한다

(3) (생  략)

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래피의 측정조건

㉮～㉯ (생  략)

㉰ 시험용액 주입부 및 검출기의 온도 : 디크로프루아니드는 210°, 프루시트리네이트는 270°

㉱ 캐리어가스 및 유량 : 질소(디크로프루아니드는 약 14분 10초, 프루시트리네이트는 약 18분에서 유출하는 유속으로 조정한다)

②～④ (생  략)

11)～12) (생  략)

13) 트라로메쓰린 및 펜발러레이트 시험법

<신  설>

<신  설>

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<신   설>

14)～21) (생  략)

22) 크로펜테진 시험법

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<신  설>

<신   설>

23)～30) (생  략)

31) 펜부타틴옥사이드 시험법

<신  설>

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<신   설>

32)～41) (생  략)

42) 포레이트 시험법

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43)～48) (생  략)

49) 터브포스 시험법

<신  설>

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50)～56) (생  략)

57) 바미도티온 시험법

<신  설>

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<신  설>

58) 브로모프로필레이트(Bromopropylate), 클로르단(chlordane), 디페닐아민(Diphenylamine), 디클로란(Dichloran), 페나미포스(Fenamiphos), 푸루실라졸(Flusilazole), 포모치온(Formothion), 헵타크로(Heptachlor), 헥사코나졸(Hexaconazole), 이프로디온(Iprodion), 이소펜포스(Isofenphos), 메카밤(Mecarbam), 메치오카브(Methiocarb), 메빈포스(Mevinphos), 모노크로토포스(Monocrothophos), 파클로부트라졸(Paclobutrazole), 페노트린(Phenothrin), 포스파미돈(Phosphamidone), 프로클로라즈(Prochloraz), 프로폭서(Propoxur), 퀸토젠(Quintozene), 테크나젠(Technazene), 치오메톤(Thiometon), 토릴푸르아니드(Tolylfluanid), 빈클로졸린(Vinclozolin) 등 다종다성분농약 동시시험법(Multi class pesticide multiresidue methods)

(1)～(4) (생  략)

59)～61) (생  략)

62) 펜틴아세테이트, 펜틴클로라이드, 펜틴하이드록사이드, 아조싸이클로틴, 싸이헥사틴, 펜부타틴옥사이드 시험법

63)～74) (생  략)

75) 펜프로패쓰린 및 바이오레스메쓰린 시험법

76) (생  략)

77) 헥시치아족스 시험법

78) 이미다크로프리드 시험법

79)～82) (생  략)

83) 이소프로치오란(Isoprothiolane), 이프로벤포스(Iprobenfos), 클로르훼나피르(Chlorfenapyr), 테부페노자이드(Tebufenozide), 테부펜피라드(Tebufenpyrad), 테프루벤주론(Teflubenzuron), 페나자퀸(Fenazaquin), 프로치오포스(Prothiofos), 플루페녹수론(Flufenoxuron), 피라크로포스(Pyraclofos), 피리다벤(Pyridaben), 피프로닐(Fipronil), 훼노부카브(Fenobucarb), 디메칠빈포스(Dimethylvinphos), 디메토모르프(Dimethomorph), 아세타미프리드(Acetamiprid) 등 동시다성분 시험법

(1)～(2) (생  략)

(3) 시험용액의 조제

①～② (생  략)

③ 정제

㉮～㉯ (생  략)

<신  설>

(4) ①～④ (생  략)

주, 이 시험법의 분석대상 농약

<신  설>

<신   설>

<신   설>

84)～88) (생  략)

89) 아바멕틴 시험법

90)～104) (생  략)

105) 밀베멕틴 시험법

106)～121) (생  략)

122) 디노테푸란 시험법

123)～140) (생  략)

141) 치펜설푸론 메칠(Thifensulfuron-methyl) 시험법

(1)～(2) (생  략)

(3) 시험용액의 조제

① 추출 : 검체를 ---. 여기에 포화염화나트륨용액 30 mL와 물 350 mL를 차례로 넣고 잘 흔들어 썩은 후 디클로로메탄 50 mL씩으로 2회 추출하고 헥산 50 mL씩 2회 씻고 헥산층은 버린다. 물층을 0.1 M HCl로 pH 3.0으로 조정한 후 분액깔대기에 옮기고 이에 디클로로메탄 50 mL씩으로 3회 세게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄을 무수황산나트륨으로 탈수하고 40℃ 이하의 수욕중에서 감압하에 용매를 날려 버리고 잔류물을 아세토니트릴 5 mL에 녹인다

② (생  략)

(4) (생  략)

142)～151) (생  략)

<신  설>

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<신   설>

<신   설>

제 1. 총칙

1. (현행과 같음)

2. 용어의 풀이

1)～ 33) (현행과 같음)

34) “건삼”(태극삼 포함)은 수삼을 햇볕․열풍 또는 기타의 방법으로 익히지 아니하고 말린 것, “홍삼”은 수삼을 증기 또는 기타의 방법으로 쪄서 익혀 말린 것, “인삼농축액 및 홍삼농축액”은 수삼․건삼 및 홍삼으로부터 물이나 주정 또는 물과 주정을 혼합한 용매로 추출, 여과하여 그대로 농축한 것을 말한다.

3. (현행과 같음)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1.～4. (현행과 같음)

5. 기준 및 규격의 적용

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식중독균

식육(제조, 가공용원료는 제외한다), 살균 또는 멸균처리하였거나 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공식품에서는 특성에 따라 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), ------  장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens),리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), --------- 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 등 식중독균이 검출되어서는 아니되며, 또한 식육 및 식육제품에 있어서는 결핵균, 탄저균, 브루셀라균이 검출되어서는 아니된다. 다만, ‘제 5. 식품별 기준 및 규격’에서 식중독균에 대한 규격이 정하여진 식품에는 해당식품의 규격을 적용하며, 그 외의 가공식품 중 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 다음과 같이 적용한다.

(1) 장류(메주 제외) 및 소스류, 복합조미식품, 절임식품, 조림식품 : g 당 10,000 이하(단 멸균제품은 음성이어야 한다).

(2) 위 (1) 이외의 식품 및 개별규격이 정하여지지 아니한 식품 중 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공식품 : g 당 1,000 이하(단 멸균제품은 음성이어야 한다).

5) ～ 9) (현행과 같음)

10) 농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 잔류농약 적용기준

①～③ (현행과 같음)

대분류	소분류	품 목
곡류	-	생략
서류	-	생략
콩류	-	생략
견과 종실류	견과류	생략
	종실류	참깨, --- 〈삭제〉, --- 홍화씨 등
과실류	이과류	생략
	감귤류	생략
	핵과류	생략
	장과류	포도, --- 구기자, 오미자 등
	열대과일류	생략
채소류	엽채류	배추, --- 우엉잎 , 겨자채 등
	엽경채류	생략
	근채류	생략
	과채류	생략
버섯류	-	생략
차	-	생략
인삼	-	생략
호프	-	생략
기타식물류	-	생략

④ 농산물의 분류

11)～15) (현행과 같음)

6. (생  략) (현행과 같음)

제3. ～ 제4. (현행과 같음)

제 5. 식품별 기준 및 규격

2. 빵 또는 떡류

1)～5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1)～(3) (현행과 같음)

(4) 황색포도상구균

크림을 도포 또는 충전한 제품의 크림 10 g을 무작위로 취한 후 멸균생리식염수 90 mL를 넣어 균질화한 것을 시험용액으로 하여 제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 14) 황색포도상구균 (1) 정성시험법에 따라 시험한다.

(5) (현행과 같음)

2. ～ 18 (현행과 같음)

18. 음료류

18-1 과일․채소류음료

1)～4) (현행과 같음))

5) 규격

(1)～(7) (현행과 같음)

<삭  제>

6) 시험방법

(1)～(6) (현행과 같음)

<삭  제>

19. (현행과 같음)

20. 장류

1)～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1)～(4) (현행과 같음)

<삭  제>

(5) (현행 (6)과 같음)

6) 시험방법

(1)～(4) (현행과 같음)

<삭  제>

(5) (현행 (6)과 같음)

21. 조미식품

21-1. (현행과 같음)

21-2 소스류

1)～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1)～(4) (현행과 같음)

<삭  제>

6) 시험방법

(1)～(4) (현행과 같음)

<삭  제>

21-3～21-6 (현행과 같음)

21-7 복합조미식품

1)～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1)～(3) (현행과 같음)

<삭  제>

6) 시험방법

(1)～(3) (현행과 같음)

<삭  제>

22～24 (현행과 같음)

25. 절임식품

1)～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1)～(5)  (현행과 같음)

<삭  제>

6) 시험방법

(1)～(5) (현행과 같음)

<삭  제>

26. 조림식품

1)～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1)～(4) (현행과 같음)

<삭  제>

6) 시험방법

(1)～(4) (현행과 같음)

<삭  제>

27. ～ 29-17 (현행과 같음)

29-18 즉석섭취․편의식품류

1)～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1)～(2) (현행과 같음)

(3) 황색포도상구균 : 1 g 당 100 이하

(4)～(5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1)～(2) (현행과 같음)

(3) 황색포도상구균

제 10. 일반시험법 8. 미생물시험법 14) 황색포도상구균 (2) 정량시험법에 따라 시험한다.

(4)～(6) (현행과 같음)

제 6. ～ 9. (현행과 같음)

제 10. 일반시험법

1～7 (현행과 같음)

8. 미생물시험법

1) 일반사항

(1) (현행과 같음)

(2) 배지

①～ (현행과 같음)

Baird-Parker Agar

Tryptone	10g
Beef extract/	5g
Yeast extract	1g
Sodium pyruvate	10g
Glycine	12g
Lithium Chloride 6H2O	5g
Agar	20g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 48-50°C로 식힌 다음 50% Egg Yolk Tellurite 용액 50 mL을 첨가한다.

2)～13) (현행과 같음)

14) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

(1) 정성시험법

① 증균배양

(현행과 같음)

② 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지14) 또는 Baird-Parker 한천평판배지(배지59)에 접종하여 37℃에서 16～24시간 배양한다. 배양결과 난황첨가만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락(만니톨분해)을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환(난황반응 양성)이 있는 집락 또는 Baird-Parker 한천평판배지에서 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.

③ 확인시험

(현행과 같음)

(2) 정량시험법

① 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 멸균 인산 완충 희석액에 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 한다. 멸균 인산 완충 희석액을 사용하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 Baird-Parker 한천평판배지(배지59) 3장에 0.3ml, 0.4ml, 0.3ml씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35℃에서 45～48시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다.

② 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지에 접종하고 37℃에서 18～24시간 배양한 후 14) 황색포도상구균 (1)정성시험법 ② 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.

③ 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다.

15) 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus)

(1) 증균시험

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 펩톤수(배지 16)를 가한 후 35°에서 18～24 시간 증균배양한다.

16)～20) (현행과 같음)

21) 바실러스 세레우스

(2) 정량시험법

② 확인시험법

계수한 평판에서 ----- 확인시험을 실시한다. 단, 최종 계산된 전형적인 집락의 개수가 규격치 이하일 경우 확인시험을 생략할 수 있다

22)～23) (현행과 같음)

9. 식품 중 농약잔류시험법

1)～5) (현행과 같음)

<삭  제>

6) 델타메쓰린(Deltamethrin), 바이오레스메스린(Bioresmethrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이플러쓰린(Cyfluthrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 트라로메스린(Tralomethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로파스린(Fenpropathrin). 푸르발리네이트(Fluvalinate), 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 및 퍼메쓰린(Permethrin) 시험법

(1) 장치

가스크로마토그래프 : 전자포획검출기(ECD)를 사용한다.

단, 바이오레스메스린은 가스크로마토그래프․질량분석기(MS)만을 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물：증류수 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실(Florisil) 카트리지：후로리실(500 ㎎) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

④ 표준원액：델타메쓰린, 바이오레스메스린, 싸이할로쓰린, 싸이플러쓰린, 싸이퍼메쓰린, 트라로메스린, 펜발러레이트, 펜프로파스린. 푸르발리네이트, 푸르시트리네이트 및 퍼메쓰린을 각각 아세톤에 녹여 500 mg/L로 한다.

⑤ 표준용액：표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 20 g, 채소류, 과실류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 20 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣는다(곡류 및 콩류는 시료에 물 20 mL를 넣고 1시간 방치). 여기에 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 상기 여액과 합친 후 1 L 분액깔대기로 옮기고 헥산 100 mL, 포화염화나트륨 용액 50 mL 및 물 450 mL를 가한 후 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 수용액 층을 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨칼럼에 통과시켜 탈수한다. 이액을 40℃ 이하에서 감압농축 하여 건고시킨 후 잔류물을 헥산 10 mL에 용해한다. 용해액 10 mL 중 4 mL를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL를 가하여 합친다. 곡류, 두류 및 고추 등 지방성 시료의 경우 상기 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 30 mL로 녹이고 250 mL 분액깔때기로 옮기고 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배추출 하여 아세토니트릴 층을 40℃ 이하에서 감압농축 하여 건고시키고 헥산 10 mL에 용해한다. 용해액 10 mL 중 4 mL 를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL를 가하여 합친다.

② 정제

미리 후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 여기에 위의 헥산 용해액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 버린다. 여기에 디클로로메탄/헥산 혼합액 (5/95, v/v) 10 mL로 씻어서 버리고 디클로로메탄/헥산 혼합액 (40/60, v/v) 10 mL로 용출시켜 시험관에 받는다. 용출액은 40℃이하의 수욕조 중에서 질소를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 즉시 이소옥탄 4 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : DB-5, DB-17 및 SPB-1701(30 m × 0.53 mm ID, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 15 mL/분

㉰ 오븐온도：210℃에서 시료를 주입하고 40분간 유지(DB-5)

230℃에서 시료를 주입하고 40분간 유지(DB-17)

225℃에서 시료를 주입하고 40분간 유지(SPB-1701)

㉱ 주입부：Splitless

㉲ 주입부 온도 : 260℃

㉳ 검출기의 온도：280℃

㉴ 주입량 : 2 μL(직접주입법)

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 가스크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 가스크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-5)

1 : 델타메쓰린 및 트라로메쓰린(37.2분) 0.2 ng, 2 : 바이오레스메스린(18.2분), 0.1 ng, 3 : 싸이할로쓰린(9.4분, 10.1분), 0.2 ng 4 : 싸이플러쓰린(16.9분, 17.8분, 18.2분, 18.6분) 0.3 ng, 5 : 싸이퍼메쓰린(19.1분, 20.1분, 20.5분, 21.0분) 0.5 ng , 6 : 펜발러레이트(25.7분, 29.5분) 0.3 ng, 7 : 펜프로파스린(6.8분) 0.1 ng, 8: 푸르발리네이트(30.1분, 32.4분) 0.3 ng, 9 : 푸르시트리네이트(21.3분, 23.3분) 0.3 ng, 10 : 퍼메쓰린(13.0분, 13.7분) 0.3 ng.

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계

분석성분	처리농도 (mg/kg)	회수율(%)						정량한계 (mg/kg)
		쌀	대두	사과	고추	배추	감자
바이오레스메스린*	0.5	91.3±5.6	93.0±2.1	90.0±2.1	85.3±1.1	88.2±3.5	90.3±3.1	0.05
	2.5	100.1±2.3	98.9±5.6	95.7±6.3	92.6±2.5	90.2±5.6	97.1±2.6
싸이할로쓰린	0.03	95.2±6.8	90.3±8.0	96.5±7.0	102.6±5.2	99.1±2.4	104.7±3.5	0.003
	0.15	90.0±4.8	83.2±2.9	85.3±6.0	103.6±4.6	91.7±3.1	105.2±6.3
싸이플러쓰린	0.1	88.2±8.9	87.0±5.7	90.1±7.8	103.2±8.1	100.7±6.1	98.7±7.8	0.01
	0.5	95.3±5.6	96.5±5.5	93.0±2.0	100.3±2.3	90.0±8.8	87.9±5.8
싸이퍼메쓰린	0.1	87.9±0.7	98.7±8.8	95.3±5.2	98.6±7.4	85.6±4.8	97.7±8.3	0.01
	0.5	95.0±8.8	101.3±9.0	103.5±4.3	96.1±2.9	93.1±2.3	90.4±4.5
델타메쓰린	0.05	100.1±5.9	103.2±5.9	102.5±2.6	98.9±7.8	89.6±2.3	101.8±3.5	0.005
	1.0	105.7±2.2	101.5±4.1	100.1±2.3	105.2±1.3	100.5±9.1	95.8±4.2
펜발러레이트	0.1	87.5±3.2	82.7±8.0	83.5±8.9	88.1±6.3	98.2±2.9	89.3±2.9	0.001
	0.5	94.5±6.9	91.0±2.1	90.3±5.8	89.7±8.8	91.2±5.2	89.5±7.4
펜프로파스린	0.03	103.2±5.1	99.3±4.7	93.1±5.6	100.0±5.9	96.4±7.9	90.6±8.4	0.003
	0.15	105.5±1.0	101.0±6.9	100.9±5.7	107.1±2.1	92.9±4.1	103.4±3.1
푸르시트리네이트	0.1	103.2±5.6	105.6±4.0	102.9±3.2	94.2±1.0	92.6±6.3	101.9±7.0	0.01
	0.5	101.5±8.0	100.1±2.9	96.7±3.2	99.3±0.8	91.5±6.4	90.1±6.3
푸르발리네이트	0.1	90.0±4.3	92.9±5.3	93.5±6.3	103.7±3.2	97.2±8.6	101.8±2.7	0.01
	0.5	88.9±6.7	83.6±5.7	97.8±5.9	105.1±7.6	93.0±1.7	98.5±4.7
퍼메쓰린	0.1	85.3±4.8	84.7±2.2	22.5±4.8	99.9±6.5	91.6±8.9	82.5±4.9	0.01
	0.5	89.7±7.1	88.7±6.1	90.0±2.1	101.3±5.8	88.0±7.1	85.7±6.4

* : 가스크로마토그래프․질량분석기 SIM 모드 분석 결과

③ 가스크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : DB-5MS 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 2ml/분

㉰ 칼럼온도：80°에서 시료를 주입하고 2분간 유지한 후 25°/분의 비율로 220° 로 상승시키고 5분간 유지하고, 2℃/분의 비율로 280°로 상승 시킨 후 5분간 유지한다.

㉱ 주입부：Splitless mode(purge time 0.9분)

㉲ 주입부 온도 : 260℃

㉳ Interface 온도 : 300℃

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵  주입량 : 2 μL

표 2. 가스크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 fragment ions

분석성분	머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored(m/z)
바이오레스메스린	18.2	338.4	171*, 143**, 128, 123, 166
싸이할로쓰린	22.1, 22.7	449.9	181, 197, 209, 141, 449
싸이플러쓰린	27.8, 28.3, 28.5, 28.7	434.3	163, 206, 226, 127
싸이퍼메쓰린	29.6, 29.8, 30.0, 30.8	416.3	163, 181, 127, 209
델타메쓰린 (트라로메스린)	36.4	505.2	181, 253, 209, 172, 152
펜발러레이트	32.8, 33.8	34.9.4	125, 167, 152, 181, 225, 419
펜프로파스린	20.0	349.4	181, 265, 125, 141, 208
푸르시트리네이트	30.0, 30.8	451.5	451, 199, 157, 181, 225
푸르발리네이트	33.6, 34.0	502.9	250, 181, 208, 152, 502, 234
퍼메쓰린	25.5, 26.1	391.9	183, 163, 127, 115

* : 정량 이온, ** : 확인 이온

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 가스크로마토그래프․질량분석기상의 머무름시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

<삭  제>

7) 디노테푸란(Dinotefuran), 아세타미프리드(Acetamiprid), 이미다클로프리드(Imidacloprid), 크로치아니딘(Clothianidin), 티아크로프리드(Thiacloprid), 티아메톡삼(Thiamethoxam) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV detector)를 사용한다.

②고속액체크로마토그래프․질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실(Florisil) : 칼람크로마토그라피용 후로리실을 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 하이드로매트릭스(Hydromatrix) 카트리지 : 20 mL 용량

④ Carboxylic acid(CBA) 카트리지 : 500 mg, 10 mL 용량

⑤ 표준원액 : 디노테푸란, 아세타미프리드, 이미다크로프리드, 크로치아니딘, 티아크로프리드, 티아메톡삼을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L으로 한다.

⑥ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑦ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 25 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Homogenizer)컵에 넣는다(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치).  아세토니트릴/물 혼합액 (80/20, v/v)을 가하고(쌀의 경우는 아세토니트릴 80 mL를 넣는다) 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 흡인여과하고, 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여액과 합친다. 합친 여액을 40℃에서 감압 농축하여 아세토니트릴을 모두 날려 보낸 후 남은 농축액을 미리 염화나트륨 14 g을 달아 넣은 50 mL 용량플라스크에 옮긴다. 소량의 물로 농축플라스크 내부 벽면을 씻어 합치고 염화나트륨을 완전히 용해시켜 정확하게 정용한다.

② 분배

㉮ 액-액 분배법

추출액 50 mL 중 시료 10 g에 해당하는 20 mL를 정확히 취하여 50 mL 마개시험관에 옮기고 헥산 20 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 헥산 층을 버린다. 다시 헥산 20 mL를 가하여 위의 세척과정을 반복한다. 수용액 층을 100 mL 분액깔대기에 옮기고 시험관내부를 디클로로메탄 20 mL로 씻어 위의 수용액과 합친 다음 1분간 격렬하게 진탕한다. 두 층이 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한다. 여기에 다시 디클로로메탄 20 mL를 가하여 위의 과정을 반복하고 디클로로메탄 추출액을 합친 다음 40℃에서 감압농축, 건고한다. 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

㉯ 하이드로매트릭스(Hydromatrix) 분배법

추출액 50 mL 중 시료 10 g에 해당하는 20 mL를 정확히 취하여 입상규조토가 충진 된 하이드로매트릭스 카트리지에 가하고 10분간 방치하여 충분히 침투시킨다. 이 카트리지에 헥산 50 mL로 흘려버리고 여기에 디클로로메탄 100 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 40℃에서 감압농축, 건고하고 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

※ 분배법은 액-액 분배법과 하이드로매트릭스 분배법 모두 가능함.

④ 정제

안지름 11 mm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 5 g과 그 위에 2 cm 높이로 무수황산나트륨을 차례로 건식충전하고 25 mL의 디클로로메탄으로 씻어서 버린다. 무수황산나트륨 층이 노출되기 직전에 위의 디클로로메탄으로 녹인 액 10 mL를 칼럼에 가하고 여분의 디클로로메탄 5 mL로 칼럼벽면을 씻어버린다. 표면이 노출되기 직전 50 mL의 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (4/96, v/v)을 가하여 씻어 버리고, 여기에 50 mL의 아세톤/디클로로메탄 (45/55, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃에서 감압농축, 건고한 후 잔류물을 10 mL의 아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다. 단, 밀감 시료의 경우는 잔류물을 10 mL의 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v)으로 녹인 다음 CBA 카트리지를 이용하여 아래와 같은 추가 정제과정을 거친다.

※ 추가 정제(밀감)

위의 디클로로메탄/헥산 혼합액 10 mL를 미리 헥산 5 mL로 활성화한 CBA 카트리지에 가하고 1 mL/min 속도로 씻어 버린다. 여기에 다시 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL로 씻어 버리고 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v) 5 mL로 용출시켜 받는다. 이 분획을 40℃에서 감압농축, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v) 10 mL로 녹인 후 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 오븐온도 : 40℃

㉰ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (258 nm)

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액 (40/60, v/v)으로 35분간 농도 구배한다.

㉲ 이동상 유량 : 1 mL/min

㉳ 시료 주입량 : 40 μL

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1 : 디노테푸란 (9.1분), 2: 티아메톡삼 (15.3분), 3 : 크로치아니딘 (18.1분), 4 : 이미다크로프리드 (19.3분), 5 : 아세타미프리드 (21.5분), 6 : 티아크로프리드 (25.4분). (각 20 ng 주입)

표 1. 농산물 중 회수율 및 정량한계

화합물	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	감자	사과	밀감	포도
아세타미프리드	0.2	88.5±2.8	90.0±1.4	90.1±1.0	83.7±4.6	89.8±7.9	0.02
	1.0	93.4±1.6	94.4±1.2	93.7±2.1	89.0±2.5	85.0±2.1
크로치아니딘	0.2	92.7±2.1	93.2±1.2	94.2±1.1	88.4±3.0	93.9±3.8	0.02
	1.0	96.6±0.8	96.2±1.1	96.9±2.4	93.9±3.1	92.9±1.5
디노테푸란	0.2	86.2±2.1	86.4±1.0	86.9±1.2	73.6±2.5	88.8±1.8	0.02
	1.0	91.3±0.6	89.8±0.7	89.8±1.8	82.5±1.5	88.8±0.6
이미다크로프리드	0.2	97.2±2.1	94.1±1.9	95.7±1.5	92.5±3.8	90.4±7.2	0.02
	1.0	98.9±0.3	98.2±0.7	97.7±2.3	96.9±3.9	86.1±2.3
티아크로프리드	0.4	87.0±2.1	88.1±1.1	91.9±0.8	81.5±4.2	85.5±8.3	0.03
	2.0	88.4±4.3	90.3±0.7	91.9±2.5	82.9±7.5	80.3±3.7
아세타미프리드	0.2	86.0±1.5	93.0±1.9	90.8±1.0	96.1±4.4	85.0±0.9	0.02
	1.0	91.6±0.9	95.7±0.3	96.1±0.8	90.8±0.8	92.3±0.9
크로치아니딘	0.2	89.9±1.7	99.1±2.1	96.0±1.0	98.6±0.9	95.0±1.1	0.02
	1.0	95.4±1.0	99.2±0.5	99.4±0.5	94.6±0.4	98.0±0.5
디노테푸란	0.2	84.3±2.3	91.5±1.8	89.8±0.8	85.3±0.6	88.8±2.2	0.02
	1.0	89.3±1.9	93.6±0.7	94.2±0.2	87.3±0.6	92.2±0.5
이미다크로프리드	0.2	90.8±2.8	97.6±1.0	97.3±1.3	94.0±2.8	94.1±0.9	0.02
	1.0	96.1±2.0	99.6±0.7	100.1±0.8	93.5±0.3	99.8±0.9
티아크로프리드	0.4	87.2±3.4	92.6±1.9	91.4±0.5	78.5±1.2	88.2±0.2	0.03
	2.0	91.3±2.4	94.1±0.3	94.4±1.3	81.0±0.4	92.4±0.9
티아메톡삼	0.2	83.6±2.1	92.9±1.5	88.3±0.6	83.7±2.1	83.5±0.6	0.02
	1.0	94.2±1.9	96.3±0.5	97.7±1.8	87.2±1.9	91.7±1.9
티아메톡삼	0.2	86.4±4.6	87.7±3.0	88.0±0.9	77.2±3.5	87.2±6.9	0.02
	1.0	94.0±0.8	93.5±1.5	92.9±2.2	92.8±1.0	83.9±1.8

③ 고속액체크로마토그래프 ․ 질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (100 mm × 2.0 mm i.d, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상：아세토니트릴/물 혼합액 (5/95, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액 (40/60, v/v)으로 35분간 농도 구배한다.

㉱ 이동상 유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료 주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～350

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : 77 V

표 3. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored (m/z)
아세타미프리드	6.5	202	203
크로치아니딘	12.4	291	292
디노테푸란	15.1	249	250
이미다크로프리드	16.3	255	256
티아크로프리드	18.4	222	223
티아메톡삼	22.1	253	253

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

8)～9) (현행과 같음)

10) 디크로프루아니드 시험법

(1) (현행과 같음)

(2) 시약 및 시액

⑤ 표준원액 : 디크크로프루아니드를 각각 헥산에 녹여 100 ㎎/L가 되게 한다

(3) (현행과 같음)

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래피의 측정조건

㉮～㉯ (현행과 같음)

㉰ 시험용액 주입부 및 검출기의 온도 :  210℃

㉱ 캐리어가스 및 유량 : 질소(약 14분에 유출하는 유속으로 조정한다)

②～④ (현행과 같음)

11)～12) (현행과 같음)

<삭  제>

13) 펜치온(Fenthion), 포레이트(Phorate) 및 터브포스(Terbufos) 시험법

(1) 장치

① 가스크로마토그래프 : 염광광도검출기(FPD : 인용 간섭필터, 파장 526 nm)를 사용한다.

② 가스크로마토그래프․질량분석기(GC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 표준원액 : 펜치온 옥손 설폰, 포레이트 옥손 설폰 및 터브포스 옥손 설폰을 아세톤에 녹여 500 mg/L로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로  혼합, 희석한다.

⑤m-클로로퍼벤조익에시드(m-Chloroperbenzoic acid)액 : 사용직전에 디클로로메탄에 녹여 준비한다.

* m-클로로퍼벤조익에시드액 첨가량 결정 : 시료 추출부터 분배까지의 추출물량 측정한 후 추출물 무게의 2배량을 가하여 산화반응을 시킨다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출 및 분배

시료 [곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 30 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 30 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL와 물 450 mL를 가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 (콩 시료는 약하게) 흔들어 섞은 후 정치한다. 유기용매 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 수용액 층에 다시 50 mL의 디클로로메탄을 가하여 위의 분배과정을 되풀이 한다. 위의 여액을 합쳐 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축하여 m-클로로퍼벤조익에시드액에 의한 산화과정을 거치며, 고추, 쌀, 대두 등 지방성 시료는 헥산/아세토니트릴 분배과정과 m-클로로퍼벤조익에시드액에 의한 산화과정을 거친다.

② 산화반응(m-클로로퍼벤조익에시드액 산화반응)

위의 건고물을 헥산/아세토니트릴 10 mL에 녹이고 10% m-클로로퍼벤조익에시드액 3 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 실온에서 30분간 방치하여 옥손설폰 형태로 변환한다. 반응물을 250 mL의 분액깔대기에 옮기고 디클로로메탄 25 mL로 용기를 씻어 위의 반응물과 합친다. 분액깔대기에 포화 sodium sulfite용액 25 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 (대두 시료는 약하게) 섞은 후 정치하여 디클로로메탄 층을 여분의 분액깔대기에 옮긴다. 다시 디클로로메탄 층에 포화 중탄산나트륨(sodium bicarbonate) 수용액 25 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이 한다. 디클로로메탄 층을 증류플라스크에 옮기고 아세톤에 녹인 10% 폴리에틸렌글리콜 용액 50 μL를 가하여 40℃에서 감압농축 한다. 잔류물에 아세톤 2 mL (Florisil 및 대사체) 또는 4 mL (펜치온, 포레이트 및 대사체)로 녹여 시험용액으로 한다.

※ 고추, 쌀, 대두 등 지방성 시료(헥산/아세토니트릴 분배 추가)

위의 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 30 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 30 mL을 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 아세토니트릴 층을 125 mL 용량의 증류플라스크에 옮기고 다시 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이한다. 합친 여액에 아세톤에 녹인 10% 폴리에틸렌글리콜 용액 50 μL를 가한 후 40℃에서 감압농축 하여 위의 m-클로로퍼벤조익에시드액에 의한 산화과정을 거친다.

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 및 온도:

- DB-1701 및 DB-17캐필러리 칼럼(30 m × 0.53 mm ID, 0.5 ㎛) : 펜치온 옥손 설폰 220℃, 포레이트 옥손 설폰 190℃, 터브포스 옥손 설폰 215℃

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 15 mL/분

㉰ 주입부 온도 : 260℃

㉱ 검출기의 온도 : 240℃,

㉲ 주입량 : 2 μL (직접 주입법)

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 가스크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 가스크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-1701, 30 m × 0.53 mm ID)

1 : 펜치온 옥손 설폰(6.5분) , 2 : 포레이트 옥손 설폰(6.4분), 3 : 터브포스 옥손 설폰(7.5분) (각 3 ng 주입)

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		현미	콩	감자	사과	고추
펜치온	0.2	78.6±8.9	77.1±9.4	73.9±7.2	80.1±5.6	75.9±3.7	0.02
	1.0	75.3±6.9	74.5±5.6	72.3±2.0	79.5±7.4	75.1±2.5
펜치온 설폭사이드	0.2	73.6±9.7	75.1±5.1	74.6±9.3	80.6±6.2	74.7±2.6	0.02
	1.0	74.8±4.2	78.6±7.2	73.3±7.3	81.2±9.7	77.1±6.5
펜치온 설폰	0.2	79.2±9.7	72.9±5.6	77.4±8.3	74.1±2.9	78.0±6.2	0.02
	1.0	78.3±8.1	73.3±8.3	71.2±5.9	75.6±8.5	79.8±4.7
펜치온 옥손	0.2	90.4±2.3	97.3±2.3	99.9±7.3	96.3±2.3	78.2±0.2	0.02
	1.0	95.2±5.1	93.5±1.4	98.8±2.8	101.6±7.5	76.7±3.3
포레이트	0.2	91.3±5.6	93.0±2.1	90.0±2.1	102.6±5.2	99.1±2.4	0.02
	1.0	100.1±2.3	98.9±5.6	95.7±6.3	103.6±4.6	91.7±3.1
포레이트 설폭사이드	0.2	95.2±6.8	90.3±8.0	96.5±7.0	103.2±8.1	100.7±6.1	0.02
	1.0	90.0±4.8	83.2±2.9	85.3±6.0	100.3±2.3	90.0±8.8
포레이트 설폰	0.2	88.2±8.9	87.0±5.7	90.1±7.8	98.6±7.4	85.6±4.8	0.02
	1.0	95.3±5.6	96.5±5.5	93.0±2.0	96.1±2.9	93.1±2.3

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계 (계속)

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		현미	콩	감자	사과	고추
포레이트 옥손	0.2	87.9±0.7	98.7±8.8	95.3±5.2	98.9±7.8	89.6±2.3	0.02
	1.0	95.0±8.8	101.3±9.0	103.5±4.3	105.2±1.3	100.5±9.1
포레이트 옥손 설폭사이드	0.2	100.1±5.9	103.2±5.9	102.5±2.6	88.1±6.3	98.2±2.9	0.02
	1.0	105.7±2.2	101.5±4.1	100.1±2.3	89.7±8.8	91.2±5.2
포레이트 옥손 설폰	0.2	87.5±3.2	82.7±8.0	83.5±8.9	100.0±5.9	96.4±7.9	0.02
	1.0	94.5±6.9	91.0±2.1	90.3±5.8	107.1±2.1	92.9±4.1
터브포스	0.1	82.5±1.6	94.9±5.9	104.3±3.8	98.4±0.3	96.4±7.8	0.01
	1.0	87.6±5.8	94.5±0.6	93.3±5.1	98.2±1.2	88.7±5.1
터브포스 설폭사이드	0.1	84.4±0.9	88.8±2.1	95.2±2.9	89.4±2.1	98.0±2.2	0.01
	1.0	80.9±7.0	82.6±1.2	93.2±1.6	82.4±0.5	87.2±3.6
터브포스 설폰	0.1	77.3±2.9	90.4±3.4	93.4±1.7	95.7±2.3	94.5±0.2	0.01
	1.0	77.8±2.3	88.1±4.0	92.3±0.7	83.0±0.5	86.4±2.4

③ 가스크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : DB-17MS 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 2 mL/분

㉰ 칼럼온도：초기의 온도 45℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 40℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 230℃에서 2분간 유지한다. 그때 5℃/분의 비율로 재차 온도를 상승시켜 260℃에서 2분간 유지한다.

㉱ 주입부：Splitless mode(purge time 1.0분)

㉲ 주입부 온도 : 270℃

㉳ Interface 온도 : 300℃

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵  주입량 : 1 μL

표 2. 가스크로마토그래프 ․ 질량분석기 분석을 위한 fragment ions

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	ion monitored(m/z)
펜치온 옥손 설폰	15.2	294	294, 215, 279, 230
포레이트 옥손 설폰	10.6	276	183, 169, 155, 139, 127
터브포스 옥손 설폰	11.2	304	183, 169, 156, 140, 128

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 가스크로마토그래프 질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

14)～21) (현행과 같음)

<삭  제>

22) 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin) 시험법

(1) 장치

① 고성능고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기 (UV Detector)를 사용한다.

② 고속액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그라피용 후로리실을 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 아미노프로필(Aminopropyl) 카트리지：아미노프로필(0.5 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

⑤ 표준원액 : 아바멕틴 및 밀베멕틴을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

⑥ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑦ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 20 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고 메탄올 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L용량의 분액깔대기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL의 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 분배과정을 되풀이 하고 추출된 용액을 합친다.

② 정제

안지름 11 mm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 1g을 충전한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 디클로로메탄 추출액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충전제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/디클로로메탄 혼합액 (10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 다시 메탄올/초산에칠 혼합액 (0.5/99.5, v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 감압농축 하여 건고하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.  미리 아미노프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 카트리지에 위의 추출액 10 mL를 가한 후 2 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 카트리지의 필터 표면이 노출되기 직전 톨루엔 3 mL ,디클로로메탄 5 mL로 통과시켜 버리고, 다시 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (20/80, v/v) 6 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 질소가스로 완전히 날려 보낸 후 아세토니트릴/메탄올/물 혼합액 (52.5/22.5/25, v/v/v) 2 mL 에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18, (150 mm × 3.9 mm, 4 ㎛)

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/물 (52.5/22.5/25, v/v/v)

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 246 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1 : 아바멕틴 B1a (10.9분) 18.8 ng, 2 : 아바멕틴 B1b (8.1분) 1.2 ng, 3 : 밀베멕틴 A3 (9.7분) 8.5 ng, 밀베멕틴 A4 (13.2분) 19.5 ng.

표 1. 농산물중 회수율 및 정량한계

화합물	처리수준 (mg/kg)	회수율 (%)		정량한계 (mg/kg)
		사과	감귤
아바멕틴 B1a	0.047	86.8±2.8	87.0±6.5	0.003
	0.235	87.1±1.1	84.8±3.9
아바멕틴 B1b	0.003	-	-	0.003
	0.015	85.6±3.1	82.1±4.6
밀베멕틴 A3	0.021	98.6±2.2	94.1±6.8	0.003
	0.105	92.9±0.9	89.6±4.6
밀베멕틴 A4	0.049	91.3±1.8	86.2±3.6	0.003
	0.245	95.1±1.4	86.9±3.8
아바멕틴 B1a	0.094	93.0±3.0	87.4±1.3	0.005
	0.470	91.7±0.7	91.5±1.2
아바멕틴 B1b	0.006	-	-	0.005
	0.030	82.9±2.1	77.6±3.2
밀베멕틴 A3	0.042	94.0±5.8	85.9±8.2	0.005
	0.210	94.7±1.0	91.9±1.0
밀베멕틴 A4	0.098	87.7±2.9	95.4±4.9	0.005
	0.490	89.3±0.8	88.6±2.0

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18,(150 mm × 2.1 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상 : 아세토니트릴/물 (70/30, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 0.2 mL/min

㉲ 이온화 : ESI negative-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 300～1000

㉵  주입량 : 10 μL

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored (m/z)
아바멕틴 B1b	8.0	858	857
아바멕틴 B1a	9.8	872	871
밀베멕틴 A3	10.6	528	527
밀베멕틴 A4	13.6	542	541

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 고속액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

23)～30) (현행과 같음)

<삭  제>

31) 벤족시메이트(Benzoximate), 클로펜테진(Clofentezine), 페나자퀸(Fenazaquin), 훼노치오카브(Fenothiocarb), 펜피록시메이트(Fenpyroximate), 헥시치아족스 (Hexythiazox), 피리다벤(Pyridaben) 및 테부펜피라드(Tebufenpyrad) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

② 고속액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 아미노프로필(Aminopropyl) 카트리지：아미노-프로필(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

③ 후로리실카트리지 : 후로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL용량) 또는 이와 동등한 것

④ 표준원액 : 벤족시메이트, 클로펜테진, 페나자퀸, 훼노치오카브, 펜피록시메이트, 헥시치아족스, 피리다벤, 테부펜피라드를 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 25g, 채소류 및 과실류는 약 1kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치) 메탄올 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부크너 깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 내려 위의 여액과 합친다. 합친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들어 정치한다. 헥산 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 40℃의 수욕 상에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

㉮ 클로펜테진, 페나자퀸, 훼노치오카브, 펜피록시메이트, 헥시치아족스, 피리다벤, 테부펜피라드

미리 아미노-프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 위의 녹인 액 10 mL 중 2 mL을 카트리지 상단에 가한다. 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 버리고 여분의 헥산 2 mL을 가하여 씻어버린다. 표면이 노출되기 직전 다시 헥산 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산 혼합액 (35/65, v/v) 5 mL를 가하여 용출한다. 용출액을 헥산 5 mL로 미리 활성화시킨 후로리실 카트리지에 가하고 디클로로메탄 10 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 질소가스로 날려 보낸 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v) 4 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

㉯ 벤족시메이트

미리 후로리실카트리지에 헥산 10 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 위의 녹인 액 10 mL 중 2 mL을 카트리지 상단에 가한다. 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 버리고 여분의 헥산 2 mL를 가하여 씻어버린다. 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL를 가하여 용출한다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 질소가스로 날려 보낸 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v) 5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (3.9 mm × 150 mm, 4 ㎛)

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상

Ⓐ 클로펜테진, 페나자퀸, 훼노치오카브, 펜피록시메이트, 헥시치아족스, 피리다벤, 테부펜피라드 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)으로 30분간 농도균배한 후 5분이상 흘려보낸다.

Ⓑ 벤족시메이트

아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 228 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1 : 훼노치오카브 (7.8분) 20 ng, 2 : 클로펜테진 (12.1분) 20 ng, 3 : 벤족시메이트 (14.2분) 10 ng, 4 : 테부펜피라드 (15.2분) 20 ng, 5 : 헥시치아족스 (20.4분) 20 ng, 6 : 펜피록시메이트 (23.3분) 20 ng, 7 : 페나자퀸 (24.3분) 20 ng, 8 : 피리다벤 (27.8분) 20 ng.

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)					정량한계 (mg/kg)
		현미	고추	배추	사과	감귤
벤족시메이트	0.2	82.5±1.6	94.9±5.9	104.3±3.8	98.4±0.3	96.4±7.8	0.02
	1.0	87.6±5.8	94.5±0.6	93.3±5.1	98.2±1.2	88.7±5.1
클로펜테진	0.4	84.4±0.9	88.8±2.1	95.2±2.9	89.4±2.1	98.0±2.2	0.04
	2.0	80.9±7.0	82.6±1.2	93.2±1.6	82.4±0.5	87.2±3.6
페나자퀸	0.4	77.3±2.9	90.4±3.4	93.4±1.7	95.7±2.3	94.5±0.2	0.04
	2.0	77.8±2.3	88.1±4.0	92.3±0.7	83.0±0.5	86.4±2.4
훼노치오카브	0.4	90.9±1.7	92.9±1.7	98.7±0.5	95.0±1.0	89.1±1.0	0.05
	2.0	89.1±6.7	86.0±3.2	95.1±0.7	88.7±0.8	89.8±2.7
펜피록시메이트	0.4	91.8±3.5	96.8±5.0	98.7±0.6	101.5±3.9	101.2±1.0	0.04
	2.0	84.6±3.5	81.1±1.5	95.0±0.7	90.0±5.9	88.3±1.7
헥시치아족스	0.4	75.9±0.5	90.0±0.9	100.2±1.1	97.0±2.1	97.1±1.9	0.04
	2.0	84.2±1.7	83.9±2.7	96.9±0.7	90.1±0.6	89.9±1.0
피리다벤	0.4	70.7±0.5	90.5±2.1	100.3±0.9	93.3±2.5	98.4±1.6	0.04
	2.0	73.8±4.9	83.5±2.6	98.5±1.6	88.4±2.0	88.8±3.0
테부펜피라드	0.4	86.0±1.0	91.3±0.6	99.8±1.6	99.6±5.8	102.9±3.2	0.04
	2.0	81.1±1.2	85.3±4.1	96.1±1.1	99.3±1.0	88.0±1.9

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18(100 mm × 2.1 mm, 3㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상 : 아세토니트릴/물 (55/45, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 0.2 mL/min

㉲ 이온화 : ESI positive mode(클로펜테진의 경우 ESI negative mode)

㉳ 분자량 범위 : 50～500

㉴  주입량 : 10 μL

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored (m/z)
벤족시메이트	12.5	363	364, 366
클로펜테진	9.6	302	302
페나자퀸	19.7	306	307
훼노치오카브	6.4	253	254
펜피록시메이트	22.4	421	422
헥시치아족스	19.3	352	353
피리다벤	32.7	364	365, 367
테부펜피라드	12.4	333	334, 336

④ 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. 주. 고속액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

⑤ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

32)～41) (현행과 같음)

<삭  제>

42) 아조싸이클로틴 (Azocyclotin) 및 싸이헥사틴 (Cyhexatin) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 실리카겔 (Silica gel) : 칼럼크로마토그라피용 실리카겔(70～230mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 표준원액 : 아조싸이클로틴, 싸이헥사틴 각각 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료 [채소류 및 과실류는 약 1 kg을 브렌더에 넣고 균질화한 후 검체 25 g을 단다]를 삼각플라스크에 정확히 달아 넣고 아세톤 80 mL와 브롬산 5 mL를 차례로 가하여 5분간 진탕 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 용기를 아세톤 20 mL를 가하여 세척하고 앞서의 여액과 합한다. 합 친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들어 정치한다. 유기용매층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시키고 40℃의 수욕 상에서 감압농축 한다. 잔류물을 아세토니트릴 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 11 mm의 칼럼관에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충진시키고 아세토니트릴 25 mL를 흘려보낸다. 아세토니트릴로 녹이 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 아세토니트릴 5 mL로 씻어버린다. 칼럼에 다시 아세토니트릴 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세토니트릴/초산 혼합액(100/0.2, v/v) 30 mL를 가하여 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 감압농축 하여 잔류물을 5 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴/염산 1 mM 혼합액 (85/15, v/v) 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (150 mm × 3.9 mm, 4㎛)

㉯ 칼럼온도 : 40℃

㉰ 이동상 : 염화나트륨 5 mM이 함유된 아세토니트릴/염산 1 mM (85/15, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 214 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

싸이헥사틴 (9.9분) 50 ng

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)			정량한계 (mg/kg)
		감자	사과	감귤
아조싸이클로틴	0.4	76.8±1.2	84.4±3.5	87.3±3.7	0.04
	2.0	81.3±1.6	86.6±1.9	91.3±0.5
싸이헥사틴	0.4	82.4±2.3	79.6±3.9	84.3±4.1	0.04
	2.0	87.2±2.9	77.5±0.6	78.6±3.7

③ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

④ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

43)～48) (현행과 같음)

<삭  제>

49) 펜부타틴옥사이드 (Fenbutatin oxide) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 실리카겔 (Silica gel) : 칼럼크로마토그라피용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 표준원액 : 펜부타틴옥사이드 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료(채소류 및 과실류는 브렌더에 넣고 균질화한 후 검체 25 g을 단다)를 삼각플라스크에 정밀히 달아 넣고 아세톤/초산 혼합액 (100/1, v/v) 80 mL를 가하여 30분간 진탕 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 아세톤 20 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 합친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들고 난 후 정치한다. 유기용매 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키고 40℃의 수욕 상에서 감압농축 한다. 건고물을 디클로로메탄 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 11 mm의 칼럼관에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충진 시키고 디클로로메탄 25 mL를 흘려보낸다. 디클로로메탄 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 디클로로메탄 5 mL로 씻어버린다. 칼럼에 다시  디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/초산 혼합액 (100/1, v/v) 60 mL를 가하여 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 감압농축하고 건고물은 5 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴/메탄올/염산 1 mM 혼합액 (50/35/15, v/v/v) 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (150 mm × 3.9 mm, 4㎛)

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상 : 염화나트륨 5 mM이 함유된 아세토니트릴/메탄올/염산 1 mM (50/35/15, v/v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 214 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율(%)			정량한계 (mg/kg)
		감자	사과	밀감
펜부타틴옥사이드	0.4	77.3±2.9	74.5±2.5	73.1±2.2	0.04
	2.0	73.0±2.2	76.8±2.3	73.3±0.6

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

펜부타틴옥사이드 (12.5분)50 ng.

③ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

④ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

50)～56) (현행과 같음)

<삭  제>

57) 펜틴아세테이트 (Fentin acetate), 펜틴클로라이드 (Fentin chloride) 및 펜틴하이드록사이드 (Fentin hydroxide) 시험법

(1) 장치

① 고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약 및 시액

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

③ 실리카겔 (Silica gel) : 칼럼크로마토그라피용 실리카겔(70～230mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

④ 표준원액 : 펜틴아세테이트, 펜틴클로라이드, 펜틴하이드록사이드를 각각 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

⑤ 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

시료[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 25 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 삼각플라스크에 넣고(곡류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 10분간 방치) 아세톤 80 mL와 브롬산 5 mL를 차례로 가하여 5분간 진탕 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 아세톤 20 mL씻어 위의 여액과 합한다. 합친 여액을 1000 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 1분간 심하게 흔들고 난 후 정치한다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시키고 수용액 층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 추출한 후 합친다. 추출액을 40℃의 수욕 상에서 감압농축하고 건고물을 아세토니트릴 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 11 mm의 칼럼관에 실리카겔 5g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충진 시키고 아세토니트릴 25 mL를 흘려보낸다. 아세토니트릴 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 아세토니트릴 5 mL로 씻어버린다. 칼럼에 다시 아세토니트릴 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 아세토니트릴/초산 혼합액(100/0.2, v/v) 50 mL를 가하여 용출시킨다. 용출액을 40℃의 수욕 상에서 감압농축 하고 건고물을 40 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴/염산 3 mM 혼합액 (45/55, v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다(채소류 및 과일류의 경우 10 mL에 녹이고 곡류 및 콩류는 4 mL에 녹인다.)

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (150 mm × 3.9 mm, 4㎛)

㉯ 칼럼온도 : 30℃

㉰ 이동상 : 염화나트륨 5 mM이 함유된 아세토니트릴/염산 3 mM (45/55, v/v)의 혼합액

㉱ 이동상 유량 : 1.0 mL/min

㉲ 검출기파장 : UV 214 nm

② 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

표 1. 농산물중 회수율 및 검출한계

대상성분	처리농도 (mg/kg)	회수율(%)					정량한계 (mg/kg)
		쌀	감자	콩	사과	밀감
펜틴하이드 록사이드	0.2	88.3±7.9	94.6±3.2	94.4±3.6	90.3±0.3	94.5±1.5	0.02
	1.0	88.9±1.8	97.6±0.9	93.0±1.7	93.8±2.1	92.3±0.8
*펜틴아세테이트 및 펜틴클로라이드는 분석시 펜틴하이드록사이드로 전환됨.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

펜틴하이드록사이드 (12.7분) 20 ng.

③ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

④ 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

58) 다종농약다성분 시험법(Multi class pesticide multiresidue methods)

(1)～(4) (현행과 같음)

59)～61) (현행과 같음)

<삭  제> <2008.3>

63)～74) (현행과 같음)

<삭  제> <2008.3>

76) (현행과 같음)

<삭  제> <2008.3>

<삭  제> <2008.3>

79)～82) (현행과 같음)

83) 다종농약다성분 시험법(Multi class pesticide multiresidue methods)

(1)～(2) (현행과 같음)

(3) 시험용액의 조제

①～② (현행과 같음)

③ 정제

㉮～㉯ (현행과 같음)

주. 곡류, 두류, 종실류 등 지방성 시료의 경우 위의 용매를 날려버린 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴 층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔사를 20% 아세톤 함유 헥산 2 mL(GC 측정농약), 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(HPLC 측정농약)로 녹인다.

(4) ①～④ (현행과 같음)

<삭  제>

(5) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

① GC 분석 대상(150종)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39	Acrinathrin(ECD) Aldrin(ECD) Anilofos(NPD) Azinphos-methyl(ECD, NPD) α, β, γ, δ-BHC(ECD) Bifenthrin(ECD) Bromacil(ECD) Bromopropylate(ECD) Cadusafos(NPD, FPD) Captafol(ECD) Captan(ECD) Carbophenothion(ECD, NPD) Chinomethionat(ECD) Chlordane(ECD) Chlorfenapyr(NPD, FPD) Chlorobenzilate(ECD) Chlorothalonil(ECD) Chlorpyrifos(ECD, NPD) Chlorpyrifos-methyl(ECD, NPD) Cycloprothrin(ECD, NPD) Cyflufenamid(ECD) Cyfluthrin(ECD)* Cyhalothrin(ECD)* Cypermethrin(ECD)* Cyproconazole(NPD) Cyprodinil(NPD) DDT(ECD) Deltamethrin(ECD)* Diazinon(ECD, NPD) Dichlofluanid(ECD, NPD) Dicloran(ECD) Dicofol(ECD) Dieldrin(ECD) Diethofencarb(NPD) Dimepiperate(ECD, NPD, FPD) Dimethenamid(NPD) Dimethoate(ECD, NPD) Dimethylvinphos(NPD, FPD) Diniconazole(ECD)	40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78	Diphenamid(NPD) Diphenylamine(NPD) Dithiopyr(ECD) Edifenphos(ECD, NPD) α-Endosulfan(ECD) β-Endosulfan(ECD) Endosulfan-sulfate(ECD) Endrin(ECD) EPN(ECD, NPD) Esprocarb(ECD, NPD) Ethion(ECD, NPD) Ethoprophos(ECD, NPD) Etoxazole(NPD) Etrimfos(ECD, NPD) Fenamidone(ECD, NPD) Fenarimol(ECD, NPD)* Fenazaquin(NPD, FPD)* Fenbuconazole(ECD)* Fenitrothion(ECD, NPD) Fenobucarb(NPD) Fenothiocarb(NPD)* Fenoxanil(ECD, NPD) Fenoxycarb(NPD, UVD) Fenpropathrin(ECD, NPD)* Fenthion(ECD, NPD)* Fenvalerate(ECD)* Fipronil(NPD, FPD) Flonicamid(ECD) Fluazinam(ECD) Fludioxonil(NPD) Flupyrazofos(NPD, FPD) Flusilazole(NPD) Flusulfamide(ECD) Flutolanil(ECD) Fluvalinate(ECD)* Folpet(ECD) Fosthiazate(NPD, FPD) Fthalide(ECD) Furathiocarb(NPD)	79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117	Heptachlor epoxide(ECD) Heptachlor(ECD) Imazalil(ECD) Indanofan(ECD) Indoxacarb(ECD) Iprobenfos(NPD, FPD) Iprodione(ECD) Iprovalicarb(ECD) Isazofos(NPD) Isofenphos(NPD) Isoprothiolane(NPD, FPD) Kresoxim-methyl(NPD) Malathion(ECD, NPD) Mecarbam(ECD, NPD) Mefenacet(ECD) Mepronil(NPD) Metconazole(NPD) Methidathion(ECD) Methoxychlor(ECD) Molinate(NPD) Myclobutanil(ECD, NPD)* Nitrapyrin(ECD) Nonachlor(ECD) Nuarimol(ECD)* Ofurace(ECD) Oxadixyl(ECD) Paclobutrazol(ECD, NPD)* Parathion(ECD, NPD) Parathion-methyl(ECD, NPD) Penconazole(ECD, NPD) Pendimethalin(ECD, NPD) Permethrin(ECD)* Phenthoate(ECD) Phosalone(ECD, NPD) Phosmet(ECD) Phosphamidone(ECD, NPD) Pirimicarb(NPD) Pirimiphos-ethyl(NPD) Pirimiphos-methyl(NPD)

② HPLC 분석 대상(60종)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15	Acetamiprid(HPLC-UVD)* Azafenidin(HPLC-UVD) Azoxystrobin(HPLC-UVD) Benzoximate(HPLC-UVD)* Boscalid(HPLC-UVD) Cinosulfuron(HPLC-UVD) Clothianidin(HPLC-UVD)* Cyazofamid(HPLC-UVD) Cyhalofop-butyl(HPLC-UVD) Cymoxanil(HPLC-UVD) Dimethomorph(HPLC-UVD) Ethaboxam(HPLC-UVD, 310nm) Fenpyroximate(HPLC-UVD)* Fenhexamid(HPLC-UVD) Flufenacet(HPLC-UVD)	16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30	Flufenoxuron(HPLC-UVD) Fluquinconazole(HPLC-UVD) Flumioxazine(HPLC-UVD) Forchlorfenuron(HPLC-UVD) Ferimzone(HPLC-UVD) Fluacrypyrim(HPLC-UVD) Hexaflumuron(HPLC-UVD) Imibenconazole(HPLC-UVD) Lufenuron(HPLC-UVD) Mepanipyrim(NPD, HPLC-UVD) Methabenzthiazuron(HPLC-UVD) Methoxyfenozide(HPLC-UVD) Novaluron(HPLC-UVD) Oxaziclomefon(HPLC-UVD) Pentoxazone(HPLC-UVD)	31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45	Pyraclostrobin(HPLC-UVD) Pyrazolate(HPLC-UVD) Pyrimethanil(HPLC-UVD) Pyributicarb(HPLC-UVD) Pyriproxyfen(HPLC-UVD) Pyroquilon(HPLC-UVD) Spirodiclofen(HPLC-UVD) Tebufenozide(HPLC-UVD) Teflubenzuron(HPLC-UVD) Tiadinil(HPLC-UVD) Thenychlor(HPLC-UVD) Thiacloprid(HPLC-UVD)* Thiamethoxam(HPLC-UVD)* Tricyclazole(NPD,HPLC-UVD) Trifloxystrobin(HPLC-UVD)
1 2 3 4 5	Aldicarb(HPLC-FLD) Bendiocarb(HPLC-FLD) Butocarboxim(HPLC-FLD) Carbaryl(HPLC-FLD) Ethiofencarb(HPLC-FLD)	6 7 8 9 10	Isoprocarb(HPLC-FLD) Methiocarb(HPLC-FLD) Methomyl(HPLC-FLD)* Metolcarb(HPLC-FLD) Oxamyl(HPLC-FLD)*	11 12 13 14 15	Promecarb(HPLC-FLD) Propoxur(HPLC-FLD) Thiodicarb(HPLC-FLD) 2,3,5-Trimethacarb(HPLC-FLD) 3,4,5-Trimethacarb(HPLC-FLD)

주. 이 시험법을 이용하여 위의 분석대상 성분중 * 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 정량분석은 아래의 시험법에 따른다.

6) 델타메쓰린(Deltamethrin), 바이오레스메스린(Bioresmethrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이플러쓰린(Cyfluthrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 트라로메스린(Tralomethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로파스린(Fenpropathrin). 푸르발리네이트(Fluvalinate), 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 및 퍼메쓰린(Permethrin) 시험법

7) 디노테푸란(Dinotefuran), 아세타미프리드(Acetamiprid), 이미다클로프리드(Imidacloprid), 크로치아니딘(Clothianidin), 티아크로프리드(Thiacloprid), 티아메톡삼(Thiamethoxam) 시험법

13) 펜치온(Fenthion), 포레이트(Phorate) 및 터브포스(Terbufos) 시험법

31) 벤족시메이트(Benzoximate), 클로펜테진(Clofentezine), 페나자퀸(Fenazaquin), 훼노치오카브(Fenothiocarb), 펜피록시메이트(Fenpyroximate), 헥시치아족스 (Hexythiazox), 피리다벤(Pyridaben) 및 테부펜피라드(Tebufenpyrad) 시험법

39) 메소밀(Methomyl) 및 옥사밀(Oxamyl) 시험법

71) 디페노코나졸(Difenoconazole), 페나리몰(Fenarimol), 펜부코나졸(Fenbuconazole), 헥사코나졸(Hexaconazole), 마이클로부타닐(Myclobutanil), 누아리몰 (Nuarimol), 파클로부트라졸(Paclobutrazol) 시험법

158) 퀴날포스(Quinalphos) 시험법

84)～88) (현행과 같음)

<삭  제> <2008.3>

90)～104) (현행과 같음)

<삭  제> <2008.3>

106)～121) (현행과 같음)

<삭  제> <2008.3>

123)～140) (현행과 같음)

141) 치펜설푸론 메칠(Thifensulfuron-methyl) 시험법

(1)～(2) (현행과 같음)

(3) 시험용액의 조제

① 추출 : 검체를 ---. 여기에 포화염화나트륨용액 30 mL와 물 350 mL를 차례로 넣고 헥산 50 mL씩 2회 분배하여 씻어버린다. 물 층을 0.1 M 염산으로 pH 3.0으로 조정한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한다. 수용액 층에 다시 50 mL의 디클로로메탄을 가하여 위의 분배과정을 되풀이 한다. 위의 여액을 합친 후 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축하고 잔류물을 아세토니트릴 5 mL에 녹인다.

② (현행과 같음)

(4) (현행과 같음)

142)～151) (현행과 같음)

152) 만디프로파미드(Mandipropamid) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 만디프로파미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(채소류 및 과실류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 컵에 정밀히 달아 넣고 메탄올 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 위의 여액에 합한다. 여액은 분액깔대기에 옮겨 물 300 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 물 층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물을 헥산 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 100 mL의 초산에칠/헥산 혼합액 (50/50, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 잔류물을 10 mL의 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (226 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

만디프로파미드 (11.0분) 10 ng

표 1. 고추 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.4	98.5±2.0	0.04
2.0	98.9±2.8

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18칼럼(100 mm × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 5 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～500

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : 14 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
6.3	411	412

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

153) 메소트리온(Mesotrione) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

①	용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 실리카겔 : 칼럼 크로마토그래프용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 메소트리온 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g)를 호모게나이저 컵에 정밀히 달아 넣고 0.2 M 염화암모늄(NH4Cl) 수용액(pH 2.0) 20 mL를 가하여 10분간 습윤화 하고 아세토니트릴 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물 은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여액에 합한다. 합친 여액을 40℃에서 감압농축하고 건고물에 40 mL의 2% 인산이칼륨(K2HPO4)수용액을 가한 후 1 M의 염산으로 pH를 6.0±0.2로 조절한다. pH 조절액을 250 mL용량의 분액깔대기로 옮기고 50 mL 헥산을 가하여 분배 후 헥산 층을 씻어버린다. 수용액 층은 100 mL용량의 비이커에 받아서 6 M 염산과 1 M의 염산을 이용하여 pH를 2.0±0.2로 조절하고 여분의 분액깔대기로 옮긴다. 분액깔대기에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 아세톤 10 mL에 녹인다.

② 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 실리카겔 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 아세톤 25 mL을 가하여 상단에 소량의 아세톤이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 아세톤에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 50 mL의 메탄올/아세톤 혼합액 (7/93, v/v) 가하여 유출시켜 버리고, 50 mL의 메탄올/아세톤 혼합액 (20/80, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하고 건고물은 아세토니트릴/50 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4) 혼합액 (30/70, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (258 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/50 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4)혼합액 (30/70, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 50 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메소트리온 (11.9분) 10 ng

표 1. 쌀 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.1	74.3±0.6	0.01
0.5	79.1±4.8

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18칼럼(100 mm × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물/Formic acid 혼합액 (25/75/0.1, v/v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI negative-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Tube lens offset : : -31V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
12.0	339	338

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

154) 메트알데하이드 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 실리카겔 : 칼럼 크로마토그래프용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 메트알데하이드 표준품을 디클로로메탄에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 클로로포름에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤2,4-디니트로페닐하이드라진(2,4-Dinitrophenylhydrazine, 2,4-DNPH) : 6 N 염산용액 200 mL에 2,4-DNPH 0.5 g을 녹여 조제한다.

⑥ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출(1차)

검체(채소류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 컵에 정밀히 달아 넣고 디클로로메탄 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물을 디클로로메탄 40 mL로 씻어 내려 위의 여액과 합친 후 1 L 분액깔대기로 옮기고 2% Na2S2O5 수용액 100 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 수용액 층은 버리고 다시 디클로로메탄 층에 2% Na2S2O5 수용액 100 mL를 가하여 앞서의 과정을 되풀이 한다. 디클로로메탄 층에 추가로 증류수 100 mL를 가하여 1분간 결렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리된 후 수용액 층은 버린다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한 후 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축한다.

② 유도체화

위의 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 가하여 잔류물을 녹이고 2,4-디니트로페닐하이드라진 염산용액 10 mL을 넣어 40℃ 수욕조에서 20분간 교반하여 유도체 반응을 거친다.

③ 추출(2차)

20분이 경과한 반응액을 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴 후 디클로로메탄 20 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 10 g에 통과시켜 탈수한다. 다시 수용액 층에 디클로로메탄 20 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 앞서의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃의 수욕 상에서 감압 하에 농축하여 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

④ 정제

안지름 15 mm, 길이 40 cm의 칼럼관에 실리카겔 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL를 유출하여 버린다. 상기 용해액 10 mL을 넣은 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 건고물은 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

※ 주 : 실험용기 세척시 주로 사용되는 아세톤은 일부의 아세트알데하이드를 포함하고 있어 분석에 방해가 됨으로 상기시험법 이용시 사용되는 용기는 디클로로메탄으로 세척 후 사용하여야 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (360 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아세트알데하이드 - 2,4-DNPH (9.3분) 10 ng

표 1. 배추 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.1	95.2±6.7	0.01
1.0	98.4±3.5

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 1 mL/min

㉲ 시료주입량 : 5 μL

㉳ 이온화 : APCI negative-ion mode

㉳ 분자량 범위 : 100～300

㉴ Capillary temperature : 275

㉵ Cone voltage : -55 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 fragment ions

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
9.3	224	223

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

155) 비스트리플루론(Bistrifluron) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 비스트리플루론 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(채소류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 넣고 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 합친 여액은 분액깔대기에 옮겨 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들고 난 후 정치시킨다. 수용액 층은 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨 15 g으로 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 100 mL의 초산에칠/헥산 혼합액 (40/60, v/v)으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축하고 잔류물은 아세토니트릴/물 혼합액 (70/30, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (256 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

비스트리플루론 (10.0분) 8 ng

표 1. 배추 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	105.6±3.5	0.02
1.0	103.5±4.0

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (100 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI negative-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100 ～ 500

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : -39 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored(m/z)
5.7	446	445

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

156) 에티클로제이트(Ethychlozate) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 형광검출기(Fluorescence Detector) 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 표준원액 : 에티클로제이트산 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(과실류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 넣고 아세톤 80 mL와 6N 염산 1 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액에 합한다. 여액을 40℃ 수욕 상에서 감압농축한 후 인산이수소칼륨(KH2PO4) 수용액 40 mL를 가하고 pH를 2.0±0.2로 조절한다. 조절된 용액을 250 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 250 mL 용량의 증류플라스크에 받고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 메탄올 5 mL와 4 N 수산화칼륨용액 4mL을 첨가하여 실온에서 30분간 가수분해 시킨다. 용액에 인산이칼륨(K2HPO4) 수용액 40 mL를 가하고 pH를 8.0±0.2로 조절 후 헥산 50 mL를 가하여 2분배 심하게 흔들어 정치한다. 수용액층을 100 mL의 비이커로 옮기고 pH를 2.0±0.2로 조절 후 여분의 분액깔대기에 옮긴다. 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 250 mL 용량의 증류플라스크에 받고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 5 mL의 아세토니트릴/메탄올/물/포름산 (15/20/65/0.1, v/v/v/v)으로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한것

㉯ 검출기 : 형광검출기 (여기파장 300 nm, 형광파장 330 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/물/포름산 혼합액 (15/20/65/0.1, v/v/v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에티클로제이트산 (12.6분) 8 ng

표 1. 밀감 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	84.5±0.5	0.02
1.0	89.9±5.6

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (100 mm × 2 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물/포름산 혼합액 (25/75/0.1, v/v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～300

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : : 79 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
10.4	238	239

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

157) 옥사디아길(Oxadiargyl) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 옥사디아길 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 물 20 mL를 넣고 습윤화 한다. 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL오 씻어 위의 여액과 합한다. 여액은 분액깔대기에 옮겨 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 수용액 층은 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (2/98, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (7/93, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축하고 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (220 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 20 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

옥사디아길 (12.9분) 8 ng

표 1. 쌀 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	86.3±1.7	0.02
1.0	85.1±2.8

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (60/40, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 1.0 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : APCI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～400

㉵ Capillary temperature : 275℃

㉶ Cone voltage : 78 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
13.5	340	341

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

158) 퀴날포스(Quinalphos) 시험법

(1) 장치

가스크로마토그래프 : 염광광도계(FPD)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 퀴날포스 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(곡류 약 1kg을 잘 혼합하여 표준체 420㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 물 20 mL를 넣고 습윤화 한다. 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과  합친다. 합친 여액을 분액깔대기로 옮겨 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 수용액 층은 버리고 헥산 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (2/98, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (5/95 v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 하여 건고물을 아세톤 5 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 가스크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : DB-5 캐필러리 칼럼(30m × 0.53 mm ID, 0.5 ㎛)

㉯ 캐리어가스 및 유량 : 헬률, 15 mL/min

㉰ 오븐온도 : 180℃

㉱ 주입부 : 240℃

㉲ 검출기온도 : 240℃

㉳ 주입량 : 2 μL (직접주입법)

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 가스크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 가스크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 (DB-5)

퀴날포스 (6.7분) 2 ng

표 1. 쌀 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.1	85.8±1.6	0.01
1.0	85.8±3.4

③ 가스크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : DB-5MS 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 캐리어가스 및 유량：헬륨, 1 mL/분

㉰ 칼럼온도：200℃

㉱ 주입부：Split mode 5:1 (purge time 1.0분)

㉲ 주입부 온도 : 260℃

㉳ Interface 온도 : 280℃

㉴ 분자량 범위 : 100～350

㉵  주입량 : 1 μL

표 2. 가스크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 fragment ions

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
9.2	298	298, 157, 146

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

159) 플루오피콜라이드(Fluopicolide) 시험법

(1) 장치

고속액체크로마토그래프 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector)를 사용한다.

(2) 시약

① 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

② 후로리실 : 칼럼 크로마토그래프용 후로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용

③ 표준원액 : 플루오피콜라이드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 조제하여 표준원액으로 한다.

④ 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

⑤ 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

(3) 시험용액의 조제

① 추출

검체(과실류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 25 g)를 호모게나이저 용기에 정밀히 달아 넣고 메탄올 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려 있는 부크너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어  위의 여액과 합친다. 합친 여액은 분액깔대기로 옮겨 물 300 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 수용액 층은 버리고 디클로로메탄/헥산 혼합액 층을 무수황산나트륨 15g에 통과시켜 탈수한다. 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축 하여 날려버리고 건고물을 헥산 10 mL로 녹인다.

② 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL을 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 헥산에 녹인 용액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 초산에칠/헥산 혼합액 (7/93, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 초산에칠/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 건고물을 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

(4) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프의 측정조건

㉮ 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

㉯ 검출기 : 자외부흡광광도검출기(UV Detector) (269 nm)

㉰ 칼럼오븐 : 40℃

㉱ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉲ 이동상유량 : 1 mL/min

㉳ 시료주입량 : 50 μL

② 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 고속액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 고속액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루오피콜라이드 (12.7분) 50 ng

표 1. 토마토 중 회수율 및 정량한계

처리농도 (mg/kg)	회수율 (%)	정량한계 (mg/kg)
0.2	92.5±8.2	0.02
1.0	85.4±2.3

③ 고속액체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

㉮ 칼럼 : C18칼럼(10 cm × 2 mm ID, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

㉯ 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v)

㉰ 칼럼온도：40℃

㉱ 이동상유량 : 0.2 mL/min

㉲ 시료주입량 : 10 μL

㉳ 이온화 : ESI positive-ion mode

㉴ 분자량 범위 : 100～500

㉵ Capillary temperature : 330℃

㉶ Cone voltage : 78 V

표 2. 고속액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
7.3	382	383

④ 정성시험

위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

⑤ 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.