식품의약품안전처 공고 제2020-427호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2020. 9. 28.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2020-427호

｢식품의 기준 및 규격｣(식품의약품안전처 고시 제2020-70호, 2020. 8. 4.)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 ｢행정절차법｣ 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2020년  9월  28일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

미생물 규격의 과학적·합리적 관리를 위하여 위해평가를 통하여 김치류 등의 클로스트리디움 퍼프린젠스 규격을 통계적 개념의 정량규격으로 개정하고, 원료용으로 사용하는 커피추출농축액의 미생물 규격을 완화하여 불필요한 규제를 합리적으로 개선하고자 함

식용근거가 확인된 식품원료 8종을 식품에 사용할 수 있는 원료목록에 추가하고 식품원료 목록 중 사용부위, 학명 등을 정비하여 식품원료 사용의 편의성을 증진하고자 함

어유의 비소기준을 중금속 구성 특성 반영 및 국제기준과의 조화를 위해 무기비소 기준으로 개정하고, 국내외에서 사용되는 농약 및 동물용의약품에 대한 잔류허용기준을 합리적으로 신설 및 개정하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

잔류허용기준이 신설되는 농약과 동물용의약품의 시험법을 신설하고, 올리고당 시험법을 개선하고, 미생물시험 시 시험조작의 무균여부 확인을 위한 음성대조군 시험을 시험법 상에 명확히 하여 시험결과의 정확성 및 신뢰성을 제고하고자 함

2. 주요 내용

가. 김치류 등 6종 식품의 클로스트리디움 퍼프린젠스 규격 개정[안 제2. 3. 4) (2) 가. 다)]

1) 미생물 규격의 과학적·합리적 관리를 위해 통계적 개념을 확대·도입 필요

2) 위해평가 결과에 따라 김치, 절임식품, 당절임, 조림류, 식초, 복합조미식품, 카레의 클로스트리디움 퍼프린젠스 규격을 통계적 개념의 정량 규격으로 개정

3) 통계적 개념의 확대 도입을 통해 미생물 검사의 대표성과 신뢰성 확보

나. 커피 중 미생물 규격 개정 [안 제5. 9. 9-2. 5) (4), 제5. 9. 9-2. 5) (5)]

1) 식품 제조·가공 원료로 사용하기 위해 반가공품도 최종제품과 동일한 규격이 적용되어 개선 필요

2) 최종 커피제품에서 미생물제어가 가능한 반가공 상태의 커피추출물은 세균수와 대장균군 규격 적용을 제외

3) 제품의 특성을 고려한 합리적 규격 적용으로 식품산업 활성화

다. 어유의 중금속 기준 개정[안 제2. 3. 5) (2) ④]

1) 어유의 중금속 구성 특성 및 국제기준과의 조화를 위해 중금속 기준 개정 필요

2) 어유의 비소 기준을 무기비소 기준으로 개정

3) 중금속 기준에 적합한 어유의 수입‧ 생산 및 유통이 가능함에 따라 식품산업의 활성화 및 위해도가 큰 무기비소 기준 관리로 식품 안전관리 및 국민 건강 보호

라. 식품원료 목록 개정[안 별표 1, 별표 2, 별표 3]

1) 식용근거가 확인된 원료를 신규 등재하고, 품목명, 기타명칭, 학명, 사용부위 등이 명확하지 않은 식품원료의 정비 필요

2) 상동나무, 노랑코홍어, 두점갑오징어, 빨강오징어, 창끝갑오징어,  Chaceon biocolor, Idiot rockfish, Northern shrimp 등 8품목을 [별표 1]의 식품에 사용할 수 있는 원료 목록에 추가

3) 식품원료 목록 중 학명수정(4품목), 사용부위 명확화(2품목), 명칭수정(7품목)하여 식품원료 목록을 정비

4) 식품에 사용 가능한 원료의 품목 확대로 다양한 제품 개발 등 식품산업 활성화에 기여하고 식품원료목록 정비를 통해 식품원료 사용의 편의성을 증진

마. 농산물 중 농약 잔류허용기준 신설 및 개정[안 별표 4 중 (20) 다이쾃, (24) 디클로베닐, (79) 알루미늄포스파이드, (116) 카탑, (127) 클로르메쾃, (210) 페나자퀸, (225) 사이프로디닐, (228) 아족시스트로빈, (237) 피메트로진, (239) 플루아지남, (248) 아바멕틴, (283) 아시벤졸라-에스-메틸, (304) 프로베나졸, (317) 하이멕사졸, (324) 비페나제이트, (349) 노발루론, (353) 메트코나졸, (357) 디티오카바메이트, (430) 설폭사플로르, (437) 플룩사피록사드, (441) 피리벤카브, (459) 피플루뷰마이드, (500) 피디플루메토펜, (509) 브로플라닐라이드, (513) 아피도피로펜, (514) 가스가마이신, (515) 펜피콕사미드]

1) 「농약관리법」에 따른 등록(예정) 농약 및 수입 농산물의 잔류허용기준 설정 신청에 따른 농약 잔류허용기준 신설 및 개정 필요

2) 다이쾃 등 27종의 농약 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 합리적으로 신설 및 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

바. 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준 신설 및 개정[안 별표 5 중 (108) 톨트라주릴, (117) 설피린, (185) 메토밀, (193) 루바베그론]

1)「약사법」에 사용이 허가된 동물용의약품의 안전관리 및 수입 축산물에 동물용의약품 잔류허용기준 설정 신청에 따른 관련 기준 신설 필요

2) 톨트라주릴 등 4종의 동물용의약품 잔류허용기준 신설·개정

3) 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준을 합리적으로 신설 및 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

사. 일반시험법 개정 등[안 제5. 22. 22-2 5) (3), 제8. 4., 제8. 6.2.1, 제8. 7.1.4.234 ∼ 235, 안 제8. 8.3.118]

1) 잔류허용기준이 신설된 농약과 동물용의약품의 관리를 위한 시험법 신설

2) 미생물시험 시 음성대조군 시험을 하도록 시험법 개정

3) 이소말토올리고당과 갈락토올리고당 시험법 개정

4) 즉석조리식품 중 멸균제품은 대장균 규격이 적용되지 않도록 문구 명확화

5) 과학적인 시험법 신설·개정으로 검사 신뢰도를 제고하고 규정의 문구를 명확히 하여 해석상의 혼란 방지

3. 의견 제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는 단체 또는 개인은 2020년 11월 27일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처장(우편번호 : 28159, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명2로 187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2417, 팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2020-00호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2020년  0월  00일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제2. 3. 4) (2) 가. 다)를 다음과 같이 한다.

다) 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

대상 식품	규 격
① 가)의 대상식품 중 햄류, 소시지류, 식육추출가공품, 알가공품	n=5, c=1, m=10, M=100 (멸균제품은 n=5, c=0, m=0/25g)
② 가)의 대상식품 중 생햄, 발효소시지, 자연치즈, 가공치즈	n=5, c=2, m=10, M=100 (멸균제품은 n=5, c=0, m=0/25g)
③ 가)의 대상식품 중 장류(메주 제외), 젓갈류, 고춧가루 또는 실고추, 향신료가공품, 김치류, 절임류, 조림류, 복합조미식품, 식초, 카레분 및 카레(액상제품 제외)	n=5, c=2, m=100, M=1,000 (멸균제품은 n=5, c=0, m=0/25g)
④ 위 ①, ②, ③ 을 제외한 가)의 대상식품	n=5, c=0, m=0/25g

제2. 3. 5) (2) 중 ④를 다음과 같이 한다.

④ 가공식품

대상식품	납(mg/kg)	비소(mg/kg)	무기비소(mg/kg)
① 식물성유지류, 기타동물성유지, 혼합식용유, 향미유, 가공유지, 쇼트닝, 마가린	0.1 이하	0.1 이하	-
② 어유	0.1 이하	-	0.1 이하
③ 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영･유아용 이유식, 영･유아용 특수조제식품	0.01 이하 [분말제품의 경우 희석하여 섭취하는 형태(제조사가 제시한 섭취방법)를 반영하여 기준적용]	-	0.1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)
④ 특수의료용도등식품(영･유아용 특수조제식품 제외), 과자, 시리얼류, 면류	-	-	0.1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)
⑤ 위 ②, ③, ④를 제외한 모든 식품	-	-	1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)

* 총비소 시험결과 무기비소 기준 초과 검출 시 무기비소로 시험하여 기준 적용

제5. 9. 9-2. 5) (4) 중 “액상제품에 한하며”를 “액상제품 중 더 이상 제조, 가공 하지 않고 그대로 섭취하는 제품에 한하며”로 한다.

제5. 9. 9-2. 5) (5) 중 “액상제품에 한한다 ”를 “액상제품 중 더 이상 제조, 가공 하지 않고 그대로 섭취하는 제품에 한한다”로 한다.

제5. 22. 22-2. 5) (3) 중 “살균제품은 제외한다.”를 “살균, 멸균제품은 제외한다.”로 한다.

제8. 4. 4.1부터 4.26까지 외의 부분 중 “유지하여야 한다.”를 “유지하여야 한다. 시험 시 음성대조군을 사용하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.5. 4.5.1. 나. 1) 중 “일반세균수로 한다.”를 “일반세균수로 한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.6. 나. 2) 중 “양성으로 한다.”를 “양성으로 한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”

제8. 4. 4.7. 4.7.1. 가. 중 “이상씩 가한다.”를 “이상씩 가한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL을 각각 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.7. 4.7.1. 나. 중 “배지(배지 3)에 가한다.”를 “배지(배지 3)에 가한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.7. 4.7.1. 다. 중 “가하여 중첩시킨다.”를 “가하여 중첩시킨다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.7. 4.7.2. 가. 1) 중 “두배농도”를 “2배 농도”로 하고 “1 mL씩 사용한다.”를 “1 mL씩 사용한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.7. 4.7.2. 가. 2) 중 “두배농도”를 “2배 농도”로 하고 “1 mL씩 사용한다.”를 “1 mL씩 사용한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.7. 4.7.2. 나. 중 “유무를 결정한다.”를 “ 유무를 결정한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.7. 4.7.2. 다. 중 “24±2시간 배양한다.”를 “24±2시간 배양한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.8. 4.8.1. 가.  중 “음성으로 한다.”를 “음성으로 한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.8. 4.8.2. 가. 1) 중 “시험용액 10 mL를 첨가할 경우 2배 농도의 배지 10 mL를 이용한다.”를 “단, 10 mL를 접종할 때에는 2배 농도 EC 배지를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석단계액을 각각 1 mL씩 사용한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.8. 4.8.2. 가. 2) (1) 중 “시험용액으로 사용한다.”를 “시험용액으로 사용한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.8. 4.8.2. 나. 중 “24∼48시간 배양한다.”를 “24∼48시간 배양한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”

제8. 4. 4.9 4.9.1. 중 “균수를 산출한다.”를 “균수를 산출한다. 모든 시험에서는 검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.11. 가. 1) 중 “증균배양한다.”를 “증균배양한다. 시료를 가하지 아니한 동일 펩톤식염완충액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.11. 가. 2) 중 “18～24시간 배양한다.”를 “18～24시간 배양한다. 시료를 채취하지 않은 동일 멸균가아제나 스폰지로 대조시험액을 제조하고 함께 시험하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.11. 가. 3) 중 “18～24시간 배양한다.”를 “18～24시간 배양한다. 시료 채취 시 사용한 동일 BPW 또는 BPD를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.11. 가. 4) 중 “24±2시간 동안 증균한다.”를 “24±2시간 동안 증균한다. 시료를 넣지 않은 멸균 TSB를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.12. 4.12.1. 가. 중 “18∼24시간 증균배양한다.”를 “18∼24시간 증균배양한다. 검체를 가하지 아니한 10% NaCl을 첨가한 TSB배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.12. 4.12.2. 가. 중 “집락을 계수한다.”를 “집락을 계수한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.13. 4.13.1. 가. 중 “18～24시간 증균배양한다.”를 “18～24시간 증균배양한다. 검체를 가하지 아니한 Alkaline 펩톤수를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.13. 4.13.2. 가. 중 “1 mL이 되게 도말한다.”를 “1 mL이 되게 도말한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.14. 4.14.1. 가. 중 “혐기배양한다.”를 “ 혐기배양한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.14. 4.14.2. 가. 중 “혐기 배양한다.”를 “혐기 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액 1mL을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.15. 가. 중 “2차 증균을 실시한다.”를 “2차 증균을 실시한다. 모든 시험에서는 검체를 가하지 아니한 동일 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.16. 가. 중 “24시간 증균배양한다.”를 “24시간 증균배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 mTSB를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.17. 가. 중 “48시간 배양한다.”를 “48시간 배양한다. 검체를 가하지 아니하고 동일한 방법으로 제조한 ITC 배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.18. 4.18.1. 가. 중 “37℃에서 24시간 배양한다.”를 “37℃에서 24시간 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.18. 4.18.2. 가. 중 “집락을 계수한다.”를 “집락을 계수한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.19. 가. 1) 중 “첨가하여 배양한다.”를 “첨가하여 배양한다. 모든 시험에서는 시험용액을 가하지 아니한 동일 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.19. 가. 2) 중 “48±2시간 배양한다.”를 “48±2시간 배양한다. 시료를 채취하지 않은 동일 멸균가아제나 스폰지로 대조시험액을 제조하고 함께 시험하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.19. 가. 3) 중 “48±2시간 배양한다.”를 “48±2시간 배양한다. 시료 채취 시 사용한 동일 BPW 또는 BPD를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.20. 가. 중 “26℃에서 7일간 배양한다.”를 “26℃에서 7일간 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 젤라틴 인산완충액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.(검체를 그대로 사용하는 액상 검체는 검체를 가하지 아니한 동일 Cook Meat 배지와 TPGY배지로 무균여부를 확인)”로 한다.

제8. 4. 4.21. 가. 중 “2차 증균 배양한다.”를 “2차 증균 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 멸균증류수를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.22. 가. 중 “24시간 배양한다.”를 “24시간 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.23. 가. 중 “8주간 배양한다.”를 “ 8주간 배양한다. 유제액을 제조하여 사용하는 경우에는 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 4. 4.24. 가. 중 “도말하여 확인한다.”를 “도말하여 확인한다. 검체를 가하지 아니한 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.”로 한다.

제8. 6. 6.2 중 6.2.1 중 나. 및 다.를 각각 다음과 같이 한다.

나. 이소말토올리고당

1) 장치

액체크로마토그래프-시차굴절검출기(Refractive Index detector, RI)

2) 시약 및 시액

가) 표준당

단당류—Glucose

이당류—Maltose

삼당류—Maltotriose

사당류—Maltotetraose

오당류—Maltopentaose

육당류—Maltohexaose

칠당류—Maltoheptaose

나) 물: HPLC용

다) 50% 에탄올

라) 아세토니트릴: HPLC용

3) 표준용액의 조제

각 표준당을 물로 녹여 100 mg/mL 농도가 되도록 조제한 후 혼합하여 표준원액으로 한다. 표준원액을 물로 희석하여 625∼10,000 μg/mL 범위로 조제하여 표준용액으로 한다.

4) 시험용액의 조제

이소말토올리고당으로서 약 0.1∼0.5 g이 되도록 검체를 취해 물 또는 50% 에탄올(단백질을 함유한 경우) 15 mL에 용해한 후 50 mL로 정용한다(필요시  1,000 ×  g에서  10 분간 원심분리 한다). 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

5) 시험방법

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 배제형 이온교환계

① 칼럼: Asahipak NH2P-50 4E(4.6 mm i.d × 250 mm × 5 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 30℃

③ 이동상: 65% 아세토니트릴

④ 유속: 1.0 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

(2) 역상분배계

① 칼럼: RSpak DC-613(6.0 mm i.d × 150 mm × 6 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 50℃

③ 이동상: 70% 아세토니트릴

④ 유속: 0.8 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 시험용액과 표준용액 피크의 머무름 시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 10 μL씩 주입하여 위의 조건에서 시험한다. 표준용액의 피크 면적 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한다.

가) 배제형 이온교환계에서 분석한 피크면적 또는 높이에 의해 각 중합도의 함유량(mg/mL)이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

DP1(단당류): A

DP2(이당류): B

DP3(삼당류): C

DP4(사당류): D

DP5(오당류): E

DP6(육당류): F

DP7(칠당류): G

나) 역상분배계에서 시료를 분석한 Data의 각 당분함유율(%)은 다음과 같다.

DP1 Glucose	A1

DP1 Glucose 이외의 단당류	A2

DP2 Maltose	B1

DP2 Maltose 이외의 이당류	B2

DP3 Maltotriose	C1

DP3 Maltotriose 이외의 삼당류	C2

DP4 Maltotetraose	D1

DP4 Maltotetraose 이외의 사당류	D2

DP5 Maltopentaose	E1

DP5 Maltopentaose 이외의 오당류	E2

DP6 Maltohexaose	F1

DP6 Maltohexaose 이외의 육당류	F2

DP7 Maltoheptaose	G1

DP7 Maltoheptaose 이외의 칠당류	G2

DP1 Glucose(mg/mL)             A × [eqn: rm {A _{1}} over {A _{1} ＋A _{2}}] ＝ a

DP2 Maltose(mg/mL)	B × [eqn: rm {B _{1}} over {B _{1} ＋B _{2}}] ＝ b

DP3 Maltotriose(mg/mL)          C × [eqn: rm {C _{1}} over {C _{1} ＋C _{2}}] ＝ c

DP4 Maltotetraose(mg/mL)        D ×[eqn: RM { D SUB1} over { D SUB1 ＋D SUB2}]＝ d

DP5 Maltopentaose(mg/mL)       E ×[eqn: RM { E SUB1} over { E SUB1 ＋E SUB2}] ＝ e

DP6 Maltohexaose(mg/mL)        F ×[eqn: RM { F SUB1} over { F SUB1 ＋F SUB2}] ＝ f

DP7 Maltoheptaose(mg/mL)       G ×[eqn: RM { G SUB1} over { G SUB1 ＋G SUB2}] ＝ g

이소말토올리고당 함량(%)	=	T-(a+b+c+d+e+f+g)	× h × i ×	100
		시료채취량(g)		1,000

T(배제형 이온교환계에서 분석한 당의 함유량) = A+B+C+D+E+F+G

h : 시험용액의 전량(mL)

i : 시험용액의 희석배수

다. 갈락토올리고당(전이갈락토올리고당)

1) 장치

액체크로마토그래프-시차굴절검출기(Refractive Index detector, RI)

2) 시약 및 시액

가) 표준당

Glucose

Galactose

Lactose

Galactooligosaccharides(순도 70% 이상)

나) 물: HPLC용

다) 20%(w/v) 설포살리실린산용액: 설포살리실산(Sulfosalicylic acid) 20 g에 물을 넣어 용해시켜 100 mL로 한다.

라) 아세토니트릴: HPLC용

3) 표준용액의 조제

Galactooligosaccharides(GOS) 4g을 물 20 mL로 녹여 50 mL로 정용한 후 혼합하여 표준원액으로 한다. 표준원액을 이동상으로 희석하여  8,000∼40,000 μg/mL 범위로 조제하여 표준용액으로 한다. 머무름시간 확인을 위해 glucose, galactose, lactose는 50 mg씩 10 mL의 이동상에 녹여(5,000 μg/mL) 표준용액으로 한다.

4) 시험용액 조제

갈락토올리고당으로서 0.1∼1 g이 되도록 검체를 취해 물 20 mL에 용해한 후 50 mL로 정용한다. 단, 단백질 제거 조작이 필요한 시료에 대해서는 20% 설포살리실산용액을 여러 방울 첨가하여 생긴 불용성 단백질을 1,000 × g에서 10분간 원심분리하여 제거한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

5) 시험방법

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 배제형 이온교환계

① 칼럼: Shodex SC1011(8.0 mm i.d × 300 mm × 6 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 80℃

③ 이동상: 물

④ 유속: 0.4 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

(2) 역상분배계

① 칼럼: TSK GEL NH2 -100(4.6 mm i.d × 150 mm × 3 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 35℃

③ 이동상: 70% 아세토니트릴

④ 유속: 0.8 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 시험용액과 표준용액 피크의 머무름 시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

가) 배제형 이온교환계

표준용액과 시험용액을 각각 2 μL씩 주입하여 위의 조건에서 시험한다. 표준용액의 피크 면적 또는 높이를 구하여 각 당류의 함유량(mg/mL)이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

DP2(이당류): A

DP3(삼당류 이상): B

그림 1. 갈락토올리고당 크로마토그램(배제형 이온교환계)

나) 역상분배계

10,000 μg/mL 농도의 GOS 표준용액, 5,000 μg/mL 농도의  glucose, galactose, lactose 표준용액과 시험용액을 각각 10 μL씩 주입하여 위의 조건에서 시험하여 각 당류의 비율(%)을 구한다(단, 용액의 농도는 필요에 따라 조절 가능하다). 전체 당 함량을 100으로 했을 때 각 중합도의 당류 비율은 다음과 같다.

DP1(전체 당 함량 중 단당류의 비율): a

DP2(전체 당 함량 중 이당류의 비율): b

DP3(전체 당 함량 중 삼당류 이상의 비율): c

(a + b + c = 100(%))

그림 2. 갈락토올리고당 크로마토그램(역상분배계)

갈락토올리고당함량(%)	=	[(A×d/b)+B]	× e × f ×	100
		시료채취량(g)		1,000

b : 전체 당 함량 중 이당류의 비율

d : 전체 당 함량 중 lactose를 제외한 이당류의 비율

e : 시험용액의 전량(mL)

f : 시험용액의 희석배수

제8. 7. 7.1 7.1.4 중 7.1.4.234 및 7.1.4.235를 다음과 같이 각각 신설한다.

7.1.4.234 가스가마이신(Kasugamycin)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 가스가마이신을 메탄올로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 가스가마이신 표준품을 물에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-lipophilic balance cartridge): Divinylbenzene- N-vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

7) 특이사항: 가스가마이신은 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용하며, 시험용액은 조제 후 즉시 분석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 5 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 5 g, 서류, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 5 g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 메탄올 10 mL를 가한 뒤 1분간 흔들고 1 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 추출용액의 pH를 13으로 조절한다. pH 조절 후 10분간 진탕하고 4℃, 7,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액 전량을 취하는 방법으로 2회 반복 추출한다. 취하여진 상층액에 메탄올을 가하여 부피를 25 mL로 맞춘다.

2) 정제

HLB 카트리지에 메탄올 3 mL와 물 3 mL를 차례로 넣고 2∼3 방울/초의 속도로 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1)추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지 상단에 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 카트리지 상단에 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: HILIC(아마이드계) 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1% 포름산 함유 물

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
2.0	10	90
2.1	30	70
7.0	90	10
7.5	90	10
8.0	10	90
10.0	10	90

라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
가스가마이신 (Kasugamycin)	379.4	379.16	380	1121)	21
				156	14
				200	15

1) 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

가스가마이신(3.7분)

* 분석기기: LC(ShimadzuⓇ Nexera X2), MS/MS(ShimadzuⓇ LCMS-8060),

컬럼(XBridgeⓇ Amide, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 3.5 μm)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 가스가마이신을 확인한다.

7.1.4.235 펜피콕사미드(Fenpicoxamid)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 펜피콕사미드를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-solid phase extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 펜피콕사미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 1차 2차 아민(PSA, Primary secondary amine), C18(Octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 5 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 5 g, 서류, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 5 g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다(곡류 및 두류의 경우 증류수 5 mL 첨가 후 30분간 방치). 아세토니트릴 20 mL를 가한 뒤 10분간 진탕하고 4,000 G에서 5분간 원심분리한다. 상층액 전량을 취한 후 아세토니트릴 20 mL를 재차 가하여 위 과정을 반복한다. 앞의 상층액과 합하여 부피를 50 mL로 맞춘 후 상층액 8 mL를 취한다.

2) 정제

d-SPE(1차 2차 아민 400 mg 및 C18 400 mg)가 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1)추출’로부터 얻은 상층액 8 mL를 가하고 30초간 와류교반기 등을 이용하여 충분히 혼합한 후 이를 4℃, 4,000 G에서 5분간 원심분리한다. 정제된 상층액을 4 mL 취하여 질소 농축한 후 아세토니트릴 2 mL로 재용해하고, 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: C18계 역상 칼럼 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
3.0	20	80
3.5	90	10
5.0	100	0
7.0	100	0
8.0	20	80
10.0	20	80

라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage: 5.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
펜피콕사미드 (Fenpicoxamid)	614.6	614.25	615	2391)	37
				515	20
				585	16

1) 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

펜피콕사미드(4.8분)

* 분석기기: LC (PerkinElmerⓇ QSight™ LX50), MS/MS (PerkinElmerⓇ QSight™ 210),

칼럼(Capcell core ADME, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 2.7 μm)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 펜피콕사미드를 확인한다.

제8. 8. 8.3.118 루바베그론(Lubabegron)을 다음과 같이 신설한다.

8.3.118 루바베그론(Lubabegron)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세트산 함유 아세토니트릴/메탄올 혼합용액(1:1, v/v)으로 추출하고 헥산 또는 일차이차아민(PSA)로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 루바베그론 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 루바베그론 표준용액 100 mg/L 농도로부터 0.01, 0.02, 0.04, 0.08, 0.16 µg/mL 농도가 되도록 메탄올로 희석하여 혼합한다.

마) 10 mM 아세테이트 완충용액(PH 4.6): 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산나트륨 0.82 g 을 넣고 물로 표시선까지 채운다. 아세트산으로 pH 4.6이 되도록 조정하여 사용한다.

바) 1% 아세트산(Acetic acid) 함유 아세토니트릴/메탄올 혼합용액(1:1, v/v): 100 mL 용량플라스크에 아세트산 1 mL을 넣고 아세토니트릴/메탄올1:1, v/v): 혼합용액으로 표시선까지 채운다.

사) 0.1 mM 불화암모늄(Ammonium fluoride)용액 : 1,000mL 용량플라스크 불화암모늄 3.7 mg을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 첨가시료의 조제

정량을 하는 경우 조직표준곡선 작성을 위하여 루바베그론이 검출되지 않은 음성대조시료 2 g씩 6개를 준비한 후 Blank를 제외하고 각 표준용액을 0.2 mL씩 가하여 0.001, 0.002, 0.004, 0.008, 0.016 µg/g가 되도록 조제한다.

6) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 10 mM 아세테이트 완충용액 (pH 4.6) 2 mL 을 넣고 2분간 초음파 처리하여 균질화한다. β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-Glucuronidase/Arylsufates) 20 µL첨가하고 65℃에서 1시간 중탕한 후 상온에서 냉각한다. 이 용액에 1% 아세트산 함유 아세토니트릴/메탄올 혼합용액을 12 mL 가하여 10분간 초음파 처리 후 15분간 진탕하고 –4℃에서 9,300 G로 10분간 원심분리한다. (㉠돼지고기를 제외한 축수산물의 경우, 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액을 취하여 헥산 12 mL을 넣고 2분간 진탕한다. -4℃에서 9,300 G로 5분간 원심분리한 후 하층액을 취하여 감압농축한다. ㉡돼지고기의 경우, PSA 500 mg 이 담겨진 50 mL 원심분리관에 상층액을 취하여 5분간 진탕한다. -4℃에서 9,300 G로 5분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 감압농축한다.) 잔류물에 50% 메탄올 1 mL을 넣어 녹이고 상온에서 15,800 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (Xbridge, 2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼 온도 : 40℃

(가) 이동상 A : 0.1 mM 불화암모늄 용액

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
4.0	0	100
7.0	0	100
7.01	50	50
10.0	50	50

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/분

(4) 주입량 :  5 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Capillary voltage :  3.6 kV (Positive), 2.8 kV (Negative)

(4) Collision gas : 아르곤(Ar)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석성분	이온화 (Ionization mode)	분자량 (molecular weight)	선구이온 (Precursor ion,, m/z)	생성이온 (Production, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
루바베그론 (Lubabegron)	+	499.19	500	215	29
				250	20
				251	25

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

8) 정성 및 확인시험

가) 정성 및 확인

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품의 크로마토그램

루바베그론 (3.3분)

그림 1. 루바베그론 표준용액(0.004 μg/mL)의 크로마토그램

9) 정량시험

가) 정량

정성 및 확인시험과 똑같은 조건에서 Blank 시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계 : 0.0002 mg/kg

[별표 1] 1. 중 A가014950을 다음과 같이 신설한다.

A가014950	겨자무	호스래디쉬(Horseradish), 서양고추냉이	Armoracia rusticana L.	뿌리

[별표 1] 1. 중 A가015600을 다음과 같이 한다.

A가015600	고들빼기	Sonchus-leaf crepidiastrum	Crepidiastrum sonchifolium (Bunge) Pak & Kawano / Youngia sonchifolia (Bunge) Maxim. / Crepidiastrum sonchifolium (Maxim.) Pak & Kawano	뿌리, 잎

[별표 1] 1. 중 A가019200을 다음과 같이 한다.

A가019200	과라나	Guarana	Paullinia cupana Kunth	열매, 씨앗

[별표 1] 1. 중 A가043000을 다음과 같이 한다.

A가043000	닥풀	딱나무, 금화규, Aibika, Aurea helianthus	Hibiscus manihot L. / Broussonetia kaempferi Siebold / Abelmoschus manihot	잎

[별표 1] 1. 중 A가075400을 다음과 같이 한다.

A가075400	바나나	Banana	Musa paradisiaca L. / Musa sapientum L. / Musaacuminata Colla	꽃, 열매

[별표 1] 1. 중 A가099850을 다음과 같이 신설한다.

A가099850	상동나무	-	Sageretia thea (Osbeck) M. C. Johnst.	열매

[별표 1] 1. 중 A가101000을 삭제한다.

[별표 1] 1. 중 A가101500을 다음과 같이 한다.

A가101500	서양산사자	산사나무, 아그배나무, Maybush, Maytree, Mayblossom, Mayflower, Thorn-appletree, Whitethorn, Hawthorn berry	Crataegus oxyacantha L.	잎

[별표 1] 1. 중 A가104800을 다음과 같이 한다.

A가104800	셀러리	셀러리악(Celeriac), Celery, Smallage, Garden celery, Wild celery	Apium graveolens var. dulce Pers	뿌리, 잎, 씨앗, 줄기

[별표 1] 1. 중 A가112900을 다음과 같이 한다.

A가112900	신양벚나무	양앵두, 큰양벗나무, 신양벚, 신벗나무, Sour Cherry, Tart Cherry	Prunus cerasus L. / Cerasus acida P.Gaertn. & al.	열매(씨앗 제외)

[별표 1] 1. 중 A가128400을 다음과 같이 한다.

A가128400	오크리프	잎상추, Oak leaf lettuce, 파게로	Lactuca sativa L. var. crispa	잎

[별표 1] 1. 중 A가148550을 다음과 같이 신설한다.

A가148550	쥐오줌풀	Valerian Root	Valeriana fauriei Briq.	어린잎	-

[별표 1] 2. 중 A나019350을 다음과 같이 신설한다.

A나019350	노랑코홍어	Yellownose skate	Zearaja chilensis	-

[별표 1] 2. 중 A나029750을 다음과 같이 신설한다.

A나029750	두점갑오징어	애기갑오징어	Sepia kobiensis	-

[별표 1] 2. 중 A나050150을 다음과 같이 신설한다.

A나050150	빨강오징어	Neon flying squid	Ommastrephes bartramii	-

[별표 1] 2. 중 A나055900을 다음과 같이 한다.

A나055900	식용달팽이	-	Helix pomatia / Nesiohelix samarangae / Achatina fulica (Bowdich) Achatinidae / Helix aspersa	-

[별표 1] 2. 중 A나074350을 다음과 같이 신설한다.

A나074350	창끝갑오징어	-	Sepia stellifera	-

[별표 1] 2. 중 A나092850을 다음과 같이 신설한다.

A나092850	Idiot rockfish	Longspine thoryhead	Sebastolobus altirelis	-

[별표 1] 2. 중 A나093505을 다음과 같이 신설한다.

A나093505	Northern shrimp	-	Pandalus borealis	-

[별표 1] 2. 중 A나093510을 다음과 같이 신설한다.

A나093510	Pacific golden crab	-	Chaceon bicolor	-

[별표 2] 1. 중 B가006700을 다음과 같이 한다.

B가006700	서양산사자	산사나무, 아그배나무, Maybush, Maytree, Mayblossom, Mayflower, Thorn-appletree, Whitethorn, Hawthorn berry	Crataegus oxyacantha L.	열매, 꽃, 씨앗	-

[별표 3] 중 C000100을 다음과 같이 한다.

C000100	갈색거저리 유충	밀웜, Mealworm, 고소애	Tenebrio molitor L.	-

[별표 3] 중 C000400을 다음과 같이 한다.

C000400	흰점박이꽃 무지유충	굼뱅이, 꽃뱅이	Protaetia brevitarsis	-

[별표 4] (20) 다이쾃(Diquat) 중 “완두 0.1T”을 삭제하고, “두류 0.5T”를 “두류 0.9†”로 한다.

[별표 4] (24) 디클로베닐(Dichlobenil) 중 다음 항목을 신설한다.

쌀	0.05

[별표 4] (79) 알루미늄포스파이드[Aluminium Phosphide(Hydrogen phosphide)] 중 다음 항목을 신설한다.

감귤	0.05

[별표 4] (116) 카탑(Cartap) 중 다음 항목을 신설한다.

가지	0.05

[별표 4] (127) 클로르메쾃(Chlormequat) 중 다음 항목을 신설한다.

트리티케일	5.0†

[별표 4] (210) 페나자퀸(Fenazaquin) 중 “호프 30T”을 “호프 30†”으로 한다.

[별표 4] (225) 사이프로디닐(Cyprodinil) 중 다음 항목을 신설한다.

석류	5.0†

[별표 4] (228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin) 중 “취나물 3.0”을 “취나물 7.0”으로 한다.

[별표 4] (237) 피메트로진(Pymetrozine) 중 “상추 1.0”을 “상추 15”로 한다.

[별표 4] (239) 플루아지남(Fluazinam) 중 다음 항목을 신설한다.

땅콩	0.01†

[별표 4] (248) 아바멕틴(Abamectin) 중 “감귤 0.02”를 “감귤 0.07”로 한다.

[별표 4] (283) 아시벤졸라-에스-메틸(Acibenzolar-S-methyl) 중  다음 항목을 각각 신설한다.

무(뿌리)	0.3

무(잎)	1.0

[별표 4] (304) 프로베나졸(Probenazole) 중 다음 항목을 신설한다.

토마토	0.05

[별표 4] (317) 하이멕사졸(Hymexazol) 중 다음 항목을 신설한다.

파	0.05

[별표 4] (324) 비페나제이트(Bifenazate) 중 “호프 20T”을 “호프 20†”으로 한다.

[별표 4] (349) 노발루론(Novaluron) 중 “블루베리 7.0T”을 “블루베리 7.0†”으로 한다.

[별표 4] (353) 메트코나졸(Metconazole) 중 “파 1.0”을 “파 5.0”으로 한다.

[별표 4] (357) 디티오카바메이트(Dithiocarbamates) 중 “블루베리 5.0T”을 “블루베리 5.0”으로 한다.

[별표 4] (430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor) 중 “고수(잎) 0.05T”를 “고수(잎) 10”으로 하고, “수수 0.08T”을 “수수 0.3†”으로 한다.

[별표 4] (437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad) 중 “딸기 2.0”을 “딸기 4.0†”으로 한다.

[별표 4] (441) 피리벤카브(Pyribencarb) 중 “딸기 0.5”를 “딸기 2.0”으로 한다.

[별표 4] (459) 피플루뷰마이드(Pyflubumide) 중 다음 항목을 신설한다.

가지	0.07

[별표 4] (500) 피디플루메토펜(Pydiflumetofen) 중 다음 항목을 신설한다.

수수	3.0†

[별표 4] (509) 브로플라닐라이드(Broflanilide) 중 “무(잎) 2.0”을 “무(잎) 5.0”으로 하고, “수박 0.05”를 “수박 0.07”로 하며, “토마토 0.3”을 “토마토 1.0”으로 한다.

[별표 4] 중 (513) ∼ (515)를 다음과 같이 신설한다.

(513) 아피도피로펜(Afidopyropen)

◎ 잔류물의 정의 : Afidopyropen

가지	0.05

딸기	0.2

무(뿌리)	0.05

무(잎)	0.1

(514) 가스가마이신(Kasugamycin)

◎ 잔류물의 정의 : Kasugamycin

가지	0.3

감귤	0.2

감자	0.05

갓	8.0

건삼	0.05

고수(잎)	2.0

고추	1.5

근대	8.0

냉이	8.0

당근	0.2

들깻잎	5.0

딸기	0.3

마	0.05

마(건조)	0.05

마늘	0.05

머위	0.05

멜론	0.2

무(뿌리)	0.05

무(잎)	2.0

미나리	0.5

배추	0.1

부추	0.7

브로콜리	0.2

비트	0.15

상추	10

셀러리	0.5

수박	0.05

수삼	0.05

시금치	3.0

쌀	0.07

쑥갓	8.0

양배추	0.2

양상추	10

양파	0.05

엇갈이배추	0.3

오이	0.2

참외	0.3

청경채	8.0

취나물	8.0

치커리	8.0

키위	0.05

토마토	0.5

파	0.3

풋마늘	0.05

피망	1.5

(515) 펜피콕사미드(Fenpicoxamid)

◎ 잔류물의 정의 : Fenpicoxamid

바나나	0.15†

[별표 4] 주3. 중 “24. 생약시험법”을 “29. 생약시험법”으로 한다.

[별표 5] (108) 톨트라주릴(Toltrazuril) 중 다음 항목을 신설한다.

염소근육	0.1

염소지방	0.15

염소간	0.5

염소신장	0.25

[별표 5] (117) 설피린(Sulpyrine, Dipyrone, Metamizole) 중 다음 항목을 신설한다.

양근육	0.1

양지방	0.1

양간	0.1

양신장	0.1

염소근육	0.1

염소지방	0.1

염소간	0.1

염소신장	0.1

[별표 5] (185) 메토밀(Methomyl) 중 “닭근육 0.01”을 “가금근육 0.01”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

양근육	0.02

염소근육	0.02

[별표 5] 중 (193)을 다음과 같이 신설한다.

(193) 루바베그론(Lubabegron) : 성장보조제

◎ 잔류물의 정의 : Lubabegron

소근육	0.002†

소지방	0.002†

소간	0.007†

소신장	0.007†

[별표 5] 중 주 3.을 다음과 같이 신설한다.

주 3. 상기 †표시된 기준은 수출국의 요청으로 설정된 잔류허용기준을 의미하며, 기준 적용 시에는 국내 및 수입 식품에 동일하게 적용한다.

부칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제8. 8.3.118과 [별표 5]의 개정규정은 2021년 1월 1일부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

제4조(다른 고시의 개정) 식품등의 자가품질 검사항목 지정 일부를 다음과 같이 개정한다.

별표 1 중 제9호 9-2. 커피의 검사항목란을 다음과 같이 한다.

납, 허용 외 타르색소, 세균수(액상제품 중 더 이상 제조, 가공 하지 않고 그대로 섭취하는 제품에 한한다), 대장균군(액상제품 중 더 이상 제조, 가공 하지 않고 그대로 섭취하는 제품에 한한다)

별표 1의 제22호 22-2. 즉석섭취·편의식품류의 즉석조리식품의 검사항목란 중 “대장균(살균제품은 제외한다)”를 “대장균(살균, 멸균제품은 제외한다)”로 한다.

신․구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제1. (생   략)

제1. (현행과 같음)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 〜 2. (생  략)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) 〜 3) (생  략)

4) 위생지표균 및 식중독균

(1) (생  략)

(2) 식중독균

가. (생  략)

가) ～ 나) (생  략)

다) 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

대상 식품	규 격
① 가)의 대상식품 중 김치류, 절임류, 조림류, 복합조미식품, 식초, 카레분 및 카레(액상제품 제외)	g 당 100 이하 (멸균제품은 음성이어야 한다)
② (생 략)	(생 략)
③ (생 략)	(생 략)
④ 가)의 대상식품 중 장류(메주 제외), 젓갈류, 고춧가루 또는 실고추, 향신료가공품	n=5, c=2, m=100, M=1,000 (멸균제품은 n=5, c=0, m=0/25g)
⑤ 위 ①, ②, ③, ④를 제외한 가)의 대상식품

라) (생  략)

나. ～ 바. (생  략)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 〜 2. (현행과 같음)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) 〜 3) (현행과 같음)

4) 위생지표균 및 식중독균

(1) (현행과 같음)

(2) 식중독균

가. (현행과 같음)

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

대상 식품	규 격
<삭 제>	<삭 제>
① (생 략)	(현행과 같음)
② (생 략)	(현행과 같음)
③ 가)의 대상식품 중 장류(메주 제외), 젓갈류, 고춧가루 또는 실고추, 향신료가공품, 김치류, 절임류, 조림류, 복합조미식품, 식초, 카레분 및 카레(액상제품 제외)	(현행과 같음)
④ 위 ①, ②, ③ 을 제외한 가)의 대상식품	(현행과 같음)

라) (현행과 같음)

나. ～ 바. (현행과 같음)

5) 오염물질

(1) (생  략)

(2) 중금속 기준

① ∼ ③ (생  략)

④ 가공식품

대상식품	납(mg/kg)	비소(mg/kg)	무기비소(mg/kg)
◦ 식물성유지류, 어유, 기타동물성유지, 혼합식용유, 향미유, 가공유지, 쇼트닝, 마가린	0.1 이하	0.1 이하 (크릴유는 제외한다)	0.1 이하 (크릴유에 한한다)
◦ 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영･유아용 이유식, 영･유아용 특수조제식품	(생략)	-	(생략)
◦ 특수의료용도등식품(영･유아용 특수조제식품 제외), 과자, 시리얼류, 면류	-	-	(생략)
◦ 기타식품**	-	-	(생략)

* (생  략)

** 기타식품은 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영･유아용 이유식, 특수의료용도등식품, 과자, 시리얼류, 면류를 제외한 모든 식품을 말한다.

5) 오염물질

(1) (현행과 같음)

(2) 중금속 기준

① ∼ ③ (현행과 같음)

④ 가공식품

대상식품	납(mg/kg)	비소(mg/kg)	무기비소(mg/kg)
① 식물성유지류, 기타동물성유지, 혼합식용유, 향미유, 가공유지, 쇼트닝, 마가린	0.1 이하	0.1 이하	-
② 어유	0.1 이하	-	0.1 이하
③ 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영･유아용 이유식, 영･유아용 특수조제식품	(현행과 같음)	-	(현행과 같음)
④ 특수의료용도등식품(영･유아용 특수조제식품 제외), 과자, 시리얼류, 면류	-	-	(현행과 같음)
⑤ 위 ②, ③, ④를 제외한 모든 식품	-	-	(현행과 같음)

* (현행과 같음)

<삭  제>

⑤ (생  략)

⑤ (현행과 같음)

(3) ∼ (10) (생  략)

5) ∼ 17) (생  략)

4. (생  략)

(3) ∼ (10) (현행과 같음)

5) ∼ 17) (현행과 같음)

4. (현행과 같음)

제3. ∼ 제4. (생   략)

제3. ∼ 제4. (현행과 같음)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 8. (생  략)

9. 음료류

9-1. (생  략)

9-2. 커피

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (3) (생  략)

(4) 세균수∶n=5, c=1, m=100, M=1,000(액상제품에 한하며, 무지유고형분 4% 이상의 제품은 n=5, c=2, m=10,000, M=50,000으로 한다. 다만, 멸균제품은 n=5, c=0, m=0이어야 한다.)

(5) 대장균군∶n=5, c=1, m=0, M=10(액상제품에 한한다).

6) (생 략)

10. ～ 21. (생  략)

22. 즉석식품류

22-1. (생  략)

22-2 즉석섭취․편의식품류

1) ～ 4)  (생 략)

5) 규격

(1) ～ (2) (생 략)

(3) 대장균∶ n=5, c=1, m=0, M=10(즉석섭취식품, 즉석조리식품에 한하며, 즉석조리식품의 살균제품은 제외한다)

n=5, c=1, m=10, M=100(신선편의식품에 한한다)

(4) ～ (9) (생 략)

6) (생 략)

23. (생   략)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 8. (현행과 같음)

9. 음료류

9-1. (현행과 같음)

9-2. 커피

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 세균수∶------------------ ------(액상제품 중 더 이상 제조, 가공 하지 않고 그대로 섭취하는 제품에 한하며, ----------------------- ------------------------------------------------------)

(5) 대장균군∶--------------- -----(액상제품 중 더 이상 제조, 가공 하지 않고 그대로 섭취하는 제품에 한한다).

6) (현행과 같음)

10. ～ 21. (현행과 같음)

22. 즉석식품류

22-1. (현행과 같음)

22-2 즉석섭취․편의식품류

1) ～ 4)  (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 대장균∶ -------------- ----------------------------------, 즉석조리식품  중 살균, 멸균제품은 제외한다) ------------------(---- ----------------)

(4) ～ (9) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

23. (현행과 같음)

제6. ∼ 제7. (생   략)

제6. ∼ 제7. (현행과 같음)

제8. 일반시험법

1. ∼ 3. (생   략)

제8. 일반시험법

1. ∼ 3. (현행과 같음)

4. 미생물시험법

미생물학적 검사를 위해서는 반드시 모든 과정이 무균적으로 수행되어야 하며 동시에 시험과정 중의 교차오염을 방지하기 위해 실험실내는 항상 청결을 유지하여야 한다.

4. 미생물시험법

--------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------- 유지하여야 한다. 시험 시 음성대조군을 사용하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

4.1～4.4 (생 략)

4.1～4.4 (현행과 같음)

4.5 세균수

(생 략)

4.5.1 일반세균수

가. (생략)

4.5 세균수

(현행과 같음)

4.5.1 일반세균수

가. (현행과 같음)

나. 건조필름법

1) 시험조작

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 각 10배 단계 희석액 1 mL를 세균수 건조필름배지(배지 53 또는 69)에 각 2매 이상씩 접종한 후 잘 흡수시키고 35±1℃에서 48±2시간 배양한 후 생성된 붉은 집락수를 계산하고 그 평균집락수에 희석배수를 곱하여 일반세균수로 한다.균수 산출 및 기재보고는 4.5.1 일반세균수에 따라 한다.

다. (생 략)

4.5.2 (생 략)

나. 건조필름법

1) 시험조작

----------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 일반세균수로 한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ------------------- ----------------.

다. (현행과 같음)

4.5.2 (현행과 같음)

4.6 세균발육시험

(생 략)

가. (생 략)

나. 세균시험

1) (생략)

2) 시험법

시험용액을 1 mL씩 5개의 티오글리콜린산염 배지(배지 13)에 접종하여 35∼37℃에서 48±3시간 배양한 후, 5관 중 어느 하나라도 세균증식이 확인되면 세균발육 양성으로 한다.

4.6 세균발육시험

(현행과 같음)

가. (현행과 같음)

나. 세균시험

1) (현행과 같음)

2) 시험법

------------------------ -----------------------------------------------------------------------------------------------------------양성으로 한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

4.7 대장균군

(생  략)

4.7.1 정성시험

가. 유당배지법

유당배지를 이용한 대장균군의 정성시험은 추정시험, 확정시험, 완전시험의 3단계로 나눈다.

4.3 제조법에 따른 시험용액 10 mL를 2배 농도의 유당배지(배지 2)에, 시험용액 1 mL 및 0.1 mL를 유당배지(배지 2)에 각각 3개 이상씩 가한다.

1) ～ 3) (생 략)

나. BGLB 배지법

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 0.1 mL를 2개씩 BGLB 배지(배지 3)에 가한다. 대량의 시험용액을 가할 필요가 있을 때에는 대량의 배지를 넣은 발효관을 사용한다. 시험용액을 넣은 BGLB 배지(배지 3)을 35∼37℃에서 48±3시간 배양한 후 가스 발생을 인정하였을 때에는(배지를 흔들 때 거품 모양의 가스의 존재를 인정하였을 때에도) Endo 한천배지(배지 5) 또는 EMB 한천배지(배지 6)에 분리 배양한다. 이하의 조작은 가. 유당배지법의 확정시험 또는 완전시험 때와 같이 행하여 대장균군의 유무를 확인한다.

다. 데스옥시콜레이트 유당한천 배지법

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 10배 단계 희석액 1 mL씩을 멸균 페트리접시 2매 이상씩에 무균적으로 취하고 약 43～45℃로 유지한 데스옥시콜레이트 유당한천배지(배지 9) 또는 VRBA 평판배지(배지 96) 약 15 mL를 무균적으로 분주하고 페트리접시 뚜껑에 부착하지 않도록 주의하면서 회전하여 검체와 배지를 잘 혼합한 후 응고 시킨다. 그리고 그 표면에 동일한 배지 또는 보통한천배지를 3～5 mL를 가하여 중첩시킨다. 이것을 35～37℃에서 24±2 시간 배양 한 후 전형적인 암적색의 집락을 인정하였을 때에는 1개 이상의 집락을, 의심스러운 집락일 경우에는 2개 이상을 Endo 한천배지(배지 5) 또는 EMB 한천배지(배지 6) 또는 MacConkey 배지(배지 30)에서 분리 배양한다. 이하의 조작은 가. 유당배지법의 확정시험 또는 완전시험 때와 같이 행하고 대장균군의 유무를 시험한다.

4.7.2 정량시험

가. 최확수법

(생 략)

1) 유당배지법

4.3 제조법에 따른 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 5개 또는 3개씩의 유당배지(배지 2)에 접종한다. 단, 10 mL를 접종할 때에는 두배농도 유당 배지를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석단계액을 각각 1 mL씩 사용한다. 가스발생 발효관 각각에 대하여 추정, 확정, 완전시험을 행하고 대장균군의 유무를 확인한 다음 최확수표로부터 검체 1 mL 또는 1 g중의 대장균군수를 구한다. 이때 시험용액을 가한 배지의 전부 또는 대부분에서 가스발생이 인정되거나 또 최소량을 가한 배지의 전부 또는 대부분이 가스가 발생되지 않도록 접종량과 희석도를 고려하여야 한다.

2) BGLB배지법

4.3 제조법에 따른 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 5개 또는 3개씩 BGLB 배지(배지 3)에 각각 접종한다. 단, 10 mL를 접종할 때에는 두배농도 BGLB 배지를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석단계액을 각각 1 mL씩 사용한다. 이때 시험용액을 가한 배지의 전부 또는 대부분에서 가스발생이 인정되거나 또 최소량을 가한 배지의 전부 또는 대부분이 가스가 발생되지 않도록 접종량과 희석도를 고려하여야 한다. 이하의 조작은 각 발효관에 대하여 BGLB 배지에 의한 정성시험법에 따라 하고 대장균군의 유무를 확인한 다음 최확수표로부터 검체 1 mL 또는 1 g중의 대장균군수를 산출한다.

나. 데스옥시콜레이트유당한천배지법

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 각 10배 단계 희석액 1 mL에 대하여 이 배지에 의한 정성시험법과 같은 조작으로 35~37℃에서 24±2시간 배양한 후 생성된 집락중 전형적인 집락 또는 의심스러운 집락에 대하여 정성시험 때와 같은 조작으로 대장균군의 유무를 결정한다. 균수 산출은 4.5.1 일반세균수에 따라 한다.

다. 건조필름법

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 각 10배 단계 희석액 1 mL를 2매 이상씩 대장균군 건조필름배지Ⅰ(배지 54) 또는 대장균군 건조필름배지Ⅱ(배지 70)에 접종한 후, 35±1℃에서 24±2시간 배양한다. 대장균군 건조필름배지Ⅰ에서는 붉은 집락 중 주위에 기포를 형성한 집락수를 계산하고, 대장균군 건조필름배지Ⅱ에서는 청색 및 청녹색의 집락수를 계산하여 그 평균집락수에 희석배수를 곱하여 대장균군 수를 산출한다. 균수 산출 및 기재보고는 4.5.1 일반세균수에 따라 한다.

라. (생 략)

4.7 대장균군

(현행과 같음)

4.7.1 정성시험

가. 유당배지법

------------------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 이상씩 가한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL을 각각 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

1) ～ 3) (현행과 같음)

나. BGLB 배지법

------------------------ ------------------------ 배지(배지 3)에 가한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. --------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

다. 데스옥시콜레이트 유당한천 배지법

------------------------ --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 가하여 중첩시킨다.검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ------------------ ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

4.7.2 정량시험

가. 최확수법

(현행과 같음)

1) 유당배지법

----------------------- -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------2배 농도------------ -------------------------------------------------------------- 1 mL씩 사용한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ---------------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

2) BGLB배지법

----------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------2배 농도---------- ----------------------------------------------------------------- 1 mL씩 사용한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ----------  -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

나. 데스옥시콜레이트유당한천배지법

------------------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 유무를 결정한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ------------------- ------------------

다. 건조필름법

------------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------  24±2시간 배양한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. --- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

라. (현행과 같음)

4.8 대장균

(생 략)

4.8.1 정성시험

가. 한도시험

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL를 3개의 EC 배지에 접종하고 44±1℃에서 24±2시간 배양 후 가스발생을 인정한 발효관은 추정시험 양성으로 하고 가스발생이 인정되지 않을 때에는 추정시험 음성으로 한다. 추정시험이 양성일 때에는 해당 EC 발효관으로부터 EMB 배지에 접종하여 35~37℃에서 24±2시간 배양한 후 전형적인 집락을 보통한천배지에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 보통한천배지에서 배양된 집락을 취하여 그람염색을 실시하여 그람음성, 무아포성 간균을 확인한 후 생화학 시험을 실시하여 대장균 양성으로 판정한다.

4.8.2 정량시험

가. 최확수법

1) 제1법

4.3 제조법에 따른 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 각각 5개 또는 3개의 EC 배지(배지 10) 발효관에 접종한 다음 44.±1℃에서 24±2시간 배양한다. 시험용액 10 mL를 첨가할 경우 2배 농도의 배지 10 mL를 이용한다. 가스발생을 인정한 발효관을 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표 1 또는 별표 2 최확수표에 따라 검체 1 mL 또는 1 g 중의 대장균수를 산출한다.

2) 제2법

(1) 시험용액의 제조

패각을 제거한 검체 200 g에 0.1% peptone solution(시액 9) 200mL을 첨가하여 마쇄한 후 마쇄액 20 mL과 동일한 희석액(시액 9) 80 mL을 혼합하여 최종 10배 희석한 것을 시험용액으로 사용한다. 시험용액은 필요에 따라 100배, 1,000배 등으로 희석하여 사용할 수 있다.

(2) ～ (3) (생 략)

3) (생 략)

나. 건조필름법

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 각 단계 희석액 1 mL를 2매 이상씩 대장균 건조필름배지Ⅰ(배지 55) 또는 대장균 건조필름배지Ⅱ(배지 71)에 접종한 후, 35±1℃에서 24∼48시간 배양한다. 대장균 건조필름배지Ⅰ에서는 푸른 집락 중 주위에 기포를 형성한 집락수를 계산하고, 대장균 건조필름배지Ⅱ에서는 남색 및 보라색의 집락수를 계산하여 그 평균집락수에 희석배수를 곱하여 대장균 수를 산출한다. 균수 산출 및 기재보고는 4.5.1 일반세균수에 따라 한다.

다. (생 략)

별표 1. ～ 2. (생 략)

4.8 대장균

(현행과 같음)

4.8.1 정성시험

가. 한도시험

----------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 음성으로 한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ---------------- ------------------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

4.8.2 정량시험

가. 최확수법

1) 제1법

----------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------단, 10 mL를 접종할 때에는 2배 농도 EC 배지를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석단계액을 각각 1 mL씩 사용한다.  검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.--------- --------------------- --------------------------------------------------------------------

2) 제2법

(1) 시험용액의 제조

----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 시험용액으로 사용한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ------ ------------------------------------------------------

(2) ～ (3) (현행과 같음)

3) (현행과 같음)

나. 건조필름법

------------------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 24∼48시간 배양한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ----------- -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

다. (현행과 같음)

별표 1. ～ 2. (현행과 같음)

4.9 유산균수

4.9.1 유산균수

유산균수 측정방법은 MRS 배지(배지 87), BL 한천배지(배지 15) 또는 BCP첨가 평판측정용배지(배지 11)를 사용하여 유산균의 집락을 계수한다. 시험용액 제조 희석액은 멸균생리식염수(시액 2) 또는 펩톤식염완충액(시액 7)을 사용한다. 검사시료 10〜25 g(mL)에 9배 희석액을 가하여 100〜250 mL가 되게 하고 균질화한다 (10-1용액). 시험용액(10-1용액) 1 mL에 희석액을 가하여 10 mL가 되게 하고 10-2시험용액을 만든 후 동일하게 조작하여 희석한다.

MRS 배지(배지 87)와 BCP첨가 평판측정용배지(배지 11)는 일반세균수의 표준평판법에 준하여 시험하고, BL 한천배지(배지 15)는 각 희석 시험용액 0.1 mL씩을 BL한천배지(배지 15) 2매 이상에 접종하여 멸균초자봉으로 도말한다. 시료가 접종된 페트리디쉬는 35〜37℃에서 48〜72±3시간 혐기배양(발효유류의 경우 호기 배양 가능)한다. 배양 후 생성된 집락수를 측정하고 희석배수를 곱하여 검사시료 g당 균수를 산출한다.

4.9.2 (생 략)

4.10 (생 략)

4.9 유산균수

4.9.1 유산균수

----------------------- -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 균수를 산출한다. 모든 시험에서는 검액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

4.9.2 (현행과 같음)

4.10 (현행과 같음)

4.11 살모넬라(Salmonella spp.)

가. 증균배양

1) 식품 및 식육: 시료 25 mL(g)에 225 mL의 펩톤식염완충액(Buffered Peptone Water)을 첨가하여 36±1℃에서 18～24시간 배양한 후 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지(배지 88)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV 배지(배지 57) 또는 RVS 배지(배지 89)에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 41.5±1℃(RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20～24시간 동안 증균배양한다.

2) 소, 돼지도체: 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 가)소 및 나)돼지의 시료채취 방법에 따라 멸균가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 50 mL BPW를 넣은 다음 균질화 시킨 후 36±1℃에서 18～24시간 배양한다. 1차 배양액은 1) 식품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

3) 닭, 오리도체: 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 다)닭의 시료 채취방법에 따라 채취한 시료 30 mL을 취하여 30 mL BPW에 넣은 다음 균질화 시키고 36±1℃에서 18～24시간 배양한다. 1차 배양액은 1) 식품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

4) 식용란: 식용란 20개를 채취하여 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.3. 식용란의 시험법 5.3.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 조제에 따라 소독 한 후 말린 식용란을 깨서 4L 용량의 멸균비커 또는 멸균비닐백 등 적정한 용량의 멸균용기에 넣어서 준비한 다음(달걀을 깰 때는 위생장갑을 껴야하며 샘플마다 위생장갑을 바꾸어준다.) 멸균 도구 등을 이용하여 난황과 난백이 섞이도록 균질화를 시킨다. 준비된 시료에 2L의 멸균 TSB를 섞어 35℃에서 24±2시간 동안 증균한다. 1차 배양액은 1) 식품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

나. ～ 다. (생 략)

4.11 살모넬라(Salmonella spp.)

가. 증균배양

1) ------------------------ -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------증균배양한다. 시료를 가하지 아니한 동일 펩톤식염완충액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

2) ----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 18～24시간 배양한다. 시료를 채취하지 않은 동일 멸균가아제나 스폰지로 대조시험액을 제조하고 함께 시험하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ------------------- --------------------------------

3) ---------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 18～24시간 배양한다. 시료 채취 시 사용한 동일 BPW 또는 BPD를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. -------------- ------------------------------------------

4) ----------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 24±2시간 동안 증균한다. 시료를 넣지 않은 멸균 TSB를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ------------------------------------------------------------ .

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.12 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

4.12.1 정성시험

가. 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 10% NaCl을 첨가한 TSB 배지(배지 23)에 가한 후 35∼37℃에서 18∼24시간 증균배양한다.

나. ～ 다. (생 략)

4.12.2 정량시험

가. 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 각 단계별 희석액을  Baird-Parker 한천배지(배지 63) 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35~37℃ 에서 48±3시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다.

나.～다. (생 략)

4.12 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

4.12.1 정성시험

가. 증균배양

-------------------------- ------------------------------------------------------------ 18∼24시간 증균배양한다. 검체를 가하지 아니한 10% NaCl을 첨가한 TSB배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.12.2 정량시험

가. 균수 측정

-------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 집락을 계수한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나.～다. (현행과 같음)

4.13. 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus)

4.13.1 정성시험

가. 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 Alkaline 펩톤수(배지 16)를 가한 후 35~37℃에서 18～24시간 증균배양한다.

나.～다. (생 략)

4.13.2 정량시험

가. 균수측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 각 단계별 희석액을 TCBS 한천배지(배지 17) 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35～37℃ 에서 18～24시간 배양한 다음 청록색의 서당(sucrose) 비분해 집락을 계수한다.

나.～다. (생 략)

4.13. 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus)

4.13.1 정성시험

가. 증균배양

------------------------- ------------------------------------------------------ 18～24시간 증균배양한다.  검체를 가하지 아니한 Alkaline 펩톤수를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나.～다. (현행과 같음)

4.13.2 정량시험

가. 균수측정

------------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 1 mL이 되게 도말한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. -------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

나.～다. (현행과 같음)

4.14 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

4.14.1 정성시험법

가. 증균배양

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL를 Cooked Meat 배지(배지 33)의 아랫부분에 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 동안 혐기배양한다.

나.～다. (생 략)

4.14.2 정량시험법

가. 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 희석액을 가한 후 1∼2분간 저속으로 균질화 한 후 10배 단계 희석액을 만든다. 시험용액 및 단계별 희석액 1 mL씩을 2매 이상의 멸균 페트리접시에 무균적으로 분주하고, 43～45℃로 유지한 난황을 첨가하지 않은 TSC 한천배지(배지 41) 10∼15 mL를 가하여 좌우로 돌리면서 잘 혼합한 후 응고시킨다. 응고된 배지 위에 다시 동일한 배지 10 mL를 가하여 중첩시킨 후 35∼37℃에서 24±2 시간 혐기 배양한다. 150개 이하의 전형적인 검은색 집락이 확인된 평판을 선별하여 각 집락수를 계수한다.

나.～다. (생 략)

4.14 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

4.14.1 정성시험법

가. 증균배양

------------------------ ------------------------------------------------------------------------ 혐기배양한다. 검액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나.～다. (현행과 같음)

4.14.2 정량시험법

가. 균수 측정

------------------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 혐기 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액 1mL을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. --------------------- ------------------------------------------

나.～다. (현행과 같음)

4.15 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)

가. 증균배양

가공식품 및 수산물에 대해서는 증균배지로 Listeria 증균배지(배지 35)를 사용하며, 검체 25 g(mL)를 취하여 225 mL의 Listeria 증균배지를 가한 후 30℃에서 48시간 배양한다. 유가공품, 식육가공품, 알가공품, 식육 및 가금류는 25g(mL)을 Listeria 증균배지(배지 35) PALCAM Broth 또는 UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36) 225 mL에 접종하여 30℃에서 24±2시간 동안 증균 배양한 후, 배양액 0.1 ml을 10ml의 Fraser broth에 접종하여 35∼37℃에서 24∼48시간 2차 증균을 실시한다.

나.～다. (생 략)

4.15 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)

가. 증균배양

------------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 2차 증균을 실시한다. 모든 시험에서는 검체를 가하지 아니한 동일 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나.～다. (현행과 같음)

4.16 장출혈성 대장균(생략)

가. 증균배양

검체 25 g(25 mL)을 취하여 225 mL mTSB(배지 74)를 가한 후 35～37℃에서 24시간 증균배양한다.

나. ～ 마. (생 략)

4.16 장출혈성 대장균(생략)

가. 증균배양

------------------------ ------------------------------------ 24시간 증균배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 mTSB를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. ～ 마. (현행과 같음)

4.17 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)

가. 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 PSBB 배지(배지 44) 225 mL을 가하고, 동시에 PSBB 배지를 가한 검액 10 mL를 취해 ITC 배지(배지 97) 90 mL에 가한다. 각각의 검액을 25℃에서 48시간 배양한다.

나. ～ 다. (생 략)

4.17 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)

가. 증균배양

------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 48시간 배양한다. 검체를 가하지 아니하고 동일한 방법으로 제조한 ITC 배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.18 바실루스 세레우스(Bacillus cereus)

4.18.1 정성시험

가. 분리배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 희석액을 가하여 균질화한 검액을 MYP한천배지(배지 46)에 접종하여 30℃, 24시간 배양하거나 PEMBA한천배지(배지 98)에 접종하여 37℃에서 24시간 배양한다. 배양 후 MYP한천배지에서는 혼탁한 환을 갖는 분홍색 집락 또는 PEMBA한천배지에서는 혼탁한 환을 갖는 청녹색 집락을 선별한다. 이 때 명확하지 않을 경우 24시간 더 배양하여 관찰한다.

나. (생 략)

4.18.2 정량시험

가. 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 한다. 희석액을 사용하여 10배 단계 희석액을 만든다. MYP 한천평판배지(배지 46)에 단계별 희석용액 총 접종액이 1 mL이 되도록 3∼5장을 도말하여 30℃에서 24±2시간 배양한 후 집락 주변에 lecithinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수한다.

나. ～ 다. (생 략)

4.18 바실루스 세레우스(Bacillus cereus)

4.18.1 정성시험

가. 분리배양

------------------------ -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 37℃에서 24시간 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ---- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

나. (현행과 같음)

4.18.2 정량시험

가. 균수 측정

----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 집락을 계수한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.19 캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)

가. 증균배양

1) 식품 및 식육: 검체 25 g(mL)를 Campylobacter supplement (A)(유가공품의 경우는Campylobacter supplement(B))가 첨가된 HUNT(CEB) 배지(배지 47), Bolton 배지(배지 68) 또는 Preston 배지(배지 78) 100 mL에 넣고 균질화한 후 35∼37℃에서 4～5시간 동안 미호기적(5% O2, 10% CO2, 85% N2)으로 1차 증균하고 42±1℃에서  44 ± 4시간 미호기적으로 2차 증균한다. 다만, HUNT 배지를 사용할 경우, 2차 증균시 일반식품은 Cefoperazone 용액(0.8 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하고 유제품은 Rifampicin용액(0.125 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하여 배양한다.

2) 소, 돼지도체 : 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 가)소 및 나)돼지의 시료채취 방법에 따라 멸균가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 25 mL BPW를 넣은 다음 균질화를 시킨 후 혈액을 첨가하지 않는 2XBolton 배지(2XBF-BEB) 25 mL를 넣고 미호기적 조건으로 42±1℃에서 48±2시간 배양한다.

3) 닭, 오리도체 : 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 다)닭의 시료채취방법에 따라 채취한 시료 30 mL에 혈액을 첨가하지 않는 2XBolton 배지(2XBF-BEB) 30 mL를 넣고 균질화 한 후 미호기적 조건에서 42±1℃ 48±2시간 배양한다.

나. ～ 다. (생 략)

4.19 캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)

가. 증균배양

1) --------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 첨가하여 배양한다. 모든 시험에서는 시험용액을 가하지 아니한 동일 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

2) ----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 48±2시간 배양한다. 시료를 채취하지 않은 동일 멸균가아제나 스폰지로 대조시험액을 제조하고 함께 시험하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

3) ---------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------  48±2시간 배양한다.  시료 채취 시 사용한 동일 BPW 또는 BPD를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.20 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)

가. 증균배양

고형 또는 반고형물 검체는 동량의 젤라틴 인산완충액(시액 5)을 첨가하고 균질화하여 시험용액으로 하며, 액상 검체는 그대로 사용한다. 1～2 g 또는 1～2 mL의 검체를 2개의 Cooked Meat 배지(배지 33) 15 mL에 접종하여 35∼37℃에서 7일간 배양하고 또 2개의 TPGY배지(배지 50)에 같은 방법으로 접종하여 26℃에서 7일간 배양한다. 다만, 접종 전 각 배지는 10～15분간 중탕하여 탈산소한 후 신속히 냉각하여 사용하며, 검체는 배지 아래부분에 천천히 접종하고 교반하지 않는다. 배양 7일후 검경하여 전형적인 클로스트리디움이 관찰되면 다음의 분리배양을 실시하고, 관찰되지 않는 경우에는 추가적으로 10일간 더 배양한다.

나. ～ 라. (생 략)

4.20 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)

가. 증균배양

------------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 26℃에서 7일간 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 젤라틴 인산완충액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. (검체를 그대로 사용하는 액상 검체는 검체를 가하지 아니한 동일 Cook Meat 배지와 TPGY배지로 무균여부를 확인) ------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

나. ～ 라. (현행과 같음)

4.21 크로노박터(Cronobacter spp.)

가. 증균배양

검체 5관에서 검체 각 60 g을 무균적으로 채취하여 540 mL의 멸균증류수에 가한 후 35~37℃에서 18∼24시간 증균배양한다. 증균배양액 10 mL를 90 mL의 EE 배지(배지 59)에 첨가하여 35∼37℃에서 18∼24시간 2차 증균 배양한다.

나. ～ 다. (생 략)

4.21 크로노박터(Cronobacter spp.)

가. 증균배양

------------------------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 2차 증균 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 멸균증류수를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.22 탄저균(Bacillus anthracis)

가. 배양 및 균분리

검체 25 g 또는 25 mL에 희석액 50 mL을 가하여 분쇄 혼합한 뒤, 62.5±0.5℃ 항온수조에서 30～60분간 가열처리한다. 배양된 유제를 10배 단계 희석하여 각 희석액으로부터 100 μL를 취하여 혈액한천배지(배지 79)에 도말하여 37℃에서 24시간 배양한다. 탄저균은 그 균의 특이한 회백색의 축모상 혹은 곰보유리모양의 집락을 형성하며 혈액한천배지에서는 용혈성이 거의 없고 액체배지에서는 침전하여 발육하며 상층부는 투명하고 균막을 형성하지 않는다. 의심되는 집락을 도말하여 염색하면 그람양성의 대간균으로서 양단이 직각으로 갈라져 있고 낚시대 모양의 연쇄상을 나타낸다.

나. ～ 다. (생 략)

4.22 탄저균(Bacillus anthracis)

가. 배양 및 균분리

------------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 24시간 배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. ------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

나. ～ 다. (생 략)

4.23 결핵균

가. 배양 전 확인법 및 균 배양 후 균 분리검사

우유와 같은 액상의 검체는 그대로 사용하고, 식육 및 식육가공품은 검체 25 g에 희석액 225 mL을 가한 후 유제액을 제조하여 사용한다. 액상 검체 또는 유제액 25 mL를 3,000 rpm에서 30분간 원심분리 하여 상층부를 새로운 시험관에 취하고 침전물에서 1 백금이를 취하여 도말표본을 만들고 Ziel-Neelsen법으로 항산성염색을 실시하여 항산성균을 검경으로 확인한다. 상층부에는 동량의 8% NaOH액을, 침전물에는 그의 약 10배량의 4% NaOH액을 가하여 잘 혼합한 후 각각 0.1 mL씩을 Lowenstein-Jensen 사면배지(배지 80) 또는 Middlebrook 7H10 한천배지(배지 81)에  접종한 후 37℃에서 8주간 배양한다. 배양기간 동안 배양유무를 육안으로 관찰한다. 배양이 육안으로 관찰되면 slide glass에 균를 도말하여 Ziehl-Neelsen법으로 항산성염색을 실시하여 항산성균을 검경으로 확인한다. 결핵균의 성장은 일반적으로 3∼6주 배양동안 관찰된다. 특이적으로 느린 성장패턴과 균 모양으로 결핵균을 잠정적으로 진단할 수 있다.

나. ～ 다. (생 략)

4.23 결핵균

가. 배양 전 확인법 및 균 배양 후 균 분리검사

------------------------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 8주간 배양한다. 유제액을 제조하여 사용하는 경우에는 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. --- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.24 브루셀라(Brucella spp.)

가. 배양 및 균 분리

검체 25 g 또는 25 mL을 amphotericin B 1 ㎍/mL, vancomycin 20 ㎍/mL가 첨가된 serum dextrose 배지(배지 82), TSB 배지(배지 23) 또는 Brucella 배지(배지 85)  225 mL에 넣은 후 균질화 한 다음 5～10%의 CO2 가스 주입이 되는 37℃ 배양기에서 6주 동안 배양하면서 주마다 배지에 도말하여 확인한다. 다만, 검체가 심하게 오염되었거나 브루셀라균이 매우 낮은 농도로 오염되었을 가능성이 클 경우에 동물실험을 할 수 있다.

나. ～ 다. (생 략)

4.25 ∼ 4.26 (생  략)

4.24 브루셀라(Brucella spp.)

가. 배양 및 균 분리

------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 도말하여 확인한다. 검체를 가하지 아니한 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. -------------------- -------------------------------------------------------------------------.

나. ～ 다. (생 략)

4.25 ∼ 4.26 (현행과 같음)

5. (생   략)

5. (현행과 같음)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 (생  략)

6.2 당류

6.2.1 올리고당

가. (생  략)

나. 이소말토올리고당

1) 장치

고속액체크로마토그래프

2) 시약

(가) 50% 알코올

(나) 활성탄∶청주용 또는 당액 탈색용

(다) 이온교환수지∶강 산성형(H형) 및 강 알칼리형(OH형)

(라) 퍼라이트(Perlite)

(마) 아세토니트릴∶HPLC용

(바) 표준당

단당류—Glucose, Fructose

이당류—Maltose, *Isomaltose, Sucrose, *Kojibiose, *Nigerose

삼당류—Maltotriose, *Pannose, *Isomaltotriose

사당류—Maltotetraose, *Isomaltotetraose

오당류—Maltopentaose, *Isomaltopentaose

육당류 ― Maltohexaose, *Isomaltohexaose

칠당류 ― Maltoheptaose, *Isomaltoheptaose

(*는 이소말토올리고당의 분기당성분)

3) 표준용제의 조제

(가) 배제형 이온교환계∶각 중합도의 직쇄당을 정확하게 50 mg씩 달아 탈기한 증류수 50 mL에 녹이고, 용해되기 어려울 때는 가온하여 녹이고 냉각 후 증류수 100 mL로 채워 표준용액으로 한다.

(나) 역상분배계∶각 분기당의 표준액 100 mg을 증류수 1 mL에 용해한 것을 표준용액으로 한다.

4) 시험용액 조제

(가) 유지를 거의 함유하지 않은 검체인 경우 이소말토올리고당이 약 500 mg이 되도록 시료를 적당량(0.5~5 g)을 정확히 달아 여기에 물 또는 50% 알코올(단백질을 함유한 경우)을 30 mL 넣어서 가열하여 용해, 혹은 추출한다. 추출액은 약 0.5 g의 활성탄과 이온교환수지(양이온 및 음이온을 1∶2로 혼합한 것 약 1.5 g)을 사용하여 정제하고, 전량을 500 mL로 하여 시험용액으로 한다.

(나) 유지를 많이 함유한 검체인 경우

이소말토올리고당 적당량(0.5~5 g)을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면(pH 4~10 이외) 중화한 후 퍼라이트를 부석부석하게 될 때까지 넣어서 잘 분산시켜 8~16시간 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 안의 전량을 꺼내어 위의 (가)와 같이 추출 이후의 조작을 한다.

주1. 중합도 2~5와 거의 같은 분자량인 설탕, 유당, 프락토올리고당, Coupling sugar 및 갈락토올리고당이 혼재할 경우에는 각각의 측정법으로 따로 분석한다. 그러나 이성화당, 포도당, 물엿 등의 전분당이 혼재할 경우에는 이소말토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

5) 시험조작

(가) 고속액체크로마토그래피 조건

① 배제형 이온교환계

— 칼럼∶∮8 mm × 200 mm MCI GEL CKO  4S 상당품

— 가드칼럼∶∮8 mm × 50 mm MCI GEL CKO 8S 상당품

— 칼럼온도∶65℃

— 이동상∶물

— 유속∶0.4 mL/min

—검출기∶시차굴절계(RI)

② 역상분배계

— 칼럼∶∮4.6 mm×250 mm TSK GEL NH2 -60 상당품

— 칼럼온도∶35℃

— 이동상∶아세토니트릴∶물(63∶37)

— 유속∶0.8 mL/min

— 검출기∶시차굴절(Refractive Index)계

(나) 정량시험

① 검량선의 작성∶표준용액을 5, 10, 15, 20, 25 mL씩을 넣고 증류수로 각각 50 mL로(이 농도는 25, 50, 75, 100, 125 mg/50mL가 된다) 한 다음 10 μL 씩 주입한 후 상당하는 직쇄상의 피크에 따라서 면적 또는 높이를 읽어내어 검량선을 작성한다.

② 계산

㉮ 배제형 이온교환계에서 분석한 피크의 면적 또는 높이에 의해 구해진 각 중합도의 검량선에서 각각의 중합도의 함유량이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

중합도 DP1(단당류)∶A

중합도 DP2(이당류)∶B

중합도 DP3(삼당류)∶C

중합도 DP4(사당류)∶D

중합도 DP5(오당류)∶E

중합도 DP6(오당류)∶F

중합도 DP7(오당류)∶G

③ 역상분배계에서 시료를 분석한 Data의 각 당분함유율(%)은 다음과 같다.

DP1 Fructose         A1

DP1 Glucose          A2

DP2 Maltose          B1

DP2 Sucrose	B2

DP2 Isomaltose        B3

DP2 Nigerose	B4

DP2 Gojibiose          B5

DP3 Maltotriose	C1

DP3 Pannose	C2

DP3 Isomaltotriose	C3

DP3 불명(분기당)	C4

DP4 Maltotetraose	D1

DP4 Isomaltotetraose	D2

DP5 Maltopentaose	E1

DP5 Isomaltopentaose    E2

DP6 이상	F

DP6 Isomaltohexaose	F2

DP7 Maltoheptaose	G1

DP7 Isomaltoheptaose   G2

DP8 이상	H

(주∶이소말토올리고당에는 DP4이상의 직쇄당 및 DP8 이상의 성분을 포함하지 않는다)

<계 산>

DP1 Fructose	A mg×[eqn: RM { A SUB1} over { A SUB1 ＋A SUB2}] ＝ a1 mg

DP1 Glucose	A mg×[eqn: RM { A SUB2} over { A SUB1 ＋A SUB2}] ＝ a2 mg

DP2 Maltose	B mg×[eqn: RM { B SUB1} over { B SUB1 ＋B SUB2 ＋B SUB3 ＋B SUB4 ＋B SUB5}]＝  b1 mg

DP2 Sucrose	B mg×[eqn: RM { B SUB2} over { B SUB1 ＋B SUB2 ＋B SUB3 ＋B SUB4 ＋B SUB5}] ＝ b2 mg

DP2 Isomaltose      B mg×[eqn: RM { B SUB3} over { B SUB1 ＋B SUB2 ＋B SUB3 { } ＋B SUB4 ＋B SUB5}] ＝ b3 mg※

DP2 Negerose       B mg×[eqn: RM { B SUB4} over { B SUB1 ＋B SUB2 ＋B SUB3 { } ＋B SUB4 ＋B SUB5}] ＝ b4 mg※

DP2 Kojibiose       B mg×[eqn: RM { B SUB5} over { B SUB1 ＋B SUB2 ＋B SUB3 { } ＋B SUB4 ＋B SUB5}] ＝ b5 mg※

DP3 Maltotriose     C mg ×[eqn: RM { C SUB1} over { C SUB1 ＋C SUB2 ＋C SUB3 ＋C SUB4}] ＝ c1 mg

DP3 Pannose        C mg ×[eqn: RM { C SUB2} over { C SUB1 ＋C SUB2 ＋C SUB3 ＋C SUB4}] ＝ c2 mg※

DP3 Isomaltotriose   C mg ×[eqn: RM { C SUB3} over { C SUB1 ＋C SUB2 ＋C SUB3 ＋C SUB4}] ＝ c3 mg※

DP3 불명(분기당)    C mg ×[eqn: RM { C SUB4} over { C SUB1 ＋C SUB2 ＋C SUB3 ＋C SUB4}] ＝ c4 mg※

DP4 Maltotetraose    D mg ×[eqn: RM { D SUB1} over { D SUB1 ＋D SUB2}]＝ d1 mg

DP4 Isomaltotetraose  D mg ×[eqn: RM { D SUB2} over { D SUB1 ＋D SUB2}] ＝ d2 mg※

DP5 Maltopentaose    E mg ×[eqn: RM { E SUB1} over { E SUB1 ＋E SUB2}] ＝ e1 mg

DP5 Isomaltopentaose  E mg ×[eqn: RM { E SUB2} over { E SUB1 ＋E SUB2}] ＝ e2 mg※

DP6이상	F mg ＝ f mg

DP6 Maltohexaose      F mg ×[eqn: RM { F SUB1} over { F SUB1 ＋F SUB2}]＝ f1 mg

DP6 Isomaltohexaose    F mg ×[eqn: RM { F SUB2} over { F SUB1 ＋F SUB2}] ＝ f2 mg※

DP7 Maltoheptaose     G mg ×[eqn: RM { G SUB1} over { G SUB1 ＋G SUB2}] ＝ g1 mg

DP7 Isomaltoheptaose   G mg ×[eqn: RM { G SUB2} over { G SUB1 ＋G SUB2}] ＝ g2 mg※

DP8 이상	H mg ＝ h mg

결국 시료채취량을 I mg으로 하고 희석배수를 Ｌ로 하면, 위의 ※은 모두 분기당이므로 분기당함유량(%) ＝ (b3＋b4＋b5＋c2＋c3＋c4＋d2＋e2＋f2＋g2) ×L÷I×100 으로 한다.

다. 갈락토올리고당(전이갈락토올리고당)

1) 장치

고속액체크로마토그래프

2) 시약

(가) 20%(w/v) 설포살리실린산용액(Sulfosalicylic acid)∶시약특급의 설포살리실린산 20 g에 물을 넣어 용해시켜 100 mL로 한다.

(나) Ribose∶시약특급

(다) Arabinose∶시약특급

3) 표준용액의 조제

갈락토올리고당 2 g을 정확히 달아 물에 녹여 50 mL로 한다.

4) 시험용액 조제

갈락토올리고당이 약 0.1~1 g 포함되도록 검체 적당량을 정확히 달아 물을 가해 용해시킨 후 50 mL로 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 시험용액으로 한다.

주1. 단백질 제거 조작이 필요한 시료에 대해서는 설포살리실린산을 여러 방울 첨가하여 생긴 불용성 단백질을 원심분리로 제거하든가 Sep pak C18 cartridge를 통과시키든가 한다. 이들의 제작을 요하는 경우에는 내부표준으로서 Ribose 또는 Arabinose를 사용한다.

주2. 유지를 많이 함유한 시료의 경우 시료의 전처리는 프락토올리고당의 분석법의 전처리방법에 준한다.

주3. 시료중에 갈락토올리고당 이외의 3 ~ 6당류인 올리고당이 존재할 경우에는 해당하는 올리고당 분해효소에 의해 단당류, 2당류로 분해하고 나서 분석한다. 그러나 이성화당, 설탕이나 다당류의 존재는 갈락토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

5) 시험조작

(가) 고속액체크로마토그래프 조건

— 칼럼∶Shodex Ionpak KS-802 상당품 및 역상 amino column

— 칼럼온도∶80℃

— 이동상∶물

— 유  속∶0.4 mL/min

— 검출기∶시차굴절계(RI)

(나) 정량시험

갈락토올리고당 표준용액을 2, 4, 6, 8 및 10 mL를 20 mL용 메스플라스크에 정확하게 취하여 물로 눈금을 맞춘 다음, 각각 10 μL 씩 고속액체크로마토그래프에 주입시켜 피크의 면적 또는 높이를 읽어내어 검량선을 작성한다. 검체중의 갈락토올리고당의 함량(%)은 다음 식으로 구한다.

갈락토올리고당(%) ＝

B mg/mL ×[eqn: RM {50~ mL} over {Ag}]×[eqn: RM {100} over {1000}]

A∶시료채취량(g)

B∶검량선에서 구한 갈락토올리고당의 농도(mg/mL)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 (현행과 같음)

6.2 당류

6.2.1 올리고당

가. (현행과 같음)

나. 이소말토올리고당

1) 장치

액체크로마토그래프-시차굴절검출기(Refractive Index detector, RI)

2) 시약 및 시액

가) 표준당

단당류—Glucose

이당류—Maltose

삼당류—Maltotriose

사당류—Maltotetraose

오당류—Maltopentaose

육당류—Maltohexaose

칠당류—Maltoheptaose

나) 물: HPLC용

다) 50% 에탄올

라) 아세토니트릴: HPLC용

3) 표준용액의 조제

각 표준당을 물로 녹여 100 mg/mL 농도가 되도록 조제한 후 혼합하여 표준원액으로 한다. 표준원액을 물로 희석하여 625∼10,000 μg/mL 범위로 조제하여 표준용액으로 한다.

4) 시험용액의 조제

이소말토올리고당으로서 약 0.1∼0.5 g이 되도록 검체를 취해 물 또는 50% 에탄올(단백질을 함유한 경우) 15 mL에 용해한 후 50 mL로 정용한다(필요시  1,000 ×  g에서  10 분간 원심분리 한다). 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

5) 시험방법

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 배제형 이온교환계

① 칼럼: Asahipak NH2P-50 4E(4.6 mm i.d × 250 mm × 5 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 30℃

③ 이동상: 65% 아세토니트릴

④ 유속: 1.0 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

(2) 역상분배계

① 칼럼: RSpak DC-613(6.0 mm i.d × 150 mm × 6 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 50℃

③ 이동상: 70% 아세토니트릴

④ 유속: 0.8 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 시험용액과 표준용액 피크의 머무름 시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 10 μL씩 주입하여 위의 조건에서 시험한다. 표준용액의 피크 면적 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한다.

가) 배제형 이온교환계에서 분석한 피크면적 또는 높이에 의해 각 중합도의 함유량(mg/mL)이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

DP1(단당류): A

DP2(이당류): B

DP3(삼당류): C

DP4(사당류): D

DP5(오당류): E

DP6(육당류): F

DP7(칠당류): G

나) 역상분배계에서 시료를 분석한 Data의 각 당분함유율(%)은 다음과 같다.

DP1 Glucose	A1

DP1 Glucose 이외의 단당류	A2

DP2 Maltose	B1

DP2 Maltose 이외의 이당류	B2

DP3 Maltotriose	C1

DP3 Maltotriose 이외의 삼당류	C2

DP4 Maltotetraose	D1

DP4 Maltotetraose 이외의 사당류	D2

DP5 Maltopentaose	E1

DP5 Maltopentaose 이외의 오당류	E2

DP6 Maltohexaose	F1

DP6 Maltohexaose 이외의 육당류	F2

DP7 Maltoheptaose	G1

DP7 Maltoheptaose 이외의 칠당류	G2

DP1 Glucose(mg/mL)             A × [eqn: rm {A _{1}} over {A _{1} ＋A _{2}}] ＝ a

DP2 Maltose(mg/mL)	B × [eqn: rm {B _{1}} over {B _{1} ＋B _{2}}] ＝ b

DP3 Maltotriose(mg/mL)          C × [eqn: rm {C _{1}} over {C _{1} ＋C _{2}}] ＝ c

DP4 Maltotetraose(mg/mL)        D ×[eqn: RM { D SUB1} over { D SUB1 ＋D SUB2}]＝ d

DP5 Maltopentaose(mg/mL)       E ×[eqn: RM { E SUB1} over { E SUB1 ＋E SUB2}] ＝ e

DP6 Maltohexaose(mg/mL)        F ×[eqn: RM { F SUB1} over { F SUB1 ＋F SUB2}] ＝ f

DP7 Maltoheptaose(mg/mL)       G ×[eqn: RM { G SUB1} over { G SUB1 ＋G SUB2}] ＝ g

이소말토올리고당 함량(%)
=	T-(a+b+c+d+e+f+g)	× h × i ×	100
	시료채취량(g)		1,000

T(배제형 이온교환계에서 분석한 당의 함유량) = A+B+C+D+E+F+G

h : 시험용액의 전량(mL)

i : 시험용액의 희석배수

다. 갈락토올리고당(전이갈락토올리고당)

1) 장치

액체크로마토그래프-시차굴절검출기(Refractive Index detector, RI)

2) 시약 및 시액

가) 표준당

Glucose

Galactose

Lactose

Galactooligosaccharides(순도 70% 이상)

나) 물: HPLC용

다) 20%(w/v) 설포살리실린산용액: 설포살리실산(Sulfosalicylic acid) 20 g에 물을 넣어 용해시켜 100 mL로 한다.

라) 아세토니트릴: HPLC용

3) 표준용액의 조제

Galactooligosaccharides(GOS) 4g을 물 20 mL로 녹여 50 mL로 정용한 후 혼합하여 표준원액으로 한다. 표준원액을 이동상으로 희석하여  8,000∼40,000 μg/mL 범위로 조제하여 표준용액으로 한다. 머무름시간 확인을 위해 glucose, galactose, lactose는 50 mg씩 10 mL의 이동상에 녹여(5,000 μg/mL) 표준용액으로 한다.

4) 시험용액 조제

갈락토올리고당으로서 0.1∼1 g이 되도록 검체를 취해 물 20 mL에 용해한 후 50 mL로 정용한다. 단, 단백질 제거 조작이 필요한 시료에 대해서는 20% 설포살리실산용액을 여러 방울 첨가하여 생긴 불용성 단백질을 1,000 × g에서 10분간 원심분리하여 제거한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

5) 시험방법

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 배제형 이온교환계

① 칼럼: Shodex SC1011(8.0 mm i.d × 300 mm × 6 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 80℃

③ 이동상: 물

④ 유속: 0.4 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

(2) 역상분배계

① 칼럼: TSK GEL NH2 -100(4.6 mm i.d × 150 mm × 3 μm) 혹은 이와 동등한 것

② 칼럼온도: 35℃

③ 이동상: 70% 아세토니트릴

④ 유속: 0.8 mL/min

⑤ 검출기: 시차굴절검출기(RI)

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 시험용액과 표준용액 피크의 머무름 시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

가) 배제형 이온교환계

표준용액과 시험용액을 각각 2 μL씩 주입하여 위의 조건에서 시험한다. 표준용액의 피크 면적 또는 높이를 구하여 각 당류의 함유량(mg/mL)이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

DP2(이당류): A

DP3(삼당류 이상): B

그림 1. 갈락토올리고당 크로마토그램(배제형 이온교환계)

나) 역상분배계

10,000 μg/mL 농도의 GOS 표준용액, 5,000 μg/mL 농도의  glucose, galactose, lactose 표준용액과 시험용액을 각각 10 μL씩 주입하여 위의 조건에서 시험하여 각 당류의 비율(%)을 구한다(단, 용액의 농도는 필요에 따라 조절 가능하다). 전체 당 함량을 100으로 했을 때 각 중합도의 당류 비율은 다음과 같다.

DP1(전체 당 함량 중 단당류의 비율): a

DP2(전체 당 함량 중 이당류의 비율): b

DP3(전체 당 함량 중 삼당류 이상의 비율): c

(a + b + c = 100(%))

그림 2. 갈락토올리고당 크로마토그램(역상분배계)

갈락토올리고당 함량(%)
=	[(A×d/b)+B]	× e × f ×	100
	시료채취량(g)		1,000

b : 전체 당 함량 중 이당류의 비율

d : 전체 당 함량 중 lactose를 제외한 이당류의 비율

e : 시험용액의 전량(mL)

f : 시험용액의 희석배수

라. ∼ 사 . (생  략)

6.2.2 ∼ 6.14 (생  략)

라. ∼ 사 . (현행과 같음)

6.2.2 ∼ 6.14 (현행과 같음)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.1.4.233 (생   략)

<신    설>

<신    설>

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.1.4.233 (현행과 같음)

7.1.4.234 가스가마이신(Kasugamycin)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 가스가마이신을 메탄올로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 가스가마이신 표준품을 물에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic -lipophilic balance cartridge): Divinylbenzene-N-vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

7) 특이사항: 가스가마이신은 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용하며, 시험용액은 조제 후 즉시 분석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 5 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 5 g, 서류, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 5 g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 메탄올 10 mL를 가한 뒤 1분간 흔들고 1 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 추출용액의 pH를 13으로 조절한다. pH 조절 후 10분간 진탕하고 4℃, 7,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액 전량을 취하는 방법으로 2회 반복 추출한다. 취하여진 상층액에 메탄올을 가하여 부피를 25 mL로 맞춘다.

2) 정제

HLB 카트리지에 메탄올 3 mL와 물 3 mL를 차례로 넣고 2∼3 방울/초의 속도로 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1)추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지 상단에 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 카트리지 상단에 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: HILIC(아마이드계) 칼럼 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1% 포름산 함유 물

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
2.0	10	90
2.1	30	70
7.0	90	10
7.5	90	10
8.0	10	90
10.0	10	90

라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
가스가마이신 (Kasugamycin)	379.4	379.16	380	1121)	21
				156	14
				200	15

1) 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

가스가마이신(3.7분)

* 분석기기: LC(ShimadzuⓇ Nexera X2),

MS/MS(ShimadzuⓇ LCMS-8060),

컬럼(XBridgeⓇ Amide, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 3.5 μm)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 가스가마이신을 확인한다.

7.1.4.235 펜피콕사미드(Fenpicoxamid)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 펜피콕사미드를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-solid phase extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 펜피콕사미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 1차 2차 아민(PSA, Primary secondary amine), C18(Octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 5 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 5 g, 서류, 과일류 및 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 5 g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다(곡류 및 두류의 경우 증류수 5 mL 첨가 후 30분간 방치). 아세토니트릴 20 mL를 가한 뒤 10분간 진탕하고 4,000 G에서 5분간 원심분리한다. 상층액 전량을 취한 후 아세토니트릴 20 mL를 재차 가하여 위 과정을 반복한다. 앞의 상층액과 합하여 부피를 50 mL로 맞춘 후 상층액 8 mL를 취한다.

2) 정제

d-SPE(1차 2차 아민 400 mg 및 C18 400 mg)가 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1)추출’로부터 얻은 상층액 8 mL를 가하고 30초간 와류교반기 등을 이용하여 충분히 혼합한 후 이를 4℃, 4,000 G에서 5분간 원심분리한다. 정제된 상층액을 4 mL 취하여 질소 농축한 후 아세토니트릴 2 mL로 재용해하고, 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: C18계 역상 칼럼 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
3.0	20	80
3.5	90	10
5.0	100	0
7.0	100	0
8.0	20	80
10.0	20	80

라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage: 5.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
펜피콕사미드 (Fenpicoxamid)	614.6	614.25	615	2391)	37
				515	20
				585	16

1) 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

펜피콕사미드(4.8분)

* 분석기기: LC (PerkinElmerⓇ QSight™ LX50),

MS/MS (PerkinElmerⓇ QSight™ 210),

칼럼(Capcell core ADME, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 2.7 μm)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 펜피콕사미드를 확인한다.

8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

8.1 ∼ 8.2 (생   략)

8.3. 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.117(생   략)

<신  설>

8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

8.1 ∼ 8.2 (현행과 같음)

8.3. 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.117 (현행과 같음)

8.3.118 루바베그론(Lubabegron)

1) 분석법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세트산 함유 아세토니트릴/메탄올 혼합용액(1:1, v/v)으로 추출하고 헥산 또는 일차이차아민(PSA)로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 루바베그론 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 루바베그론 표준용액 100 mg/L 농도로부터 0.01, 0.02, 0.04, 0.08, 0.16 µg/mL 농도가 되도록 메탄올로 희석하여 혼합한다.

마) 10 mM 아세테이트 완충용액(PH 4.6): 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산나트륨 0.82 g 을 넣고 물로 표시선까지 채운다. 아세트산으로 pH 4.6이 되도록 조정하여 사용한다.

바) 1% 아세트산(Acetic acid) 함유 아세토니트릴/메탄올 혼합용액(1:1, v/v): 100 mL 용량플라스크에 아세트산 1 mL을 넣고 아세토니트릴/메탄올1:1, v/v): 혼합용액으로 표시선까지 채운다.

사) 0.1 mM 불화암모늄(Ammonium fluoride)용액 : 1,000mL 용량플라스크 불화암모늄 3.7 mg을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 첨가시료의 조제

정량을 하는 경우 조직표준곡선 작성을 위하여 루바베그론이 검출되지 않은 음성대조시료 2 g씩 6개를 준비한 후 Blank를 제외하고 각 표준용액을 0.2 mL씩 가하여 0.001, 0.002, 0.004, 0.008, 0.016 µg/g가 되도록 조제한다.

6) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 10 mM 아세테이트 완충용액 (pH 4.6) 2 mL 을 넣고 2분간 초음파 처리하여 균질화한다. β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-Glucuronidase/Arylsufates) 20 µL첨가하고 65℃에서 1시간 중탕한 후 상온에서 냉각한다. 이 용액에 1% 아세트산 함유 아세토니트릴/메탄올 혼합용액을 12 mL 가하여 10분간 초음파 처리 후 15분간 진탕하고 –4℃에서 9,300 G로 10분간 원심분리한다. (㉠돼지고기를 제외한 축수산물의 경우, 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액을 취하여 헥산 12 mL을 넣고 2분간 진탕한다. -4℃에서 9,300 G로 5분간 원심분리한 후 하층액을 취하여 감압농축한다. ㉡돼지고기의 경우, PSA 500 mg 이 담겨진 50 mL 원심분리관에 상층액을 취하여 5분간 진탕한다. -4℃에서 9,300 G로 5분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 감압농축한다.) 잔류물에 50% 메탄올 1 mL을 넣어 녹이고 상온에서 15,800 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (Xbridge, 2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼 온도 : 40℃

(가) 이동상 A : 0.1 mM 불화암모늄 용액

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
4.0	0	100
7.0	0	100
7.01	50	50
10.0	50	50

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/분

(4) 주입량 :  5 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Capillary voltage :  3.6 kV (Positive), 2.8 kV (Negative)

(4) Collision gas : 아르곤(Ar)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석성분	이온화 (Ionization mode)	분자량 (molecular weight)	선구이온 (Precursor ion,, m/z)	생성이온 (Production, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
루바베그론 (Lubabegron)	+	499.19	500	215	29
				250	20
				251	25

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

8) 정성 및 확인시험

가) 정성 및 확인

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품의 크로마토그램

루바베그론 (3.3분)

그림 1. 루바베그론(0.004 μg/mL)의 크로마토그램

9) 정량시험

가) 정량

정성 및 확인시험과 똑같은 조건에서 Blank 시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계 : 0.0002 mg/kg

9. ∼ 12. (생  략)

9. ∼ 12. (현행과 같음)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명 칭	기타 명칭 또는 시장 명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A가000100 〜 A가014900	(생 략)
<신 설: 명칭 변경에 따라 A가101000에서 이동>
A가015000〜 A가015500	(생 략)
A가015600	고들빼기	씀바귀, Sonchus-leaf crepidiastrum	Crepidiastrum sonchifolium (Bunge) Pak & Kawano / Youngia sonchifolia (Bunge) Maxim. / Crepidiastrum sonchifolium (Maxim.) Pak & Kawano	뿌리, 잎
A가015700〜 A가019100	(생 략)
A가019200	과라나	Guarana	Paullinia cupana H.B. & K.	열매, 씨앗
A가019300〜 A가042900	(생 략)
A가043000	닥풀	딱나무, 금화규, Aibika, Aurea helianthus	Hibiscus manihot Siebold. / Broussonetia kaempferi Siebold / Abelmoschus manihot	잎
A가043100〜 A가075300	(생 략)
A가075400	바나나	Banana	Musa paradisiaca L. / Musa sapientum L. / <신 설>	꽃, 열매
A가075500〜 A가099800	(생 략)
<신 설>
A가099900〜 A가100900	(생 략)
A가101000	서양고추냉이	호스래디쉬(Horseradish), 겨자무	Armoracia rusticana L.	뿌리
A가101100〜 A가101400	(생 략)
A가101500	서양산사자	산사나무, 아그배나무, Maybush, Maytree, Mayblossom, Mayflower, Thorn-appletree, Whitethorn, Howthornberry	Crataegus oxyacantha L.	잎
A가101600〜 A가104700	(생 략)
A가104800	셀러리	셀러리악(Celeriac), Celery, Smallage, Garden celery, Wild celery	Apium graveolens var. dulce Pers	뿌리, 잎, 씨앗
A가104900〜 A가112800	(생 략)
A가112900	신양벚나무	양앵두, 큰양벗나무, 신양벚, 신벗나무, Sour Cherry, <신 설>	Prunus cerasus L. / Cerasus acida P.Gaertn. & al.	열매(씨앗 제외)
A가113000〜 A가128300	(생 략)
A가128400	오크리프	잎상추, Oak leaf lettuce, <신 설>	Lactuca sativa L. var. crispa	잎
A가128500〜 A가148500	(생 략)
<신 설>
A가148600〜 A가367400	(생 략)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명 칭		기타 명칭 또는 시장 명칭		학명 또는 특성		사용부위 (생약명)
A가000100 〜 A가014900	(현행과 같음)
A가014950	겨자무	호스래디쉬(Horseradish), 서양고추냉이		Armoracia rusticana L.		뿌리
A가015000〜 A가015500	(현행과 같음)
A가015600	고들빼기	Sonchus-leaf crepidiastrum		Crepidiastrum sonchifolium (Bunge) Pak & Kawano / Youngia sonchifolia (Bunge) Maxim. / Crepidiastrum sonchifolium (Maxim.) Pak & Kawano		뿌리, 잎
A가015700〜 A가019100	(현행과 같음)
A가019200	과라나	Guarana		Paullinia cupana Kunth		열매, 씨앗
A가019300〜 A가042900	(현행과 같음)
A가043000	닥풀	딱나무, 금화규, Aibika, Aurea helianthus		Hibiscus manihot L. / Broussonetia kaempferi Siebold / Abelmoschus manihot		잎
A가043100〜 A가075300	(현행과 같음)
A가075400	바나나	Banana		Musa paradisiaca L. / Musa sapientum L. / Musaacuminata Colla		꽃, 열매
A가075500〜 A가099800	(현행과 같음)
A가099850	상동나무	-		Sageretia thea (Osbeck) M. C. Johnst.		열매
A가099900〜 A가100900	(현행과 같음)
<삭 제: A가014950으로 이동>
A가101100〜 A가101400	(현행과 같음)
A가101500	서양산사자	산사나무, 아그배나무, Maybush, Maytree, Mayblossom, Mayflower, Thorn-appletree, Whitethorn, Hawthorn berry		Crataegus oxyacantha L.		잎
A가178400〜 A가104700	(현행과 같음)
A가104800	셀러리	셀러리악(Celeriac), Celery, Smallage, Garden celery, Wild celery		Apium graveolens var. dulce Pers		뿌리, 잎, 씨앗, 줄기
A가104900〜 A가112800	(현행과 같음)
A가112900	신양벚나무	양앵두, 큰양벗나무, 신양벚, 신벗나무, Sour Cherry, Tart Cherry		Prunus cerasus L. / Cerasus acida P.Gaertn. & al.		열매(씨앗 제외)
A가113000〜 A가128300	(현행과 같음)
A가128400	오크리프	잎상추, Oak leaf lettuce, 파게로		Lactuca sativa L. var. crispa		잎
A가128500〜 A가148500	(현행과 같음)
A가148550	쥐오줌풀		Valerian Root		Valeriana fauriei Briq.		어린잎
A가148600〜 A가367400	(현행과 같음)

2. 동물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A나000100 〜 A나019300	(생 략)
<신 설>
A나019400 〜 A나029700	(생 략)
<신 설>
A나029800 〜 A나050100	(생 략)
<신 설>
A나050200 〜 A나055800	(생 략)
A나055900	식용달팽이	-	Helix pomatia / Nesiohelix samarangae / Achatina fulica (Bowdich) Achatinidae / <신 설>	-
A나056000 〜 A나074300	(생 략)
<신 설>
A나074400 〜 A나092200	(생 략)
<신 설>
A나092900 〜 A나093400	(생 략)
<신 설>
<신 설>
A나093520 〜 A나095600	(생 략)

2. 동물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A나000100 〜 A나019300	(현행과 같음)
A나019350	노랑코홍어	Yellownose skate	Zearaja chilensis	-
A나019400 〜 A나029700	(현행과 같음)
A나029750	두점갑오징어	애기갑오징어	Sepia kobiensis	-
A나029800 〜 A나050100	(현행과 같음)
A나050150	빨강오징어	Neon flying squid	Ommastrephes bartramii	-
A나050200 〜 A나055800	(현행과 같음)
A나055900	식용달팽이	-	Helix pomatia / Nesiohelix samarangae / Achatina fulica (Bowdich) Achatinidae / Helix aspersa	-
A나056000 〜 A나074300	(현행과 같음)
A나074350	창끝갑오징어	-	Sepia stellifera	-
A나074400 〜 A나092800	(현행과 같음)
A나092850	Idiot rockfish	Longspine thoryhead	Sebastolobus altirelis	-
A나092900 〜 A나093500	(현행과 같음)
A나093505	Northern shrimp	-	Pandalus borealis	-
A나093510	Pacific golden crab	-	Chaceon bicolor	-
A나093520 〜 A나095600	(현행과 같음)

3. ∼ 4. (생  략)

3. ∼ 4. (현행과 같음)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)	사용 조건
B가000100 ∼ B가006600	(생 략)
B가006700	서양산사자	산사나무, 아그배나무, Maybush, Maytree, Mayblossom, Mayflower, Thorn-appletree, Whitethorn, Howthornberry	Crataegus oxyacantha L.	열매, 꽃, 씨앗	-
B가006800 ∼ B가014900	(생 략)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)	사용 조건
B가000100 ∼ B가006600	(현행과 같음)
B가006700	서양산사자	산사나무, 아그배나무, Maybush, Maytree, Mayblossom, Mayflower, Thorn-appletree, Whitethorn, Hawthorn berry	Crataegus oxyacantha L.	열매, 꽃, 씨앗	-
B가006800 ∼ B가014900	(현행과 같음)

2. ∼ 4. (생  략)

2. ∼ 4. (현행과 같음)

[별표 3] “한시적 기준․규격에서 전환된 원료”의 목록

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위	제조/ 사용 조건
C000100	갈색거저리 유충	밀웜, Mealworm, <신 설>	Tenebrio molitor L.	-	-
C000200 ∼ C000300	(생 략)
C000400	흰점박이꽃 무지유충	-	Protaetia brevitarsis	-	-
C000500 ∼ C000700	(생 략)

[별표 3] “한시적 기준․규격에서 전환된 원료”의 목록

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위	제조/ 사용 조건
C000100	갈색거저리 유충	밀웜, Mealworm, 고소애	Tenebrio molitor L.	-	-
C000200 ∼ C000300	(현행과 같음)
C000400	흰점박이꽃 무지유충	굼뱅이, 꽃뱅이	Protaetia brevitarsis	-	-
C000500 ∼ C000700	(현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (19) (생   략)

(20) 다이쾃(Diquat)

(생   략)

완두	0.1T

두류	0.5T

(21) ∼ (23) (생   략)

(24) 디클로베닐(Dichlobenil)

(생   략)

<신    설>

(25) ∼ (78) (생   략)

(79) 알루미늄포스파이드[Aluminium   Phosphide(Hydrogen phosphide)]

(생   략)

<신    설>

(80) ∼ (115) (생   략)

(116) 카탑(Cartap)

(생   략)

<신    설>

(117) ∼ (126) (생   략)

(127) 클로르메쾃(Chlormequat)

(생   략)

<신    설>

(128) ∼ (209) (생   략)

(210) 페나자퀸(Fenazaquin)

(생   략)

호프	30T

(211) ∼ (224) (생   략)

(225) 사이프로디닐(Cyprodinil)

(생   략)

<신    설>

(226) ∼ (227) (생   략)

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(생   략)

취나물	3.0

(229) ∼ (236) (생   략)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(생   략)

상추	1.0

(238) (생   략)

(239) 플루아지남(Fluazinam)

(생   략)

<신    설>

(240) ∼ (247) (생   략)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(생   략)

감귤	0.02

(249) ∼ (282) (생   략)

(283) 아시벤졸라-에스-메틸

(Acibenzolar-S-methyl)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(284) ∼ (303) (생   략)

(304) 프로베나졸(Probenazole)

(생   략)

<신    설>

(305) ∼ (316) (생   략)

(317) 하이멕사졸(Hymexazol)

(생   략)

<신    설>

(318) ∼ (323) (생   략)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(생   략)

호프	20T

(325) ∼ (348) (생   략)

(349) 노발루론(Novaluron)

(생   략)

블루베리	7.0T

(350) ∼ (352) (생   략)

(353) 메트코나졸(Metconazole)

(생   략)

파	1.0

(354) ∼ (356) (생   략)

(357) 디티오카바메이트

(Dithiocarbamates)

(생   략)

블루베리	5.0T

(358) ∼ (429) (생   략)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(생   략)

고수(잎)	0.05T

수수	0.08T

(431) ∼ (436) (생   략)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(생   략)

딸기	2.0

(438) ∼ (440) (생   략)

(441) 피리벤카브(Pyribencarb)

(생   략)

딸기	0.5

(442) ∼ (458) (생   략)

(459) 피플루뷰마이드(Pyflubumide)

(생   략)

<신    설>

(460) ∼ (499) (생   략)

(500) 피디플루메토펜(Pydiflumetofen)

(생   략)

<신    설>

(501) ∼ (508) (생   략)

(509) 브로플라닐라이드(Broflanilide)

(생   략)

무(잎)	2.0

수박	0.05

토마토	0.3

(510) ∼ (512) (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

주1. ∼ 주2. (생   략)

주3. ------------------------ ---------------------- 중 “24. 생약시험법”에 따른다.

주4. ∼ 주9. (생   략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (19) (현행과 같음)

(20) 다이쾃(Diquat)

(현행과 같음)

<삭    제>

두류	0.9†

(21) ∼ (23) (현행과 같음)

(24) 디클로베닐(Dichlobenil)

(현행과 같음)

쌀	0.05

(25) ∼ (78) (현행과 같음)

(79) 알루미늄포스파이드[Aluminium   Phosphide(Hydrogen phosphide)]

(현행과 같음)

감귤	0.05

(80) ∼ (115) (현행과 같음)

(116) 카탑(Cartap)

(현행과 같음)

가지	0.05

(117) ∼ (126) (현행과 같음)

(127) 클로르메쾃(Chlormequat)

(현행과 같음)

트리티케일	5.0†

(128) ∼ (209) (현행과 같음)

(210) 페나자퀸(Fenazaquin)

(현행과 같음)

호프	30†

(211) ∼ (224) (현행과 같음)

(225) 사이프로디닐(Cyprodinil)

(현행과 같음)

석류	5.0†

(226) ∼ (227) (현행과 같음)

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(현행과 같음)

취나물	7.0

(229) ∼ (236) (현행과 같음)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(현행과 같음)

상추	15

(238) (현행과 같음)

(239) 플루아지남(Fluazinam)

(현행과 같음)

땅콩	0.01†

(240) ∼ (247) (현행과 같음)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(현행과 같음)

감귤	0.07

(249) ∼ (282) (현행과 같음)

(283) 아시벤졸라-에스-메틸

(Acibenzolar-S-methyl)

(현행과 같음)

무(뿌리)	0.3

무(잎)	1.0

(284) ∼ (303) (현행과 같음)

(304) 프로베나졸(Probenazole)

(현행과 같음)

토마토	0.05

(305) ∼ (316) (현행과 같음)

(317) 하이멕사졸(Hymexazol)

(현행과 같음)

파	0.05

(318) ∼ (323) (현행과 같음)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(현행과 같음)

호프	20†

(325) ∼ (348) (현행과 같음)

(349) 노발루론(Novaluron)

(현행과 같음)

블루베리	7.0†

(350) ∼ (352) (현행과 같음)

(353) 메트코나졸(Metconazole)

(현행과 같음)

파	5.0

(354) ∼ (356) (현행과 같음)

(357) 디티오카바메이트

(Dithiocarbamates)

(현행과 같음)

블루베리	5.0

(358) ∼ (429) (현행과 같음)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(현행과 같음)

고수(잎)	10

수수	0.3†

(431) ∼ (436) (현행과 같음)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(현행과 같음)

딸기	4.0†

(438) ∼ (440) (현행과 같음)

(441) 피리벤카브(Pyribencarb)

(현행과 같음)

딸기	2.0

(442) ∼ (458) (현행과 같음)

(459) 피플루뷰마이드(Pyflubumide)

(현행과 같음)

가지	0.07

(460) ∼ (499) (현행과 같음)

(500) 피디플루메토펜(Pydiflumetofen)

(현행과 같음)

수수	3.0†

(501) ∼ (508) (현행과 같음)

(509) 브로플라닐라이드(Broflanilide)

(현행과 같음)

무(잎)	5.0

수박	0.07

토마토	1.0

(510) ∼ (512) (현행과 같음)

(513) 아피도피로펜(Afidopyropen)

◎ 잔류물의 정의 : Afidopyropen

가지	0.05

딸기	0.2

무(뿌리)	0.05

무(잎)	0.1

(514) 가스가마이신(Kasugamycin)

◎ 잔류물의 정의 : Kasugamycin

가지	0.3

감귤	0.2

감자	0.05

갓	8.0

건삼	0.05

고수(잎)	2.0

고추	1.5

근대	8.0

냉이	8.0

당근	0.2

들깻잎	5.0

딸기	0.3

마	0.05

마(건조)	0.05

마늘	0.05

머위	0.05

멜론	0.2

무(뿌리)	0.05

무(잎)	2.0

미나리	0.5

배추	0.1

부추	0.7

브로콜리	0.2

비트	0.15

상추	10

셀러리	0.5

수박	0.05

수삼	0.05

시금치	3.0

쌀	0.07

쑥갓	8.0

양배추	0.2

양상추	10

양파	0.05

엇갈이배추	0.3

오이	0.2

참외	0.3

청경채	8.0

취나물	8.0

치커리	8.0

키위	0.05

토마토	0.5

파	0.3

풋마늘	0.05

피망	1.5

(515) 펜피콕사미드(Fenpicoxamid)

◎ 잔류물의 정의 : Fenpicoxamid

바나나	0.15†

주1. ∼ 주2. (현행과 같음)

주3. ------------------------ ---------------------- 중 “29. 생약시험법”에 따른다.

주4. ∼ 주9. (현행과 같음)

[별표 5] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (107) (생   략)

(108) 톨트라주릴(Toltrazuril) : 항원충제

(생   략)

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

(109) ∼ (116) (생   략)

(117) 설피린(Sulpyrine, Dipyrone, Metamizole) : 항염증제

(생   략)

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

(118) ∼ (184) (생   략)

(185) 메토밀(Methomyl) : 살충제

(생   략)

닭근육	0.01

<신   설>

<신   설>

(186) ∼ (192) (생   략)

<신   설>

＊주 1 ∼ 주 2 (생  략)

<신    설>

[별표 5] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (107) (현행과 같음)

(108) 톨트라주릴(Toltrazuril) : 항원충제

(현행과 같음)

염소근육         0.1

염소지방        0.15

염소간          0.5

염소신장        0.25

(109) ∼ (116) (현행과 같음)

(117) 설피린(Sulpyrine, Dipyrone, Metamizole) : 항염증제

(현행과 같음)

양근육           0.1

양지방           0.1

양간             0.1

양신장           0.1

염소근육        0.1

염소지방        0.1

염소간          0.1

염소신장        0.1

(118) ∼ (184) (현행과 같음)

(185) 메토밀(Methomyl) : 살충제

(현행과 같음)

가금근육	0.01

양근육           0.02

염소근육        0.02

(186) ∼ (192) (현행과 같음)

(193) 루바베그론(Lubabegron)

: 성장보조제

◎ 잔류물의 정의 : Lubabegron

소근육            0.002†

소지방            0.002†

소간              0.007†

소신장            0.007†

＊주 1 ∼ 주 2 (현행과 같음)

주 3. 상기 †표시된 기준은 수출국의 요청으로 설정된 잔류허용기준을 의미하며, 기준 적용 시에는 국내 및 수입 식품에 동일하게 적용한다.

[별표 6] ∼ [별표 8] (생   략)

[별표 6] ∼ [별표 8] (현행과 같음)