식품의약품안전처 공고 제2016-674호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2016. 10. 11.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2016-674호

｢식품의 기준 및 규격｣ (식품의약품안전처고시 제2016-106호, 2016. 9. 30.)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 ｢행정절차법｣ 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2016년 10월 11일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

국내 식용근거가 확인된 신규 식품원료를 식품에 사용할 수 있는 원료 및 제한적으로 사용할 수 있는 식품원료 목록에 추가하여 다양한 식품을 생산할 수 있도록 식품산업을 활성화하고자 함

식품 중 검출되어서는 아니 되는 물질인 니트로푸라존 잔류물의 정의를 개정하고, 관련 시험법을 신설하여 식품 중 동물용의약품의 잔류기준을 합리적으로 관리하고자 함

또한, 국내외에서 사용되는 농약 및 동물용의약품의 잔류허용기준을 개정·신설하고, 식품 중 잔류동물용의약품 동시 시험법 분석 대상을 확대하여 신속한 검사 업무를 추진하고자 함.

2. 주요 내용

가. 식품에 사용할 수 있는 원료 추가 신설 및 개정[안 별표 1]

1) 국내 식용근거가 확인된 감태, 모무늬돌김, 마의 주아(영여자), 조릿대 잎 및 김치에서 추출한 균주인 Weissella cibaria 등 19품목을 식품에 사용할 수 있는 원료 목록에 추가

2) 국제적으로 공인된 기구(Food and Agriculture Organization of the United Nation의 Fisheries & Aquaculture, WorldFish의 Fishbase 등)에서 어획량에 대한 정보, 식용 근거 및 학명·이명 등이 확인된 수산물은 식품원료로 사용 가능하도록 단서 조항 신설

3) 녹두의 싹, 타조의 알을 식품원료로 추가 등 식품원료 6품목 사용기준 개정

4) ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣에 따라 인정된 흰점박이꽃무지 유충과 장수풍뎅이 유충을 식품원료 목록에 추가하여 인정받은 자 외에도 모든 영업자가 사용할 수 있도록 확대

5) 식품에 사용가능한 원료의 품목 확대로 다양한 제품 개발 등 식품산업활성화에 기여

나. 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료 신설 및 개정[안 별표 2]

1) 학명이 동일한 울금과 강황의 명칭을 통일하기 위하여 울금을 목록에서 삭제하고 강황의 이명으로 개정

2) 미생물 원료인 Debaryomyces hansenii 및 Leuconostoc pseudomesenteroides를 유가공품 제조에, Protaminobacter rubrum은 팔라티노스(설탕대체용 당류) 제조에 사용 가능하도록 제한적으로 사용할 수 있는 원료 목록에 추가

3) 기타 원료 중 칼슘보충용 원료에 진주 추가

4) 식품원료 사용범위 확대로 다양한 제품 개발 등 식품산업활성화에 기여

다. 잔류동물용의약품 기준적용 대상 개정[안 제2. 5. 11) (1) ①]

1) 관련 법령에서 안전성 및 유효성 문제 성분으로 고시되어 식품 중 검출되어서는 아니 되는 동물용의약품인 니트로푸라존 잔류물의 정의 개정 및 관련 시험법 신설 필요

2) 갑각류에서 기준적용 대상을 대사물질인 세미카바자이드에서 원물질인 니트로푸라존으로 개정하고 관련 주석 및 시험법 신설

3) 식품 중 검출되어서는 아니 되는 물질에 대한 안전관리를 강화하고자 함

라. 일반시험법 개정 [안 제9. 4.1.3.15, 제9. 4.1.3.43, 제9. 4.1.3.44, 제9. 4.1.3.45, 제9. 4.1.3.46, 제9. 4.1.3.47, 제9. 4.1.4.34, 제9. 4.1.4.111, 제9. 4.1.4.191, 제9. 4.1.4.192, 제9. 4.1.4.193, 제9. 4.1.4.194, 제9. 4.1.4.195, 제9. 4.1.4.196, 제9. 4.1.4.197, 제9. 4.1.4.198, 제9. 4.1.4.199, 제9. 4.1.4.200, 제9. 4.1.4.201, 제9. 4.3.1.4, 제9. 5.3.2, 제9. 5.3.3, 제9. 5.3.8, 제9. 5.3.13, 제9. 5.3.15, 제9. 5.3.16, 제9. 5.3.18, 제9. 5.3.20, 제9. 5.3.35, 제9. 5.3.42, 제9. 5.3.53, 제9. 5.3.56, 제9. 5.3.67, 제9. 5.3.84, 제9. 5.3.89, 제9. 5.3.96, 제9. 5.3.98, 제9. 5.3.99, 제9. 5.3.111, 제9. 5.3.112, 제9. 5.3.113, 제9. 5.3.114]

1) 신규 기준설정 잔류물질에 대한 시험법 신설 및 잔류물의 정의 개정 또는 효율성이 낮은 시험법의 분석 조건 개정에 따른 시험법 개정 필요

2) 사이클라닐리프롤, 니트로푸라존 등 42종 분석법 신설 및 개정

3) 식품 중 잔류물질 시험법을 신설 및 개정하여 검사 신뢰도를 제고함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

마. 농산물 중 농약 잔류허용기준 신설 및 개정[안 별표 3 중 (1) 이미녹타딘, (2) 글루포시네이트, (3) 글리포세이트, (9) 델타메트린, (21) 디클로르보스, (26) 디페노코나졸, (29) 디플루벤주론, (31) 마이클로뷰타닐, (38) 메탈락실, (54) 벤타존, (55) 뷰프로페진, (59) 비터타놀, (61) 비펜트린, (63) 세톡시딤, (68) 사이할로트린, (71) 아미트라즈, (79) 알루미늄포스파이드, (85) 에토펜프록스, (101) 이미다클로프리드, (105) 이프로디온, (110) 카두사포스, (111) 카바릴, (112) 카벤다짐, (114) 카보퓨란, (118) 캡탄, (133) 테부코나졸, (135) 터부포스, (141) 트리아디메놀, (158) 페나리몰, (186) 프로클로라즈, (192) 프로피코나졸, (206) 클로르페나피르, (208) 테부펜피라드, (209) 테플루벤주론, (210) 페나자퀸, (212) 플루페녹수론, (218) 디메토모르프, (220) 디에토펜카브, (225) 사이프로디닐, (227) 아세타미프리드, (228) 아족시스트로빈, (230) 크레속심메틸, (231) 클로르플루아주론, (235) 포스티아제이트, (237) 피메트로진, (238) 플루디옥소닐, (239) 플루아지남, (242) 루페뉴론, (248) 아바멕틴, (249) 에마멕틴벤조에이트, (273) 밀베멕틴, (285) 아크리나트린, (286) 에트리디아졸, (290) 인독사카브, (309) 플루톨라닐, (321) 디노테퓨란, (323) 보스칼리드, (324) 비페나제이트, (325) 사이아조파미드, (332) 클로티아니딘, (345) 피라클로스트로빈, (349) 노발루론, (352) 메톡시페노자이드, (355) 스피로디클로펜, (356) 에타복삼, (357) 디티오카바메이트, (370) 벤티아발리카브아이소프로필, (371) 디니코나졸, (380) 피리달릴, (386) 플로니카미드, (394) 비스트리플루론, (399) 사이플루메토펜, (403) 메타플루미존, (404) 메트라페논, (405) 사이에노피라펜, (408) 스피네토람, (410) 옥솔린산, (416) 클로란트라닐리프롤, (417) 플루벤디아마이드, (422) 펜티오피라드, (424) 피리플루퀴나존, (427) 이미시아포스, (428) 플루오피람, (430) 설폭사플로르, (433) 사이안트라닐리프롤, (435) 펜피라자민, (437) 플룩사피록사드, (438) 피리오페논, (439) 스피로테트라맷, (452) 아이소페타미드, (458) 사이클라닐리프롤, (459) 피플루뷰마이드]

1) 「농약관리법」에 신규 등록된 농약의 안전관리 및 수입 농산물에 농약 잔류허용기준 설정 신청에 따른 관련 기준 신설 및 개정 필요

2) 사이클라닐리프롤 등 농약 92종의 농약 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 합리적으로 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

바. 인삼 중 농약 잔류허용기준 신설 및 개정[안 별표 4 중 (26) 플루톨라닐, (84) 이미다클로프리드]

1) ｢농약관리법｣에 등록되어 있는 농약 중 인삼에 대한 사용범위 확대에 따라 해당 농약의 잔류허용기준 신설 및 개정 필요

2) 이미다클로프리드 등 농약 2종의 농약 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 농약 잔류허용기준 신설 및 개정을 통하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

사. 식품 중 동물용의약품 잔류물의 정의 개정 및 잔류허용기준 신설[안 별표 6 중 (2) 나이카바진, (27) 에토파베이트, (36) 죠렌, (66) 콜리스틴, (173) 시프로헵타딘, (174) 요오드퀴놀린설폰산, (175) 플루메타손]

1) 국내 허가되어 있으나 잔류허용기준이 없는 동물용의약품에 대한 기준 신설 필요

2) 시프로헵타딘 등 3종에 대한 잔류허용기준 신설

3) 나이카바진, 에토파베이트, 죠렌 및 콜리스틴 잔류물의 정의 개정

4) 동물용의약품 잔류허용기준을 확대하여 국민에게 안전한 식품 공급

아. 용어 및 문구 개정[안 제1. 2. 41)～42), 제2. 5. 10) (1), 제5. 13) 3) (4)]

1) ‘영아’, ‘유아’에 대한 정의 신설

2) ‘당해 농산물’의 적용범위 신설

3) 두부류에 사용할 수 있는 수질기준의 관리 법령인 환경정책기본법령의 개정으로 관련 조항 문구 수정

3. 의견 제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는  단체 또는 개인은 2016년 11월 11일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처장(우편번호 : 28159, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명2로 187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2417, 팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2016-00호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2016-106호, 2016. 9. 30.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2016년  0월  00일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1. 2. 41)～42)을 다음과 같이 각각 신설한다.

41) ‘영아’라 함은 생후 12개월 미만인 사람을 말한다.

42) ‘유아’라 함은 생후 12개월부터 36개월까지인 사람을 말한다.

제2. 5. 5)의 (5)를 다음과 같이 개정한다.

(5) 식용곤충의 중금속 기준(건조물로서)

① 갈색거저리유충 : 납 0.1 mg/kg 이하, 카드뮴 0.05 mg/kg 이하, 비소 0.1 mg/kg 이하

② 쌍별귀뚜라미 : 납 0.3 mg/kg 이하, 카드뮴 0.3 mg/kg 이하

③ 장수풍뎅이유충 : 납 0.3 mg/kg 이하, 카드뮴 0.3 mg/kg 이하

④ 흰점박이꽃무지유충 : 납 0.3 mg/kg 이하, 카드뮴 0.05 mg/kg 이하, 비소 0.1 mg/kg 이하

제2. 5. 11) (1) ① 중 ‘식품* 중 검출되어서는 아니 되는 물질’의 1을 다음과 같이 한다.

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
1	니트로푸란{푸라졸리돈(Furazolidone), 푸랄타돈(Furaltadone), 니트로푸라존(Nitrofurazone), 니트로푸란토인(Nitrofurantoine), 니트로빈(Nitrovin) 등} 제제 및 대사물질 ◎ 잔류물의 정의 : 3-amino-2-oxazolidinone(AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl- 2-oxazolidinone(AMOZ), semicarbazide(SEM)*2, nitrofurazone*3, 1-aminohydantoin(AHD), nitrovin

*주2. 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(semicarbazide, SEM)는 비가열 축산물 및 동물성 수산물(단순절단 포함, 갑각류 제외)의 가식부위에 한하여 적용한다.

*주3. 갑각류에 한해 적용한다.

제2. 5. 10)의 (1) ①의 ㉮를 다음과 같이 개정한다.

㉮ 당해 농산물(개별 농산물 그 자체를 의미하며 그룹으로 설정된 농산물은 제외)에 대한 CODEX 기준

제5. 13. 3) (4)를 다음과 같이 개정한다.

(4) 두부류 제조시에는 ｢환경정책기본법 시행령｣ [별표] 환경기준 중 3. 라. 1)과 4)의 수질기준에 적합한 해수(염지하수 포함)에 한하여 사용할 수 있다.

제9. 4.1.3.15를 다음과 같이 한다.

4.1.3.15  옥사밀(Oxamyl)

가. 시험법 적용범위

고추, 당근. 대두, 땅콩, 메밀, 배추, 버섯류, 보리, 복숭아, 양파, 오렌지, 오이, 옥수수, 완두콩, 토마토, 파, 호박 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 가수분해하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프 질소․인 검출기(NPD)를 사용한다.

2) 기체크로마토그래프․질량분석기(GC/MS)를 사용한다.

라. 시약 및 시액

1) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액：옥사밀 옥심을 아세톤에 녹여 100 mg/L으로 한다.

4) 표준용액：표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 곡류는 50 g에 물 40 mL, 두류는 25 g에 물 20 mL를 넣고 1시간 방치, 채소류, 과실류, 종실류 및 견과류는 약 1kg을 분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 균질기(Omni mixer)병에 넣고 아세톤 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 아세톤 30 mL로 씻고 여과한 후 위의 여액과 합한다. 이 여액을 소량이 남을 때 까지 30℃이하에서 감압농축하여 아세톤을 날려보낸다. 이 농축액을 250 mL 분액깔때기에 옮기고 잔류물을 10 mL 증류수로 씻어 합한다. 이 분액깔때기에 5 mL의 1N 황산 수용액과 50 mL 헥산을 차례로 가하고 1분간 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 하층의 수용액을 250 mL 분액깔때기로 옮기고 헥산은 버린다. 50 mL 헥산으로 이 과정을 되풀이한다. 수용액층에 염화나트륨 10 g을 넣고 디클로르메탄 50 mL로 2회 추출하고 이 추출액을 무수황산나트륨칼럼에 통과시켜 탈수․여과한다. 탈수액에 2% 디에틸렌글리콜․아세톤 용액 0.2 mL를 가하고 30℃에서 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류하에서 서서히 증발, 건고시킨다. 잔류물에 30 mL의 0.1N 수산화나트륨용액을 가하고 80℃ 항온수조에서 30분간 가수분해시켜, 옥사밀을 옥심체로 변환시킨다. 반응물을 방냉한 후 5 mL의 1 N 황산용액으로 씻어 250 mL 분액깔때기로 옮긴다. 여기에 10 g 염화나트륨을 넣고 디클로르메탄 50 mL로 2회 추출하고 이 추출액을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 추출액에 2% 디에틸렌글리콜․아세톤 용액 0.2 mL를 가하고 30℃에서 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류하에서 서서히 증발, 건고시킨다. 이 잔류물에 아세톤 5 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼：DB-608(30 m×0.53 mm ID, 정량용) 또는 DB-17(30 m×0.25 mm 확인용) 캐필러리 칼럼 또는 이와 동등한 것

나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：질소, DB-608 15 mL /분, DB-17 1 mL/분

다) 칼럼온도：150℃에서 검체를 주입하고 10분간 유지(DB-608, 옥사밀 옥심)

45℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지 후 220℃까지 10℃/분으로 상승시켜서 5분간 유지시킨다(DB-17, 옥사밀 옥심).

라) 주입부 온도：250℃

마) 검출기 온도：280℃

바) 주입량：DB-608 2 μL(직접 주입법), DB-17 1 μL(splitless, purge time 0.9분)

2) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-608)

옥사밀 옥심(6.4분) 2 ng

그림 2. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-17)

옥사밀 옥심(13.3분) 2 ng

4) 정량한계

0.01 mg/kg

5) 기체크로마토그래프 질량분석기 측정 조건

가) 칼럼：DB-17MS 캐필러리 칼럼(30 m×0.25 mm ID) 또는 이와 동등한 것

나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：헬륨, 2 mL/분

다) 칼럼온도：45℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 220℃ 로 상승시키고 5분간 유지한다.

라) 주입부：Splitless mode(purge time 0.9분)

마) 주입부 온도：250℃

바) Interface 온도：280℃

사) 분자량 범위：50～200

아) 주입량：1 μL

표 1. 기체크로마토그래프 질량분석기 분석을 위한 fragment ions

분석성분	머무름 시간(분)	분자량	Fragment monitored(m/z)
옥사밀 옥심	13.2	170.04	162, 145, 115 98, 72

사. 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.(주. 기체크로마토그래프 질량분석기상의 머무름 시간(retention time) 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.)

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.(정량한 잔류량에 옥사밀의 경우 1.35를 곱하여 최종 잔류량으로 한다)

제9. 4.1.3.43 ～ 4.1.3.47을 다음과 같이 각각 신설한다.

4.1.3.43 메토밀(Methomyl), 티오디카브(Thiodicarb)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 메토밀 및 티오디카브를 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 메토밀 및 티오디카브 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 20 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 20 g)을 정밀히 달아 250 mL 원심분리용 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 20 mL를  가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 균질기에서 10분간 균질화 시킨다. 이에 염화나트륨 10 g을 첨가하여 2분간 심하게 흔들어주고, 3,500 rpm에서 5분간 원심분리한다.

2) 정제

아세토니트릴층 6 mL를 취하여 황산마그네슘 900 mg 및 PSA (primary secondary amine) 150 mg이 담겨진 15 mL 용량의 용기에 넣고 1분간 강하게 흔든다. 이를 3,500 rpm에서 10분간 원심분리 하고, 상층액을 취하여 시험용액으로 한다.

주1) 티오디카브는 곡류 및 콩류에서 습윤화 과정 중에 가수분해되어 2분자의 대사산물인 메토밀로 대사되므로 분자량 차이에 따른 보정계수 thiodicarb 분자량(354.5)/methomyl 분자량(162.2) × 2 = 1.09를 곱하여 티오디카브의 잔류량을 표시한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
0.5	10	90
3.0	95	5
4.0	95	5
4.5	10	90
6.0	10	90

라) 이동상 유량 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 4.5 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
메토밀 (Methomyl)	162.2	162.04	163	88	-9
				106	-10
티오디카브 (Thiodicarb)	354.5	354.04	355	88	-16
				108	-16

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

농도별 표준용액을 일정량 취하여 무처리 시료추출 용액과 각각 혼합한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

메토밀(A: 3.3분), 티오디카브(B: 3.9분)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 메토밀 및 티오디카브를 확인한다.

4.1.3.44 브로모프로필레이트(Bromopropylate), 클로르페나피르(Chlorfenapyr), 에톡사졸(Ethoxazole), 스피로디클로펜(Spirodiclofen)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출한 후 액-액분배하여 액체크로마토그래프 질량분석기로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)

3) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 각 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합,희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화시킨다.(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산층을 취하였다. 헥산액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.[지방성 검체의 경우 추가로 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 125 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/1.5/48.5, v/v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)의 측정조건

(브로모프로필레이트, 클로르페나피르, 스피로디클로펜)

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. × 30 m, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 50 mL/분

다) 주입부 온도 : 260℃

라) 오븐 온도 : 210℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)의 측정 조건

(에톡사졸)

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. x 30 m, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 10 mL/min

다) 주입부 온도 : 260℃

라) 오븐 온도 : 220℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 2 μL, splitless

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프-전자포획검출기에서 표준품의 크로마토그램

클로르페나피르 (A: 4.1분), 브로모프로필레이트 (B: 7.7분),   스피로디펜 (C: 14.7분)

그림 2. 기체크로마토그래프-질소·인 검출기에서 표준품의 크로마토그램

에톡사졸(5.7분)

5) 정량한계

브로모프로필레이트 0.005 mg/kg , 클로르페나피르 0.002 mg/kg, 에톡사졸 0.02 mg/kg, 스피로디클로펜 0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등   한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 50℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한 뒤 20℃/분의 비율로 온도를 220℃로 상승시켜 2분간 유지한다. 그 뒤 5℃/분의 비율로 온도를 280℃까지 올린 후 5분간 유지하여 분석하였다.

라) 주입부 온도 : 260℃

마) 인터페이스온도 : 300℃

바) 이온원 온도 : 250℃

사) 주입량 : 1 μL, splitless

아) 분자량 범위 : 50～450 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

물질명	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
브로모프로필레이트 (Bromopropylate)	18.9	428.1	426	183, 339, 341
클로르페나피르 (Chlorfenapyr)	15.5	407.6	406	247, 249
스피로디클로펜 (Spirodiclofen)	21.9	411.3	410	312, 314
에톡사졸 (Etoxazole)	19.2	359.4	359	141, 204, 359

4.1.3.45 디에토펜카브(Diethofencarb), 디메피퍼레이트(Dimepiperate), 에스프로카브(Esprocarb), 몰리네이트(Molinate), 피리부티카브(Pyributicarb)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 각 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 내부표준원액 : 디메틸엘로우1)(Dimethyl yellow[4-(dimethoxyamino) azobenzene)])및 4-메톡시아조벤젠2)(4-methoxyazobenzene) 분석용 표준품을 각각 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L 이 되게 한다.

1)디메틸엘로우 : 디에토펜카브, 에스프로카브, 몰리네이트용 내부표준물질

2)4-메톡시아조벤젠 : 디메피퍼레이트, 피리부티카브용 내부표준물질

5) 표준용액 : 표준원액을 각각 에틸아세테이트에 녹여 적당한 농도로 희석하고 내부표준물질 디메틸엘로우(dimethyl yellow)와 4-메톡시아조벤젠(4-methoxyazobenzene)의 농도는 항상 각각 0.4 및 0.8 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

6) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 하부 수용액층을 버리고 유기용매층을 취한다. 유기용매층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌 글리콜 0.5 mL을 가하고 30℃이하의 수욕상에서 약 3 mL가 남을 때 까지 감압 농축하고 질소기류하에서 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸 후 여분의 헥산 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 아세톤/헥산 혼합액(2/98, v/v) 50 mL를 용출(디메피퍼레이트, 에스프로카브, 몰리네이트 및 피리부티카브용 분획)시켜 받고, 다시 아세톤/헥산(6/94, v/v) 혼합액으로 용출(디에토펜카브용 분획)시켜 받고, 위의 용출액(디메피퍼레이트, 에스프로카브, 몰리네이트 및 피리부티카브용 분획)은 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌글리콜 0.5 mL을 가한 후 30℃ 이하의 수욕상에서 질소농축한 후 약 3 mL가 남을 때가지 농축하고 질소 기류하에 건고한다. 위의 용출액(디에토펜카브용 분획)을 40℃ 이하의 수욕상에서 질소농축한다. 각 분획의 잔류물(디메피퍼레이트, 에스프로카브, 몰리네이트 및 피리부티카브용)과 잔류물(디에토펜카브)을 내부표준물질인 0.4 μg/mL의 디메틸엘로우(dimethyl yellow)와 0.8 μg/mL의 4-메톡시아조벤젠(4-methoxyazobenzene)가 함유된 에틸 아세테이트를 가하여 각각 최종 부피가 5 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정 조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고  10℃/min.의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 250℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, Splitless

2) 검량선 작성

농도별로 조제한 검량용 표준용액(내부표준물질 포함)을 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상에서 각 대상성분 피크의 면적 또는 높이의 내부표준물질에 대한 비율을 계산하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

몰리네이트(A: 13.8분), 4-methoxyazobenzene(내부표준물질 B: 18.0분), 에스프로카브(C: 18.3분), 디에토펜카브(D:  18.4분), 디메피퍼레이트(E: 19.5분), dimethyl yellow(내부표준물질 F: 20.8분),  피리부티카브(G: 22.7분)

4) 정량한계

디에토펜카브 0.05 mg/kg, 디메피퍼레이트 0.02 mg/kg, 에스프로카브 0.02 mg/kg, 몰리네이트 0.01 mg/kg, 피리부티카브 0.03 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고 10℃/min.의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지

라) 주입부 : 250℃

마) 인터페이스 온도 : 290℃

바) 분자량 범위 : 100～350 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
디에토펜카브 (Diethofencarb)	18.6	267.3	267.15	267, 225, 207
디메피퍼레이트 (Dimepiperate)	19.7	263.4	263.13	119, 118, 145
에스프로카브 (Esprocarb)	18.4	265.4	265.15	222, 162, 151
몰리네이트 (Molinate)	13.6	187.3	187.10	126, 187
피리부티카브 (Pyributicarb)	23.3	330.4	330.14	165, 108, 181

4.1.3.46 카두사포스(Cadusafos), 디메틸빈포스(Dimethylvinphos), 프로페노포스(Profenofos), 피라조포스(Pyrazophos), 트리아조포스(Triazofos)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소·인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil) ：칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

4) 표준원액 : 각 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

5) 내부표준원액 : TPP를 각각 아세톤에 녹여 1,000 mg/L 이 되게 한다.

6) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

표준원액을  각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석하고 내부표준     물질 TPP의 농도는 각각 0.08 mg/L가 되도록 혼합하여 아세톤에      조제한다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과한 뒤 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로르메탄(80:20, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 위의 헥산/디클로르메탄(80:20, v/v)층을 취한다. 헥산/디클로르메탄(80:20, v/v)액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산/디클로르메탄(65:35, v/v) 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 헥산/디클로르메탄(65:35, v/v)에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 헥산/디클로르메탄 혼합액(65:35, v/v) 100 mL를 용출시켜 버리고, 헥산/디클로르메탄/아세토니트릴 혼합액(50/48/2, v/v/v) 150 mL로 용출시켜 받은 후 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 검체를 주입하고 120℃에서 10℃/분의 비율로 온도를 260℃로 상승시켜 11분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 280℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액과 내부표준물질을 농도별로 일정량 취하여 함께 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 표준물질의 각 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 내부표준물질과의 농도비를 계산하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

카두사포스(A: 6.6분), 디메틸빈포스(B: 9.5분), 프로페노포스(C: 11.2분), 트리아조포스(D: 12.4분), TPP(내부표준물질 E: 13.2분),피라조포스 (F: 15분)

4) 정량한계

카두사포스 0.002 mg/kg, 디메틸빈포스 0.004 mg/kg, 프로페노포스0.004 mg/kg, 트리아조포스 0.004 mg/kg, 피라조포스 0.004 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐온도 : 검체를 주입한 후 120℃에서 10℃/분의 비율로 온도를 260℃로 상승시켜 11분간 유지한다. 그 뒤 5℃/분의 비율로 온도를 280℃까지 올린 후 5분간 유지

라) 주입부 : 250℃

마) 인터페이스 온도 : 280℃

바) 이온원 온도 : 250℃

사) 주입량 : 2 μL, splitless

아) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
카두사포스 (Cadusafos)	6.6	270.1	270.08	159
디메틸빈포스 (Dimethylvinphos)	9.5	329.9	329.93	295
프로페노포스 (Profenofos)	11.2	371.9	371.93	208
트리아조포스 (Triazophos)	12.4	313.1	313.06	161
피라조포스 (Pyrazophos)	15	373.1	373.08	221

4.1.3.47 디클로란(Dicloran), 이프로디온(Iprodione), 프탈리드(Phthalide, Fthalide), 빈클로졸린(Vincozolin)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄으로 액-액분배하고 실리카 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카 : 칼럼크로마토그래프용 실리카(70∼230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

4) 표준원액 : 각 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화시킨다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 여기에 아세토니트릴 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로르메탄(20/80, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 아래의 유기용매층을 취한다. 헥산/디클로르메탄(20/80, v/v)액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 실리카겔 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 헥산/디클로로메탄 혼합액(70/30, v/v) 100 mL를 용출시켜 버리고, 디클로란, 빈클로졸린 및 프달리드용으로 150 mL의 헥산/디클로로메탄/아세토니트릴 혼합액(50/49/1, v/v/v)을 칼럼에 용출시켜 를 받아내고, 계속하여 이프로디온용으로 150 mL 헥산/디클로로메탄/아세토니트릴 혼합액(50/43/7, v/v/v)을 칼럼에 용출시켜 받은 후 각각의 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-17(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 검체를 주입하고 170℃에서 5℃/분의 비율로 온도를 220℃로 상승시켜 2분간 유지한다. 220℃에서 260℃까지 10℃/분로 승온시키고 260℃에서 280℃까지 20℃/분의 속도로 승온한뒤 13분간 유지

라) 주입부 온도 : 280℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

디클로란(A: 6.8분), 빈클로졸린(B: 8.8분), 프탈리드(C: 11.0분),

이프로디온(D: 15.9분)

4) 정량한계

디클로란 0.01 mg/kg, 이프로디온 0.04 mg/kg, 프탈리드 0.006 mg/kg, 빈클로졸린 0.008 mg/kg

바. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

사. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 3 mL/분

다) 오븐온도 : 검체를 주입하고 120℃에서 2분간 유지한 뒤 20℃/분의 비율로 온도를 160℃로 상승시킨 뒤 5℃/분 의 비율로 온도를 180℃까지 올린 후 4분간 유지한다. 20℃/분의 속도로 300℃까지 승온시킨 뒤 12분간 유지

라) 주입부 : 200℃

마) 인터페이스 온도 : 230℃

바) 이온원 온도 : 250℃

사) 주입량 : 2 μL, splitless

아) 분자량 범위 : 50～400 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (M.W.)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
디클로란 (Dicloran)	6.9	207.0	205.96	124, 176
빈클로졸린 (Vinclozolin)	8.8	286.1	284.99	198, 212
프탈리드 (Phthalide(Fthalide))	11.0	269.9	269.88	243, 272
이프로디온 (Iprodione)	15.9	330.2	329.03	314

제9. ‘4.1.4.34 티오디카브(Thiodicarb)’를 ‘4.1.4.34 피리미디펜(Pyrimidifen)’으로 하고 다음과 같이 한다.

4.1.4.34 피리미디펜(Pyrimidifen)

가. 분석법 적용범위

과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체에 아세토니트릴로 추출한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액으로 액-액분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래피로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소․인검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 유기용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

3) 표준원액 : 피리미디펜 분석용 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L 원액을 조제한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적절한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 검체 25 g(채소류 및 과실류 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5∼1cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)을 정밀히 달고, 아세토니트릴 100 mL을 가한 후 2분간 고속 마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 잔류물에 여분의 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 100 mL를 가하여 1분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 수용액 층을 버리고 유기용매 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 증류플라스크에 받는다. 분배 추출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버리고 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g과 그 위에 2 cm 높이로 무수황산나트륨을 차례로 건식 충전하고 헥산 25 mL를 흘려버린다. 무수황산나트륨 층 표면이 노출되기 직전, 추출과정의 추출액 10 mL를 칼럼에 가하고 여분의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 50 mL의 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산(50/4/46, v/v) 혼합액을 유출시켜 버리고, 50 mL의 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산(50/10/40, v/v/v) 혼합액으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피 10 mL이 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래피 측정 조건

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. × 30 m, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량 : 헬륨, 10 mL/분

다) 오븐온도 : 240℃

라) 검출기온도 : 300℃

마) 주입구온도 : 260℃

바) 검체 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선의 작성

농도별로 조제한 GC 검량용 표준용액 1 μL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상에서 대상성분 피크의 면적 또는 높이를 기준으로 직선적 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프-질소인검출기에서 표준품의 크로마토그램

피리미디펜 8.3분

4) 정량한계

0.02 mg/kg

사. 정성시험

위 분석 조건에서 얻어진 검체 크로마토그램 상 대상 성분의 피크는 어느 측정 조건에서도 표준 화합물 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험

정성시험과 동일한 분석 조건에서 얻어진 크로마토그램 상 대상 성분의 표준물질에 대한 피크 면적비 또는 피크 높이비를 표준검량선과 비교, 시험용액 주입량 중 성분량을 외부표준법에 따라 정량한다.

1) 기체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm)또는 동등한것

나) 이동상 가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 20℃/min 비율로 250℃까지 직선적으로 승온하고 2분간 유지한 후 3℃/분 비율로 280℃까지 직선적으로 승온한 후 5분간 유지

라) 인터페이스 온도 : 300℃

마) 주입부 : 260℃

바) 검체 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
22.5	377.9	377.19	183, 186

제9. 4.1.4.111을 다음과 같이 한다.

4.1.4.111 플로니카미드(Flonicamid)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 플로니카미드를 산성 아세토니트릴로 추출하여 황산마그네슘 및 염화나트륨을 이용하여 분배하고 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 플로니카미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 5% 초산 함유 아세토니트릴 용액 : 100 mL 메스플라스크에 초산 용액(≥99%) 5 mL를 취한 후 아세토니트릴에 녹여 표시선까지 채운다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 5 g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리용 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 증류수 5 mL를 가한 후 30분간 방치) 5% 초산 함유 아세토니트릴 10 mL를 가하여 균질기에서 10분간 균질화 시킨다. 이에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g을 첨가하여 1분간 격렬히 흔들어주고, 3,000 rpm에서 5분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 13,000 rpm에서 5분간 고속으로 원심분리 후 상층액 500 μL을 아세토니트릴 500 μL와 혼합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.0 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	5	95
1.0	5	95
3.0	70	30
5.0	90	10
6.0	90	10
7.0	5	95
10.0	5	95

라) 이동상 유량 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 방법 : ESI negative-ion mode

나) Capillary voltage : 4.5 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion , m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플로니카미드 (Flonicamid)	229.2	229.04	228	81	24
				146	22

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

농도별 표준용액을 일정량 취하여 무처리 시료추출 용액과 각각 혼합한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

플로니카미드(4.9분)

5) 정량한계

0.02 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 플로니카미드를 확인한다.

제9, 4.1.4.191 ～ 4.1.4.201을 다음과 같이 각각 신설한다.

4.1.4.191 사이클라닐리프롤(Cyclaniliprole)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 사이클라닐리프롤 및 NK-1375[3-bromo-2-((2-bromo-4H–pyrazolo[1,5-d]pyrido[3,2-b][1,4]oxazin-4-ylidene)amino)-5-chloro- N-(1-cyclopropylethyl)benzamide]을 아세토니트릴로 추출하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 사이클라닐리프롤 및 NK-1375 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 50 mL를 가하여 균질기에서 10분간 균질화 시킨다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(celite 545) 10 g을 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 증류수 100 mL를 가하여 녹인 후 pH 미터기를 이용해 1 N 염산용액을 천천히 가해 pH 3이 되도록 한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 염화나트륨 10 g을 더한 뒤 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축 하여 용매를 모두 날려버린 후, 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다. [지방성 검체의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압농축한 후 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.]

2) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/95, v/v) 5 mL를 가하여 씻어버린다. 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 15 mL를 용출시켜 받은 시험액을 감압농축 플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
4.0	80	20
6.0	80	20
8.0	20	80
10.0	20	80

라) 이동상 유량 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 2.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) Cone voltage

(1) 사이클라닐리프롤 : 30 V

(2) NK-1375 : 20 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
사이클라닐리프롤 (Cyclaniliprole)	602.1	598.91	604	177	50
				286	20
NK-1375	565.6	562.93	566	159	50
				268	25

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

사이클라닐리프롤(A: 5.4분), NK-1375(B: 5.9분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 사이클라닐리프롤 및 NK-1375를 확인한다.

4.1.4.192 피플루뷰마이드(Pyflubumide)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 피플루뷰마이드 및 피플루뷰마이드-NH[N-[3-isobutyl-4- [2,2,2-trifluoro-1-methoxy-1-(trifluoromethyl)ethyl]phenyl]-1,3,5-trimethylpyrazole-4-carboxamide]를 아세토니트릴로 추출하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 피플루뷰마이드 및 피플루뷰마이드-NH 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(celite 545) 10 g을 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 증류수 100 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮기고 포화식염수 10 mL를 더한 뒤 디클로로메탄 30 mL를 차례로 가하고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축 플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 용매를 모두 날려버린 후, 디클로로메탄 10 mL을 가하여 녹인다. [지방성 검체의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압농축한 후 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.]

2) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 2 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 5 mL를 가하여 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(30/70, v/v) 10 mL를 가해 용출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
1.0	50	50
3.0	90	10
8.0	90	10
8.1	50	50
10.0	50	50

라) 이동상 유량 : 0.25 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) Cone voltage : 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
피플루뷰마이드 (Pyflubumide)	535.5	535.22	536	111	55
				155	25
피플루뷰마이드-NH	465.4	465.18	466	111	35
				137	35

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

피플루뷰마이드(A: 4.1분), 피플루뷰마이드-NH(B: 3.9분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피플루뷰마이드 및 피플루뷰마이드-NH를 확인한다.

4.1.4.193 에타복삼(Ethaboxam)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 에타복삼을 아세톤으로 추출하여 헥산과 증류수를 이용해 유지 제거하여 pH 6으로 조절하고 디클로르메탄으로 액-액 분배한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실 : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

4) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다. 검량용 표준용액은 아세토니트릴/물(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(celite 545) 10 g을 이용해 흡인여과한 뒤 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL, 포화식염수 50 mL, 1 M 인산 수용액 5 mL 및 100 mL의 헥산을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산 층을 제거한다. 헥산이 제거된 잔류액에 다시 6.7 mL의 1 M 수산화나트륨 수용액을 가하고 pH 6.0±0.2가 되도록 조절한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을 취하여 위의 디클로로메탄액과 합한다. 디클로로메탄액을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버리고 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 건식 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 디클로로메탄에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보내고 여분의 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄액(5/95, v/v) 50 mL를 용출시켜 버리고, 50 mL의 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/95, v/v)을 칼럼에 용출시켜받고 다시 50 mL의 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(15/85, v/v)을 칼럼에 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물에 아세토니트릴/물 혼합액(40/60, v/v)을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d. × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(310 nm)

라) 이동상: 아세토니트릴/물(35/65, v/v)

마) 이동상 유량 : 1 mL/분

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에타복삼(11.3 분)

4) 정량한계

0.02 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름시간과 특성이온으로 에타복삼을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 아세토니트릴/물(45/55, v/v)

라) 이동상 유량 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

사) Capillary voltage : 4.5 kV

아) Collision gas : 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
에타복삼 (Ethaboxam)	8.8	320.4	320.08	321	183, 200

4.1.4.194 페나미돈(Fenamidone)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 검체 25 g(곡류 및 콩류는 약 1kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 25 g, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 25 g)을 정밀히 달고, 곡류 및 콩류는 물 50 mL를 넣고 습윤화 한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 다시 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄층을 취하여 위의 디크롤로메탄층과 합한다. 디클로로메탄액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 3회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/디클로로메탄 혼합액(50/50, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피가 10 mL를 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d. x 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 아세토니트릴/물 (65/35, v/v)

다) 이동상 유량 : 1 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 검출기 파장 : UV 230 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

페나미돈(7.7분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페나미돈을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 10 mM 암모늄 아세테이트 수용액/아세토니트릴(35/65, v/v)

다) 이동상 유량 : 0.25 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

사) 분자량 범위 : 50∼400 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
7.7	311.4	311.10	236, 264, 312

4.1.4.195 페녹사닐(Fenoxanil)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로르메탄·헥산을 이용하여 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 정제한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소·인 검출기(GC/NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4)  표준용액  :  표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 후 검체 25 g(곡류 및 콩류는  약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 25 g, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 25 g)을 정밀히 달고, 곡류 및 콩류는 물 50 mL를 넣고 습윤화 한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 다시 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로르메탄(80/20, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 위의 헥산/디클로르메탄(80/20, v/v)층을 취하였다. 헥산/디클로르메탄(80/20, v/v)액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산/디클로르메탄 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/에틸아세테이트 혼합액(90/10, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. x 30 m, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 4 mL/분

다) 주입부 온도 : 280℃

라) 오븐 온도 : 220℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

페녹사닐 (5.1분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페녹사닐을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등   한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

다) 주입부 온도 : 250℃

라) 오븐 온도 : 190℃에서 검체를 주입하고 1분 유지한 후 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 올린 후 300℃까지 5℃/분 올려 상승시키고 10분 유지

마) 인터페이스온도 : 300℃

바) 분자량 범위 : 50～400 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
6.4	329.2	328.07	125, 189, 293

4.1.4.196 플루아지남(Fluazinam)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획 검출기(GC/ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고 시킨 후 헥산으로 적절한 농도로 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 검체 25 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 25 g)을 정밀히 달고, 곡류 및 콩류는 물 50 mL를 넣고 습윤화한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 다시 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매 층을 취한다. 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날린 후 잔류물은 헥산/디클로르메탄(95/5, v/v)  10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산/디클로르메탄 혼합액(95/5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시킨다. 여기에 위의 헥산/디클로르메탄에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/디클로르메탄(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/디클로르메탄(65/35, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-17(0.53 mm i.d. × 30 m, 0.50 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 10 mL/분

다) 오븐 온도 : 180℃

라) 주입부 온도 : 190℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루아지남 (6.2분)

4) 정량한계

0.004 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플루아지남을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

다) 오븐온도 : 210℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한다. 그 뒤 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 올린 후 2분간 유지한다. 5℃/분의 비율로 300℃까지 올린 뒤 10분간 유지한 후 분석하였다.

라) 주입부 : 250℃

마) 인터페이스 온도 : 300℃

바) 분자량 범위 : 50～500 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
6.2	465.1	463.95	207, 387

4.1.4.197 니트라피린(Nitrapyrin)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산으로 액-액 분배하고 플로리실 카드리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 각 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 카트리지 : 플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 뒤 아세톤 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 아세톤을 가하여 150 mL로 조절하고 이 중 시료 2.5 g에 해당하는 15 mL 추출액을 70 mL 용량의 마개 시험관에 옮긴다. 여기에 2 mL의 포화식염수 및 30 mL의 증류수를 가한 후 10 mL와 5 mL의 헥산으로 2회 분배 추출하여 합한다. 합한 헥산층을 5  g의 무수황산나트륨을 통과시켜 탈수한 후 25 mL의 용량의 마개시험관에 받는다.

2) 정제

플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2~3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 전량을 카트리지 상단에 넣고 1~2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받은 후 헥산 2 mL로 용기 및 카트리지 벽면을 씻어 함께 받는다. 추가로 아세톤/헥산(2/98, v/v) 혼합액 5 mL을 용출시켜 합친 뒤 아세톤/헥산(2/98, v/v) 혼합액을 가하여 최종부피 25 mL가 되게 한 후 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d., x 30 m, 0.50 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 10 mL/분

다) 오븐 온도 : 130℃

라) 주입부 온도 : 250℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 .기체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

니트라피린 (4.7분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 니트라피린을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5MS (0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

다) 오븐온도 : 90℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고 20℃/분의 비율로 온도를 150℃까지 상승시키고 5℃/분 비율로 온도를 300℃까지 상승시키고 4분간 유지

라) 주입부 : 260℃

마) 인터페이스 온도 : 300℃

바) 분자량 범위 : 50～300 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
니트라피린 (Nitrapyrin)	8.5	230.9	228.90	229, 194

4.1.4.198 아이소프로티올레인(Isoprothiolane)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 두류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴으로 추출하고 디클로로메탄/헥산 혼합으로 액-액 분배 후 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치하고 미리 acetonitrile로 포화시킨 n-hexane 40 mL을 잔류물에 가하여 녹인 후 250-mL 용량의 분액여두에 옮기고 미리 n-hexane으로 포화시킨 acetonitrile 30 mL씩으로 2회 분배 추출한다.) 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층을 취하였다. 유기용매층액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 건식충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v)에 녹인 검체용액 10 mL 중 5 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 여분의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 5 mL로 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 (50/2/48, v/v/v) 혼합액 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 ,디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 (50/4/46, v/v/v) 혼합액 50 mL로 용출시커 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴/물 (50/50, v/v) 혼합액을 가하여최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.0 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(307 nm)

다) 이동상 : 아세토니트릴/물 (50/50, v/v)

라) 유속 : 1 mL/분

마) 칼럼 온도 : 40℃

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 .	액체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

아이소프로티올레인 (10.1분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아이소프로티올레인을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(50/50, v/v) 혼합액

다) 유속 : 0.3 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
아이소프로티올레인 (Isoprothiolane)	5.7	290.4	290.06	291

4.1.4.199 이프로발리카브(Iprovalicarb)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산/디클로로메탄 혼합액으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼으로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀서 사용한다.

라. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮긴다. 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로로메탄(20/80, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층을 취한다. 취한 유기용매층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/에틸 아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸 아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 건고물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

마. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 아세토니트릴/증류수 (60/40, v/v)

다) 이동상 유량 : 1 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 검출기 파장: 210 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이프로발리카브(7.3분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

바. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

사. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이프로발리카브를 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 10 mM 암모늄 아세테이트 함유 아세토니트릴/물(60/40, v/v) 혼합액

다) 이동상 유량 : 0.25 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
이프로발리카브 (Iprovalicarb)	7.3	320.4	320.20	119, 203

4.1.4.200 디메토모르프(Dimethomorph)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴으로 추출한 후 헥산으로 1차 액-액 분배 및 2차 디클로로메탄으로액-액분배를 한 후 플로리실 칼럼크로마토그래프로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다. 검량용 표준용액은 아세토니트릴/물(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 하부 수용액은 별개의 분액여두로 옮기고 헥산층을 버린다. 수용액층에 디크로로메탄 50 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 디클로로메탄층을 취하였다. 분액에 남은 수용액층에 다시 디클로로메탄 50 mL을 가하여 합친 디클로로메탄액을  무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 건식충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 디클로로메탄에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려버리고 여분의 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 에틸아세테이트/디클로로메탄액(10/90, v/v)혼합액 50 mL로 유출시켜 버리고 재차 에틸아세테이트/디클로로메탄액(25/75, v/v) 혼합액 60 mL를 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에  아세토니트릴/물 (40/60, v/v) 혼합액을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.0 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(244 nm)

다) 이동상 : 아세토니트릴/물(40/60, v/v)

라) 유속 : 1 mL/분

마) 칼럼 온도 : 40℃

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 .	액체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

E-디메토모르프(A: 10.8분), Z-디메토모르프(B: 12.4분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 디메토모르프를 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm I.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(45/55, v/v) 혼합액

다) 유속 : 0.3 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
E-디메토모르프 (E-dimethomorph)	4.3	387.9	387.12	388
Z-디메토모르프 (Z-dimethomorph)	4.8	387.9	387.12	388

4.1.4.201 디페닐아민(Diphenylamine)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 두류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴으로 추출한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액으로 액-액 추출한 후 아미노프로필 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다. 검량용 표준용액은 아세토니트릴/물 (50/50, v/v)혼합액에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 아미노프로필 카트리지 : 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 40 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다.(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층을 취하였다.  유기용매층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 아세톤에 녹인 0.1% 디에틸렌 글리콜 용액 0.5 mL를 첨가하고 40℃에서 감압 농축 후 잔류물을 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v)  10 mL로 녹인다. [지방성 검체의 경우 추가로 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 3회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.]

2) 정제

아미노프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 10 mL 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받은 후 여분의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 2 mL로 카트리지 벽면을 씻어 함께 받는다. 추가로 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 5 mL를 용출시켜 합친 뒤 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물에 아세토니트릴/물(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.0 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(283 nm)

다) 이동상 : 아세토니트릴/물(50/50, v/v)

라) 유속 : 1 mL/분

마) 칼럼 온도 : 40℃

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

디페닐아민 (10.7분)

4) 정량한계

0.02 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 디페닐아민을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(50/50, v/v) 혼합액

다) 유속 : 0.3 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
디페닐아민 (Diphenylamine)	6.0	169.2	169.09	170

제9. “4.3.1.4 클로르단(Chlordane), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 델타메쓰린(Deltamethrin), 에트림포스(Etrimfos), 펜발러레이트(Fenvalerlate), 퍼메쓰린(Permethrin), 포레이트(Phorate), 포사론(Phosalone), 피리미포스메틸(Pirimiphos methyl), 프로파자이트(Propargite), 빈클로졸린(Vinclozolin)”를  “4.3.1.4 클로르단(Chlordane), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 델타메쓰린(Deltamethrin), 에트림포스(Etrimfos), 펜발러레이트(Fenvalerlate), 퍼메쓰린(Permethrin), 포사론(Phosalone), 피리미포스메틸(Pirimiphos methyl), 프로파자이트(Propargite), 빈클로졸린(Vinclozolin)”으로 하고, 4.3.1.4 중 8)의 주2)를 다음과 같이 한다.

주2) 위의 다종다성분농약 동시분석법에 적용되는 농약

[에테르 및 헥산의 %비율(두 가지 이상의 서로 다른 비율은 “＋”로 표기함), %회수율(회수율%가 없는 농약은 80% 이상임)]

Acetochlor(15＋50), Alachlor(50), Aldrin(6), Allethrin(50), Anilazine(15＋50), Benfluralin(6), Benoxacor(15＋50), Bensulide(50), BHC(α, β, γ：6), BHC(δ: 6＋15), Bifenox(15＋50), Bifenthrin(6＋15), Binapacryl(15, 65%), Bromophos(6), Bromophos-ethyl(6, 59~78%), Bromopropylate(15＋50), Captan(50), Carbophenothions(6, 60%), Chlobenside(6), Chlobromuron(50, 44~100%), Nuarimol(50), Octachlor epoxide(6), Ovex(15), Oxadiazon(15, 75%), Parathion methyl(15), Parathion(15), Pendimethalin(15, 33~56%), Pentachloroaniline(6), Pentachlorobenzene(6), pentachlorobenzonirile(15, 60%), Pentachlorphenyl methyl ester(6), Bifenthrin Cyfluthrin Dimethoate Diphenylamine	Chlobufam(15), Chlordane(6), Chlordecone(15＋50), Chlordene(6), Chlornitrofen(6＋15), Chlorobenzilate(15＋50), Chloropropylate(15＋50), Chlorpropham(15), Chlorpyrifos(6), Chlorthiophos(6), Cypermethrin(15), DDD(6), DDE(6), DDT(6), DEF(15＋50), Deltamethrin(15, 77~80), Dialifor(15, 50%), Diazinon(15), Dichlobenil(15), Dichlofop-methyl(15), Pentachlorphenyl methyl sulfide(6), Permethrin(6＋15), Perthane(6), Phosalone(50), Photodieldrin(15＋50), Pirimiphos-ethyl(15＋50), Pirimiphos-methyl(15＋50), Procymidone(15, 76%), Profenofos(50, 50%), Prometryn(50, 70%), Disulfoton Fenarimol Fenpropathrin Fenpyroximate	Dichlorfenthion(6, 69~89%), Dicloran(15＋50, 50%), Dicofol(15＋50, 61~85%), Dieldrin(15), Dinitramine(15, 78~80%), Dinocap(15, 60%), Endosulfan(15＋50), Endrin(15), EPN(15), Esfenvalerate(15), Ethalfluralin(6), Ethion(6), Etridiazole(6, 68~73%), Etrimfos(15), Fenarimol(50), Fenitrothion(15), Fenoxaprop ethyl ester(50, 65~110%), Fenpropathrin(15, 59~ 114%), Propargite(15), Propham(15, 80%), Prothiofos(6), Pyrethrins(50), Quintozene(6), Ronnel(6), Simazine(50), Strobane(6), Sulfallate(6＋15), Sulfotep(6＋15, 65~70%), Sulphenone(20＋25), Kresoxim-methyl Myclobutanil Penconazole Profenofos	Fenvalerate(50),Fluazifop butyl ester(15, 50~110%), Folpet(15＋50, 50%), Fonofos(6), Heptachlor & Heptachlor epoxide(6), Hexachlorobenzene(6, 60%), Lactofen(50), Leptopphos(50), Linuron(50, 42~62%), Malathion(15＋50), Merphos(6＋15＋50), Methidathion(50, 50%), Methoxychlor(6), Mirex(6, 75), Nitalin(50, 70%), Nitrofen(15), Nitrofluorfen(15), Nonachlor(6), TCMTB(15, 61~62%), Tecnazene(6), Tetradifon(15), Tetraiodoethylene(6, 65%), Tetrasul(6), Thiobencarb(15, 50~86%), Toxaphene(6), Triallate(6), Trichloronat(6), Trifluralin(6), Vincozolin(15). Pyriproxyfen Quintozene Triadimenol Triazophos

제9. 5. 5.3.2와 5.3.3을 다음과 같이 한다.

5.3.2 나라신(Narasin), 라살로시드(Lasalocid), 마두라마이신(Maduramycin), 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin), 샘두라마이신(Semduramicin)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올로 표시선까지 채워 100 mg/L이 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 각 동물용의약품 잔류허용기준의 10배 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 증류수로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2): 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 0.3% 개미산(Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 3 mL을 넣고 증류수로 표시선까지 채운다.

사) 0.3% 개미산 함유 아세토니트릴 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 3 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 1 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 0.2 M 인산완충액 (pH 7.2) 1 mL를 가하여 균질화한 후 아세토니트릴 10 mL를 넣고 5분간 진탕한다. 4℃에서 3,500 G로 20분간 원심분리하여 상층액을 취한 후 40 ℃에서 질소농축한다. 잔류물에 50% 아세토니트릴 용액 1 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C8(Eclipse Plus C8, 2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.3% 개미산 용액

(나) 이동상 B: 0.3% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	50	50
10.0	10	90
14.0	10	90
15.0	0	100
25.0	0	100
25.5	50	50
30.0	50	50

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 35℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Source temperature: 350℃

(3) Capillary voltage: 4.0 kV

(4) Collision gas: N2 (질소)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	나라신 (Narasin)	14.11	765.0	787.5	431.3	60
					531.3	50
					413.1	60
2	라살로시드-Na (Lasalocid-Na)	11.71	612.8	613.2	377.1	40
					577.1	30
					595.3	30
3	마두라마이신 (Maduramycin)	15.02	917.1	939.4	877.4	30
					895.2	50
					859.0	50
4	모넨신-Na (Monensin-Na)	13.15	692.9	693.3	461.2	60
					479.2	60
					501.2	60
5	살리노마이신-Na (Salinomycin-Na)	12.92	773.0	773.3	431.2	60
					531.2	50
					265.2	60
6	샘두라마이신 (Semduramicin)	10.75	873.1	895.3	833.4	30
					851.2	30
					815.1	30

(5) 분석대상물질의 개별 조건

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주2.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나라신 (14.1분)	라살로시드(11.7분)
마두라마이신(15.0분)	모넨신(13.1분)
살리노마이신(12.9분)	샘두라마이신(10.7분)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 나라신, 라살로시드, 마두라마이신, 모넨신, 살리노마이신, 샘두라마이신 표준품의 크로마토그램(각 0.4 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

동물용의약품	정량한계(mg/kg)
	식육	우유	알	수산물
나라신 (Narasin)	0.01	0.002	0.003	0.002
라살로시드 (Lasalocid)	0.005	0.001	0.01	0.001
마두라마이신 (Maduramycin)	0.004	0.002	0.002	0.002
모넨신 (Monensin)	0.009	0.002	0.004	0.002
살리노마이신 (Salinomycin)	0.008	0.001	0.005	0.002
샘두라마이신 (Semduramicin)	0.005	0.002	0.003	0.002

나) 정량한계

5.3.3 나이카바진(Nicarbazine), 데코퀴네이트(Decoquinate), 디싸이클라닐(Dicyclanil), 디아베리딘(Diaveridine), 디클라주릴(Diclazuril), 로베니딘(Robenidine), 록사손(Roxarsone), 암프롤리움(Amprolium), 에토파베이트(Ethopabate), 이미도캅(Imidocarb), 죠렌(Zoalene), 클로피돌(Clopidol), 할로푸지논(Halofuginone), 톨트라주릴(Toltrazuril)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하여 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 각 동물용의약품 표준품을 100 mL 용량플라스크에 각각 정밀히 달아 해당 용매주1)(물, 아세토니트릴, 메탄올, 디메틸설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF))에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 잔류허용기준의 10배 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 아세토니트릴로 표시선까지 채워 냉동 보관한다. 혼합표준용액은 아세토니트릴로 희석하여 사용한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

No	동물용의약품	분석대상물질	용매
1	나이카바진(Nicarbazine)	*N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea	디메틸포름아미드(DMF)
2	데코퀴네이트(Decoquinate)	Decoquinate	아세토니트릴
3	디싸이클라닐(Dicyclanil)	Dicyclanil	디메틸포름아미드(DMF)
4	디아베리딘(Diaveridine)	Diaveridine	디메틸포름아미드(DMF)
5	디클라주릴(Diclazuril)	Diclazuril	메탄올
6	로베니딘(Robenidine),	Robenidine	메탄올
7	록사손(Roxarsone)	Roxarsone	메탄올
8	암프롤리움(Amprolium)	Amprolium	물
9	에토파베이트(Ethopabate)	Ethopabate	메탄올
		*m-Phenetidine
10	이미도캅(Imidocarb)	Imidocarb	메탄올
11	죠렌(Zoalene)	Zoalene	아세토니트릴
		*3-amino-5-nitro-o-toluamide(ANOT)
12	클로피돌(Clopidol)	Clopidol	디메틸설폭사이드(DMSO)
13	할로푸지논(Halofuginone)	Halofuginone	메탄올
14	톨트라주릴(Toltrazuril)	*Toltrazuril sulfone	메탄올

주1). 분석대상 물질 및 표준원액 제조에 사용되는 용매

*표시 물질은 대사체임

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 물 2 mL를 넣고 5분간 균질화한다. 아세토니트릴 10 mL를 가하고 15분간 진탕한 후 -4℃에서 9,300 G 로 10분간 원심분리 한 후 상층액을 취한다. 상층액에 n-헥산 10 mL를 넣고 2분간 교반한 후 -4℃에서 9,300 G 로 10분간 원심분리 한 후 하층액을 취하여 감압농축한다. 잔류물에 50% 아세토니트릴 용액 1 mL를 가하여 녹인 후 마이크로 원심분리 튜브에 옮겨 상온에서 15,800 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(Atlantis Ⓡ T3, 2.1 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B: 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
9.0	5	95
11.0	5	95
11.1	95	5
13.5	95	5

(3) 유속: 0.35 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive, Negative)

(2) Capillary temperature: 350℃

(3) Collision gas: N2 (질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea	Negative	7.30	302.2	300.9	136.9	20.0
						106.8	44.0
2	데코퀴네이트 (Decoquinate)	Positive	9.02	417.5	418.2	372.1	33.0
						203.9	55.0
						231.9	47.0
3	디싸이클라닐 (Dicyclanil)	Negative	7.68	407.6	405.1	333.9	28.0
						299.0	42.0
					407.0	336.0	24.0
4	디아베리딘 (Diaveridine)	Positive	3.47	260.3	261.0	245.0	37.0
						122.9	29.0
						217.1	37.0
5	디클라주릴 (Diclazuril)	Positive	2.10	190.2	191.0	150.0	27.0
						149.8	29.0
						163.1	23.0
6	로베니딘 (Robenidine)	Positive	5.67	334.2	334.0	154.9	27.0
						110.9	61.0
						137.9	33.0
7	록사손 (Roxarsone)	Negative	3.03	263.0	261.9	243.8	18.0
						153.1	26.0
						122.9	34.0
8	암프롤리움 (Amprolium)	Positive	0.88	278.8	243.1	150.0	17.0
						93.8	19.0
						122.0	31.0
9	에토파베이트 (Ethopabate)	Positive	5.40	237.3	238.1	206.1	15.0
						136.0	37.0
						164.0	27.0
	m-Phenetidine	Positive	3.56	137.2	138.0	109.9	21.0
						64.9	33.0
						93.1	31.0
10	이미도캅 (Imidocarb)	Positive	3.14	348.4	175.1	162.0	19.0
						145.0	35.0
						89.8	47.0
11	죠렌 (Zoalene)	Negative	4.98	225.2	223.9	181.0	14.0
						42.0	36.0
						151.0	22.0
	*3-Amino-5-nitro-toluamide(ANOT)	Positive	3.46	198.2	196.0	107.0	23.0
						153.1	23.0
						179.0	11.0
12	클로피돌 (Clopidol)	Positive	3.61	192.0	191.9	101.0	35.0
						86.9	41.0
						51.1	63.0
13	할로푸지논 (Halofuginone)	Positive	4.38	414.7	413.9	100.0	23.0
					416.0	120.0	23.0
						100.0	67.0
14	톨트라주릴 설폰 (Toltrazuril sulfone)	Negative	7.36	457.4	456.0	456.0	8.0
						41.8	86.0

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea(7.30분)	데코퀴네이트(9.02분)
디클라주릴(7.68분)	디아베리딘(3.47분)
디싸이클라닐(2.10분)	로베니딘(5.67분)
록사손(3.03분)	암프롤리움(0.88분)
에토파베이트(5.40분)	m-Phenetidine(3.56분)
이미도캅(3.14분)	죠렌(4.98분)
3-amino-5-nitro-o-toluamide(3.46분)	클로피돌(3.61분)
할로푸지논(4.38분)	톨트라주릴설폰(7.36분)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea, 데코퀴네이트, 디싸이클라닐, 디아베리딘, 디클라주릴, 로베니딘, 록사손, 암프롤리움, 에토파베이트, m-phenetidine, 이미도캅, 죠렌, 3-amino–5-nitro-o-toluamide (ANOT), 클로피돌, 할로푸지논, 톨트라주릴설폰, 표준품의 크로마토그램(각 0.05 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 각 정량이온(Quantitative ion)의 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량하여 합한 값을 정량값으로 한다.

나) 정량한계

물질	정량한계 (mg/kg)
	식육	유	알	어류
N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea	0.04	0.001	0.002	0.004
데코퀴네이트(Decoquinate)	0.1	0.004	0.004	0.004
디싸이클라닐(Dicyclanil)	0.003	0.003	0.002	0.003
디아베리딘(Diaveridine)	0.008	0.007	0.002	0.002
디클라주릴(Diclazuril)	0.04	0.001	0.001	0.003
로베니딘(Robenidine)	0.02	0.001	0.002	0.004
록사손(Roxarsone)	0.004	0.004	0.004	0.002
암프롤리움(Amprolium)	0.09	0.002	0.002	0.001
에토파베이트(Ethopabate)	0.08	0.0004	0.001	0.003
*m-Phenetidine	0.002	0.001	0.003	0.003
이미도캅(Imidocarb)	0.06	0.001	0.001	0.004
죠렌(Zoalene)	0.2	0.001	0.002	0.004
*3-Amino-5-nitro-o-toluamide	0.003	0.001	0.002	0.004
클로피돌(Clopidol)	0.04 가금(0.5)	0.001	0.003	0.003
할로푸지논(Halofuginone)	0.004	0.002	0.004	0.003
톨트라주릴 설폰 (*Toltrazuril sulfone)	0.003	0.001	0.001	0.004

제9. 5. 5.3.8를 삭제하고 5.3.9～5.3.12를 각각 5.3.8～5.3.11로 한다.

제9. 5. 5.3.13을 삭제하고 5.3.14를 5.3.12로 한다.

제9. 5. 5.3.15를 삭제하고 5.3.16을 5.3.13으로 하며 다음과 같이 한다.

5.3.13 아빌라마이신(Avilamycin)

1) 시험법 적용범위
축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 아빌라마이신(Avilamycin)을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아빌라마이신(Avilamycin) 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) C18 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유
균질화한 검체 2 g에 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유, 알을 제외한 식품
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	60	40
5.0	10	90
20.0	10	90
21.0	60	40
30.0	60	40

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 측정파장 : 210 nm(아빌라마이신(Avilamycin)

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아빌라마이신(Avilamycin)의 함량을 각각 구한다.

제9. 5. 5.3.17을 5.3.14로 하고 5.3.18을 삭제하며, 5.3.19를 5.3.15로 한다.

제9. 5. 5.3.20을 삭제하고 5.3.21～5.3.34를 각각 5.3.16～5.3.29로 한다.

제9. 5. 5.3.35를 5.3.30으로 하고 다음과 같이 한다.

5.3.30 아프라마이신(Apramycin)

1) 시험법 적용범위
아프라마이신(Apramycin)은 유, 알 및 수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 아프라마이신(Apramycin)을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 아프라마이신(Apramycin) 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액: 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2): 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취한 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 가하여 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 혼합한 후 아세토니트릴 6 mL를 가하고 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 4 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가하여 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유, 알을 제외한 식품
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 아세톤을 2% 포함한 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼C8(2.0 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상

① 이동상 A: 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

② 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
19.0	100	0

(다) 유속: 0.4 mL/분

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization: ESI(Positive)

(나) Spray voltage: 5 kV

(다) Capillary temperature: 280℃

(라) Sheath gas:  질소(N2)(50 psi)

(마) Auxiliary gas: 질소(N2)(10 psi)

(바) SIM ion: m/z 540(아프라마이신)

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(Retention time)을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아프라마이신(Apramycin) 함량을 구한다.

제9. 5. 5.3.36～5.3.41을 각각 5.3.31～5.3.36으로 한다.

제9. 5. 5.3.42를 삭제하고 5.3.43～5.3.52를 각각 5.3.37～5.3.46으로 한다.

제9. 5. 5.3.53을 삭제하고 5.3.54～5.3.55를 각각 5.3.47～5.3.48로 한다.

제9. 5. 5.3.56을 삭제하고 5.3.57～5.3.66을 각각 5.3.49～5.3.58로 한다.

제9. 5. 5.3.67을 삭제하고 5.3.68～5.3.83을 각각 5.3.59～5.3.74로 한다.

제9. 5. 5.3.84를 5.3.75로 하고 다음과 같이 한다.

5.3.75 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 겐타마이신·네오마이신을 10 mM 인산완충용액으로 추출하고 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 겐타마이신 및 네오마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 마)의 표준품 희석용매에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 표준품 희석용매: 100 mL 아세토니트릴과 10 mL 초산을 넣고 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

마) 10 mM 인산완충용액(0.4 mM EDTA와 2% 삼염화초산 함유): 1 L 용량플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 1.36 g을 넣고 물 0.9 L 먼저 녹인 후 1 N 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨 이수화물(Na2 EDTA dihydrate) 0.15 g과 삼염화초산 20 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 헵타플루오르뷰티릭산(HFBA) 용액: 1 L 용량플라스크에 헵타플루오르뷰티릭산(HFBA) 1.3 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 용출용액: 삼염화초산 5 g을 넣고 물 100 mL로 녹인 후 아세토니트릴 50 mL를 첨가하고 물로 250 mL가 되게 한다.

아) 약양이온교환(Weak Cation Exchange, WCX) 카트리지(150 mg, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

차) 기구: 사용하는 모든 용기는 폴리프로필렌 재질 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 ㉠10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 20분 동안 격렬하게 진탕한 다음 4℃ 12,000 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 0.45 ㎛ 막 여과지(Nylon membrane filter)로 여과하여 새로운 폴리프로필렌 원심분리관에 옮긴다. 잔여물에 ㉠의 과정을 반복한 후 상층액을 합하여 추출액으로 한다. 30% 수산화나트륨을 약 0.2 mL를 가하여  pH 7.5∼8.0으로 맞추어 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 약양이온교환(WCX) 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL를 넣어 세척한다. 5분 이상 진공감압하여 수분을 제거한 후 용출용액 4 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화한 후 0.2 ㎛ 막 여과지(Nylon membrane filter)로 여과하여 폴리프로필렌 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(XSELECT 2.1 ｘ 150 mm, 3.5 µm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도: 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A: 10 mM 헵타플루오르뷰티릭산(HFBA) 용액

(나) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	80	20
2	80	20
4	5	95
8	5	95
9	80	20
12	80	20

(4) 유속: 0.3 mL/분

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Capillary temperature: 200℃

(3) Capillary voltage : 3.5 kV

(4) Collision gas: 아르곤(Ar)

(5) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
네오마이신 (Neomycin)	4.02	614	615	161	48
				114	30
				293	24
겐타마이신 C1 (Gentamicin C1)	4.03	478	479	322	25
				126	15
				160	10
겐타마이신 C2,C2a (Gentamicin C2,C2a)	4.03	464	465	322	25
				112	25
				126	15
겐타마이신 C1a (Gentamicin C1a)	4.02	450	451	322	25
				112	20
				163	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

네오마이신

겐타마이신C1

겐타마이신C2, C2a

겐타마이신C1a

그림 1. 겐타마이신(4.03분, 0.1 mg/kg), 네오마이신(4.02분, 0.5 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 각각 피크의 높이 또는 면적값으로 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 각각의 정량이온(Quantitative ion)의 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 겐타마이신 및 네오마이신을 정량한다. 단, 겐타마이신 C1, C2, C2a, C1a 각각 정량이온의 피크 높이 또는 피크 면적값의 합을 겐타마이신으로 한다.

나) 정량한계

겐타마이신(Gentamicin): 0.005 mg/kg

네오마이신(Neomycin): 0.02 mg/kg

제9. 5. 5.3.85～5.3.88을 각각 5.3.76～5.3.79로 한다.

제9. 5. 5.3.89를 5.3.80으로 하고 다음과 같이 한다.

5.3.80 덱사메타손(Dexamethasone), 메틸프레드니솔론(Methylprednisolone), 베타메타손(Betamethasone), 알도스테론(Aldosterone), 코르티손(Cortisone), 코르티코스테론(Corticosterone), 프레드니손(Prednisone), 프레드니솔론(Prednisolone), 플루메타손(Flumethasone)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고, C18 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액100 mL 용량플라스크에 각 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 일정 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 10% 아세토니트릴 용액으로 표시선까지 채워 냉동 보관한다. 혼합표준용액은 10% 아세토니트릴 용액으로 희석하여 사용한다.

마) 3 M 아세테이트 완충용액(pH 4.6): 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산나트륨 246.1 g을 넣고 물 500 mL로 충분히 녹인 후 초산으로 pH 4.6이 되도록 조정하고 물로 표시선까지 채운다.

바) 20% 아세톤 용액: 100 mL 용량플라스크에 아세톤을 20 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량 플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) C18 카트리지 (6 mL, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 3 M 아세테이트 완충용액(pH 4.6) 10 mL를 가한 후 진탕한다. β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/arylsulfatase) 50 μL를 첨가하여 균질화하고 60℃ 오븐에 1시간 동안 넣어 둔 후 상온에서 냉각한다. 이 용액에 아세토니트릴 10 mL을 가하여 5분간 진탕하고 0℃에서 5,000 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취한다. 이런 과정을 한번 더 반복하여 얻어진 상층액에 헥산 8 mL와 디클로르메탄 2 mL를 가하여 10분간 진탕한다. 하층액(아세토니트릴층)을 취하여 50℃에서 질소농축 하고 잔류물에 메탄올 1 mL과 증류수 10 mL로 용해한 후, 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화 시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시킨다. 물 5 mL, 20% 아세톤 용액 5 mL, 헥산 5 mL로 차례로 세척한 후 진공 감압하여 물을 완전히 제거해준다. 에틸아세테이트 6 mL로 용출하고 50℃에서 질소농축한 후 잔류물에 10% 아세토니트릴 용액 1 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼： C18(Atlantis dC18 2.1 mm ｘ 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	70	30
7	70	30
8.5	10	90
12	10	90
14	70	30
16	70	30

(3) 유속: 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive, Negative)

(2) Capillary temperature: 250℃

(3) Capillary voltage: Positive(5.0 kV)/Negative(3.0 kV)

(4) Collision gas: Ar(아르곤)

(5) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	덱사메타손 (Dexamethasone)	Negative	7.7	392.46	437.2	292.0	38
						307.1	33
						361.1	20
						391.1	15
2	메틸프레드니솔론 (Methyl prednisolone)	Negative	7.0	374.47	419.2	294.0	38
						309.1	34
						343.1	20
						373.1	14
3	베타메타손 (Betamethasone)	Negative	7.4	392.46	437.2	292.1	37
						307.0	30
						324.8	32
						361.1	20
4	알도스테론 (Aldosterone)	Positive	3.8	360.45	361.2	255.1	17
						315.0	17
						325.1	14
						343.2	15
5	코르티손 (Cortisone)	Positive	5.0	360.45	361.2	105.1	32
						121.1	31
						145.1	30
						163.1	23
6	코르티코스테론 (Corticosterone)	Positive	9.2	346.47	347.2	121.1	25
						293.1	14
						311.2	16
						329.1	12
7	프레드니손 (Prednisone)	Negative	4.6	358.43	403.2	299.1	47
						327.1	20
						357.1	19
						187.0	12
8	프레드니솔론 (Prednisolone)	Negative	4.5	360.44	405.2	187.0	31
						280.1	37
						295.1	32
						329.1	19
9	플루메타손 (Flumethasone)	Negative	7.6	410.45	455.2	305.1	40
						363.1	27
						379.1	20
						409.1	15

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 % ∼ ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 % ∼ ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

프레드니손 RT 4.6분

프레드니솔론 RT 4.5분

메틸프레드니솔론 RT 7.1분

베타메타손 RT 7.4분

덱사메타손 RT 7.8분

플루메타손 RT 7.1분

코르티코스테론 RT 9.2분

코르티손 RT 5.0분

알도스테론 RT 3.8분

그림 1. 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 플루메타손, 코르티코스테론, 코르티손, 알도스테론 표준품의 크로마토그램(0.001 mg/L)

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

9) 정량한계

덱사메타손 : 0.0001 mg/kg

메틸프레드니솔론 : 0.0001 mg/kg

베타메타손 : 0.0001 mg/kg

알도스테론 : 0.005 mg/kg

코르티손 : 0.002 mg/kg

코르티코스테론 : 0.002 mg/kg

프레드니손 : 0.0001 mg/kg

프레드니솔론 : 0.0001 mg/kg

플루메타손 : 0.001 mg/kg

제9. 5. 5.3.90～5.3.95를 각각 5.3.81～5.3.86으로 하고 5.3.96을 삭제한다.

제9. 5.3.97을 5.3.87로 하고 5.3.98과 5.3.99를 삭제한다.

제9. 5.3.100～5.3.122를 각각 5.3.88～5.3.110으로 하고 5.3.111～5.3.114를 다음과 같이 신설한다.

5.3.111 니트로푸라존(Nitrofurazone)

1) 시험법 적용범위

수산물 중 갑각류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 니트로푸라존(Nitrofurazone)을 0.2% 메타인산/메탄올 혼합용액(6:4, v/v)으로 추출하고 HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다. 니트로푸라존은 빛에 쉽게 분해되므로 실험과정에 사용되는 초자는 갈색유리병을 사용하거나 호일로 감싸 빛을 차단하여 실험한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 니트로푸라존 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액: 표준원액을 10 mM 암모늄아세테이트로 희석하여 사용한다.

마) 10 mM 암모늄아세테이트(Ammonium acetate) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 암모늄아세테이트 0.78 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

바) 0.2% 메타인산/메탄올 혼합용액(6:4, v/v):  1,000 mL 용량플라스크에 메타인산 2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 메탄올과 6:4의 비율로 혼합하여 추출용액으로 사용한다.

사) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

아) 기타시약: 특급

자) 용기: 갈색 유리기구

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체  5 g을 정밀히 달아 용기에 넣고 0.2% 메타인산/메탄올 혼합용액(6:4, v/v) 100 mL를 가한 후 1분간 균질화 한다. 이 용액을 whatman No.6 여과지가 깔린 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 이 여과액{단, (껍질을 포함하는) 민물새우의 경우 여과액을 4℃에서 12,000 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 사용}은 40°C 이하의 수욕 중에서 20〜30 mL가 되게 회전식 감압 농축한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 10% 메탄올 5 mL로 세척한 뒤, 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 수용액상에서 질소농축한 후, 잔류물은 10 mM 암모늄아세테이트/아세토니트릴(3:7, v/v) 혼합용액 1 mL로 재용해하고 0.2 μm 막 여과지(Nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(BEH, 2.1 × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 10 mM 암모늄아세테이트

(나) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
0.5	95	5
1.5	70	30
2.0	70	30
3.0	95	5
5.0	95	5

(3) 유속: 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도: 35℃

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Negative)

(2) Capillary temperature: 350℃

(3) Capillary voltage: 2.8 kV

(4) Collision gas: 아르곤(Ar)

(5) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compounds)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
니트로푸라존 (Nitrofurazone)	1.87	198.1362	197.07	124.10	10
				149.92	10
				79.92	10

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 % ∼ ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 % ∼ ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 니트로푸라존(1.86분, 0.005 mg/L) 표준품의 크로마토그램

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

(1) 껍질을 포함하는 민물새우 : 0.005 mg/kg

(2) (1)을 제외한 갑각류(가식부) : 0.001 mg/kg

5.3.112 시프로헵타딘(Cyproheptadine), 더콴텔(Derquantel), 펄리마이신(Pirlimycin)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 80% 아세토니트릴로 추출하여 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 혼합표준용액: 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 유를 제외한 축‧수산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 2 g (새우, 장어의 경우 1.5 g)과 80% 아세토니트릴 용액 10 mL을 가하여 15분간 진탕한 후, 2,200 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 헥산 10 mL를 넣고 30 초간 진탕한 후 2,200 G에서 5분간 원심분리한다. 하층액(아세토니트릴층) 2 mL를 새로운 원심분리관에 취하여 50℃에서 질소농축한 후 잔류물에 0.1% 개미산/메탄올 혼합용액(1:1, v/v) 0.4 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 1.5 g, 초산암모늄 1 g, 80% 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 15분간 진탕한 후, 2,200 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여헥산 10 mL를 넣고 30 초간 진탕하고 2,200 G에서 5분간 원심분리한다. 하층액(아세토니트릴층) 2 mL를 새로운 원심분리관에 취하여 50℃에서 질소농축한 후 잔류물에 0.1% 개미산/메탄올 혼합용액(1:1, v/v) 0.4 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(Kinetex, 2.1 × 50 mm, 1.3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
10	10	90
15	10	90
15.1	90	10
18	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI (Positive)

(2) Capillary temperature : 250℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	시프로헵타딘 (Cyproheptadine)	7.3	287.4	288.1	96.1	-26
					191.1	-29
					215.1	-47
2	더콴텔 (Derquantel)	6.1	479.6	480.3	462.2	-25
					405.3	-32
					148.1	-44
3	펄리마이신 (Pirlimycin)	6.0	410.1	411.2	112.2	-15
					56.1	-20
					363.1	-20

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤20%
> 20%∼≤ 50%	≤25%
> 10%∼≤ 20%	≤30%

시프로헵타딘(7.3분)

더콴텔(6.1분)

펄리마이신(6.0분)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 시프로헵타딘, 더콴텔, 펄리마이신 표준품의 크로마토그램(각 0.005 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

시프로헵타딘(Cyproheptadine) : 0.005 mg/kg

더콴텔(Derquantel) : 0.0002 mg/kg

펄리마이신(Pirlimycin) : 0.005 mg/kg

5.3.113 요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세트산이 함유된 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 요오드퀴놀린설폰산 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액: 100 mL 용량플라스크에 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

마) 0.1% 아세트산(Acetic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산 1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 아세트산 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량 플라스크에 아세트산 1 mL를 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴 용액 8 mL를 가하여 10분간 진탕 혼합한 후 4℃에서 2,600 G로 15분간 원심분리하여 상층액 ⓐ를 취한다. 잔류물에 다시 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴을 7 mL를 가하여 10분간 진탕하고 4℃에서 2,600 G로 15분간 원심분리하여 상층액 ⓑ를 취한다. 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액 ⓐ와 ⓑ를 합한 후 헥산 15 mL를 가하여 10분간 진탕하고 4℃에서 2,600 G로 15분간 원심분리한다. 하층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 0.3 mL이 될 때까지 질소농축한 후 0.1% 아세트산 수용액:0.1% 아세트산 함유 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 2.2 mL을 가하여 재분산한다. 4℃에서 15,000 G로 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18 (Xbridge 2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.1% 아세트산 용액

(나) 이동상 B: 0.1% 아세트산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
3	95	5
5	5	95
12	5	95
15	95	5
20	95	5

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 35℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Negative)

(2) Capillary Temperature: 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
요오드퀴놀린설폰산 (Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid)	9.28	351.1	349.7	223.0	-38
				159.1	-40
				80.0	-90

※ 밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1). 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 요오드퀴놀린설폰산 표준품의 크로마토그램(9.28분, 0.05 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid) : 0.005 mg/kg

5.3.114 콜리스틴(Colistin)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 콜리스틴을 1N 염산(수산물의 경우, 5% 메탄올성 0.5% 개미산 혼합용액)으로 추출하고 HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 콜리스틴 표준품(A와 B의 혼합물)을 정밀히 달아 50% 메탄올 용액에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액: 표준원액을 1% 개미산 메탄올 용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 5% 메탄올성 0.5% 개미산 혼합용액: 1,000 mL 용량플라스크에 5 mL의 개미산을 넣고 5% 메탄올 용액을 표시선까지 채운다.

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약: 특급

아) 기구: 사용하는 모든 용기는 폴리프로필렌 재질 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 ㉠ 1 N 염산용액 5 mL를 넣어 추출한 후 4℃ 12,000 G에서 10분간 원심분리한다. ㉠의 과정을 2회 반복하여 상층액을 합하여  추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후, 1% 개미산을 함유하는 메탄올 용액 4 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화한 후 0.2 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 수산물

균질화한  검체 2 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 ㉡ 5% 메탄올성 0.5% 개미산 혼합용액 5 mL를 넣어 가볍게 진탕한 후 4℃ 12,000 G에서 10분간 원심분리한다. ㉡의 과정을 2회 반복하여 상층액을 합하여  추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화 시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후, 1% 개미산을 함유하는 메탄올 용액 4 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화한 후 0.2 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(XSELECT, 2.1 × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도: 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A: 암모늄포메이트/개미산/물(1/2.5/497.5, v/v/v)

(나) 이동상 B: 1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
1	100	0
8	10	90
9	10	90
9.5	100	0
12	100	0

(4) 유속: 0.3 mL/분

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Capillary temperature: 500℃

(3) Capillary voltage: 3.5 kV

(4) Collision gas: 아르곤(Ar)

(5) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compounds)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
콜리스틴 A (Colistin A)	4.65	1169.48	585.3	100.99	30
				227.09	20
				569.58	16
콜리스틴 B (Colistin B)	4.47	1155.45	578.35	100.99	30
				202.01	13
				576.53	16

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

콜리스틴 A

콜리스틴 B

그림 1. 콜리스틴(A : 4.65분, B : 4.47분, 0.15 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 콜리스틴 A와 콜리스틴 B 각각의 피크 높이 또는 면적값을 합한 값으로 콜리스틴의 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 콜리스틴 A와 콜리스틴 B 각각의 정량이온(Quantitative ion)의 피크 높이 또는 피크 면적값을 합한 값으로 콜리스틴을 정량한다.

나) 정량한계

(1) 유 : 0.01 mg/kg

(2) 유를 제외한 축·수산물 : 0.05 mg/kg

[별표 1] 1. 중 65를 다음과 같이 개정한다.

65	감로멜론	멜론, Honeydew melon	Cucumis melo var. inodorus H. Jacq.	열매

[별표 1] 1. 중 68∼105를 각각 69∼106으로 하고, 68을 다음과 같이 신설한다.

68	감태	Kajime	Ecklonia cava	전체

[별표 1] 1. 중 106∼172를 각각 108∼174로 하고, 107를 다음과 같이 신설한다.

107	개암나무	헤이즐넛, 진자	Corylus heterophylla Fisch. ex Trautv.	열매

[별표 1] 1. 중 종전의 174∼384를 각각 176∼386으로 하고, 종전의 173을 다음과 같이 개정한다.

175	곤달비	Narrow-head ragwort	Ligularia stenocephala (Maxim.) Matsum. & Koiz. / Ligularia stenocephala f. quinquebracteata Yamam.	잎

[별표 1] 1. 중 종전의 386∼598를 각각 388∼600으로 하고, 종전의 385를 다음과 같이 개정한다.

387	녹두	안두(安豆), 길두(吉豆), Green gram, Mung bean	Phaseolus radiatus L.	씨앗, 싹

[별표 1] 1. 중 599∼676을 각각 602∼679로 하고, 601을 다음과 같이 신설한다.

601	마	참마, East Asian mountain yam	Dioscorea batatas Decaisne / Dioscorea japonica Thunberg	뿌리, 뿌리줄기※(산약), 주아(영여자)

[별표 1] 1. 중 677∼773을 각각 681∼777로 하고, 680을 다음과 같이 신설한다.

680	모무늬돌김	-	Pyropia seriata	전체

[별표 1] 1. 중 968을 삭제하고 774∼967을 각각 779∼972로 하며, 778을 다음과 같이 신설한다.

778	방사무늬김	-	Pyropia yezoensis	전체

[별표 1] 1. 중 969∼1002을 각각 973∼1006으로 하고 종전의 1003∼1039를 각각 1008∼1044로 하며, 1007을 다음과 같이 신설한다.

1007	서양고추냉이	호스래디쉬 (Horseradish), 겨자무	Armoracia rusticana L.	뿌리

[별표 1] 1. 중 종전의 1040을 다음과 같이 개정한다.

1045	셀러리	셀러리악(Celeriac), Celery, Smallage, Garden celery, Wild celery	Apium graveolens var. dulce Pers / Apium graveolens subsp. rapaceum (Mill.) P.D.Sell	뿌리, 잎, 씨앗

[별표 1] 1. 중 종전의 1041∼1265를 각각 1046∼1270으로 하고, 종전의 1266을 다음과 같이 개정한다.

1271	오미자	Five-flavor magnolia vine	Schisandra chinensis (Turcz.) Baillon	열매※(오미자)

[별표 1] 1. 중 종전의 1267∼1368을 각각 1272∼1373으로 하고, 종전의 1369∼1434를 각각 1375∼1440으로 하며 1374를 다음과 같이 신설한다.

1374	잇바디돌김	-	Pyropia dentata	전체

[별표 1] 1. 중 1435∼3680을 각각 1442∼3687로 하고, 1441을 다음과 같이 신설한다.

1441	조릿대	-	Sasa borealis (Hack) Makino	잎

[별표 1] 1. 중 주1.과 주2.를 다음과 같이 한다.

주1. 상기의 ※ 표시된 품목(건조한 것에 한함)의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 ｢대한민국약전｣(식품의약품안전처 고시) 또는 ｢대한민국약전외한약(생약)규격집｣(식품의약품안전처 고시)에 따른다.

주2. 다만, 조류는 상기에서 명시된 식물성 원료 이외에 국제적으로 공인된 기구(세계조류학회 Listing the World’s Algae의 Algaebase 등)에서 식용 근거, 학명·이명 등이 확인된 경우 식품에 사용할 수 있는 원료로 사용할 수 있다. 이때, 별표 2에서 정하고 있는 원료는 제외한다.

[별표 1] 2. 중 74∼236을 각각 75∼237로 하고, 74를 다음과 같이 신설한다.

74	검정돌치	Black rockcod	Notothenia coriiceps	-

[별표 1] 2. 중 237∼628을 각각 239∼630으로 하고, 238을 다음과 같이 신설한다.

238	대리석무늬돌치	Marbled rockcod	Notothenia rossii	-

[별표 1] 2. 중 629∼656을 각각 632∼659로 하고, 631을 다음과 같이 신설한다.

631	유럽물레고둥	Whelk	Buccinum undatum	-

[별표 1] 2. 중 657∼790을 각각 661∼794로 하고, 660을 다음과 같이 신설한다.

660	장수풍뎅이 유충		Allomyrina dichotoma	-

[별표 1] 2. 중 792∼900을 각각 796∼904로 하고, 종전의 791을 다음과 같이 개정한다.

794	타조	-	Struthio camelus	고기, 알

[별표 1] 2. 중 901∼907을 각각 906∼912로 하고, 905를 다음과 같이 신설한다.

905	흰점박이꽃무지 유충	-	Protaetia brevitarsis	-

[별표 1] 2. 중 908∼918을 각각 916∼926로 하고, 913∼915를 다음과 같이 각각 신설한다.

913	Atlantic wolffish	Striped wolffish	Anarhichas lupus	-
914	Black scabbardfish	-	Aphanopus carbo	-
915	Blue ling	-	Molva dypterygia	-

[별표 1] 2. 919∼920을 각각 928∼929로 하고, 927을 다음과 같이 신설한다.

927	Ling	-	Molva molva	-

[별표 1] 2. 중 921∼922를 각각 931∼932로 하고, 930을 다음과 같이 신설한다.

930	North Pacific hake	-	Merluccius productus	-

[별표 1] 2. 중 923∼941을 각각 934∼952로 하고, 933을 다음과 같이 신설한다.

931	Pollack	-	Pollachius pollachius	-

[별표 1] 2. 중 주1.과 주2.를 각각 다음과 같이 한다.

주1. 상기의 ※ 표시된 품목은 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 적합한 것이어야 한다.

주2. 다만, 수산물은 상기에서 명시된 동물성 수산물 이외에도 국제적으로 공인된 기구(Food and Agriculture Organization of the United Nations의 Fisheries & Aquaculture, WorldFish의 Fishbase, World Register of Marine Species 등)에서 어획량에 대한 정보가 확인되고, 식용 근거, 학명·이명 등이 확인된 경우는 식품에 사용가능한 원료로 사용할 수 있다. 이때, 별표 2에서 정하고 있는 원료는 제외한다.

[별표 1] 3. 중 68∼69를 각각 69∼70으로 하고, 68을 다음과 같이 신설한다.

68	Weissella cibaria	-	Weissella cibaria	-

[별표 1] 3. 중 주1.를 다음과 같이 한다.

주1. 상기 미생물 원료 이외에 국제적으로 공인된 기관[국제낙농연맹(International Dairy Federation), 미국식품의약국(U.S. Food and Drug Administration), 유럽식품안전청(European Food Safety authority) 등]에서 제시하고 있는 미생물 원료는 동 기관에서 제시된 사용목적에 대해서만 식품원료로 사용 가능하다.

[별표 2] 1. 중 5를 다음과 같이 개정한다.

5	강황	울금, 심황, 우콘, Turmeric, Curcuma, haldi	Curcuma aromatica / Curcuma longa L. / Curcuma domestica Valeton	뿌리줄기	-

[별표 2] 1. 중 89를 삭제하고, 90∼146을 각각 89∼145로 한다.

[별표 2] 1. 중 주1.을 다음과 같이 한다.

주1. 상기의 ※ 표시된 품목(생지황을 제외한 품목의 경우 건조한 것에 한함)의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 「대한민국약전」(식품의약품안전처 고시) 또는 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 따른다.

[별표 2], 3. 중 8∼12를 각각 9∼13으로 하고, 8을 다음과 같이 신설한다.

8	Debaryomyces hansenii	-	Debaryomyces hansenii	유가공품 제조에 사용

[별표 2], 3. 중 종전 13∼20을 각각 15∼22로 하고, 14를 다음과 같이 신설한다.

14	Leuconostoc pseudomesenteroides	-	Leuconostoc pseudomesenteroides	유가공품 제조에 사용

[별표 2], 3. 중 종전의 21∼24를 각각 24∼27로 하고, 23을 다음과 같이 신설한다.

23	Protaminobacter rubrum	-	Protaminobacter rubrum	팔라티노스 제조에 한함

[별표 2], 3. 중 종전의 27을 28로 하며 종전의 25∼26을 각각 29∼30으로 한다.

[별표 2], 4. 중 7을 다음과 같이 개정한다.

7	패각, 난각, 나각, 산호, 진주	-	-	-	칼슘보충용 원료에 한함.

[별표 3] (1) 이미녹타딘(Iminoctadine)  중 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	0.7

[별표 3] (2) 글루포시네이트[Glufosinate(ammonium)] 중 다음 항목을 신설한다.

바나나	0.05†

[별표 3] (3) 글리포세이트(Glyphosate) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

바나나	0.05†

커피원두	1.0†

파인애플	0.05†

키위	0.05†

견과류	1.0†

[별표 3] (9) 델타메트린(Deltamethrin) 중 다음 항목을 신설한다.

조	0.2

[별표 3] (21) 디클로르보스(Dichlorvos) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.05

풋콩	0.05

[별표 3] (26) 디페노코나졸(Difenoconazole) 중 “복숭아 0.5”를 “복숭아 2.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

수수	0.2

왕고들빼기	7.0

[별표 3] (29) 디플루벤주론(Diflubenzuron) 중 다음 항목을 신설한다.

엽경채류	3.0

[별표 3] (31) 마이클로뷰타닐(Myclobutanil) 중 다음 항목을 신설한다.

왕고들빼기	3.0

[별표 3] (38) 메탈락실(Metalaxyl) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

엽채류	5.0

엽경채류	0.2

[별표 3] (54) 벤타존(Bentazone) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

배	0.05

사과	0.05

[별표 3] (55) 뷰프로페진(Buprofezin) 중 “토마토 1.0”을 “토마토 3.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

풋마늘	0.05

마늘	0.05

살구	0.5

자두	1.0

[별표 3] (59) 비터타놀(Bitertanol) 중 다음 항목을 신설한다.

엽경채류	10

[별표 3] (61) 비펜트린(Bifenthrin) 중 “시금치 2.0”을 “시금치 7.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

참나물	7.0

양상추	3.0

녹두	0.05

엽채류	2.0

엽경채류	0.07

[별표 3] (63) 세톡시딤(Sethoxydim) 중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎	0.3

[별표 3] (68) 사이할로트린(Cyhalothrin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

우엉잎	0.7

우엉	0.05

엽채류	2.0

엽경채류	0.3

[별표 3] (71) 아미트라즈(Amitraz) 중 다음 항목을 신설한다.

살구	2.0

[별표 3] (79) 알루미늄포스파이드[Aluminium Phosphide(Hydrogen phosphide)] 중 다음 항목을 신설한다.

양상추	0.05

[별표 3] (85) 에토펜프록스(Etofenprox) 중 다음 항목을 신설한다.

녹두	0.3

[별표 3], (101) 이미다클로프리드(Imidacloprid) 중 “토마토 0.5”를 “토마토 1.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

고구마	0.05

블루베리	4.0†

라즈베리	1.5†

크랜베리	0.04†

망고	0.4†

올리브	0.5†

바나나	0.01†

파파야	0.6†

옥수수	0.01†

커피원두	0.7†

[별표 3] (105) 이프로디온(Iprodione) 중 다음 항목을 신설한다.

마	0.05

마(건조)	0.05

[별표 3] (110) 카두사포스(Cadusafos) 중 다음 항목을 신설한다.

바나나	0.01†

[별표 3] (111) 카바릴(Carbaryl: NAC) 중 다음 항목을 신설한다.

오렌지	7.0†

[별표 3] (112) 카벤다짐(Carbendazim) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

커피원두	0.03†

파파야	0.5†

면실	0.2†

[별표 3] (114) 카보퓨란(Carbofuran) 중 다음 항목을 신설한다.

바나나	0.01†

[별표 3] (118) 캡탄(Captan) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감	0.7

풋마늘	7.0

[별표 3] (133) 테부코나졸(Tebuconazole) 중 “산마늘 0.1”을 “산마늘잎 0.1”로 한다.

[별표 3] (135) 터부포스(Terbufos) 중 다음 항목을 신설한다.

참외	0.05

[별표 3], (141) 트리아디메놀(Triadimenol) 중 다음 항목을 신설한다.

커피원두	0.15†

[별표 3] (158) 페나리몰(Fenarimol) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

엽채류	2.0

엽경채류	1.0

[별표 3] (186) 프로클로라즈(Prochloraz) 중 “바나나 0.05”를 “바나나 5.0†”으로 한다.

[별표 3] (192) 프로피코나졸(Propiconazole) 중 “파 0.05”를 “파 1.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

고구마	0.05

고구마줄기	0.05

[별표 3] (206) 클로르페나피르(Chlorfenapyr) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

수수	0.5

엽채류	5.0

엽경채류	3.0

[별표 3] (208) 테부펜피라드(Tebufenpyrad) 중 다음 항목을 신설한다.

취나물	1.5

[별표 3] (209) 테플루벤주론(Teflubenzuron) 중 “배추 0.1”을 “배추 1.0”으로 한다.

[별표 3] (210) 페나자퀸(Fenazaquin) 중 다음 항목을 신설한다.

취나물	2.0

[별표 3] (212) 플루페녹수론(Flufenoxuron) 중 “대추 0.5”를 “대추 1.0”으로 하고, “대추(건조) 1.0”을 “대추(건조) 2.0”으로 하며, 다음 항목을 각각 신설한다.

참나물	5.0

조	0.5

엽경채류	2.0

[별표 3] (218) 디메토모르프(Dimethomorph) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

엽채류	30

엽경채류	7.0

[별표 3] (220) 디에토펜카브(Diethofencarb) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

키위	3.0

엽채류	30

엽경채류	15

[별표 3] (225) 사이프로디닐(Cyprodinil) 중 “복숭아 1.0”을 “복숭아 2.0”으로 한다.

[별표 3] (227) 아세타미프리드(Acetamiprid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고려엉겅퀴	2.0

우엉잎	0.5

우엉	0.05

해바라기씨	0.01†

엽채류	5.0

엽경채류	1.0

[별표 3] (228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

왕고들빼기	3.0

엽채류	20

엽경채류	3.0

[별표 3] (230) 크레속심메틸(Kresoxim-methyl) 중 “풋마늘 1.0”을 “풋마늘 3.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

왕고들빼기	3.0

엽채류	25

엽경채류	2.0

[별표 3] (231) 클로르플루아주론(Chlorfluazuron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

무(잎)	7.0

무(뿌리)	0.2

엽채류	5.0

엽경채류	2.0

[별표 3] (235) 포스티아제이트(Fosthiazate) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

부추	2.0

우엉잎	5.0

우엉	0.05

[별표 3] (237) 피메트로진(Pymetrozine) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

사과	0.3

팥	0.05

[별표 3] (238) 플루디옥소닐(Fludioxonil) 중 “부추 0.5”를 “부추 7.0”으로 하고, “산마늘 0.2”를 “산마늘잎 0.2”로 하며, 다음 항목을 각각 신설한다.

취나물	15

오미자(건조)	7.0

오미자	2.0

엽채류	15

엽경채류	5.0

[별표 3] (239) 플루아지남(Fluazinam) 중 다음 항목을 신설한다.

산수유(건조)	1.0

[별표 3] (242) 루페뉴론(Lufenuron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

비트(잎)	3.0

비트(뿌리)	0.3

아스파라거스	0.5

우엉잎	5.0

우엉	0.05

취나물	7.0

포도	2.0

엽채류	5.0

엽경채류	3.0

[별표 3] (248) 아바멕틴(Abamectin) 중 “파 0.1”을 “파 0.3”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

부추	0.3

대추	0.05

대추(건조)	0.5

[별표 3] (249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate) 중 “고추 0.05”를 “고추 0.2”로 하고, “피망 0.05”를 “피망 0.2”로 하며, “파 0.05”를 “파 0.4”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

부추	0.4

미나리	0.4

아스파라거스	0.05

[별표 3] (273) 밀베멕틴(Milbemectin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대추	0.3

대추(건조)	0.3

[별표 3] (285) 아크리나트린(Acrinathrin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

취나물	3.0

엽채류	5.0

엽경채류	1.0

[별표 3] (286) 에트리디아졸(Etridiazole) 중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎	0.1

[별표 3] (290) 인독사카브(Indoxacarb) 중 “파 0.5”를 “파 2.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

녹두	0.3

부추	3.0

조	0.5

[별표 3] (309) 플루톨라닐(Flutolanil) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

풋콩	0.05

엽채류	15

엽경채류	10

[별표 3] (321) 디노테퓨란(Dinotefuran) 중 다음 항목을 신설한다.

갓	0.1

[별표 3] (323) 보스칼리드(Boscalid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

풋마늘	1.0

감귤류	2.0†

블루베리	10†

라즈베리	9.0†

호프	35†

체리	4.0†

엽경채류	30

[별표 3] (324) 비페나제이트(Bifenazate) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대추	0.3

대추(건조)	0.3

[별표 3] (325) 사이아조파미드(Cyazofamid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

엽채류	10

엽경채류	2.0

[별표 3] (332) 클로티아니딘(Clothianidin) 중 다음 항목을 신설한다.

엽경채류	1.0

[별표 3] (345) 피라클로스트로빈(Pyraclostrobin) 중 “파 1.0”을 “파 4.0”으로 하고, “감 0.1”을 “감 0.5”로 하며, “들깻잎 10”을 “들깻잎 20”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

대추(건조)	5.0

셀러리	4.0

취나물	20

호두	0.05

피스타치오	0.7†

[별표 3] (349) 노발루론(Novaluron) 중 “파 0.3”을 “파 0.7”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

녹두	0.5

포도	2.0

[별표 3] (352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

부추	2.0

미나리	2.0

[별표 3] (355) 스피로디클로펜(Spirodiclofen) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

취나물	20

아보카도	0.9†

견과류	0.05†

[별표 3] (356) 에타복삼(Ethaboxam) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

엽채류	15

엽경채류	7.0

[별표 3] (357) 디티오카바메이트(Dithiocarbamates) 중 “◎ 잔류물의 정의 : Dithiocarbamate계 농약들의 합”을 “◎ 잔류물의 정의 : Dithiocarbamate계 농약들의 합(CS2로서)”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

풋마늘	3.0

대두	0.05

풋콩	0.05

마	0.05

마(건조)	0.05

[별표 3] (370) 벤티아발리카브아이소프로필(Benthiavalicarb-isopropyl) 중 다음 항목을 신설한다.

시금치	1.0

[별표 3] (371) 디니코나졸(Diniconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	0.3

[별표 3] (380) 피리달릴(Pyridalyl) 중 “파 2.0”을 “파 15”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

미나리	15

수수	5.0

엽채류	15

엽경채류	7.0

[별표 3] (386) 플로니카미드(Flonicamid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

가지	0.2

다채	0.5

[별표 3] (394) 비스트리플루론(Bistrifluron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

비트(잎)	10

비트(뿌리)	0.5

[별표 3] (399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	1.0

피망	1.0

[별표 3] (403) 메타플루미존(Metaflumizone) 중 “파 3.0”을 “파 15”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

미나리	15

취나물	10

무(잎)	5.0

무(뿌리)	0.05

[별표 3] (404) 메트라페논(Metrafenone) 중 다음 항목을 신설한다.

참깨	0.2

[별표 3] (405) 사이에노피라펜(Cyenopyrafen) 중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎	7.0

[별표 3] (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 “파 0.5”를 “파 0.7”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

미나리	0.7

비트(잎)	0.05

비트(뿌리)	0.05

[별표 3] (410) 옥솔린산(Oxolinic acid) 중 “복숭아 2.0”을 “복숭아 5.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

수박	2.0

쌈배추	5.0

풋콩	1.0

대두	0.05

[별표 3] (416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

비트(잎)	7.0

비트(뿌리)	0.2

양배추	0.3

무(잎)	10

무(뿌리)	0.05

우엉잎	10

우엉	0.05

[별표 3] (417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide) 중 “대추 1.0”을 “대추 2.0”으로 하고, “대추(건조) 1.0”을 “대추(건조) 7.0”으로 하며, “무(잎) 3.0”을 “무(잎) 7.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

매실	1.0

머위	15

[별표 3] (422) 펜티오피라드(Penthiopyrad) 중 다음 항목을 신설한다.

녹두	0.05

[별표 3] (424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon) 중 다음 항목을 신설한다.

고려엉겅퀴	1.0

[별표 3] (427) 이미시아포스(Imicyafos) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

우엉잎	2.0

우엉	0.05

[별표 3] (428) 플루오피람(Fluopyram) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

배	0.7

사과	0.7

녹두	0.5

[별표 3] (430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

가지	0.2

고려엉겅퀴	2.0

우엉잎	1.0

우엉	0.05

팥	0.05

[별표 3] (433) 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole) 중 다음 항목을 신설한다.

올리브	1.5†

[별표 3] (435) 펜피라자민(Fenpyrazamine) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

오미자(건조)	5.0

오미자	2.0

키위	3.0

블루베리	4.0†

라즈베리	5.0†

[별표 3] (437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

바나나	3.0†

건포도	5.7†

자두	1.5†

건자두	3.0†

[별표 3] (438) 피리오페논(Pyriofenone) 중 다음 항목을 신설한다.

왕고들빼기	10

[별표 3] (439) 스피로테트라맷(Spirotetramat) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고려엉겅퀴	5.0

우엉잎	10

우엉	0.05

팥	0.05

[별표 3] (452) 아이소페타미드(Isofetamid) 중 “◎ 잔류물의 정의 : Isofetamid”를 “◎ 잔류물의 정의 : Isofetamid와 GPTC의 합을 isofetamid로 함”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

복숭아	2.0

사과	0.2

[별표 3] (458) 사이클라닐리프롤(Cyclaniliprole)을 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Cyclaniliprole과 NK-1375의 합을 cylaniliprole로 함

고추	1.0

피망	1.0

엇갈이배추	0.5

배추	0.2

파	0.5

[별표 3] (459) 피플루뷰마이드(Pyflubumide)를 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Pyflubumide와 Pyflubumide-NH의 합을 pyflubumide로 함

감	0.5

[별표 4] (26) 플루톨라닐(Flutolanil) 중 다음 항목을 신설한다.

건삼	5.0

[별표 4] (84) 이미다클로프리드(Imidacloprid)를 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Imidacloprid

건삼	0.05

수삼	0.05

[별표 6] (2) 나이카바진(Nicarbazin)의 잔류물의 정의를 다음과 같이 한다.

(2) 나이카바진(Nicarbazin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea

[별표 6] (27) 에토파베이트(Ethopabate)의 잔류물의 정의를 다음과 같이 한다.

(27) 에토파베이트(Ethopabate) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Ethopabate와 m-phenetidine의 합을 ethopabate로 한다

[별표 6] (36) 죠렌(Zoalene)의 잔류물의 정의를 다음과 같이 한다.

(36) 죠렌(Zoalene) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Zoalene과 3-amino-5-nitro-o-toluamide(3-ANOT)의 합을 zoalene으로 한다

[별표 6] (66) 콜리스틴(Colistin)의 잔류물의 정의를 다음과 같이 한다.

(66) 콜리스틴(Colistin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Colistin A, B의 합을 colistin으로 한다

[별표 6] (173) 시프로헵타딘(Cyproheptadine)을 다음과 같이 신설한다.

(173) 시프로헵타딘(Cyproheptadine) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Cyproheptadine

소근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

[별표 6] (174) 요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinoline sulfonic acid)을 다음과 같이 신설한다.

(174) 요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinoline sulfonic acid): 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Iodo hydroxy quinoline sulfonic acid

소근육	0.01

돼지근육	0.01

[별표 6] (175) 플루메타손(Flumethasone)을 다음과 같이 신설한다.

(175) 플루메타손(Flumethasone): 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Flumethasone

소근육	0.001

돼지근육	0.001

말근육           0.001

부칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제9. 5.3.112〜113 및 별표 6의 (173)〜(175)의 개정 규정은 고시 후 1년이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제1. (생  략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. (생  략)

2. 용어의 풀이

1) ∼ 40) (생   략)

<신    설>

<신    설>

3. ～ 4. (생   략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 4) (생  략)

5) 중금속 기준

(1) ∼ (4) (생  략)

(5) 식용곤충의 중금속 기준

① ∼ ② (생  략)

<신    설>

<신    설>

6) ∼ 9) (생  략)

10) 농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 잔류허용 기준 적용

① (현행과 같음)

㉮ 당해 농산물에 대한 CODEX 기준

㉯ (현행과 같음)

② ～ ③ (현행과 같음)

(2) ～ (7) (현행과 같음)

11)동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 식품 중 잔류 동물용의약품 기준 적용

(생   략)

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
1	니트로푸란{푸라졸리돈(Furazolidone), 푸랄타돈(Furaltadone), 니트로푸라존(Nitrofurazone), 니트로푸란토인(Nitrofurantoine), 니트로빈(Nitrovin) 등} 제제 및 대사물질*2 ◎ 잔류물의 정의 : 3-amino-2-oxazolidinone(AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl- 2-oxazolidinone(AMOZ), Semicarbazide(SEM), 1-aminohydantoin(AHD), Nitrovin
2～17	(생 략)

*주1. 축산물 및 동물성 수산물과 그 가공식품에 한한다.

*주2. 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(SEM)는 비가열 축산물 및 동물성 수산물(단순절단 포함)의 가식부위에 한하여 적용한다.

<신 설>

②～⑤ (생   략)

(2)～(3) (생   략)

12) ∼ 23) (생   략)

6. (생   략)

제3. ～ 제4. (생   략)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 12. (생  략)

13. 두부류 또는 묵류

1) ～ 2) (생  략)

3) (생  략)

(1) ～ (3) (생  략)

(4) 두부류 제조시에는 환경정책기본법 시행령 [별표] 환경기준 중 3. 라. 1) 및 2)에서 정하고 있는 등급Ⅰ의 수질기준에 적합한 해수(염지하수 포함)에 한하여 사용할 수 있다.

4) ～ 6) (생  략)

14. ～29. (생  략)

제6. ∼ 제8. (생  략)

제9. 일반시험법

1. ～ 3. (생  략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.14 (생   략)

4.1.3.15 메소밀(Methomyl) 및 옥사밀(Oxamyl)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 나) (생   략)

다) 표준원액：메소밀 옥심 및 옥사밀 옥심을 각각 아세톤에 녹여 100 mg/L으로 한다.

라) 표준용액：표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) (생   략)

5) 시험용액의 조제

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 20 mesh를 통과하도록 분쇄한 곡류는 50 g에 물 40 mL, 두류는 25 g에 물 20 mL를 넣고 1시간 방치, 채소류, 과실류, 종실류 및 견과류는 약 1kg을 분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 균질기(Omni mixer)병에 넣고 아세톤 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 아세톤 30 mL로 씻고 여과한 후 위의 여액과 합한다. 이 여액을 소량이 남을 때 까지 30℃이하에서 감압농축하여 아세톤을 날려보낸다. 이 농축액을 250 mL 분액깔때기에 옮기고 잔류물을 10 mL 증류수로 씻어 합한다. 이 분액깔때기에 5 mL의 1N 황산 수용액과 50 mL 헥산을 차례로 가하고 1분간 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 하층의 수용액을 250 mL 분액깔때기로 옮기고 헥산은 버린다. 50 mL 헥산으로 이 과정을 되풀이한다. 수용액층에 염화나트륨 10 g을 넣고 디클로르메탄 50 mL로 2회 추출하고 이 추출액을 무수황산나트륨칼럼에 통과시켜 탈수․여과한다. 탈수액에 2% 디에틸렌글리콜․아세톤 용액 0.2 mL를 가하고 30℃에서 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류하에서 서서히 증발, 건고시킨다. 잔류물에 30 mL의 0.1N 수산화나트륨용액을 가하고 80℃ 항온수조에서 30분간 가수분해시켜, 메소밀과 옥사밀을 옥심체로 변환시킨다. 반응물을 방냉한 후 5 mL의 1 N 황산용액으로 씻어 250 mL 분액깔때기로 옮긴다. 여기에 10 g 염화나트륨을 넣고 디클로르메탄 50 mL로 2회 추출하고 이 추출액을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 추출액에 2% 디에틸렌글리콜․아세톤 용액 0.2 mL를 가하고 30℃에서 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류하에서 서서히 증발, 건고시킨다. 이 잔류물에 아세톤 5 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) ∼ (2) (생   략)

(3) 칼럼온도：80℃에서 검체를 주입하고 10분간 유지(DB-608, 메소밀 옥심)

150℃에서 검체를 주입하고 10분간 유지(DB-608, 옥사밀 옥심)

45℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지 후 220℃까지 10℃/분으로 상승시켜서 5분간 유지시킨다(DB-17, 메소밀 옥심 및 옥사밀 옥심).

(4) ∼ (6) (생   략)

나) (생   략)

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-608)

1：메소밀 옥심(5.9분), 2：옥사밀 옥심(6.4분) 각 2 ng

그림 2. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-17)

1：메소밀 옥심(8.2분), 2：옥사밀 옥심(13.3분) 각 2 ng

라) ∼ 마) (생   략)

표 1. 기체크로마토그래프 질량분석기 분석을 위한 fragment ions

분석성분	머무름 시간(분)	분자량	Fragment monitored(m/z)
메소밀 옥심	8.0	106.33	105, 88, 71, 58
옥사밀 옥심	13.2	170.04	162, 145, 115 98, 72

7) (생   략)

8) 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.(정량한 잔류량에 메소밀의 경우 1.54, 옥사밀의 경우 1.35를 곱하여 최종 잔류량으로 한다)

4.1.3.16 ∼ 4.1.3.42 (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

4.1.4 단성분시험법(individual residue methods)

4.1.4.1 ∼ 4.1.4.33 (생   략)

4.1.4.34 티오디카브(Thiodicarb)

1) 시험법 적용범위

감, 고추, 대두, 면실, 배추, 복숭아, 사과, 옥수수, 파 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리
검체를 아세톤으로 추출한 후 액액분배하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프∶불꽃광도검출기(FPD) 및 질소․인 검출기(NPD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：티오디카브를 아세톤에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

라) 표준용액：표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

마) 기타시액：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출
검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g을 달아 물 40 mL를 넣고 2시간 방치한다. 종실류는 약 1 kg을 정밀히 달아 필요하면 적당량의 물을 넣고 균질화한 후 그 20 g에 상당하는 양을 단다)를 균질기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 균질화한 후 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 다시 균질기에 넣고 아세톤 50 mL를 넣어 5분간 균질화한 후 이와 같이 되풀이하여 여과한다. 여액을 합쳐 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 약 40 mL로 농축한다. 이를 미리 증류수 50 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 1N 황산 5 mL, 염화나트륨 20 g 및 헥산 50 mL를 넣어 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층을 취한다. 물층에 헥산 50 mL를 넣어 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층을 위의 물층에 합친다. 이에 디클로메탄 100 mL를 넣고 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로메탄층을 취한다. 다시 물층에 디클로메탄 100 mL씩을 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 디클로메탄층을 위의 디클로메탄층에 합친다. 이에 2% 디에틸렌글리콜 아세톤 용액 0.1 mL를 넣고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 날려보낸 후 잔사(residue)를 4N 수산화나트륨용액 20 mL에 녹인다. 이에 공기냉각기를 부착하고 85℃의 수욕상에서 30분간 가열하여 식힌 후 1N 황산 100 mL 및 에틸아세테이트 100 mL를 넣은 분액깔때기에 옮긴다. 이를 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 에틸아세테이트층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 에틸아세테이트 50 mL씩을 넣고 이와 같이 2회 되풀이하여 에틸아세테이트층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 에틸아세테이트층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 30분간 방치한 후 여과한다. 다시 에틸아세테이트 20 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 씻고 여과한다. 여액을 합친 후 이에 2% 디에틸렌글리콜아세톤용액 0.1 mL를 넣고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 용매를 날려보낸다. 잔사(residue)를 아세톤에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 컬럼충전제

(가) 고정상담체：기체크로마토그래프용 규조토(149～177 μm)를 6N 염산으로 2시간 환류시켜 씻고 물로 유출액이 중성이 될 때까지 씻은 후 건조하여 메틸실라잔처리[트리메틸클로로실란：피리딘：헥사메틸디실라잔(1：5：3)의 혼합액에 침지하고 10분간 물로 씻어 건조한다]한다.

(나) 고정상액체：10% 유리지방산 에스테르

(2) 칼럼：안지름 3 mm, 길이 100 cm의 유리관

(3) 시험용액 주입부 및 검출기의 온도：250℃

(4) 칼럼오븐온도：160～190℃

(5) 운반기체(carrier gas) 및 유량：질소 또는 헬륨(메틸치오아세트히드록메이크가 약 3～4분에서 유출하는 유속으로 조정하고 공기 및 수소의 유량을 최적 조건으로 조정한다)

나) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.35 ∼ 4.1.4.110 (생   략)

4.1.4.111 플로니카미드(Flonicamid)

1) 시험법 적용범위

고추, 기타농산물, 딸기, 배, 사과, 수박, 오이 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출한 후 실리카 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 전자포획검출기(electron capture detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 및 이와 동등한 것

다) 실리카 (silica)：칼럼크로마토그래프용 실리카(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 표준원액：플로니카미드를 아세톤에 녹여 100 mg/L이 되게 만든다.

마) 표준용액：표준원액을 아세톤에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

바) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출
검체 1 kg을 잘게 썰어 잘 섞은 후 20 g을 정밀히 달아 아세토니트릴 70 mL를 가하고 5분간 고속으로 균질화한 후 여과보조제(Celite 545)를 깔은 부흐너깔때기를 사용하여 흡인, 여과한다. 잔류물은 아세토니트릴 30 mL로 잘 씻고 이 씻은 액은 앞의 여액에 합한다. 합친 여액을 1 L 분액깔때기로 옮겨 포화염화나트륨용액 50 mL와 물 450 mL를 가한 후 디클로로메탄 70 mL를 가하여 심하게 진탕하여 정치시킨 후 디클로르메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 70 mL로 2회 반복하여 추출하고 상기 여액과 합친 후 무수황산나트륨으로 탈수, 여과시키고 40℃이하의 수욕중에서 감압농축하여 용매를 날려버리고 헥산 5 mL로 녹인다.

나) 정제
직경 15 mm 칼럼관에 실리카 5 g을 충전하고 여기에 헥산 30 mL로 씻어서 버린다. 칼럼 상단이 노출되기 직전에 상기 용해액 5 mL를 넣은 후 헥산/아세톤 혼합액(70/30, v/v) 50 mL를 흘려 버린다. 여기에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(50/50, v/v) 50 mL로 용출시켜 40℃이하의 수욕중에서 감압농축하여 용매를 날려 버리고 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：HP-17 캐필러리 칼럼(10 m × 0.53 mm ID, 2.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 운반기체(carrier gas) 및 유량：질소, 15 mL/분

(3) 칼럼오븐온도：180℃

(4) 주입부 온도：280℃

(5) 검출기 온도：300℃

(6) 주입량：2 μL(직접 주입법)

나) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정성시험
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

<신    설>

4.1.4.112 ∼ 4.1.4.190 (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

4.2 ∼ 4.3.1.3 (생   략)

4.3.1.4 클로르단(Chlordane), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 델타메쓰린(Deltamethrin), 에트림포스(Etrimfos), 펜발러레이트(Fenvalerlate), 퍼메쓰린(Permethrin), 포레이트(Phorate), 포사론(Phosalone), 피리미포스메틸(Pirimiphos methyl), 프로파자이트(Propargite), 빈클로졸린(Vinclozolin)

1) ∼ 3) (생   략)

가) ∼ 라) (생   략)

4) ∼ 5) (생   략)

가) ∼ 나) (생   략)

(1) ∼ (2) (생   략)

6) (생   략)

가) (생   략)

(1) (생   략)

(가) ∼ (다) (생   략)

(2) ∼ (6) (생   략)

나) (생   략)

7) ∼ 8) (생   략)

주1) (생   략)

주2) 위의 다종다성분농약 동시분석법에 적용되는 농약

[에테르 및 헥산의 %비율(두 가지 이상의 서로 다른 비율은 “＋”로 표기함), %회수율(회수율%가 없는 농약은 80% 이상임)]

Acetochlor(15＋50), Alachlor(50), Aldrin(6), Allethrin(50), Anilazine(15＋50), Benfluralin(6), Benoxacor(15＋50), Bensulide(50), BHC(α, β, γ：6), BHC(δ: 6＋15), Bifenox(15＋50), Bifenthrin(6＋15), Binapacryl(15, 65%), Bromophos(6), Bromophos-ethyl(6, 59～78%), Bromopropylate(15＋50), Captan(50), Carbophenothions(6, 60%), Chlobenside(6), Chlobromuron(50, 44～100%), Nuarimol(50), Octachlor epoxide(6), Ovex(15), Oxadiazon(15, 75%), Parathion methyl(15), Parathion(15), Pendimethalin(15, 33～56%), Pentachloroaniline(6), Pentachlorobenzene(6), pentachlorobenzonirile(15, 60%), Pentachlorphenyl methyl ester(6), Bifenthrin Cyfluthrin Dimethoate Diphenylamine	Chlobufam(15), Chlordane(6), Chlordecone(15＋50), Chlordene(6), Chlornitrofen(6＋15), Chlorobenzilate(15＋50), Chloropropylate(15＋50), Chlorpropham(15), Chlorpyrifos(6), Chlorthiophos(6), Cypermethrin(15), DDD(6), DDE(6), DDT(6), DEF(15＋50), Deltamethrin(15, 77～80), Dialifor(15, 50%), Diazinon(15), Dichlobenil(15), Dichlofop-methyl(15), Pentachlorphenyl methyl sulfide(6), Permethrin(6＋15), Perthane(6), Phorate(6, 80%), Phosalone(50), Photodieldrin(15＋50), Pirimiphos-ethyl(15＋50), Pirimiphos-methyl(15＋50), Procymidone(15, 76%), Profenofos(50, 50%), Prometryn(50, 70%), Disulfoton Fenarimol Fenpropathrin Fenpyroximate	Dichlorfenthion(6, 69～89%), Dicloran(15＋50, 50%), Dicofol(15＋50, 61～85%), Dieldrin(15), Dinitramine(15, 78～80%), Dinocap(15, 60%), Endosulfan(15＋50), Endrin(15), EPN(15), Esfenvalerate(15), Ethalfluralin(6), Ethion(6), Etridiazole(6, 68～73%), Etrimfos(15), Fenarimol(50), Fenitrothion(15), Fenoxaprop ethyl ester(50, 65～110%), Fenpropathrin(15, 59～ 114%), Propargite(15), Propham(15, 80%), Prothiofos(6), Pyrethrins(50), Quintozene(6), Ronnel(6), Simazine(50), Strobane(6), Sulfallate(6＋15), Sulfotep(6＋15, 65～70%), Sulphenone(20＋25), Kresoxim-methyl Myclobutanil Penconazole Profenofos	Fenvalerate(50),Fluazifop butyl ester(15, 50～110%), Folpet(15＋50, 50%), Fonofos(6), Heptachlor & Heptachlor epoxide(6), Hexachlorobenzene(6, 60%), Lactofen(50), Leptopphos(50), Linuron(50, 42～62%), Malathion(15＋50), Merphos(6＋15＋50), Methidathion(50, 50%), Methoxychlor(6), Mirex(6, 75), Nitalin(50, 70%), Nitrofen(15), Nitrofluorfen(15), Nonachlor(6), TCMTB(15, 61～62%), Tecnazene(6), Tetradifon(15), Tetraiodoethylene(6, 65%), Tetrasul(6), Thiobencarb(15, 50～86%), Toxaphene(6), Triallate(6), Trichloronat(6), Trifluralin(6), Vincozolin(15). Pyriproxyfen Quintozene Triadimenol Triazophos

주3) (생   략)

4.3.1.5 ～ 4.3.2.22 (생   략)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.1 (생 략)

5.3.2 나라신(Narasin), 린코마이신(Lincomycin)

1) 시험법 적용범위
축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 나라신 및 린코마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE (Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 나라신 및 린코마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) C18 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)
균질화한 검체 2 g에 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용약(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

② 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
7.0	10	90
13.0	10	90
14.0	100	0
22.0	100	0

(다) 유속 : 0.2 mL/분

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI (positive)

(나) Spray voltage : 5 kV

(다) Capillary temperature : 280℃

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 린코마이신 및 나라신의 함량을 구한다.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
린코마이신	407	124, 126, 359
나라신	787	413, 431, 531

나) 나라신 정량한계 : 0.005 mg/kg(알)

5.3.3 나이카바진(Nicarbazin)

1) 시험법 적용범위
축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체를 아세토니트릴로 추출하여 아세토니트릴․n-헥산 분배를 한 후 아세토니트릴을 감압증발건조시키고 알루미나 칼럼으로 정제한 후 메탄올․클로로포름(1：9)의 혼합액으로 용출하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 유기용매：잔류농약 시험용

나) 알루미나：알루미나 90, 활성형, 염기성 활성도 1, pH 10.0～10.5(pH의 측정：본품 10 g을 달아 물 100 mL를 넣어 2분간 격렬히 흔든 후 알루미나가 침전할 때까지 정치하고, 상층을 취해 pH를 측정한다)

다) 표준원액：나이카바진 표준품 10 mg을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mL로 한다.

라) 표준용액：나이카바진 표준원액을 메탄올․아세토니트릴(7：3)의 혼합액으로 희석하여 각각의 농도를 0.3, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 및 5.0 μg/mL의 용액을 만든다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출
검체 10 g을 달아 아세토니트릴 100 mL를 넣어 균질기로 균질하게 한 후 3,000～3,500 rpm에서 5분간 원심분리하여 상등액을 분액깔때기에 취한다. 잔류물은 아세토니트릴 50 mL로 앞의 조작을 되풀이한 후 상등액을 앞의 분액깔때기에 합한다.
이 액에 아세토니트릴포화헥산 75 mL를 넣어 10분간 진탕한 후 하층을 분액깔때기에 취한다. 이에 아세토니트릴포화헥산 10 mL를 넣고 위의 조작을 되풀이하여 하층을 감압증발건조한 후 잔류물을 클로로포름 5 mL로 녹인다.

나) 정제
안지름 10 mm, 길이 200 mm의 칼럼에 알루미나 5 g을 클로로포름 약 25 mL에 현탁시켜 2 mL/분 속도로 흘려버리고 클로로포름 30 mL로 충전물의 상단에 소량의 클로로포름이 남을 때까지 씻는다. 이 칼럼에 위의 추출액을 넣어 흘려버리고 다시 클로로포름 5 mL씩으로 플라스크를 2회 씻어 칼럼에 흘려버린 후 다시 클로로포름 150 mL를 넣어 씻는다. 계속해서 위의 칼럼에 메탄올․클로로포름(1：9)의 혼합액 25 mL를 용출시켜 이 액을 감압증발건조한 후 잔류물을 메탄올․아세토니트릴(7：3)의 혼합액 1 mL로 녹여 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼：길이 250 mm, 안지름 4.6 mm, Fine Gel 110

(2) 이동상：메탄올․아세토니트릴(7：3)의 혼합액

(3) 측정파장：340 nm

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액 30 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 나이카바진의 함량을 구한다.

5.3.8 (생 략)

5.3.9∼5.3.12 (생 략)

5.3.13 (생 략)

5.3.14 (생 략)

5.3.15 (생 략)

5.3.16 라살로시드(Lasalocid), 아빌라마이신(Avilamycin)

1) 시험법 적용범위
축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 라살로시드(lasalocid) 및 아빌라마이신(avilamycin)을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 라살로시드(lasalocid) A 및 아빌라마이신(avilamycin) 표준품을 각각 정밀히 달아 라살로시드(lasalocid) A는 아세토니트릴에 아빌라마이신(avilamycin)은 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) C18 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)
균질화한 검체 2 g에 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	60	40
5.0	10	90
20.0	10	90
21.0	60	40
30.0	60	40

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 측정파장 : 254 nm(라살로시드(lasalocid) A), 210 nm(아빌라마이신(avilamycin))

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아빌라마이신(avilamycin) 및 라살로시드(lasalocid) A의 함량을 각각 구한다. 이때 라살로시드(lasalocid) A의 함량을 라살로시드(lasalocid) 함량으로 한다.

5.3.17 (생 략)

5.3.18 (생 략)

5.3.19 (생 략)

5.3.20 (생 략)

5.3.21∼5.3.34 (생 략)

5.3.35 아프라마이신(Apramycin), 콜리스틴(Colistin)

1) 시험법 적용범위
아프라마이신(apramycin)은 유, 알 및 수산물 등에 적용하고 콜리스틴(colistin)은 축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 아프라마이신(apramycin) 및 콜리스틴(colistin)을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 콜리스틴(colistin) 및 아프라마이신(apramycin) 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취한 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 가하여 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 혼합한 후 아세토니트릴 6 mL를 가하고 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 4 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가하여 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 아세톤을 2% 포함한 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C8(2.0 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

② 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
19.0	100	0

(다) 유속 : 0.4 mL/분

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Spray voltage : 5 kV

(다) Capillary temperature : 280℃

(라) Sheath gas : 질소(N2)(50 psi)

(마) Auxiliary gas : 질소(N2)(10 psi)

(바) SIM ion : m/z 540(아프라마이신), m/z 585.5(콜리스틴)

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아프라마이신(apramycin) 및 콜리스틴(colistin)의 함량을 구한다.

5.3.36∼5.3.41 (생 략)

5.3.42 (생 략)

5.3.43∼5.3.52 (생 략)

5.3.53 (생 략)

5.3.54∼5.3.55 (생 략)

5.3.56 (생 략)

5.3.57∼5.3.66 (생 략)

5.3.67 (생 략)

5.3.68∼5.3.83 (생 략)

5.3.84 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin)

1) 시험법 적용범위
수산물에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 겐타마이신 및 네오마이신을 인산완충용액으로 추출하고 HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지 및 약양이온교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 겐타마이신 및 네오마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 표준품 희석용매에 녹여 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 표준품 희석용매로 희석하여 겐타마이신은 0.025, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 mg/L, 네오마이신은 0.125, 0.25, 0.5, 0.75 및 1.0 mg/L가 되게 한다.

마) 표준품 희석용매 : 100 mL 아세토니트릴과 10 ml 초산을 넣고 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

바) 5 mM 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 용액: 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 0.65 mL를 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

사) 10 mM 인산완충용액(0.4 mM EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid)와 2% 삼염화초산 함유) : 2 L 매스플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 2.72 g를 넣고 물 1.9 L로 녹인 후 1 N 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨 이수화물(Na2EDTA dihydrate) 0.3 g과 삼염화초산(trichloroacetic acid) 40 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

아) 용출용액: 삼염화초산 4.1 g을 넣고 물 100 mL로 녹인 후 아세토니트릴 50 mL를 첨가하고 물로 250 mL가 되게 한다.

자) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 : divinylbenzene-co-N-vinyl- pyrrolidone 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(200 mg, 6 mL)를 사용한다.

차) 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지 : 약양이온교환수지(weak cation exchange resin) 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(150 mg, 6 mL)를 사용한다.

카) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제
분쇄한 검체 2 g을 폴리프로필렌(Polypropylene)재질의 원심분리관에 취하고 10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 1분 동안 균질화한 다음 초음파로 10분간 추출한다. 진탕기를 이용하여 10분간 격렬하게 진탕한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 원심분리관에 옮긴 다음 남은 잔여물에 10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 교반기로 섞고, 진탕기를 이용하여 10분간 격렬하게 진탕한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한 후 상층액을 합한다. 30% 수산화나트륨을 약 0.2 mL를 가하여 pH 7.5～8.0으로 맞추어 추출액으로 한다.
메탄올 5 mL와 물 5 mL로 각각 HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 활성화한다. HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 연속으로 연결하여 추출액을 1～3 mL/min의 속도로 흡착시키고 물 5 mL를 넣어 같은 유속으로 세척한다. 수분을 제거하기 위해 5분 이상 공기를 통과시켜 건조한다. 용출용액 4 mL를 1～3 mL/min의 속도로 용출시켜 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험액을 폴리프로필렌(Polypropylene) 재질의 바이알(Vial)에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

․이동상 A : 5 mM 헵타플로오로뷰티릭산(HFBA) 용액

․이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
15.0	60	40
25.0	60	40
30.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Inoization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 200℃

(3) 특이이온(specific ion) 및 Spray voltage

물 질	SIM ion(m/z)	Spra(K V)
겐타마이신(C1a)	450	4.5
겐타마이신(C2, C2a)	464	4.5
겐타마이신(C1)	478	4.5
네오마이신	308	4.5

다) 표준품의 크로마토그램

겐타마이신(C1a) RT 12.9분

겐타마이신(C2, C2a) RT 13.0분

겐타마이신(C1) RT 13.1분

네오마이신 RT 13.5분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 특이이온(specific ion)을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간(retention time)을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액중 겐타마이신 및 네오마이신의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 겐타마이신 정량한계 : 0.04 mg/kg

(2) 네오마이신 정량한계 : 0.003 mg/kg

5.3.85∼5.3.88 (생 략)

5.3.89 프레드니솔론(Prednisolone), 메틸프레드니솔론(Methylprednisolone), 베타메타손(Betamethasone), 덱사메타손(Dexamethasone)

1) 시험법 적용범위
축산물과 수산물에 적용한다.

2) 분석원리
검체를 분해효소로 분해한 후 아세토니트릴 또는 아세테이트 완충용액으로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 덱사메타손 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 0.0075, 0.015, 0.02, 0.04, 0.08 및 0.12 mg/L가 되게 한다.

마) 내부표준원액 : 플루오로메톨론(Fluorometholone)을 정밀히 달아 메탄올에 용해시켜 100 mg/L로 한다.

바) 내부표준용액 : 내부표준원액을 메탄올로 희석하여 10 mg/L로 한다.

사) 3 M 아세테이트 완충용액(pH 4.6) : 1 L 용량플라스크에 아세트산나트륨(CH3COONa) 246.1 g을 달아넣고 증류수로 충분히 녹인다. 진한초산으로 pH 4.6으로 조절한 후 증류수로 눈금을 채운다.

아) 0.2 M 아세테이트 완충용액 : 3 M 아세테이트 완충용액을 증류수로 희석하여 사용한다.

자) 분해효소제 : β-글루쿠로니다제/아릴설파타제 (β-glucuronidase /arylsulfatase)

차) C18 카트리지 (500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

카) HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지 (60 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

타) Silica 카트리지 (500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

파) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품
균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 내부표준물질 10 mg/L를 50 μL와 3 M 아세테이트 완충용액(pH 4.6) 10 mL를 가한다. 균일하게 혼합하고 β-글루쿠로니다제/아릴설파타제 50 μL를 첨가한 후 1시간 동안 60℃ 오븐에서 방치한다. 시간경과 후 상온에서 냉각한 검체에 아세토니이트릴을 15 mL를 첨가하여 10분간 격렬하게 진탕하고, 0℃, 3,600 G에서 10분간 원심 분리한다. 상층액을 여분의 원심분리관에 취하고 위의 과정을 반복한다. 추출액에 8 mL 헥산과 2 mL 디클로로메탄으로 세척하여 비극성 불순물을 제거한다. 아세토니트릴층을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔사(residue)를 메탄올 1 mL와 증류수 10 mL로 녹인다. 미리 메탄올 5 mL와 증류수 5 mL로 활성화 시킨 C18 카트리지에 흡착시키고, 증류수 5 mL를 흘려보낸다. 아세톤/증류수 혼합액 (20/80, v/v) 5 mL와 헥산 5 mL로 세척한 후, 진공을 이용하여 10분간 카트리지를 건조한다. 에틸아세테이트 6 mL로 용출하여 40℃이하에서 질소가스로 용매를 날려 보낸다.  잔사(residue)를 메탄올 200 μL로 녹여 시험용액으로 한다.

나) 유(乳)
균질화한 검체 20 g을 원심분리관에 취하여 내부표준물질 10 mg/L를 50 μL를 가한다. 20 % 삼염화초산(trichoroacetic acid) 2 mL를 가하고 15분 동안 진탕한 후 4℃ 냉장고에서 30분간 방치한다. 검체를 0℃, 4,000 G에서 10분 동안 원심 분리하고 상층액을 여분의 원심분리관에 취한다. 원심분리관에 헥산 20 mL를 첨가하여 비극성 불순물을 제거하고 메탄올 3 mL와 증류수 3 mL로 활성화 시킨 HLP 카트리지에 흡착시킨다. 카트리지에 20 mM 수산화나트륨/메탄올 혼합액 (60/40 , v/v) 3 mL, 증류수 3 mL 및 헥산 3 mL를 차례로 흘려보낸 다음 진공을 이용하여 10분간 카트리지를 건조한다. 메탄올 6 mL로 대상성분을 용출한 후, 40℃ 이하에서 질소가스로 용매를 날려 보낸다. 잔사(residue)를 메탄올 500 μL로 녹여 시험용액으로 한다.

다) 알(卵)
균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하여 내부표준물질 10 mg/L를 50 μL 가하고, 0.2 M 아세테이트 완충용액 10 mL와 β-글루쿠로니다제/아릴설파다아제 100 μL를 첨가하여 1시간 동안 60℃의 오븐에 방치한다. 시간경과 후 상온에서 냉각한 검체에 메탄올 15 mL를 첨가하여 0℃, 2,000 G에서 10분간 원심 분리한다. 상층액을 여분의 원심분리과에 옮기고 헥산을 20 mL를 가하여 2분간 진탕한 후 0℃, 2,000 G에서 10분간 원심 분리한다. 헥산층을 제거한 후 위의 과정을 되풀이 한다. 수용액층에 1-프로판올 5 mL를 가한 후 40℃ 수욕상에서 감압 농축한다. 잔사(residue)를 증류수 8 mL 로 녹이고, 메탄올 2 mL를 첨가한다. 메탄올 6 mL와 증류수 6 mL로 활성화시킨 HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지에 추출액을 흡착시킨다. 증류수 6 mL로 세척하고 진공상태에서 10분 동안 건조한다. 메탄올 6 mL로 대상성분을 용출하여 40℃이하에서 용매를 날려 보낸다. 잔사(residue)를 클로로포름 2 mL로 녹인 후 헥산 5 mL를 첨가하여 혼합하고 미리 헥산 6 mL로 활성화 시킨 실리카 카트리지에 흡착시킨다. 헥산 5 mL로 세척한 후 메탄올/에틸아세테이트 혼합액 (40/60, v/v) 4 mL로 용출하여 40℃ 이하에서 질소가스로 용매를 날려보낸다. 잔사(residue)를 메탄올 200 μL로 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.0 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	75	25
10.0	70	30
20.0	40	60
21.0	75	25
25.0	75	25

(4) 유속 : 0.3 mL/분

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI (negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy :

프레드니솔론 30 V

메틸프레드니솔론 58 V

덱사메타손 48 V

베타메타손 48 V

플루오로메톨론 91 V

다) 검량선의 작성
표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 플루오로메톨론 m/z 355 이온에 대한 프레드니솔론 m/z 329, 메틸프레드니솔론 m/z 343, 덱사메타손 m/z 361, 베타메타손 m/z 361 이온의 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성한다.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
프레드니솔론	405	329
메틸프레드니솔론	419	343, 373
덱사메타손	437	361, 307
베타메타손	437	361
플루오로메톨론(IS)	421	355

라) 정량한계

(1) 프레드니솔론 정량한계

소 :  0.0003 mg/kg,

유 : 0.00015 mg/kg

(2) 메틸프레드니솔론 정량한계

소 : 0.0003 mg/kg,

유 : 0.00015 mg/kg

(3) 덱사메타손 정량한계

소 : 0.0003 mg/kg,

닭 : 0.0001 mg/kg,

유 : 0.00015 mg/kg,

알 : 0.0001 mg/kg

(4) 베타메타손

소 : 0.0003 mg/kg,

닭 : 0.0001 mg/kg,

유 : 0.00015 mg/kg,

알 : 0.00015 mg/kg

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램.   프레드니솔론 (8.7분), 메틸프레드니솔론 (12.8분), 베타메타손 (13.4분), 덱사메타손 (13.7분), 플루오로메톨론 (16.4분)

7) 정성시험
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.  또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 플루오로메톨론 m/z 355 이온에 대한  프레드니솔론 m/z 329, 메틸프레드니솔론 m/z 343, 덱사메타손 m/z 361, 베타메타손 m/z 361 이온의 면적비를 검량선식에 대입하여 정량한다.

5.3.90∼5.3.95 (생 략)

5.3.96 (생 략)

5.3.97 (생 략)

5.3.98 (생 략)

5.3.99 (생 략)

5.3.100∼5.3.122 (생 략)

<신 설>

<신 설>

<신 설>

<신 설>

제10. ∼ 제11. (생  략)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
1∼64	(생 략)
65	감로멜론	멜론, Honeydew melon	Cucumis melo var. inodorus H. Jacq. Cucurbitaceae	열매
66~67	(생 략)
<신 설>
68~105	(생 략)
<신 설>
106 ~ 172	(생 략)
173	곤달비	곰취, Narrow-head ragwort	Ligularia stenocephala (Maxim.) Matsum. & Koiz. / Ligularia stenocephala f. quinquebracteata Yamam.	잎
174 ~ 384	(생 략)
385	녹두	안두(安豆), 길두(吉豆), Green gram, Mung bean	Phaseolus radiatus L.	씨앗
386 ~ 598	(생 략)
<신 설>
599 ~ 676	(생 략)
<신 설>

677 ~ 773	(생 략)
<신 설>
774 ~ 967	(생 략)
968	산약	마, 참마, East Asian mountain yam	Dioscorea batatas Decaisne / Dioscorea japonica Thunberg		뿌리, 뿌리줄기※(산약)
969 ~ 1002	(생 략)
<신 설>
1003 ~ 1039	(생 략)
1040	셀러리	Celery, Smallage, Garden celery, Wild celery	Apium graveolens var. dulce Pers / Apium graveolens subsp. rapaceum (Mill.) P.D.Sell	뿌리, 잎, 씨앗
1041 ~ 1265	(생 략)
1266	오미자	Five-flavor magnolia vine	Schisandra chinensis Baillon	열매※(오미자)
1267 ~ 1368	(생 략)
<신 설>
1369 ~ 1434	(생 략)
<신 설>

1435 ~ 3680	(생 략)
상기의 ※ 표시된 품목(건조한 것에 한함)의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 ｢대한민국약전｣(식품의약품안전처 고시) 또는 ｢대한민국약전외한약(생약)규격집｣(식품의약품안전처 고시)에 따른다. <신 설>

2. 동물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위
1∼73	(생 략)
<신 설>
74~236	(생 략)
<신 설>
237 ~ 628	(생 략)
<신 설>
629 ~ 656	(생 략)
<신 설>
657 ~ 790	(생 략)
791	타조	-	Struthio camelus	고기
792 ~ 900	(생 략)
<신 설>
901 ~ 907	(생 략)
<신 설>
<신 설>
<신 설>

908 ~ 918	(생 략)
<신 설>
919 ~ 920	(생 략)
<신 설>
921 ~ 922	(생 략)
<신 설>
923 ~ 941	(생 략)
상기의 ※ 표시된 품목은 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 적합한 것이어야 한다. <신 설>

3. 미생물

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	비고
1~67	(생 략)
<신 설>
68~69	(생 략)
상기 미생물 원료 이외에 국제적으로 공인된 기관[국제낙농연맹(International Dairy Federation), 미국식품의약국(U.S. Food and Drug Administration), 유럽식품안전청(European Food Safety authority) 등]에서 제시하고 있는 미생물 원료는 동 기관에서 제시된 사용목적에 대해서만 식품원료로 사용 가능함.

4. (생 략)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
1~4	(생 략)
5	강황	심황, 우콘, Turmeric, Curcuma, haldi	Curcuma longa L. / Curcuma domestica Valeton	뿌리 줄기
6~88	(생 략)
89	울금		Curcuma aromatica	뿌리 줄기
90 ~ 146	(생 략)
상기의 ※ 표시된 품목(생지황을 제외한 품목의 경우 건조한 것에 한함)의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 「대한민국약전」(식품의약품안전처 고시) 또는 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 따른다.

2. 동물성

(생  략)

3. 미생물

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
1~7	(생 략)
<신 설>
8~12	(생 략)
<신 설>
13~20	(생 략)
<신 설>
21~24	(생 략)
25	(생 략)
26	(생 략)
27	(생 략)

4. 기타

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
1~6	(생 략)
7	패각, 난각, 나각, 산호	-	-	-	칼슘 보충용 원료에 한함

[별표 3] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이미녹타딘(Iminoctadine)

(생   략)

<신    설>

(2) 글루포시네이트

(Glufosinate(ammonium))

(생   략)

<신    설>

(3) 글리포세이트(Glyphosate)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(4) ∼ (8) (생   략)

(9) 델타메트린(Deltamethrin)

(생   략)

<신    설>

(10) ∼ (20) (생   략)

(21) 디클로르보스(Dichlorvos)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(22) ∼ (25) (생   략)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(생   략)

복숭아	0.5

<신    설>

<신    설>

(27) ∼ (28) (생   략)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(생   략)

<신    설>

(30) (생   략)

(31) 마이클로뷰타닐(Myclobutanil)

(생   략)

<신    설>

(32) ∼ (37) (생   략)

(38) 메탈락실(Metalaxyl)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(39) ∼ (53) (생   략)

(54) 벤타존(Bentazone)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(55) 뷰프로페진(Buprofezin)

(생   략)

토마토	1.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(56) ∼ (58) (생   략)

(59) 비터타놀(Bitertanol)

(생   략)

<신    설>

(60) (생   략)

(61) 비펜트린(Bifenthrin)

(생   략)

시금치	2.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(62) (생   략)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(생   략)

<신    설>

(64) ∼ (67) (생   략)

(68) 사이할로트린(Cyhalothrin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(69) ∼ (70) (생   략)

(71) 아미트라즈(Amitraz)

(생   략)

<신    설>

(72) ∼ (78) (생   략)

(79) 알루미늄포스파이드[Aluminium Phosphide(Hydrogen phosphide)]

(생   략)

<신    설>

(80) ∼ (84) (생   략)

(85) 에토펜프록스(Etofenprox)

(생   략)

<신    설>

(86) ∼ (100) (생   략)

(101) 이미다클로프리드(Imidacloprid)

(생   략)

토마토	0.5

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(102) ∼ (104) (생   략)

(105) 이프로디온(Iprodione)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(106) ∼ (109) (생   략)

(110) 카두사포스(Cadusafos)

(생   략)

<신    설>

(111) 카바릴(Carbaryl: NAC)

(생   략)

<신    설>

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(113) (생   략)

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

(생   략)

<신    설>

(115) ∼ (117) (생   략)

(118) 캡탄(Captan)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(119) ∼ (132) (생   략)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(생   략)

산마늘	0.1

(134) (생   략)

(135) 터부포스(Terbufos)

(생   략)

<신    설>

(136) ∼ (140) (생   략)

(141) 트리아디메놀(Triadimenol)

(생   략)

<신    설>

(142) ∼ (157) (생   략)

(158) 페나리몰(Fenarimol)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(159) ∼ (185) (생   략)

(186) 프로클로라즈(Prochloraz)

(생   략)

바나나	0.05

(187) ∼ (191) (생   략)

(192) 프로피코나졸(Propiconazole)

(생   략)

파	0.05

<신    설>

<신    설>

(193) ∼ (205) (생   략)

(206) 클로르페나피르(Chlorfenapyr)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(207) (생   략)

(208) 테부펜피라드(Tebufenpyrad)

(생   략)

<신    설>

(209) 테플루벤주론(Teflubenzuron)

(생   략)

배추	0.1

(210) 페나자퀸(Fenazaquin)

(생   략)

<신    설>

(211) (생   략)

(212) 플루페녹수론(Flufenoxuron)

(생   략)

대추	0.5

대추(건조)	1.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(213) ∼ (217) (생   략)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(219) (생   략)

(220) 디에토펜카브(Diethofencarb)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(221) ∼ (224) (생   략)

(225) 사이프로디닐(Cyprodinil)

(생   략)

복숭아	1.0

(226) (생   략)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(229) (생   략)

(230) 크레속심메틸(Kresoxim-methyl)

(생   략)

풋마늘	1.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(231) 클로르플루아주론(Chlorfluazuron)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(232) ∼ (234) (생   략)

(235) 포스티아제이트(Fosthiazate)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(236) (생   략)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(238) 플루디옥소닐(Fludioxonil)

(생   략)

부추	0.5

산마늘	0.2

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(239) 플루아지남(Fluazinam)

(생   략)

<신    설>

(240) ∼ (241) (생   략)

(242) 루페뉴론(Lufenuron)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(243) ∼ (247) (생   략)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(생   략)

파	0.1

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(249) 에마멕틴벤조에이트

(Emamectin benzoate)

(생   략)

고추	0.05

피망	0.05

파	0.05

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(250) ∼ (272) (생   략)

(273) 밀베멕틴(Milbemectin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(274) ∼ (284) (생   략)

(285) 아크리나트린(Acrinathrin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(286) 에트리디아졸(Etridiazole)

(생   략)

<신    설>

(287) ∼ (289) (생   략)

(290) 인독사카브(Indoxacarb)

(생   략)

파	0.5

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(291) ∼ (308) (생   략)

(309) 플루톨라닐(Flutolanil)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(310) ∼ (320) (생   략)

(321) 디노테퓨란(Dinotefuran)

(생   략)

<신    설>

(322) (생   략)

(323) 보스칼리드(Boscalid)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(325) 사이아조파미드(Cyazofamid)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(326) ∼ (331) (생   략)

(332) 클로티아니딘(Clothianidin)

(생   략)

<신    설>

(333) ∼ (344) (생   략)

(345) 피라클로스트로빈(Pyraclostrobin)

(생   략)

파	1.0

감	0.1

들깻잎	10

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(346) ∼ (348) (생   략)

(349) 노발루론(Novaluron)

(생   략)

파	0.3

<신    설>

<신    설>

(350) ∼ (351) (생   략)

(352) 메톡시페노자이드

(Methoxyfenozide)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(353) ∼ (354) (생   략)

(355) 스피로디클로펜(Spirodiclofen)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(356) 에타복삼(Ethaboxam)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(357) 디티오카바메이트

(Dithiocarbamates)

◎ 잔류물의 정의 : Dithiocarbamate계 농약들의 합

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(358) ∼ (369) (생   략)

(370) 벤티아발리카브아이소프로필

(Benthiavalicarb-isopropyl)

(생   략)

<신    설>

(371) 디니코나졸(Diniconazole)

(생   략)

<신    설>

(372) ∼ (379) (생   략)

(380) 피리달릴(Pyridalyl)

(생   략)

파	2.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(381) ∼ (385) (생   략)

(386) 플로니카미드(Flonicamid)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(387) ∼ (393) (생   략)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(395) ∼ (398) (생   략)

(399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(400) ∼ (402) (생   략)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(생   략)

파	3.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(404) 메트라페논(Metrafenone)

(생   략)

<신    설>

(405) 사이에노피라펜(Cyenopyrafen)

(생   략)

<신    설>

(406) ∼ (407) (생   략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생   략)

파	0.5

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(409) (생   략)

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(생   략)

복숭아	2.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(411) ∼ (415) (생   략)

(416) 클로란트라닐리프롤

(Chlorantraniliprole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(417) 플루벤디아마이드

(Flubendiamide)

(생   략)

대추	1.0

대추(건조)	1.0

무(잎)	3.0

<신    설>

<신    설>

(418) ∼ (421) (생   략)

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(생   략)

<신    설>

(423) (생   략)

(424) 피리플루퀴나존

(Pyrifluquinazon)

(생   략)

<신    설>

(425) ∼ (426) (생   략)

(427) 이미시아포스(Imicyafos)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(428) 플루오피람(Fluopyram)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(429) (생   략)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(431) ∼ (432) (생   략)

(433) 사이안트라닐리프롤

(Cyantraniliprole)

(생   략)

<신    설>

(434) (생   략)

(435) 펜피라자민(Fenpyrazamine)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(436) (생   략)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(438) 피리오페논(Pyriofenone)

(생   략)

<신    설>

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(440) ∼ (451) (생   략)

(452) 아이소페타미드(Isofetamid)

◎ 잔류물의 정의 : Isofetamid

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(453) ∼ (457) (생   략)

<신    설>

<신    설>

[별표 4] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (25) (생   략)

(26) 플루톨라닐(Flutolanil)

(생   략)

<신    설>

(27) ∼ (83) (생   략)

<신    설>

[별표 5] (생   략)

[별표 6] 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준

(1) (생 략)

(2) 나이카바진(Nicarbazin) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의: Nicarbazin

(생 략)

(3)∼(26) (생 략)

(27) 에토파베이트(Ethopabate) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의: Ethopabate

(생 략)

(28)∼(35) (생 략)

(36) 죠렌(Zoalene) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의: Zoalene

(생 략)

(37)∼(65) (생 략)

(66) 콜리스틴(Colistin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의: Colistin

(생 략)

(67)∼(172) (생 략)

<신 설>

<신 설>

<신 설>

[별표 7] (생 략)

제1. (현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. (현행과 같음)

2. 용어의 풀이

1) ∼ 40) (현행과 같음)

41) ‘영아’라 함은 생후 12개월 미만인 사람을 말한다.

42) ‘유아’라 함은 생후 12개월부터 36개월까지인 사람을 말한다.

3 ～ 4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 중금속 기준

(1) ∼ (4) (현행과 같음)

(5) 식용곤충의 중금속 기준(건조물로서)

① ∼ ② (현행과 같음)

③ 장수풍뎅이유충 : 납 0.3 mg/kg 이하, 카드뮴 0.3 mg/kg 이하

④ 흰점박이꽃무지유충 : 납 0.3 mg/kg 이하, 카드뮴 0.05 mg/kg 이하, 비소 0.1 mg/kg 이하

6) ∼ 9) (현행과 같음)

10) 농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 잔류허용 기준 적용

① (현행과 같음)

㉮ 당해 농산물(개별 농산물 그 자체를 의미하며 그룹으로 설정된 농산물은 제외)에 대한 CODEX 기준

㉯ (현행과 같음)

② ～ ③ (현행과 같음)

(2) ～ (7) (현행과 같음)

11)동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 식품 중 잔류 동물용의약품 기준 적용

(현행과 같음)

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
1	니트로푸란{푸라졸리돈(Furazolidone), 푸랄타돈(Furaltadone), 니트로푸라존(Nitrofurazone), 니트로푸란토인(Nitrofurantoine), 니트로빈(Nitrovin) 등} 제제 및 대사물질 ◎ 잔류물의 정의 : 3-amino-2-oxazolidinone(AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl- 2-oxazolidinone(AMOZ), semicarbazide(SEM)*2, nitrofurazone*3, 1-aminohydantoin(AHD), nitrovin
2～17	(현행과 같음)

(현행과 같음)

*주2. 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(semicarbazide, SEM)는 비가열 축산물 및 동물성 수산물(단순절단 포함, 갑각류 제외)의 가식부위에 한하여 적용한다.

*주3. 갑각류에 한해 적용한다.

②～⑤ (현행과 같음)

(2)～(3) (현행과 같음)

12) ∼ 23) (현행과 같음)

6. (현행과 같음)

제3. ～ 제4. (현행과 같음)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 12. (현행과 같음)

13. 두부류 또는 묵류

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) (현행과 같음)

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 두부류 제조시에는 ｢환경정책기본법｣ 시행령 [별표] 환경기준 중 3. 라. 1)과 4)의 수질기준에 적합한 해수(염지하수 포함)에 한하여 사용할 수 있다.

4) ～ 6) (현행과 같음)

14. ～29. (현행과 같음)

제6. ∼ 제8. (현행과 같음)

제9. 일반시험법

1. ～ 3. (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.14 (현행과 같음)

4.1.3.15  옥사밀(Oxamyl)

가. ∼ 다. (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 표준원액：옥사밀 옥심을 아세톤에 녹여 100 mg/L으로 한다.

4) 표준용액：표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) (현행과 같음)

마. 시험용액의 조제

-----------------------  ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------. 잔류물에 30 mL의 0.1N 수산화나트륨용액을 가하고 80℃ 항온수조에서 30분간 가수분해시켜, 옥사밀을 옥심체로 변환시킨다.-------------------- ---------------------------------------------- --------------------------------------------------------------------- -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) ∼ 나) (현행과 같음)

다) 칼럼온도：50℃에서 검체를 주입하고 10분간 유지(DB-608, 옥사밀 옥심)

45℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지 후 220℃까지 10℃/분으로 상승시켜서 5분간 유지시킨다(DB-17, 옥사밀 옥심).

라) ∼ 바) (현행과 같음)

2) (현행과 같음)

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-608)

옥사밀 옥심(6.4분) 2 ng

그림 2. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-17)

옥사밀 옥심(13.3분) 2 ng

4) ∼ 5) (현행과 같음)

표 1. 기체크로마토그래프 질량분석기 분석을 위한 fragment ions

분석성분	머무름 시간(분)	분자량	Fragment monitored(m/z)
옥사밀 옥심	13.2	170.04	162, 145, 115 98, 72

사. (현행과 같음)

아. 정량시험

------------------------------------------------------------------------------(정량한 잔류량에 옥사밀의 경우 1.35를 곱하여 최종 잔류량으로 한다)

4.1.3.16 ∼ 4.1.3.42 (현행과 같음)

4.1.3.43 메토밀(Methomyl), 티오디카브(Thiodicarb)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 메토밀 및 티오디카브를 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 메토밀 및 티오디카브 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 20 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 20 g)을 정밀히 달아 250 mL 원심분리용 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 20 mL를  가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 균질기에서 10분간 균질화 시킨다. 이에 염화나트륨 10 g을 첨가하여 2분간 심하게 흔들어주고, 3,500 rpm에서 5분간 원심분리한다.

2) 정제

아세토니트릴층 6 mL를 취하여 황산마그네슘 900 mg 및 PSA(primary secondary amine) 150 mg이 담겨진 15 mL 용량의 용기에 넣고 1분간 강하게 흔든다. 이를 3,500 rpm에서 10분간 원심분리 하고, 상층액을 취하여 시험용액으로 한다.

주1) 티오디카브는 곡류 및 콩류에서 습윤화 과정 중에 가수분해되어 2분자의 대사산물인 메토밀로 대사되므로 분자량 차이에 따른 보정계수 thiodicarb 분자량(354.5)/methomyl 분자량(162.2) × 2 = 1.09를 곱하여 티오디카브의 잔류량을 표시한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
0.5	10	90
3.0	95	5
4.0	95	5
4.5	10	90
6.0	10	90

라) 이동상 유량 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 방법 : ESI positive- ion mode

나) Capillary voltage : 4.5 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측 질량 (Exact mass)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
메토밀 (Methomyl)	162.2	162.04	163	88	-9
				106	-10
티오디카브 (Thiodicarb)	354.5	354.04	355	88	-16
				108	-16

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

농도별 표준용액을 일정량 취하여 무처리 시료추출 용액과 각각 혼합한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

메토밀(A: 3.3분), 티오디카브(B: 3.9분)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 메토밀 및 티오디카브를 확인한다.

4.1.3.44 브로모프로필레이트(Bromopropylate), 클로르페나피르 (Chlorfenapyr), 에톡사졸 (Etoxazole), 스피로디클로펜 (Spirodiclofen)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출한 후 액-액분배하여 액체크로마토그래프 질량분석기로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)

3) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 각 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합,희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화시킨다.(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산층을 취하였다. 헥산액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고  헥산 10 mL로 녹인다.[지방성 검체의 경우 추가로 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 125 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄/헥산 혼합액 (50/50, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/1.5/48.5, v/v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)의 측정조건

(브로모프로필레이트, 클로르페나피르, 스피로디클로펜)

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. × 30 m, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 50 mL/분

다) 주입부 온도 : 260℃

라) 오븐 온도 : 210℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)의 측정 조건

(에톡사졸)

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. x 30 m, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 10 mL/min

다) 주입부 온도 : 260℃

라) 오븐 온도 : 220℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 2 μL, splitless

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프-전자포획검출기에서 표준품의 크로마토그램

클로르페나피르(A: 4.1분), 브로모프로필레이트(B: 7.7분), 스피로디펜 (C: 14.7분)

그림 2. 기체크로마토그래프-질소·인 검출기에서 표준품의 크로마토그램

에톡사졸(5.7분)

5) 정량한계

브로모프로필레이트 0.005 mg/kg , 클로르페나피르 0.002 mg/kg, 에톡사졸 0.02 mg/kg, 스피로디클로펜 0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등   한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 50℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한 뒤 20℃/분의 비율로 온도를 220℃로 상승시켜 2분간 유지한다. 그 뒤 5℃/분의 비율로 온도를 280℃까지 올린 후 5분간 유지하여 분석하였다.

라) 주입부 온도 : 260℃

마) 인터페이스온도 : 300℃

바) 이온원 온도 : 250℃

사) 주입량 : 1 μL, splitless

아) 분자량 범위 : 50～450 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

물질명	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측 질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
브로모프로필레이트 (Bromopropylate)	18.9	428.1	426	183, 339, 341
클로르페나피르 (Chlorfenapyr)	15.5	407.6	406	247, 249
스피로디클로펜 (Spirodiclofen)	21.9	411.3	410	312, 314
에톡사졸 (Etoxazole)	19.2	359.4	359	141, 204, 359

4.1.3.45. 디에토펜카브(Diethofencarb), 디메피퍼레이트(Dimepiperate), 에스프로카브(Esprocarb), 몰리네이트(Molinate), 피리부티카브(Pyributicarb)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 각 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 내부표준원액 : 디메틸엘로우1)(Dimethyl yellow[4-(dimethoxy amino)azobenzene)])및 4-메톡시아조벤젠

2)(4-methoxyazobenzene) 분석용 표준품을 각각 에틸아세테이트에   녹여 500 mg/L이 되게 한다.

1)디메틸엘로우 : 디에토펜카브, 에스프로카브, 몰리네이트용 내부표준물질

2)4-메톡시아조벤젠 : 디메피퍼레이트, 피리부티카브용 내부표준물질

5) 표준용액 : 표준원액을 각각 에틸아세테이트에 녹여 적당한 농도로 희석하고 내부표준물질 디메틸엘로우(dimethyl yellow)와 4-메톡시아조벤젠(4-methoxyazobenzene)의 농도는 항상 각각 0.4 및 0.8 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

6) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤  아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 하부 수용액층을 버리고 유기용매층을 취한다. 유기용매층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌 글리콜 0.5 mL을 가하고 30℃이하의 수욕상에서 약 3 mL가 남을 때 까지 감압 농축하고 질소기류하에서 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸 후 여분의 헥산 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 아세톤/헥산 혼합액(2/98, v/v) 50 mL를 용출(디메피퍼레이트, 에스프로카브, 몰리네이트 및 피리부티카브용 분획)시켜 받고, 다시 아세톤/헥산(6/94, v/v) 혼합액으로 용출(디에토펜카브용 분획)시켜 받고, 위의 용출액(디메피퍼레이트, 에스프로카브, 몰리네이트 및 피리부티카브용 분획)은 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌글리콜 0.5 mL을 가한후30℃ 이하의 수욕상에서 질소농축한 후 약 3 mL가 남을 때가지 농축하고 질소 기류하에 건고한다. 위의 용출액(디에토펜카브용 분획)을 40℃ 이하의 수욕상에서 질소농축한다. 각 분획의 잔류물(디메피퍼레이트, 에스프로카브, 몰리네이트 및 피리부티카브용)과 잔류물(디에토펜카브)을 내부표준물질인 0.4 μg/mL의 디메틸엘로우(dimethyl yellow)와 0.8 μg/mL의 4-메톡시아조벤젠( 4-methoxy azobenzene)가 함유된 에틸 아세테이트를 가하여 각각 최종 부피가 5 mL이 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고  10℃/min.의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 250℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, Splitless

2) 검량선 작성

농도별로 조제한 검량용 표준용액(내부표준물질 포함)을 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상에서 각 대상성분 피크의 면적 또는 높이의 내부표준물질에 대한 비율을 계산하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

몰리네이트(A: 13.8분), 4-methoxyazobenzene (내부표준물질 B: 18.0분), 에스프로카브(C: 18.3분), 디에토펜카브(D: 18.4분), 디메피퍼레이트(E: 19.5분), dimethyl yellow(내부표준물질 F: 20.8분), 피리부티카브(G: 22.7분)

4) 정량한계

디에토펜카브 0.05 mg/kg, 디메피퍼레이트 0.02 mg/kg, 에스프로카브      0.02 mg/kg, 몰리네이트 0.01 mg/kg, 피리부티카브 0.03 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고  10℃/min.의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지

라) 주입부 : 250℃

마) 인터페이스 온도 : 290℃

바) 분자량 범위 : 100～350 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
디에토펜카브 (Diethofencarb)	18.6	267.3	267.15	267, 225, 207
디메피퍼레이트 (Dimepiperate)	19.7	263.4	263.13	119, 118, 145
에스프로카브 (Esprocarb)	18.4	265.4	265.15	222, 162, 151
몰리네이트 (Molinate)	13.6	187.3	187.10	126, 187
피리부티카브 (Pyributicarb)	23.3	330.4	330.14	165, 108, 181

4.1.3.46. 카두사포스(Cadusafos), 디메틸빈포스(Dimethylvinphos), 프로페노포스(Profenofos), 피라조포스(Pyrazophos), 트리아조포스(Triazofos)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소·인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 :  3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil) ：칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

4) 표준원액 : 각 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

5) 내부표준원액 : TPP를 각각 아세톤에 녹여 1,000 mg/L 이 되게 한다.

6) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석하고 내부표준물질 TPP의 농도는 각각 0.08 mg/L가 되도록 혼합하여 아세톤에 조제한다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과한 뒤 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로르메탄(80:20, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 위의 헥산/디클로르메탄(80:20, v/v)층을 취한다. 헥산/디클로르메탄(80:20, v/v)액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산/디클로르메탄(65:35, v/v) 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 헥산/디클로르메탄(65:35, v/v)에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 헥산/디클로르메탄 혼합액(65:35, v/v) 100 mL를 용출시켜 버리고, 헥산/디클로르메탄/아세토니트릴 혼합액(50/48/2, v/v/v) 150 mL로 용출시켜 받은 후 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 검체를 주입하고 120℃에서 10℃/분의 비율로 온도를 260℃로 상승시켜 11분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 280℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액과 내부표준물질을 농도별로 일정량 취하여 함께 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 표준물질의 각 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 내부표준물질과의 농도비를 계산하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

카두사포스(A: 6.6분),

디메틸빈포스(B: 9.5분),

프로페노포스(C: 11.2분),

트리아조포스(D: 12.4분),

TPP(내부표준물질 E: 13.2분),  피라조포스(F: 15분)

4) 정량한계

카두사포스 0.002 mg/kg, 디메틸빈포스 0.004 mg/kg, 프로페노포스0.004 mg/kg, 트리아조포스 0.004 mg/kg, 피라조포스 0.004 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐온도 : 검체를 주입한 후 120℃에서 10℃/분의 비율로 온도를 260℃로 상승시켜 11분간 유지한다. 그 뒤 5℃/분의 비율로 온도를 280℃까지 올린 후 5분간 유지

라) 주입부 : 250℃

마) 인터페이스 온도 : 280℃

바) 이온원 온도 : 250℃

사) 주입량 : 2 μL, splitless

아) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측 질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
카두사포스 (Cadusafos)	6.6	270.1	270.08	159
디메틸빈포스 (Dimethylvinphos)	9.5	329.9	329.93	295
프로페노포스 (Profenofos)	11.2	371.9	371.93	208
트리아조포스 (Triazophos)	12.4	313.1	313.06	161
피라조포스 (Pyrazophos)	15	373.1	373.08	221

4.1.3.47. 디클로란(Dicloran), 이프로디온(Iprodione), 프탈리드(Phthalide, Fthalide), 빈클로졸린(Vincozolin)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄으로 액-액분배하고 실리카 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카 : 칼럼크로마토그래프용 실리카(70∼230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

4) 표준원액 : 각 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화시킨다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 여기에 아세토니트릴 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로르메탄(20/80, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 아래의 유기용매층을 취한다. 헥산/디클로르메탄(20/80, v/v)액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 실리카겔 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 헥산/디클로로메탄 혼합액(70/30, v/v) 100 mL를 용출시켜 버리고, 디클로란, 빈클로졸린 및 프달리드용으로 150 mL의 헥산/디클로로메탄/아세토니트릴 혼합액(50/49/1, v/v/v)을 칼럼에 용출시켜 를 받아내고, 계속하여 이프로디온용으로 150 mL 헥산/디클로로메탄/아세토니트릴 혼합액(50/43/7, v/v/v)을 칼럼에 용출시켜 받은 후 각각의 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-17(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 검체를 주입하고 170℃에서 5℃/분의 비율로 온도를 220℃로 상승시켜 2분간 유지한다. 220℃에서 260℃까지  10℃/분로 승온시키고 260℃에서 280℃까지 20℃/분의 속도로 승온한뒤 13분간 유지

라) 주입부 온도 : 280℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

디클로란(A: 6.8분),

빈클로졸린(B: 8.8분),

프탈리드(C: 11.0분),

이프로디온(D:15.9분)

4) 정량한계

디클로란 0.01 mg/kg, 이프로디온 0.04 mg/kg, 프탈리드 0.006 mg/kg, 빈클로졸린 0.008 mg/kg

바. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

사. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 3 mL/분

다) 오븐온도 : 검체를 주입하고 120℃에서 2분간 유지한 뒤 20℃/분의 비율로 온도를 160℃로 상승시킨 뒤 5℃/분 의 비율로 온도를 180℃까지 올린 후 4분간 유지한다. 20℃/분의 속도로 300℃까지 승온시킨 뒤 12분간 유지

라) 주입부 : 200℃

마) 인터페이스 온도 : 230℃

바) 이온원 온도 : 250℃

사) 주입량 : 2 μL, splitless

아) 분자량 범위 : 50～400 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

성분	머무름 시간 (분)	분자량 (M.W.)	관측 질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
디클로란 (Dicloran)	6.9	207.0	205.96	124, 176
빈클로졸린 (Vinclozolin)	8.8	286.1	284.99	198, 212
프탈리드 (Phthalide(Fthalide))	11.0	269.9	269.88	243, 272
이프로디온 (Iprodione)	15.9	330.2	329.03	314

4.1.4 단성분시험법(individual residue methods)

4.1.4.1 ∼ 4.1.4.33 (현행과 같음)

4.1.4.34 피리미디펜(Pyrimidifen)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체에 아세토니트릴로 추출한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액으로 액-액분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래피로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소․인검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 유기용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

3) 표준원액 : 피리미디펜 분석용 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L 원액을 조제한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적절한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 검체 25 g(채소류 및 과실류 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5∼1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)을 정밀히 달고, 아세토니트릴 100 mL을 가한 후 2분간 고속 마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 잔류물에 여분의 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 100 mL를 가하여 1분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 수용액 층을 버리고 유기용매 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 증류플라스크에 받는다. 분배 추출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버리고 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g과 그 위에 2 cm 높이로 무수황산나트륨을 차례로 건식 충전하고 헥산 25 mL를 흘려버린다. 무수황산나트륨 층 표면이 노출되기 직전, 추출과정의 추출액 10 mL를 칼럼에 가하고 여분의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 50 mL의 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산(50/4/46, v/v) 혼합액을 유출시켜  버리고, 50 mL의 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산(50/10/40, v/v/v) 혼합액으로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피 10 mL이 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래피 측정 조건

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. × 30 m, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량 : 헬륨, 10 mL/분

다) 오븐온도 : 240℃

라) 검출기온도 : 300℃

마) 주입구온도 : 260℃

바) 검체 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선의 작성

농도별로 조제한 GC 검량용 표준용액 1 μL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상에서 대상성분 피크의 면적 또는 높이를 기준으로 직선적 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프-질소인검출기에서 표준품의 크로마토그램

피리미디펜 8.3분

4) 정량한계

0.02 mg/kg

사. 정성시험

위 분석 조건에서 얻어진 검체 크로마토그램 상 대상 성분의 피크는 어느 측정 조건에서도 표준 화합물 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험

정성시험과 동일한 분석 조건에서 얻어진 크로마토그램 상 대상 성분의 표준물질에 대한 피크 면적비 또는 피크 높이비를 표준검량선과 비교, 시험용액 주입량 중 성분량을 외부표준법에 따라 정량한다.

1) 기체크로마토그래프․질량분석기 측정 조건

가) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm)또는 동등한것

나) 이동상 가스 및 유량 : 헬륨, 2 mL/분

다) 오븐온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 20℃/min 비율로 250℃까지 직선적으로 승온하고 2분간 유지한 후 3℃/분 비율로 280℃까지 직선적으로 승온한 후 5분간 유지

라) 인터페이스 온도 : 300℃

마) 주입부 : 260℃

바) 검체 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
22.5	377.9	377.19	183, 186

4.1.4.35 ∼ 4.1.4.110 (현행과 같음)

4.1.4.111 플로니카미드(Flonicamid)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 플로니카미드를 산성 아세토니트릴로 추출하여 황산마그네슘 및 염화나트륨을 이용하여 분배하고 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 플로니카미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 5% 초산 함유 아세토니트릴 용액 : 100 mL 메스플라스크에 초산 용액(≥99%) 5 mL를 취한 후 아세토니트릴에 녹여 표시선까지 채운다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 5 g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리용 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 증류수 5 mL를 가한 후 30분간 방치) 5% 초산 함유 아세토니트릴 10 mL를 가하여 균질기에서 10분간 균질화 시킨다. 이에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g을 첨가하여 1분간 격렬히 흔들어주고, 3,000 rpm에서 5분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 13,000 rpm에서 5분간 고속으로 원심분리 후 상층액 500 μL을 아세토니트릴 500 μL와 혼합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.0 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	5	95
1.0	5	95
3.0	70	30
5.0	90	10
6.0	90	10
7.0	5	95
10.0	5	95

라) 이동상 유량 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 방법 : ESI negative-ion mode

나) Capillary voltage : 4.5 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion , m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
플로니카미드 (Flonicamid)	229.2	229.04	228	81	24
				146	22

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

농도별 표준용액을 일정량 취하여 무처리 시료추출 용액과 각각 혼합한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

플로니카미드(4.9분)

5) 정량한계

0.02 mg/kg

<삭    제>

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 플로니카미드를 확인한다.

4.1.4.112 ∼ 4.1.4.190 (현행과 같음)

4.1.4.191 사이클라닐리프롤(Cyclaniliprole)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 사이클라닐리프롤 및 NK-1375[3-bromo-2-((2- bromo-4H–pyrazolo[1,5-d] pyrido[3,2-b][1,4]oxazin-4-ylidene)amino)-5-chloro- N-(1-cyclopropylethyl) benzamide]을 아세토니트릴로 추출하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 사이클라닐리프롤 및 NK-1375 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 50 mL를 가하여 균질기에서 10분간 균질화 시킨다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(celite 545) 10 g을 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 증류수 100 mL를 가하여 녹인 후 pH 미터기를 이용해 1 N 염산용액을 천천히 가해 pH 3이 되도록 한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 염화나트륨 10 g을 더한 뒤 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축 하여 용매를 모두 날려버린 후, 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다. [지방성 검체의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압농축한 후 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.]

2) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/95, v/v) 5 mL를 가하여 씻어버린다. 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 15 mL를 용출시켜 받은 시험액을 감압농축 플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
4.0	80	20
6.0	80	20
8.0	20	80
10.0	20	80

라) 이동상 유량 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 2.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) Cone voltage

(1) 사이클라닐리프롤 : 30 V

(2) NK-1375 : 20 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측 질량 (Exact mass)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
사이클라닐리프롤 (Cyclaniliprole)	602.1	598.91	604	177	50
				286	20
NK-1375	565.6	562.93	566	159	50
				268	25

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

사이클라닐리프롤(A: 5.4분), NK-1375(B: 5.9분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 사이클라닐리프롤 및 NK-1375를 확인한다.

4.1.3.192 피플루뷰마이드(Pyflubumide)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 피플루뷰마이드 및 피플루뷰마이드-NH [N-[3-isobutyl-4-[2,2,2-trifluoro-1-methoxy-1-(trifluoromethyl)ethyl]phenyl]-1,3,5-trimethylpyrazole-4-carboxamide]를 아세토니트릴로 추출하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 피플루뷰마이드 및 NNI-0711-NH 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(과일류, 채소류, 서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g, 곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(celite 545) 10 g을 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 증류수 100 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮기고 포화식염수 10 mL를 더한 뒤 디클로로메탄 30 mL를 차례로 가하고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축 플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압농축 하여 용매를 모두 날려버린 후, 디클로로메탄 10 mL을 가하여 녹인다. [지방성 검체의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압농축한 후 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.]

2) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 2 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 5 mL를 가하여 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(30/70, v/v) 10 mL를 가해 용출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
1.0	50	50
3.0	90	10
8.0	90	10
8.1	50	50
10.0	50	50

라) 이동상 유량 : 0.25 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) Cone voltage : 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측 질량 (Exact mass)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
피플루뷰마이드 (Pyflubumide)	535.5	535.22	536	111	55
				155	25
피플루뷰마이드-NH	465.4	465.18	466	111	35
				137	35

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

피플루뷰마이드(A: 4.1분), 피플루뷰마이드-NH(B: 3.9분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피플루뷰마이드 및 피플루뷰마이드-NH를 확인한다.

4.1.3.193 에타복삼(Ethaboxam)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 에타복삼을 아세톤으로 추출하여 헥산과 증류수를 이용해 유지 제거하여 pH 6으로 조절하고 디클로르메탄으로 액-액 분배한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실 : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

4) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다. 검량용 표준용액은 아세토니트릴/물(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(celite 545) 10 g을 이용해 흡인여과한 뒤 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL, 포화식염수 50 mL, 1 M 인산 수용액 5 mL 및 100 mL의 헥산을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산 층을 제거한다. 헥산이 제거된 잔류액에 다시 6.7 mL의 1 M 수산화나트륨 수용액을 가하고 pH 6.0±0.2가 되도록 조절한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을 취하여 위의 디클로로메탄액과 합한다. 디클로로메탄액을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버리고 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 건식 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 디클로로메탄에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보내고 여분의 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄액(5/95, v/v) 50 mL를 용출시켜 버리고, 50 mL의 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/95, v/v)을 칼럼에 용출시켜받고 다시 50 mL의 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(15/85, v/v)을 칼럼에 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물에 아세토니트릴/물 혼합액(40/60, v/v)을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d. × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(310 nm)

라) 이동상: 아세토니트릴/물(35/65, v/v)

마) 이동상 유량 : 1 mL/분

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에타복삼(11.3 분)

4) 정량한계

0.02 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름시간과 특성이온으로 에타복삼을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상 : 아세토니트릴/물(45/55, v/v)

라) 이동상 유량 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive- ion mode

사) Capillary voltage : 4.5 kV

아) Collision gas : 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측 질량 (Exact mass)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)
에타복삼 (Ethaboxam)	8.8	320.4	320.08	321	183, 200

4.1.3.194 페나미돈(Fenamidone)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실(Florisil)  : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 검체 25g(곡류 및 콩류는 약 1kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 25 g, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 25 g)을 정밀히 달고, 곡류 및 콩류는 물 50 mL를 넣고 습윤화 한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 다시 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄층을 취하여 위의 디크롤로메탄층과 합한다. 디클로로메탄액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 3회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/디클로로메탄 혼합액(50/50, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피가 10 mL를 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d. x 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 아세토니트릴/물 (65/35, v/v)

다) 이동상 유량 : 1 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 검출기 파장 : UV 230 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

페나미돈(7.7분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페나미돈을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 10 mM 암모늄 아세테이트 수용액/아세토니트릴(35/65, v/v)

다) 이동상 유량 : 0.25 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive- ion mode

사) 분자량 범위 : 50∼400 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
7.7	311.4	311.10	236, 264, 312

4.1.4.195 페녹사닐(Fenoxanil)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로르메탄·헥산을 이용하여 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 정제한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소·인 검출기(GC/NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4)  표준용액  :  표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 후 검체 25 g(곡류 및 콩류는  약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 25 g, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 25 g)을 정밀히 달고, 곡류 및 콩류는 물 50 mL를 넣고 습윤화 한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 다시 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로르메탄(80/20, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 위의 헥산/디클로르메탄(80/20, v/v)층을 취하였다. 헥산/디클로르메탄(80/20, v/v)액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산/디클로르메탄 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/에틸아세테이트 혼합액(90/10, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d. x 30 m, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 4 mL/분

다) 주입부 온도 : 280℃

라) 오븐 온도 :   220℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

페녹사닐 (5.1분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페녹사닐을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5MS(0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 ㎛ ) 또는 이와 동등  한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

다) 주입부 온도 : 250℃

라) 오븐 온도 : 190℃에서 검체를 주입하고 1분 유지한 후 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 올린 후 300℃까지 5℃/분 올려 상승시키고 10분 유지

마) 인터페이스온도 : 300℃

바) 분자량 범위 : 50～400 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
6.4	329.2	328.07	125, 189, 293

4.1.4.196 플루아지남(Fluazinam)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획 검출기(GC/ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고 시킨 후 헥산으로 적절한 농도로 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 검체 25 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 25 g)을 정밀히 달고, 곡류 및 콩류는 물 50 mL를 넣고 습윤화한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고, 잔류물은 다시 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 헥산 100 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매 층을 취한다. 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날린 후 잔류물은 헥산/디클로르메탄(95/5, v/v)  10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산/디클로르메탄 혼합액(95/5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시킨다. 여기에 위의 헥산/디클로르메탄에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/디클로르메탄(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/디클로르메탄(65/35, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-17 (0.53 mm i.d. × 30 m, 0.50 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 질소, 10 mL/분

다) 오븐 온도 : 180℃

라) 주입부 온도 : 190℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, split-less

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루아지남 (6.2분)

4) 정량한계

0.004 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플루아지남을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : HP-5 MS(0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

다) 오븐온도 : 210℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한다. 그 뒤 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 올린 후 2분간 유지한다. 5℃/분의 비율로 300℃까지 올린 뒤 10분간 유지한 후 분석하였다.

라) 주입부 : 250℃

마) 인터페이스 온도 : 300℃

바) 분자량 범위 : 50～500 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
6.2	465.1	463.95	207, 387

4.1.4.197 니트라피린(Nitrapyrin)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산으로 액-액 분배하고 플로리실 카드리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 각 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 카트리지 :  플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 뒤 아세톤 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 아세톤을 가하여 150 mL로 조절하고 이 중 시료 2.5 g에 해당하는 15 mL 추출액을 70 mL 용량의 마개 시험관에 옮긴다. 여기에 2 mL의 포화식염수 및 30 mL의 증류수를 가한 후 10 mL와 5 mL의 헥산으로 2회 분배 추출하여 합한다. 합한 헥산층을 5 g의 무수황산나트륨을 통과시켜 탈수한 후 25 mL의 용량의 마개시험관에 받는다.

2) 정제

플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 전량을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받은 후 헥산 2 mL로 용기 및 카트리지 벽면을 씻어 함께 받는다. 추가로 아세톤/헥산(2/98, v/v) 혼합액 5 mL을 용출시켜 합친 뒤 아세톤/헥산(2/98, v/v) 혼합액을 가하여 최종부피 25 mL가 되게 한 후 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5(0.53 mm i.d., x 30 m, 0.50 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 10 mL/분

다) 오븐 온도 : 130℃

라) 주입부 온도 : 250℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 .기체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

니트라피린 (4.7분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 니트라피린을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5MS (0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/분

다) 오븐온도 : 90℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고 20℃/분의 비율로 온도를 150℃까지 상승시키고 5℃/분 비율로 온도를 300℃까지 상승시키고 4분간 유지

라) 주입부 : 260℃

마) 인터페이스 온도 : 300℃

바) 분자량 범위 : 50～300 m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
니트라피린 (Nitrapyrin)	8.5	230.9	228.90	229, 194

4.1.4.198 아이소프로티올레인(Isoprothiolane)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 두류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴으로 추출하고 디클로로메탄/헥산 혼합으로 액-액 분배 후 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치하고 미리 acetonitrile로 포화시킨 n-hexane 40 mL을 잔류물에 가하여 녹인 후 250-mL 용량의 분액여두에 옮기고 미리 n-hexane으로 포화시킨 acetonitrile 30 mL씩으로 2회 분배 추출한다.) 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층을 취하였다. 유기용매층액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 건식충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v)에 녹인 검체용액 10 mL 중 5 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 여분의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 5 mL로 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 (50/2/48, v/v/v) 혼합액 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 ,디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 (50/4/46, v/v/v) 혼합액 50 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴/물 (50/50, v/v) 혼합액을 가하여최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.0 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(307 nm)

다) 이동상 : 아세토니트릴/물 (50/50, v/v)

라) 유속 : 1 mL/분

마) 칼럼 온도 : 40℃

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 .	액체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

아이소프로티올레인 (10.1분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아이소프로티올레인을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(50/50, v/v) 혼합액

다) 유속 : 0.3 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
아이소프로티올레인 (Isoprothiolane)	5.7	290.4	290.06	291

4.1.4.199 이프로발리카브(Iprovalicarb)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산/디클로로메탄 혼합액으로 액-액 분배하고 플로리실 칼럼으로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀서 사용한다.

라. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한 후 분액여두에 옮긴다. 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산/디클로로메탄(20/80, v/v)을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층을 취한다. 취한 유기용매층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날린다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 2회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 헥산에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 헥산/에틸 아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸 아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 150 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 건고물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

마. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 아세토니트릴/증류수 (60/40, v/v)

다) 이동상 유량 : 1 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 검출기 파장: 210 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이프로발리카브(7.3분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

바. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

사. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이프로발리카브를 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 10 mM 암모늄 아세테이트 함유 아세토니트릴/물(60/40, v/v) 혼합액

다) 이동상 유량 : 0.25 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
이프로발리카브 (Iprovalicarb)	7.3	320.4	320.20	119, 203

4.1.4.200 디메토모르프(Dimethomorph)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴으로 추출한 후 헥산으로 1차 액-액 분배 및 2차 디클로로메탄으로 액-액분배를 한 후 플로리실 칼럼크로마토그래프로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다. 검량용 표준용액은 아세토니트릴/물(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 플로리실 : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 헥산을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 하부 수용액은 별개의 분액여두로 옮기고 헥산층을 버린다. 수용액층에 디크로로메탄 50 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 디클로로메탄층을 취하였다. 분액에 남은 수용액층에 다시 디클로로메탄 50 mL을 가하여 합친 디클로로메탄액을  무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

2) 정제

안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 건식충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 디클로로메탄에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려버리고 여분의 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 충진제 표면이 노출되기 직전 에틸아세테이트/디클로로메탄액(10/90, v/v)혼합액 50 mL로 유출시켜 버리고 재차 에틸아세테이트/디클로로메탄액(25/75, v/v)혼합액 60 mL를 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에  아세토니트릴/물 (40/60, v/v) 혼합액을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.0 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(244 nm)

다) 이동상 : 아세토니트릴/물(40/60, v/v)

라) 유속 : 1 mL/분

마) 칼럼 온도 : 40℃

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 .	액체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

E-디메토모르프(A: 10.8분), Z-디메토로르프(B: 12.4분)

4) 정량한계

0.04 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 디메토모르프를 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm I.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(45/55, v/v) 혼합액

다) 유속 : 0.3 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
E-디메토모르프 (E-dimethomorph)	4.3	387.9	387.12	388
Z-디메토모르프 (Z-dimethomorph)	4.8	387.9	387.12	388

4.1.4.201 디페닐아민(Diphenylamine)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 곡류, 두류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체를 아세토니트릴으로 추출한 후 디클로로메탄/헥산 혼합액으로 액-액 추출한 후 아미노프로필 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다. 검량용 표준용액은 아세토니트릴/물 (50/50, v/v)혼합액에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

5) 아미노프로필 카트리지 : 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 25 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 25 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 후 그 25 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 40 mL를 가하여 균질기에서 5분간 균질화 시킨다.(곡류 및 콩류의 경우 증류수 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치). 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한 후 분액여두에 옮기고 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 100 mL의 디클로로메탄/헥산 (20/80, v/v) 혼합액을 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층을 취하였다.  유기용매층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 아세톤에 녹인 0.1% 디에틸렌 글리콜 용액 0.5 mL를 첨가하고 40℃에서 감압 농축 후 잔류물을 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v)  10 mL로 녹인다. [지방성 검체의 경우 추가로 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액여두에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 분액여두에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액여두에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 총 3회 되풀이 한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.]

2) 정제

아미노프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 10 mL 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받은 후 여분의 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 2 mL로 카드리지 벽면을 씻어 함께 받는다. 추가로 디클로로메탄/헥산(20/80, v/v) 혼합액 5 mL를 용출시켜 합친 뒤 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물에 아세토니트릴/물(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18(4.0 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(283 nm)

다) 이동상 : 아세토니트릴/물 (50/50, v/v)

라) 유속 : 1 mL/분

마) 칼럼 온도 : 40℃

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램

디페닐아민 (10.7분)

4) 정량한계

0.02 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 디페닐아민을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(50/50, v/v) 혼합액

다) 유속 : 0.3 mL/분

라) 칼럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
디페닐아민 (Diphenylamine)	6.0	169.2	169.09	170

4.2 ∼ 4.3.1.3 (현행과 같음)

4.3.1.4 클로르단(Chlordane), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 델타메쓰린(Deltamethrin), 에트림포스(Etrimfos), 펜발러레이트(Fenvalerlate), 퍼메쓰린(Permethrin), 포사론(Phosalone), 피리미포스메틸(Pirimiphos methyl), 프로파자이트(Propargite), 빈클로졸린(Vinclozolin)

가. ∼ 다. (현행과 같음)

1) ∼ 4) (현행과 같음)

라. ∼ 마. (현행과 같음)

1) ∼ 2) (현행과 같음)

가) ∼ 나) (현행과 같음)

바. (현행과 같음)

1) (현행과 같음)

가) (현행과 같음)

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

나) ∼ 바) (현행과 같음)

2) (현행과 같음)

사. ∼ 아. (현행과 같음)

주1) (현행과 같음)

주2) 위의 다종다성분농약 동시분석법에 적용되는 농약

[에테르 및 헥산의 %비율(두 가지 이상의 서로 다른 비율은 “＋”로 표기함), %회수율(회수율%가 없는 농약은 80% 이상임)]

Acetochlor(15＋50), Alachlor(50), Aldrin(6), Allethrin(50), Anilazine(15＋50), Benfluralin(6), Benoxacor(15＋50), Bensulide(50), BHC(α, β, γ：6), BHC(δ: 6＋15), Bifenox(15＋50), Bifenthrin(6＋15), Binapacryl(15, 65%), Bromophos(6), Bromophos-ethyl(6, 59～78%), Bromopropylate(15＋50), Captan(50), Carbophenothions(6, 60%), Chlobenside(6), Chlobromuron(50, 44～100%), Nuarimol(50), Octachlor epoxide(6), Ovex(15), Oxadiazon(15, 75%), Parathion methyl(15), Parathion(15), Pendimethalin(15, 33～56%), Pentachloroaniline(6), Pentachlorobenzene(6), pentachlorobenzonirile(15, 60%), Pentachlorphenyl methyl ester(6), Bifenthrin Cyfluthrin Dimethoate Diphenylamine	Chlobufam(15), Chlordane(6), Chlordecone(15＋50), Chlordene(6), Chlornitrofen(6＋15), Chlorobenzilate(15＋50), Chloropropylate(15＋50), Chlorpropham(15), Chlorpyrifos(6), Chlorthiophos(6), Cypermethrin(15), DDD(6), DDE(6), DDT(6), DEF(15＋50), Deltamethrin(15, 77～80), Dialifor(15, 50%), Diazinon(15), Dichlobenil(15), Dichlofop-methyl(15), Pentachlorphenyl methyl sulfide(6), Permethrin(6＋15), Perthane(6), <삭 제> Phosalone(50), Photodieldrin(15＋50), Pirimiphos-ethyl(15＋50), Pirimiphos-methyl(15＋50), Procymidone(15, 76%), Profenofos(50, 50%), Prometryn(50, 70%), Disulfoton Fenarimol Fenpropathrin Fenpyroximate	Dichlorfenthion(6, 69～89%), Dicloran(15＋50, 50%), Dicofol(15＋50, 61～85%), Dieldrin(15), Dinitramine(15, 78～80%), Dinocap(15, 60%), Endosulfan(15＋50), Endrin(15), EPN(15), Esfenvalerate(15), Ethalfluralin(6), Ethion(6), Etridiazole(6, 68～73%), Etrimfos(15), Fenarimol(50), Fenitrothion(15), Fenoxaprop ethyl ester(50, 65～110%), Fenpropathrin(15, 59～ 114%), Propargite(15), Propham(15, 80%), Prothiofos(6), Pyrethrins(50), Quintozene(6), Ronnel(6), Simazine(50), Strobane(6), Sulfallate(6＋15), Sulfotep(6＋15, 65～70%), Sulphenone(20＋25), Kresoxim-methyl Myclobutanil Penconazole Profenofos	Fenvalerate(50),Fluazifop butyl ester(15, 50～110%), Folpet(15＋50, 50%), Fonofos(6), Heptachlor & Heptachlor epoxide(6), Hexachlorobenzene(6, 60%), Lactofen(50), Leptopphos(50), Linuron(50, 42～62%), Malathion(15＋50), Merphos(6＋15＋50), Methidathion(50, 50%), Methoxychlor(6), Mirex(6, 75), Nitalin(50, 70%), Nitrofen(15), Nitrofluorfen(15), Nonachlor(6), TCMTB(15, 61～62%), Tecnazene(6), Tetradifon(15), Tetraiodoethylene(6, 65%), Tetrasul(6), Thiobencarb(15, 50～86%), Toxaphene(6), Triallate(6), Trichloronat(6), Trifluralin(6), Vincozolin(15). Pyriproxyfen Quintozene Triadimenol Triazophos

주3) (현행과 같음)

4.3.1.5 ～ 4.3.2.22 (현행과 같음)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.1 (현행과 같음)

5.3.2 나라신(Narasin), 라살로시드(Lasalocid), 마두라마이신(Maduramycin), 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin), 샘두라마이신(Semduramicin)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올로 표시선까지 채워 100 mg/L이 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 각 동물용의약품 잔류허용기준의 10배 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 증류수로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2): 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 0.3% 개미산(Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 3 mL을 넣고 증류수로 표시선까지 채운다.

사) 0.3% 개미산 함유 아세토니트릴 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 3 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 1 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 0.2 M 인산완충액 (pH 7.2) 1 mL를 가하여 균질화한 후 아세토니트릴 10 mL를 넣고 5분간 진탕한다. 4℃에서 3,500 G로 20분간 원심분리하여 상층액을 취한 후 40 ℃에서 질소농축한다. 잔류물에 50% 아세토니트릴 용액 1 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C8(Eclipse Plus C8, 2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.3% 개미산 용액

(나) 이동상 B: 0.3% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	50	50
10.0	10	90
14.0	10	90
15.0	0	100
25.0	0	100
25.5	50	50
30.0	50	50

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 35℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Source temperature: 350℃

(3) Capillary voltage: 4.0 kV

(4) Collision gas: N2 (질소)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy,eV)
1	나라신 (Narasin)	14.11	765.0	787.5	431.3	60
					531.3	50
					413.1	60
2	라살로시드-Na (Lasalocid-Na)	11.71	612.8	613.2	377.1	40
					577.1	30
					595.3	30
3	마두라마이신 (Maduramycin)	15.02	917.1	939.4	877.4	30
					895.2	50
					859.0	50
4	모넨신-Na (Monensin-Na)	13.15	692.9	693.3	461.2	60
					479.2	60
					501.2	60
5	살리노마이신-Na (Salinomycin-Na)	12.92	773.0	773.3	431.2	60
					531.2	50
					265.2	60
6	샘두라마이신 (Semduramicin)	10.75	873.1	895.3	833.4	30
					851.2	30
					815.1	30

(5) 분석대상물질의 개별 조건

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1)  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

나라신 (14.1분)	라살로시드(11.7분)
마두라마이신(15.0분)	모넨신(13.1분)
살리노마이신(12.9분)	샘두라마이신(10.7분)

그림 1. 나라신, 라살로시드, 마두라마이신, 모넨신, 살리노마이신, 샘두라마이신 표준품의 크로마토그램(각 0.4 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

동물용의약품	정량한계(mg/kg)
	식육	우유	알	수산물
나라신(Narasin)	0.01	0.002	0.003	0.002
라살로시드 (Lasalocid)	0.005	0.001	0.01	0.001
마두라마이신 (Maduramycin)	0.004	0.002	0.002	0.002
모넨신 (Monensin)	0.009	0.002	0.004	0.002
살리노마이신 (Salinomycin)	0.008	0.001	0.005	0.002
샘두라마이신 (Semduramicin)	0.005	0.002	0.003	0.002

나) 정량한계

5.3.3 나이카바진(Nicarbazine), 데코퀴네이트(Decoquinate), 디싸이클라닐(Dicyclanil), 디아베리딘(Diaveridine), 디클라주릴(Diclazuril), 로베니딘(Robenidine), 록사손(Roxarsone), 암프롤리움(Amprolium), 에토파베이트(Ethopabate), 이미도캅(Imidocarb), 죠렌(Zoalene), 클로피돌(Clopidol), 할로푸지논(Halofuginone), 톨트라주릴(Toltrazuril)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하여 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 각 동물용의약품 표준품을 100 mL 용량플라스크에 각각 정밀히 달아 해당 용매주1)(물, 아세토니트릴, 메탄올, 디메틸설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF))에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 잔류허용기준의 10배 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 아세토니트릴로 표시선까지 채워 냉동 보관한다. 혼합표준용액은 아세토니트릴로 희석하여 사용한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

주1). 분석대상 물질 및 표준원액 제조에 사용되는 용매

No	동물용의약품	분석대상물질	용매
1	나이카바진 (Nicarbazine)	*N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea	디메틸포름아미드 (DMF)
2	데코퀴네이트 (Decoquinate)	Decoquinate	아세토니트릴
3	디싸이클라닐(Dicyclanil)	Dicyclanil	디메틸포름아미드 (DMF)
4	디아베리딘 (Diaveridine)	Diaveridine	디메틸포름아미드 (DMF)
5	디클라주릴 (Diclazuril)	Diclazuril	메탄올
6	로베니딘 (Robenidine)	Robenidine	메탄올
7	록사손 (Roxarsone)	Roxarsone	메탄올
8	암프롤리움 (Amprolium)	Amprolium	물
9	에토파베이트 (Ethopabate)	Ethopabate	메탄올
		*m-Phenetidine
10	이미도캅 (Imidocarb)	Imidocarb	메탄올
11	죠렌(Zoalene)	Zoalene	아세토니트릴
		*3-amino-5-nitro-o-toluamide(ANOT)
12	클로피돌 (Clopidol)	Clopidol	디메틸설폭사이드 (DMSO)
13	할로푸지논 (Halofuginone)	Halofuginone	메탄올
14	톨트라주릴 (Toltrazuril)	*Toltrazuril sulfone	메탄올

*표시 물질은 대사체임

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 물 2 mL를 넣고 5분간 균질화한다. 아세토니트릴 10 mL를 가하고 15분간 진탕한 후 -4℃에서 9,300 G 로 10분간 원심분리 한 후 상층액을 취한다. 상층액에 n-헥산 10 mL를 넣고 2분간 교반한 후 -4℃에서 9,300 G 로 10분간 원심분리 한 후 하층액을 취하여 감압농축한다. 잔류물에 50% 아세토니트릴 용액 1 mL를 가하여 녹인 후 마이크로 원심분리 튜브에 옮겨 상온에서 15,800 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(Atlantis Ⓡ T3, 2.1 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B: 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
9.0	5	95
11.0	5	95
11.1	95	5
13.5	95	5

(3) 유속: 0.35 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive, Negative)

(2) Capillary temperature: 350℃

(3) Collision gas: N2 (질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea	Negative	7.30	302.2	300.9	136.9	20.0
						106.8	44.0
2	데코퀴네이트 (Decoquinate)	Positive	9.02	417.5	418.2	372.1	33.0
						203.9	55.0
						231.9	47.0
3	디싸이클라닐 (Dicyclanil)	Negative	7.68	407.6	405.1	333.9	28.0
						299.0	42.0
					407.0	336.0	24.0
4	디아베리딘 (Diaveridine)	Positive	3.47	260.3	261.0	245.0	37.0
						122.9	29.0
						217.1	37.0
5	디클라주릴 (Diclazuril)	Positive	2.10	190.2	191.0	150.0	27.0
						149.8	29.0
						163.1	23.0
6	로베니딘 (Robenidine)	Positive	5.67	334.2	334.0	154.9	27.0
						110.9	61.0
						137.9	33.0
7	록사손 (Roxarsone)	Negative	3.03	263.0	261.9	243.8	18.0
						153.1	26.0
						122.9	34.0
8	암프롤리움 (Amprolium)	Positive	0.88	278.8	243.1	150.0	17.0
						93.8	19.0
						122.0	31.0
9	에토파베이트 (Ethopabate)	Positive	5.40	237.3	238.1	206.1	15.0
						136.0	37.0
						164.0	27.0
	m-Phenetidine	Positive	3.56	137.2	138.0	109.9	21.0
						64.9	33.0
						93.1	31.0
10	이미도캅 (Imidocarb)	Positive	3.14	348.4	175.1	162.0	19.0
						145.0	35.0
						89.8	47.0
11	죠렌 (Zoalene)	Negative	4.98	225.2	223.9	181.0	14.0
						42.0	36.0
						151.0	22.0
	*3-Amino-5-nitro-o-toluamide(ANOT)	Positive	3.46	198.2	196.0	107.0	23.0
						153.1	23.0
						179.0	11.0
12	클로피돌 (Clopidol)	Positive	3.61	192.0	191.9	101.0	35.0
						86.9	41.0
						51.1	63.0
13	할로푸지논 (Halofuginone)	Positive	4.38	414.7	413.9	100.0	23.0
					416.0	120.0	23.0
						100.0	67.0
14	톨트라주릴 설폰 (Toltrazuril sulfone)	Negative	7.36	457.4	456.0	456.0	8.0
						41.8	86.0

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea(7.30분)	데코퀴네이트(9.02분)
디클라주릴(7.68분)	디아베리딘(3.47분)
디싸이클라닐(2.10분)	로베니딘(5.67분)
록사손(3.03분)	암프롤리움(0.88분)
에토파베이트(5.40분)	m-Phenetidine(3.56분)
이미도캅(3.14분)	죠렌(4.98분)
3-amino-5-nitro-o-toluamide(3.46분)	클로피돌(3.61분)
할로푸지논(4.38분)	톨트라주릴설폰(7.36분)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea, 데코퀴네이트, 디싸이클라닐, 디아베리딘, 디클라주릴, 로베니딘, 록사손, 암프롤리움, 에토파베이트, m-phenetidine, 이미도캅, 죠렌, 3-amino–5-nitro-o-toluamide (ANOT), 클로피돌, 할로푸지논, 톨트라주릴설폰, 표준품의 크로마토그램(각 0.05 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 각 정량이온(Quantitative ion)의 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량하여 합한 값을 정량값으로 한다.

나) 정량한계

물질	정량한계 (mg/kg)
	식육	유	알	어류
N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea	0.04	0.001	0.002	0.004
데코퀴네이트 (Decoquinate)	0.1	0.004	0.004	0.004
디싸이클라닐 (Dicyclanil)	0.003	0.003	0.002	0.003
디아베리딘 (Diaveridine)	0.008	0.007	0.002	0.002
디클라주릴 (Diclazuril)	0.04	0.001	0.001	0.003
로베니딘 (Robenidine)	0.02	0.001	0.002	0.004
록사손 (Roxarsone)	0.004	0.004	0.004	0.002
암프롤리움 (Amprolium)	0.09	0.002	0.002	0.001
에토파베이트 (Ethopabate)	0.08	0.0004	0.001	0.003
*m-Phenetidine	0.002	0.001	0.003	0.003
이미도캅 (Imidocarb)	0.06	0.001	0.001	0.004
죠렌 (Zoalene)	0.2	0.001	0.002	0.004
*3-Amino-5-nitro-o-toluamide	0.003	0.001	0.002	0.004
클로피돌 (Clopidol)	0.04 가금 (0.5)	0.001	0.003	0.003
할로푸지논 (Halofuginone)	0.004	0.002	0.004	0.003
톨트라주릴 설폰 (*Toltrazuril sulfone)	0.003	0.001	0.001	0.004

<삭 제>

5.3.8∼5.3.11 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.12 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.13 아빌라마이신(Avilamycin)

1) 시험법 적용범위
축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 아빌라마이신(Avilamycin)을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아빌라마이신(Avilamycin) 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) C18 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유
균질화한 검체 2 g에 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유, 알을 제외한 식품
균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	60	40
5.0	10	90
20.0	10	90
21.0	60	40
30.0	60	40

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 측정파장 : 210 nm(아빌라마이신(Avilamycin)

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아빌라마이신(Avilamycin)의 함량을 각각 구한다.

5.3.14 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.15 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.16∼5.3.29

5.3.30 아프라마이신(Apramycin)

1) 시험법 적용범위
아프라마이신(Apramycin)은 유, 알 및 수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체 중 아프라마이신(Apramycin)을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 아프라마이신(Apramycin) 표준품을 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액: 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2): 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취한 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 가하여 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 혼합한 후 아세토니트릴 6 mL를 가하고 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 4 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가하여 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유, 알을 제외한 식품
균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 추출액을 흡착시키고 아세톤을 2% 포함한 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼C8(2.0 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상

① 이동상 A: 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

② 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
19.0	100	0

(다) 유속: 0.4 mL/분

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization: ESI(Positive)

(나) Spray voltage: 5 kV

(다) Capillary temperature: 280℃

(라) Sheath gas:  질소(N2)(50 psi)

(마) Auxiliary gas: 질소(N2)(10 psi)

(바) SIM ion: m/z 540(아프라마이신)

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(Retention time)을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 아프라마이신(Apramycin) 함량을 구한다.

5.3.31∼5.3.36 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.37∼5.3.46 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.47∼5.3.48 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.49∼5.3.58 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.59∼5.3.74 (현행과 같음)

5.3.75 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 겐타마이신·네오마이신을 10 mM 인산완충용액으로 추출하고 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 겐타마이신 및 네오마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 라)의 표준품 희석용매에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 표준품 희석용매: 100 mL 아세토니트릴과 10 mL 초산을 넣고 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

마) 10 mM 인산완충용액(0.4 mM EDTA와 2 % 삼염화초산 함유): 1 L 용량플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 1.36 g을 넣고 물 0.9 L 먼저 녹인 후 1 N 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨 이수화물(Na2 EDTA dihydrate) 0.15 g과 삼염화초산 20 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 헵타플루오르뷰티릭산(HFBA) 용액: 1 L 용량플라스크에 헵타플루오르뷰티릭산(HFBA) 1.3 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 용출용액: 삼염화초산 5 g을 넣고 물 100 mL로 녹인 후 아세토니트릴 50 mL를 첨가하고 물로 250 mL가 되게 한다.

아) 약양이온교환(Weak Cation Exchange, WCX) 카트리지(150 mg, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

차) 기구: 사용하는 모든 용기는 폴리프로필렌 재질 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 ㉠10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 20분 동안 격렬하게 진탕한 다음 4℃ 12,000 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 0.45 ㎛ 막 여과지(Nylon membrane filter)로 여과하여 새로운 폴리프로필렌 원심분리관에 옮긴다. 잔여물에 ㉠의 과정을 반복한 후 상층액을 합하여 추출액으로 한다. 30% 수산화나트륨을 약 0.2 mL를 가하여  pH 7.5∼8.0으로 맞추어 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 약양이온교환(WCX) 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL를 넣어 세척한다. 5분 이상 진공감압하여 수분을 제거한 후 용출용액 4 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화한 후 0.2 ㎛ 막 여과지(Nylon membrane filter)로 여과하여 폴리프로필렌 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(XSELECT 2.1 ｘ 150 mm, 3.5 µm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도: 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A: 10 mM 헵타플루오르뷰티릭산(HFBA) 용액

(나) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	80	20
2	80	20
4	5	95
8	5	95
9	80	20
12	80	20

(4) 유속: 0.3 mL/분

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Capillary temperature: 200℃

(3) Capillary voltage : 3.5 kV

(4) Collision gas: 아르곤(Ar)

(5) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
네오마이신 (Neomycin)	4.02	614	615	161	48
				114	30
				293	24
겐타마이신 C1 (Gentamicin C1)	4.03	478	479	322	25
				126	15
				160	10
겐타마이신 C2,C2a (Gentamicin C2,C2a)	4.03	464	465	322	25
				112	25
				126	15
겐타마이신 C1a (Gentamicin C1a)	4.02	450	451	322	25
				112	20
				163	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

네오마이신

겐타마이신C1

겐타마이신C2, C2a

겐타마이신C1a

그림 1. 겐타마이신(4.03분, 0.1 mg/kg), 네오마이신(4.02분, 0.5 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 각각 피크의 높이 또는 면적값으로 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 각각의 정량이온(Quantitative ion)의 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 겐타마이신 및 네오마이신을 정량한다. 단, 겐타마이신 C1, C2, C2a, C1a 각각 정량이온의 피크 높이 또는 피크 면적값의 합을 겐타마이신으로 한다.

나) 정량한계

겐타마이신(Gentamicin): 0.005 mg/kg

네오마이신(Neomycin): 0.02 mg/kg

5.3.76∼5.3.79 (현행과 같음)

5.3.80 덱사메타손(Dexamethasone), 메틸프레드니솔론(Methylprednisolone), 베타메타손(Betamethasone), 알도스테론(Aldosterone), 코르티손(Cortisone), 코르티코스테론(Corticosterone), 프레드니손(Prednisone), 프레드니솔론(Prednisolone), 플루메타손(Flumethasone)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고, C18 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：100 mL 용량플라스크에 각 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액：100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 일정 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 10% 아세토니트릴 용액으로 표시선까지 채워 냉동 보관한다. 혼합표준용액은 10% 아세토니트릴 용액으로 희석하여 사용한다.

마) 3 M 아세테이트 완충용액(pH 4.6) : 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산나트륨 246.1 g을 넣고 물 500 mL로 충분히 녹인 후 초산으로 pH 4.6이 되도록 조정하고 물로 표시선까지 채운다.

바) 20% 아세톤 용액 : 100 mL 용량플라스크에 아세톤을 20 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량 플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) C18 카트리지 (6 mL, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 3 M 아세테이트 완충용액(pH 4.6) 10 mL를 가한 후 진탕한다. β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/arylsulfatase) 50 μL를 첨가하여 균질화하고 60℃ 오븐에 1시간 동안 넣어 둔 후 상온에서 냉각한다. 이 용액에 아세토니트릴 10 mL을 가하여 5분간 진탕하고 0℃에서 5,000 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취한다. 이런과정을 한번 더 반복하여 얻어진 상층액에 헥산 8 mL와 디클로르메탄 2 mL를 가하여 10분간 진탕한다. 하층액(아세토니트릴층)을 취하여 50℃에서 질소농축 하고 잔류물에 메탄올 1 mL과 증류수 10 mL로 용해한 후, 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화 시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시킨다. 물 5 mL, 20% 아세톤 용액 5 mL, 헥산 5 mL로 차례로 세척한 후 진공 감압하여 물을 완전히 제거해준다. 에틸아세테이트 6 mL로 용출하고 50℃에서 질소농축한 후 잔류물에 10% 아세토니트릴 용액 1 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18(Atlantis dC18 2.1 mm ｘ 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	70	30
7	70	30
8.5	10	90
12	10	90
14	70	30
16	70	30

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive, Negative)

(2) Capillary temperature : 250℃

(3) Capillary voltage : Positive(5.0 kV)/Negative(3.0 kV)

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며  그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	덱사메타손 (Dexamethasone)	Negative	7.7	392.46	437.2	292.0	38
						307.1	33
						361.1	20
						391.1	15
2	메틸프레드니솔론 (Methyl prednisolone)	Negative	7.0	374.47	419.2	294.0	38
						309.1	34
						343.1	20
						373.1	14
3	베타 메타손 (Betamethasone)	Negative	7.4	392.46	437.2	292.1	37
						307.0	30
						324.8	32
						361.1	20
4	알도 스테론 (Aldosterone)	Positive	3.8	360.45	361.2	255.1	17
						315.0	17
						325.1	14
						343.2	15
5	코르티손 (Cortisone)	Positive	5.0	360.45	361.2	105.1	32
						121.1	31
						145.1	30
						163.1	23
6	코르티코스테론 (Corticosterone)	Positive	9.2	346.47	347.2	121.1	25
						293.1	14
						311.2	16
						329.1	12
7	프레 드니손 (Prednisone)	Negative	4.6	358.43	403.2	299.1	47
						327.1	20
						357.1	19
						187.0	12
8	프레드니솔론 (Prednisolone)	Negative	4.5	360.44	405.2	187.0	31
						280.1	37
						295.1	32
						329.1	19
9	플루 메타손 (Flumethasone)	Negative	7.6	410.45	455.2	305.1	40
						363.1	27
						379.1	20
						409.1	15

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주2. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 % ∼ ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 % ∼ ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

프레드니손 RT 4.6분

프레드니솔론 RT 4.5분

메틸프레드니솔론 RT 7.1분

베타메타손 RT 7.4분

덱사메타손 RT 7.8분

플루메타손 RT 7.1분

코르티코스테론 RT 9.2분

코르티손 RT 5.0분

알도스테론 RT 3.8분

그림 1. 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 플루메타손, 코르티코스테론, 코르티손, 알도스테론 표준품의 크로마토그램(0.001 mg/L)

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

9) 정량한계

덱사메타손 : 0.0001 mg/kg

메틸프레드니솔론 : 0.0001 mg/kg

베타메타손 : 0.0001 mg/kg

알도스테론 : 0.005 mg/kg

코르티손 : 0.002 mg/kg

코르티코스테론 : 0.002 mg/kg

프레드니손 : 0.0001 mg/kg

프레드니솔론 : 0.0001 mg/kg

플루메타손 : 0.001 mg/kg

5.3.81∼5.3.86 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.87 (현행과 같음)

<삭 제>

<삭 제>

5.3.88∼5.3.110 (현행과 같음)

5.3.111 니트로푸라존(Nitrofurazone)

1) 시험법 적용범위

수산물 중 갑각류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 니트로푸라존(nitrofurazone)을 0.2% 메타인산/메탄올 혼합용액(6:4, v/v)으로 추출하고 HLB(hydrophilic lipophilic balance) 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다. 니트로푸라존은 빛에 쉽게 분해되므로 실험과정에 사용되는 초자는 갈색유리병을 사용하거나 호일로 감싸 빛을 차단하여 실험한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 니트로푸라존 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액: 표준원액을 10 mM 암모늄아세테이트로 희석하여 사용한다.

마) 10 mM 암모늄아세테이트(ammonium acetate) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 암모늄아세테이트 0.78 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

바) 0.2% 메타인산/메탄올 혼합용액(6:4, v/v):  1,000 mL 용량플라스크에 메타인산 2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 메탄올과 6:4의 비율로 혼합하여 추출용액으로 사용한다.

사) HLB(hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

아) 기타시약: 특급

자) 용기: 갈색 유리기구

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체  5 g을 정밀히 달아 용기에 넣고 0.2% 메타인산/메탄올 혼합용액(6:4, v/v) 100 mL를 가한 후 1분간 균질화 한다. 이 용액을 whatman No.6 여과지가 깔린 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 이 여과액(단, (껍질을 포함하는) 민물새우의 경우 여과액을 4℃에서 12,000 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 사용)은 40°C 이하의 수욕 중에서 20〜30 mL가 되게 회전식 감압 농축한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 10% 메탄올 5 mL로 세척한 뒤, 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 수용액상에서 질소농축한 후, 잔류물은 10 mM 암모늄아세테이트/아세토니트릴(3:7, v/v) 혼합용액 1 mL로 재용해하고 0.2 μm 막 여과지(nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(BEH, 2.1 × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 10 mM 암모늄아세테이트 용액

(나) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
0.5	95	5
1.5	70	30
2.0	70	30
3.0	95	5
5.0	95	5

(3) 유속: 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도: 35℃

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI (Negative)

(2) Capillary temperature: 350℃

(3) Capillary voltage: 2.8 kV

(4) Collision gas: 아르곤(Ar)

(5) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compounds)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
니트로푸라존 (Nitrofurazone)	1.87	198.1	197.07	124.10	10
				149.92	10
				79.92	10

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 % ∼ ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 % ∼ ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 니트로푸라존(1.86분, 0.005 mg/L) 표준품의 크로마토그램

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

(1) 껍질을 포함하는 민물새우 : 0.005 mg/kg

(2) (1)을 제외한 갑각류(가식부) : 0.001 mg/kg

5.3.112 시프로헵타딘(Cyproheptadine), 더콴텔(Derquantel), 펄리마이신(Pirlimycin)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 80% 아세토니트릴로 추출하여 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 혼합표준용액: 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산 (formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 유를 제외한 축‧수산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 2 g (새우, 장어의 경우 1.5 g)과 80% 아세토니트릴 용액 10 mL을 가하여 15분간 진탕한 후, 2,200 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 헥산 10 mL를 넣고 30 초간 진탕한 후 2,200 G에서 5분간 원심분리한다. 하층액(아세토니트릴층) 2 mL를 새로운 원심분리관에 취하여 50℃에서 질소농축한 후 잔류물에 0.1% 개미산/메탄올 혼합용액(1:1, v/v) 0.4 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 1.5 g, 초산암모늄 1 g, 80% 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 15분간 진탕한 후, 2,200 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여헥산 10 mL를 넣고 30 초간 진탕하고 2,200 G에서 5분간 원심분리한다. 하층액(아세토니트릴층) 2 mL를 새로운 원심분리관에 취하여 50℃에서 질소농축한 후 잔류물에 0.1% 개미산/메탄올 혼합용액(1:1, v/v) 0.4 mL를 가하여 녹인 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (Kinetex 2.1 × 50 mm, 1.3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
10	10	90
15	10	90
15.1	90	10
18	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI (Positive)

(2) Capillary temperature : 250℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	시프로헵타딘 (Cyproheptadine)	7.3	287.4	288.1	96.1	-26
					191.1	-29
					215.1	-47
2	더콴텔 (Derquantel)	6.1	479.6	480.3	462.2	-25
					405.3	-32
					148.1	-44
3	펄리마이신 (Pirlimycin)	6.0	410.1	411.2	112.2	-15
					56.1	-20
					363.1	-20

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤30 %

나) 표준품 크로마토그램

시프로헵타딘(7.3분)

더콴텔(6.1분)

펄리마이신(6.0분)

그림 1. 시프로헵타딘, 더콴텔, 펄리마이신 표준품의 크로마토그램(각 0.005 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

시프로헵타딘(Cyproheptadine): 0.005 mg/kg

더콴텔(Derquantel): 0.0002 mg/kg

펄리마이신(Pirlimycin): 0.005 mg/kg

5.3.113 요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세트산이 함유된 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 요오드퀴놀린설폰산 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액: 100 mL 용량플라스크에 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

마) 0.1% 아세트산(Acetic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산 1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 아세트산 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량 플라스크에 아세트산 1 mL를 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴 용액 8 mL를 가하여 10분간 진탕 혼합한 후 4℃에서 2,600 G로 15분간 원심분리하여 상층액 ⓐ를 취한다. 잔류물에 다시 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴 용액을 7 mL를 가하여 10분간 진탕하고 4℃에서 2,600 G로 15분간 원심분리하여 상층액 ⓑ를 취한다. 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액 ⓐ와 ⓑ를 합한 후 헥산 15 mL를 가하여 10분간 진탕하고 4℃에서 2,600 G로 15분간 원심분리한다. 하층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 0.3 mL이 될 때까지 질소농축한 후 0.1% 아세트산 수용액:0.1% 아세트산 함유 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 2.2 mL을 가하여 재분산한다. 4℃에서 15,000 G로 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18 (Xbridge 2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.1% 아세트산 용액

(나) 이동상 B: 0.1% 아세트산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
3	95	5
5	5	95
12	5	95
15	95	5
20	95	5

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 35℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Negative)

(2) Capillary Temperature: 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
요오드퀴놀린설폰산 (Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid)	9.28	351.1	349.7	223.0	-38
				159.1	-40
				80.0	-90

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1). 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 요오드퀴놀린설폰산 표준품의 크로마토그램(9.28분, 0.05 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinolinesulfonic acid) : 0.005 mg/kg

5.3.114 콜리스틴(Colistin)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 콜리스틴을 1N 염산(수산물의 경우, 5% 메탄올성 0.5% 개미산 혼합용액)으로 추출하고 HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 콜리스틴 표준품(A와 B의 혼합물)을 정밀히 달아 50% 메탄올 용액에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액: 표준원액을 1% 개미산 메탄올 용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 5% 메탄올성 0.5% 개미산 혼합용액: 1,000 mL 용량플라스크에 5 mL의 개미산을 넣고 5% 메탄올 용액을 표시선까지 채운다.

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약: 특급

아) 기구: 사용하는 모든 용기는 폴리프로필렌 재질 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 ㉠ 1 N 염산용액 5 mL를 넣어 추출한 후 4℃ 12,000 G에서 10분간 원심분리한다. ㉠의 과정을 2회 반복하여 상층액을 합하여  추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후, 1% 개미산을 함유하는 메탄올 용액 4 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화한 후 0.2 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 수산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 ㉡ 5% 메탄올성 0.5% 개미산 혼합용액 5 mL를 넣어 가볍게 진탕한 후 4℃ 12,000 G에서 10분간 원심분리한다. ㉡의 과정을 2회 반복하여 상층액을 합하여  추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화 시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후, 1% 개미산을 함유하는 메탄올 용액 4 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화한 후 0.2 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(XSELECT, 2.1 × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도: 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A: 암모늄포메이트/개미산/물(1/2.5/497.5, v/v/v)

(나) 이동상 B: 1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
1	100	0
8	10	90
9	10	90
9.5	100	0
12	100	0

(4) 유속: 0.3 mL/분

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Capillary temperature: 500℃

(3) Capillary voltage: 3.5 kV

(4) Collision gas: 아르곤(Ar)

(5) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compounds)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
콜리스틴 A (Colistin A)	4.65	1169.48	585.3	100.99	30
				227.09	20
				569.58	16
콜리스틴 B (Colistin B)	4.47	1155.45	578.35	100.99	30
				202.01	13
				576.53	16

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

콜리스틴A

콜리스틴B

그림 1. 콜리스틴(A : 4.65분, B : 4.47분, 0.15 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 콜리스틴 A와 콜리스틴 B 각각의 피크 높이 또는 면적값을 합한 값으로 콜리스틴의 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 콜리스틴 A와 콜리스틴 B 각각의 정량이온(Quantitative ion)의 피크 높이 또는 피크 면적값을 합한 값으로 콜리스틴을 정량한다.

나) 정량한계

(1) 유 : 0.01 mg/kg

(2) 유를 제외한 축·수산물 : 0.05 mg/kg

제10. ∼ 제11. (현행과 같음)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
1∼64	(현행과 같음)
65	감로멜론	멜론, Honeydew melon	Cucumis melo var. inodorus H. Jacq.	열매
66~67	(현행과 같음)
68	감태	Kajime	Ecklonia cava	전체
69~106	(현행 68~105와 같음)
107	개암나무	헤이즐넛, 진자	Corylus heterophylla Fisch. ex Trautv.	열매
108 ~ 174	(현행 106~172와 같음)
175	곤달비	Narrow-head ragwort	Ligularia stenocephala (Maxim.) Matsum. & Koiz. / Ligularia stenocephala f. quinquebracteata Yamam.	잎
176 ~ 386	(현행 174~384와 같음)
387	녹두	안두(安豆), 길두(吉豆), Green gram, Mung bean	Phaseolus radiatus L.	씨앗, 싹
388 ~ 600	(현행 386~598과 같음)
601	마	참마, East Asian mountain yam	Dioscorea batatas Decaisne / Dioscorea japonica Thunberg	뿌리, 뿌리줄기※(산약), 주아(영여자)
602 ~ 679	(현행 599~676과 같음)
680	모무늬돌김	-	Pyropia seriata	전체

681 ~ 777	(현행 677~773과 같음)
778	방사무늬김	-	Pyropia yezoensis	전체
779 ~ 972	(현행 774~967과 같음)
<삭 제>
973 ~ 1006	(현행 969~1002와 같음)
1007	서양고추냉이	호스래디쉬 (Horseradish), 겨자무	Armoracia rusticana L.	뿌리
1008 ~ 1044	(현행 1003~1039와 같음)
1045	셀러리	셀러리악(Celeriac), Celery, Smallage, Garden celery, Wild celery	Apium graveolens var. dulce Pers / Apium graveolens subsp. rapaceum (Mill.) P.D.Sell	뿌리, 잎, 씨앗
1046 ~ 1270	(현행 1041~1265와 같음)
1271	오미자	Five-flavor magnolia vine	Schisandra chinensis (Turcz.) Baillon	열매※(오미자)
1272 ~ 1373	(현행 1267~1368과 같음)
1374	잇바디돌김	-	Pyropia dentata	전체
1375 ~ 1440	(현행 1369~1434와 같음)
1441	조릿대	-	Sasa borealis (Hack) Makino	잎

1442 ~ 3687	(현행 1435~3680과 같음)
주1. 상기의 ※ 표시된 품목(건조한 것에 한함)의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 ｢대한민국약전｣(식품의약품안전처 고시) 또는 ｢대한민국약전외한약(생약)규격집｣(식품의약품안전처 고시)에 따른다. 주2. 다만, 조류는 상기에서 명시된 식물성 원료 이외에 국제적으로 공인된 기구(세계조류학회 Listing the World’s Algae의 Algaebase) 등에서 식용 근거, 학명·이명 등이 확인된 경우 식품에 사용할 수 있는 원료로 사용할 수 있다. 다만, 별표 2에서 정하고 있는 원료는 제외한다.

2. 동물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성		사용 부위
1∼73	(현행과 같음)
74	검정돌치	Black rockcod	Notothenia coriiceps
75~237	(현행 74~236과 같음)
238	대리석무늬돌치	Marbled rockcod	Notothenia rossii
239 ~ 630	(현행 237~628과 같음)
631	유럽물레고둥	Whelk	Buccinum undatum
632 ~ 659	(현행 629~656과 같음)
660	장수풍뎅이 유충		Allomyrina dichotoma
661 ~ 794	(현행 657~790과 같음)
795	타조	-	Struthio camelus		고기, 알
796 ~ 904	(현행 792~900과 같음)
905	흰점박이꽃무지유충		Protaetia brevitarsis
906 ~ 912	(현행 901~907과 같음)
913	Atlantic wolffish	Striped wolffish	Anarhichas lupus		-
914	Black scabbardfish	-	Aphanopus carbo		-
915	Blue ling	-	Molva dypterygia		-

914 ~ 924	(현행 908~918과 같음)
925	Ling	-	Molva molva	-
926 ~ 927	(현행 919~920과 같음)
928	North Pacific hake	-	Merluccius productus	-
929 ~ 930	(현행 921~922와 같음)
931	Pollack	-	Pollachius pollachius	-
932 ~ 950	(현행 923~941과 같음)
주1. 상기의 ※ 표시된 품목은 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 적합한 것이어야 한다. 주2. 다만, 수산물은 상기에서 명시된 동물성 수산물 이외에도 국제적으로 공인된 기구(Food and Agriculture Organization of the United Nations의 Fisheries & Aquaculture, WorldFish의 Fishbase, World Register of Marine Species 등)에서 어획량에 대한 정보가 확인되고, 식용 근거, 학명·이명 등이 확인된 경우는 식품에 사용가능한 원료로 사용할 수 있다. 다만, 별표 2에서 정하고 있는 원료는 제외한다.

3. 미생물

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	비고
1~67	(현행과 같음)
68	Weissella cibaria	-	Weissella cibaria	-
69~70	(현행 68~69와 같음)
주1. 상기 미생물 원료 이외에 국제적으로 공인된 기관[국제낙농연맹(International Dairy Federation), 미국식품의약국(U.S. Food and Drug Administration), 유럽식품안전청(European Food Safety authority) 등]에서 제시하고 있는 미생물 원료는 동 기관에서 제시된 사용목적에 대해서만 식품원료로 사용 가능하다.

4. (현행과 같음)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
1~4	(현행과 같음)
5	강황	울금, 심황, 우콘, Turmeric, Curcuma, haldi	Curcuma aromatica / Curcuma longa L. / Curcuma domestica Valeton	뿌리 줄기
6~88	(현행과 같음)
<삭 제>
89 ~ 145	(현행90~146과 같음)
주1. 상기의 ※ 표시된 품목(생지황을 제외한 품목의 경우 건조한 것에 한함)의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 「대한민국약전」(식품의약품안전처 고시) 또는 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 따른다.

2. 동물성

(현행과 같음)

3. 미생물

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
1~7	(현행과 같음)
8	Debaryomyces hansenii		Debaryomyces hansenii	유가공품 제조에 사용
9~13	(현행 8~12와 같음)
14	Leuconostoc pseudomesenteroides		Leuconostoc pseudomesenteroides	유가공품 제조에 사용
15~22	(현행 13~20과 같음)
23	Protaminobacter rubrum		Protaminobacter rubrum	팔라티노스 제조에 한함
24~27	(현행 21~24과 같음)
28	(현행 27과 같음)
29	(현행 25와 같음)
30	(현행 26과 같음)

4. 기타

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
1~6	(현행과 같음)
7	패각, 난각, 나각, 산호, 진주	-	-	-	칼슘 보충용 원료에 한함

[별표 3] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이미녹타딘(Iminoctadine)

(현행과 같음)

풋마늘	0.7

(2) 글루포시네이트

(Glufosinate(ammonium))

(현행과 같음)

바나나	0.05†

(3) 글리포세이트(Glyphosate)

(현행과 같음)

바나나	0.05†

커피원두	1.0†

파인애플	0.05†

키위	0.05†

견과류	1.0†

(4) ∼ (8) (현행과 같음)

(9) 델타메트린(Deltamethrin)

(현행과 같음)

조	0.2

(10) ∼ (20) (현행과 같음)

(21) 디클로르보스(Dichlorvos)

(현행과 같음)

대두	0.05

풋콩	0.05

(22) ∼ (25) (현행과 같음)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(현행과 같음)

복숭아	2.0

수수	0.2

왕고들빼기	7.0

(27) ∼ (28) (현행과 같음)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(현행과 같음)

엽경채류	3.0

(30) (현행과 같음)

(31) 마이클로뷰타닐(Myclobutanil)

(현행과 같음)

왕고들빼기	3.0

(32) ∼ (37) (현행과 같음)

(38) 메탈락실(Metalaxyl)

(현행과 같음)

엽채류	5.0

엽경채류	0.2

(39) ∼ (53) (현행과 같음)

(54) 벤타존(Bentazone)

(현행과 같음)

배	0.05

사과	0.05

(55) 뷰프로페진(Buprofezin)

(현행과 같음)

토마토	3.0

풋마늘	0.05

마늘	0.05

살구	0.5

자두	1.0

(56) ∼ (58) (현행과 같음)

(59) 비터타놀(Bitertanol)

(현행과 같음)

엽경채류	10

(60) (현행과 같음)

(61) 비펜트린(Bifenthrin)

(현행과 같음)

시금치	7.0

참나물	7.0

양상추	3.0

녹두	0.05

엽채류	2.0

엽경채류	0.07

(62) (현행과 같음)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(현행과 같음)

들깻잎	0.3

(64) ∼ (67) (현행과 같음)

(68) 사이할로트린(Cyhalothrin)

(현행과 같음)

우엉잎	0.7

우엉	0.05

엽채류	2.0

엽경채류	0.3

(69) ∼ (70) (현행과 같음)

(71) 아미트라즈(Amitraz)

(현행과 같음)

살구	2.0

(72) ∼ (78) (현행과 같음)

(79) 알루미늄포스파이드[Aluminium Phosphide(Hydrogen phosphide)]

(현행과 같음)

양상추	0.05

(80) ∼ (84) (현행과 같음)

(85) 에토펜프록스(Etofenprox)

(현행과 같음)

녹두	0.3

(86) ∼ (100) (현행과 같음)

(101) 이미다클로프리드(Imidacloprid)

(현행과 같음)

토마토	1.0

고구마	0.05

블루베리	4.0†

라즈베리	1.5†

크랜베리	0.04†

망고	0.4†

올리브	0.5†

바나나	0.01†

파파야	0.6†

옥수수	0.01†

커피원두	0.7†

(102) ∼ (104) (현행과 같음)

(105) 이프로디온(Iprodione)

(현행과 같음)

마	0.05

마(건조)	0.05

(106) ∼ (109) (현행과 같음)

(110) 카두사포스(Cadusafos)

(현행과 같음)

바나나	0.01†

(111) 카바릴(Carbaryl: NAC)

(현행과 같음)

오렌지	7.0†

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(현행과 같음)

커피원두	0.03†

파파야	0.5†

면실	0.2†

(113) (현행과 같음)

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

(현행과 같음)

바나나	0.01†

(115) ∼ (117) (현행과 같음)

(118) 캡탄(Captan)

(현행과 같음)

감	0.7

풋마늘	7.0

(119) ∼ (132) (현행과 같음)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(현행과 같음)

산마늘잎	0.1

(134) (현행과 같음)

(135) 터부포스(Terbufos)

(현행과 같음)

참외	0.05

(136) ∼ (140) (현행과 같음)

(141) 트리아디메놀(Triadimenol)

(현행과 같음)

커피원두	0.15†

(142) ∼ (157) (현행과 같음)

(158) 페나리몰(Fenarimol)

(현행과 같음)

엽채류	2.0

엽경채류	1.0

(159) ∼ (185) (현행과 같음)

(186) 프로클로라즈(Prochloraz)

(현행과 같음)

바나나	5.0†

(187) ∼ (191) (현행과 같음)

(192) 프로피코나졸(Propiconazole)

(현행과 같음)

파	1.0

고구마	0.05

고구마줄기	0.05

(193) ∼ (205) (현행과 같음)

(206) 클로르페나피르(Chlorfenapyr)

(현행과 같음)

수수	0.5

엽채류	5.0

엽경채류	3.0

(207) (현행과 같음)

(208) 테부펜피라드(Tebufenpyrad)

(현행과 같음)

취나물	1.5

(209) 테플루벤주론(Teflubenzuron)

(현행과 같음)

배추	1.0

(210) 페나자퀸(Fenazaquin)

(현행과 같음)

취나물	2.0

(211) (현행과 같음)

(212) 플루페녹수론(Flufenoxuron)

(현행과 같음)

대추	1.0

대추(건조)	2.0

참나물	5.0

조	0.5

엽경채류	2.0

(213) ∼ (217) (현행과 같음)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(현행과 같음)

엽채류	30

엽경채류	7.0

(219) (현행과 같음)

(220) 디에토펜카브(Diethofencarb)

(현행과 같음)

키위	3.0

엽채류	30

엽경채류	15

(221) ∼ (224) (현행과 같음)

(225) 사이프로디닐(Cyprodinil)

(현행과 같음)

복숭아	2.0

(226) (현행과 같음)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(현행과 같음)

고려엉겅퀴	2.0

우엉잎	0.5

우엉	0.05

해바라기씨	0.01†

엽채류	5.0

엽경채류	1.0

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(현행과 같음)

왕고들빼기	3.0

엽채류	20

엽경채류	3.0

(229) (현행과 같음)

(230) 크레속심메틸(Kresoxim-methyl)

(현행과 같음)

풋마늘	3.0

왕고들빼기	3.0

엽채류	25

엽경채류	2.0

(231) 클로르플루아주론(Chlorfluazuron)

(현행과 같음)

무(잎)	7.0

무(뿌리)	0.2

엽채류	5.0

엽경채류	2.0

(232) ∼ (234) (현행과 같음)

(235) 포스티아제이트(Fosthiazate)

(현행과 같음)

부추	2.0

우엉잎	5.0

우엉	0.05

(236) (현행과 같음)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(현행과 같음)

사과	0.3

팥	0.05

(238) 플루디옥소닐(Fludioxonil)

(현행과 같음)

부추	7.0

산마늘잎	0.2

취나물	15

오미자(건조)	7.0

오미자	2.0

엽채류	15

엽경채류	5.0

(239) 플루아지남(Fluazinam)

(현행과 같음)

산수유(건조)	1.0

(240) ∼ (241) (현행과 같음)

(242) 루페뉴론(Lufenuron)

(현행과 같음)

비트(잎)	3.0

비트(뿌리)	0.3

아스파라거스	0.5

우엉잎	5.0

우엉	0.05

취나물	7.0

포도	2.0

엽채류	5.0

엽경채류	3.0

(243) ∼ (247) (현행과 같음)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(현행과 같음)

파	0.3

부추	0.3

대추            0.05

대추(건조)	0.5

(249) 에마멕틴벤조에이트

(Emamectin benzoate)

(현행과 같음)

고추	0.2

피망	0.2

파	0.4

부추	0.4

미나리	0.4

아스파라거스	0.05

(250) ∼ (272) (현행과 같음)

(273) 밀베멕틴(Milbemectin)

(현행과 같음)

대추	0.3

대추(건조)	0.3

(274) ∼ (284) (현행과 같음)

(285) 아크리나트린(Acrinathrin)

(현행과 같음)

취나물	3.0

엽채류	5.0

엽경채류	1.0

(286) 에트리디아졸(Etridiazole)

(현행과 같음)

들깻잎	0.1

(287) ∼ (289) (현행과 같음)

(290) 인독사카브(Indoxacarb)

(현행과 같음)

파	2.0

녹두	0.3

부추	3.0

조	0.5

(291) ∼ (308) (현행과 같음)

(309) 플루톨라닐(Flutolanil)

(현행과 같음)

풋콩	0.05

엽채류	15

엽경채류	10

(310) ∼ (320) (현행과 같음)

(321) 디노테퓨란(Dinotefuran)

(현행과 같음)

갓	0.1

(322) (현행과 같음)

(323) 보스칼리드(Boscalid)

(현행과 같음)

풋마늘	1.0

감귤류	2.0†

블루베리	10†

라즈베리	9.0†

호프	35†

체리	4.0†

엽경채류	30

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(현행과 같음)

대추	0.3

대추(건조)	0.3

(325) 사이아조파미드(Cyazofamid)

(현행과 같음)

엽채류	10

엽경채류	2.0

(326) ∼ (331) (현행과 같음)

(332) 클로티아니딘(Clothianidin)

(현행과 같음)

엽경채류	1.0

(333) ∼ (344) (현행과 같음)

(345) 피라클로스트로빈(Pyraclostrobin)

(현행과 같음)

파	4.0

감	0.5

들깻잎	20

대추(건조)	5.0

셀러리	4.0

취나물	20

호두	0.05

피스타치오	0.7†

(346) ∼ (348) (현행과 같음)

(349) 노발루론(Novaluron)

(현행과 같음)

파	0.7

녹두	0.5

포도	2.0

(350) ∼ (351) (현행과 같음)

(352) 메톡시페노자이드

(Methoxyfenozide)

(현행과 같음)

부추	2.0

미나리	2.0

(353) ∼ (354) (현행과 같음)

(355) 스피로디클로펜(Spirodiclofen)

(현행과 같음)

취나물	20

아보카도	0.9†

견과류	0.05†

(356) 에타복삼(Ethaboxam)

(현행과 같음)

엽채류	15

엽경채류	7.0

(357) 디티오카바메이트

(Dithiocarbamates)

◎ 잔류물의 정의 : Dithiocarbamate계 농약들의 합(CS2로서)

(현행과 같음)

풋마늘	3.0

대두	0.05

풋콩	0.05

마	0.05

마(건조)	0.05

(358) ∼ (369) (현행과 같음)

(370) 벤티아발리카브아이소프로필

(Benthiavalicarb-isopropyl)

(현행과 같음)

시금치	1.0

(371) 디니코나졸(Diniconazole)

(현행과 같음)

풋마늘	0.3

(372) ∼ (379) (현행과 같음)

(380) 피리달릴(Pyridalyl)

(현행과 같음)

파	15

미나리	15

수수	5.0

엽채류	15

엽경채류	7.0

(381) ∼ (385) (현행과 같음)

(386) 플로니카미드(Flonicamid)

(현행과 같음)

가지	0.2

다채	0.5

(387) ∼ (393) (현행과 같음)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(현행과 같음)

비트(잎)	10

비트(뿌리)	0.5

(395) ∼ (398) (현행과 같음)

(399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen)

(현행과 같음)

고추	1.0

피망	1.0

(400) ∼ (402) (현행과 같음)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(현행과 같음)

파	15

미나리	15

취나물	10

무(잎)	5.0

무(뿌리)	0.05

(404) 메트라페논(Metrafenone)

(현행과 같음)

참깨	0.2

(405) 사이에노피라펜(Cyenopyrafen)

(현행과 같음)

들깻잎	7.0

(406) ∼ (407) (현행과 같음)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

파	0.7

미나리	0.7

비트(잎)	0.05

비트(뿌리)	0.05

(409) (현행과 같음)

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(현행과 같음)

복숭아	5.0

수박	2.0

쌈배추	5.0

풋콩	1.0

대두	0.05

(411) ∼ (415) (현행과 같음)

(416) 클로란트라닐리프롤

(Chlorantraniliprole)

(현행과 같음)

비트(잎)	7.0

비트(뿌리)	0.2

양배추	0.3

무(잎)	10

무(뿌리)	0.05

우엉잎	10

우엉	0.05

(417) 플루벤디아마이드

(Flubendiamide)

(현행과 같음)

대추	2.0

대추(건조)	7.0

무(잎)	7.0

매실	1.0

머위	15

(418) ∼ (421) (현행과 같음)

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(현행과 같음)

녹두	0.05

(423) (현행과 같음)

(424) 피리플루퀴나존

(Pyrifluquinazon)

(현행과 같음)

고려엉겅퀴	1.0

(425) ∼ (426) (현행과 같음)

(427) 이미시아포스(Imicyafos)

(현행과 같음)

우엉잎	2.0

우엉	0.05

(428) 플루오피람(Fluopyram)

(현행과 같음)

배	0.7

사과	0.7

녹두	0.5

(429) (현행과 같음)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(현행과 같음)

가지	0.2

고려엉겅퀴	2.0

우엉잎	1.0

우엉	0.05

팥	0.05

(431) ∼ (432) (현행과 같음)

(433) 사이안트라닐리프롤

(Cyantraniliprole)

(현행과 같음)

올리브	1.5†

(434) (현행과 같음)

(435) 펜피라자민(Fenpyrazamine)

(현행과 같음)

오미자(건조)	5.0

오미자	2.0

키위	3.0

블루베리	4.0†

라즈베리	5.0†

(436) (현행과 같음)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(현행과 같음)

바나나	3.0†

건포도	5.7†

자두	1.5†

건자두	3.0†

(438) 피리오페논(Pyriofenone)

(현행과 같음)

왕고들빼기	10

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(현행과 같음)

고려엉겅퀴	5.0

우엉잎	10

우엉	0.05

팥	0.05

(440) ∼ (451) (현행과 같음)

(452) 아이소페타미드(Isofetamid)

◎ 잔류물의 정의 : Isofetamid와 GPTC의 합을 isofetamid로 함

(현행과 같음)

복숭아	2.0

사과	0.2

(453) ∼ (457) (현행과 같음)

(458) 사이클라닐리프롤

(Cyclaniliprole)

◎ 잔류물의 정의 : Cyclaniliprole과 NK-1375의 합을 cyclaniliprole로 함

고추	1.0

피망	1.0

엇갈이배추	0.5

배추	0.2

파	0.5

(459) 피플루뷰마이드

(Pyflubumide)

◎ 잔류물의 정의 : Pyflubumide와 Pyflubumide-NH의 합을 pyflubumide로 함

감	0.5

[별표 4] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (25) (현행과 같음)

(26) 플루톨라닐(Flutolanil)

(현행과 같음)

건삼	5.0

(27) ∼ (83) (현행과 같음)

(84) 이미다클로프리드(Imidacloprid)

◎ 잔류물의 정의 : Imidacloprid

건삼	0.05

수삼	0.05

[별표 5] (현행과 같음)

[별표 6] 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준

(1) (현행과 같음)

(2) 나이카바진(Nicarbazin) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의: N,N’-BIS- (4-nitrophenyl)urea

(현행과 같음)

(3)∼(26) (현행과 같음)

(27) 에토파베이트(Ethopabate) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의: Ethopabate와 m-phenetidine의 합을 ethopabate로 한다

(현행과 같음)

(28)∼(35) (현행과 같음)

(36) 죠렌(Zoalene) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의: Zoalene과 3-amino-5-nitro-o-toluamide(3-ANOT)의 합을 zoalene으로 한다

(현행과 같음)

(37)∼(65)  (현행과 같음)

(66) 콜리스틴(Colistin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의: Colistin A, B의 합을 colistin으로 한다

(현행과 같음)

(67)∼(172) (현행과 같음)

(173) 시프로헵타딘(Cyproheptadine) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Cyproheptadine

소근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

(174) 요오드퀴놀린설폰산(Iodo hydroxy quinoline sulfonic acid): 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Iodo hydroxy quinoline sulfonic acid

소근육	0.01

돼지근육	0.01

(175) 플루메타손(Flumethasone): 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Flumethasone

소근육	0.001

돼지근육	0.001

말근육          0.001

[별표 7] (현행과 같음)