식품의약품안전처 고시 제2022-84호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2022. 12. 1.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 고시 제2022-84호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

설사성 패독 기준 관리 대상 물질을 확대하고, 농약의 잔류허용기준 등을 신설 및 개정하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

2. 주요 내용

가. 설사성 패독 기준 관리 대상 물질 확대[안 제2. 3. 5) (9) ②]

1) 국내 설사성 패류 독소의 기준 관리 대상 물질이 국제기준과 상이하여 기준·규격의 국제조화 필요

2) 설사성 패독 기준 관리 대상 물질의 확대

3) 국내 유통 패류의 안전관리 강화 및 국제기준과의 조화

나. 농산물의 농약 잔류허용기준 개정[안 별표 4 중 (66) 사이퍼메트린, (67) 사이플루트린, (73) 아세페이트, (112) 카벤다짐, (114) 카보퓨란, (131) 클로르피리포스, (421) 레피멕틴, (525) 플루인다피르]

1) 「농약관리법」에 따른 등록(예정) 농약의 잔류허용기준 신설 및 국내외 사용되는 농약의 잔류허용기준 재평가 결과 반영 필요

2) 사이퍼메트린 등 8종의 농약 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 합리적으로 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

다. 일반시험법 신설 및 개정[안 제8. 7. 7.1 7.1.3 7.1.3.112 및 제8. 9. 9.8 9.8.3]

1) 기준‧규격 신설 및 개정에 따른 시험법 마련 필요

2) 농산물 중 플루인다피르 농약 시험법 신설

3) 설사성 패독 기준 관리 대상 물질 확대에 따른 시험법 개정

4) 과학적인 시험법 개정으로 검사 신뢰도를 제고함으로서 국민에게 안전한 식품 공급

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

가) 공고 제2022-322호(2022. 7. 18. ∼ 2022. 9. 19.)

나) 공고 제2022-323호(2022. 7. 18. ∼ 2022. 9. 19.)

2) 식품·축산물위생심의위원회

가) 식품위생심의위원회 유해오염물질분과 심의: 2022. 9. 27.

나) 식품위생심의위원회 잔류물질분과 심의: 2022. 9. 30., 2022. 11. 7∼8.(서면)

3) 규제심사

가) 국무조정실 규제심사 대상여부

(1) 규제심사 비대상 제2022-2840호(2022. 7. 8.)

(2) 규제심사 대상 제2022-2841호(2022. 7. 11.)

나) 식약처 자체규제심사(2022. 10. 14 ∼ 10. 17, 원안의결)

다) 법제처 심사 : 법령위반 및 위임범위 일탈 없음(2022. 10. 18 ∼ 11. 1.)

라) 국무조정실 규제개혁위원회 예비심사 : 비중요규제(862회, 2022.11.25.)

식품의약품안전처 고시 제2022-84호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2022년  12월 1일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 한다.

제2. 3. 5) (9) 중 ②를 다음과 같이 한다.

② 설사성 패독

대 상 식 품	기 준(mg OA 당량*/kg)
이매패류	0.16 이하

* Okadaic acid 및 Dinophysistoxin-1, Dinophysistoxin-2를 Okadaic acid로 환산하여 합한 값

제8. 7. 7.1 7.1.3 중 7.1.3.112를 다음과 같이 신설한다.

7.1.3.112 플루인다피르(Fluindapyr)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 플루인다피르 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제

무수황산마그네슘 150 mg과 1차 2차 아민 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 와류교반기 등을 이용하여 충분히 혼합한 후 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18계 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	30	70
2.0	30	70
4.0	40	60
5.0	80	20
7.0	100	0
8.0	100	0
8.5	30	70
10.0	30	70

라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루인다피르 (Fluindapyr)	351.4	351.1	352	2561)	25
				276	24
				312	25

1) 정량이온

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

플루인다피르(6.0분)

* 분석기기 : LC(WatersⓇ Acquity UPLC), MS/MS(WatersⓇ Xevo TQ-S),
컬럼(XbridgeⓇ C18, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 3.5 μm)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정성시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 플루인다피르를 확인한다.

아. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

제8. 9. 9.8 9.8.3 나. 중 “90% 메탄올로 추출하여”를 “메탄올로 추출하고 가수분해하여 Dinophysistoxin-3(DTX-3)를 Okadaic acid(OA), DTX-1, DTX-2로 전환 시킨 후 정제하여”로 한다.

제8. 9. 9.8 9.8.3 다. 1) 중 “질량분석기”를 “질량분석기(HPLC/MS/MS)”로 한다.

제8. 9. 9.8 9.8.3 다. 중 2)를 다음과 같이 한다.

2) 시린지 필터(Syringe filter) : 0.2 μm 또는 이와 동등한 것

제8. 9. 9.8 9.8.3 다. 중 3)을 다음과 같이 신설한다.

3) SPE 카트리지 : Sep-pak C18(6cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

제8. 9. 9.8 9.8.3 라. 중 3) ∼ 6)을 다음과 같이 한다.

3) 기타 시약 ： 특급 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액 : OA와 DTX-1, DTX-2 표준품을 메탄올로 용해하여 1 μg/mL이 되도록 한다. 표준원액은 영하 20℃ 이하에서 보관한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 0.0025, 0.0050, 0.010, 0.020 및 0.040 μg/mL 농도가 되도록 메탄올로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다(사용 시 조제한다).

6) 이동상 용액 A (2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 물) : 128 mg 개미산암모늄을 소량의 물에 녹인 후, 개미산 (>98%) 1.88 mL와 물로 1,000 mL 부피플라스크의 표시선까지 채운다.
이동상 용액 B (2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 95% 아세토니트릴 용액) : 128 mg 개미산암모늄을 물로 녹여 부피플라스크를 이용하여 50 mL으로 맞춘 후, 개미산 1.88 mL와 100% 아세토니트릴로 1,000 mL 부피플라스크의 표시선까지 채운다.

제8. 9. 9.8 9.8.3 마. 중 3)을 다음과 같이 한다.

3) 추출

균질화한 시료 2 g을 50 mL 원심분리관에 넣고 메탄올 9 mL를 가하여 교반기를 이용하여 최고 속도로 3분 동안 추출한 후 원심분리(2,000 ×G, 10분)하여 상층액을 20 mL 부피플라스크에 취한다. 남은 잔사에 메탄올 9 mL를 가하고 위와 같은 방법으로 추출하여 상등액을 이전에 모아둔 상등액과 합한 다음 표시선까지 메탄올로 채운 뒤 균질화한다. 상등액 20 mL 중 2 mL를 취하여 가수분해한다.

제8. 9. 9.8 9.8.3 마. 중  4) ∼ 6)을 다음과 같이 신설한다.

4) 가수분해

밀봉이 가능한 바이알에 추출액 2 mL과 2.5 M 수산화나트륨 0.25 mL을 넣고 교반기로 30초간 교반한 후 76℃에서 40분간 가수분해하고 상온에서 방냉 후 2.5 M 염산 0.25 mL을 넣어 Vortex로 30초간 교반하여 중화한다(가수분해 전 추출액 높이를 표시하고, 방냉 후 증발하여 추출액이 줄어든 경우 메탄올을 가하여 높이를 맞춘다).

5) 탈지

가수분해한 용액 2.5 mL에 헥산 2.5 mL을 가하여 30초간 진탕 후 상층액인 헥산층을 제거하고 증류수 2.5 mL을 가하여 희석한다.

6) 정제

탈지한 용액 5 mL을 미리 메탄올 5 mL과 증류수 5 mL 순으로 각각 세척한 C18 카트리지에 초당 1방울의 속도로 주입한다. 여기에 40% 메탄올 3 mL, 물 3 mL, 40% 메탄올 3 mL 순으로 세척하여 버리고 감압펌프를 이용하여 여액을 제거한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 건고한 다음 메탄올 2 mL로 재용해하여 0.2 μm 시린지 필터(PVDF syringe filter)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

제8. 9. 9.8 9.8.3 중 바.와 사.를 삭제하고, 바. ∼ 아.를 다음과 같이 신설한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 조건

가) 칼럼 : Xbridge C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A : 2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 물

(2) 이동상 B: 2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 95% 아세토니트릴 용액

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상 용액 A(%)	이동상 용액 B(%)
0	90	10
1	90	10
10	10	90
13	10	90
15	90	10
19	90	10

다) 유속 : 0.4 mL/min

라) 칼럼온도 : 40℃

마) 주입량 : 5 µL

2) 질량분석기/질량분석기(MS/MS)의 분석조건

가) Ionization mode : ESI(Negative)

나) Source voltage : 4.5 kV

다) Collision Gas : 헬륨 또는 질소

라) Capillary Temperature : 650℃

마) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석성분 (Compound)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
OA	803.5	255	62
		113	60
		563	46
DTX-1	817.5	255	62
		113	60
		563	54
DTX-2	803.5	255	62
		113	60
		563	44

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 정성이온 이외의 생성이온도 적용 가능함

3) 검량선 작성

표준용액을 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기에 주입한 후 얻어진 크로마토그램 상의 정량이온의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다

4) 표준물질의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기/질량분석기의 표준용액 크로마토그램
(OA : 8.58분, DTX-1 : 9.68분, DTX-2 : 8.89분)

사. 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위(상대값)
> 50 %	± 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	± 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	± 30 %

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액 크로마토그램 상의 피크 머무름 시간과 특성이온이 표준용액과 일치할 때 정량이온에 대한 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

1) 계산

OA, DTX-1, DTX-2의 독소별 함량은 다음 식으로부터 각각 구한다.

설사성 패독(OA)의 함량(mg/kg) = COA × V/S × D

설사성 패독(DTX-1)의 함량(mg/kg) = CDTX-1 × V/S × D

설사성 패독(DTX-2)의 함량(mg/kg) = CDTX-2 × V/S × D

COA : 검량선에서 구한 Okadaic acid의 농도(μg/mL)

CDTX-1 : 검량선에서 구한 DTX-1의 농도(μg/mL)

CDTX-2 : 검량선에서 구한 DTX-2의 농도(μg/mL)

V : 시험용액의 최종부피(mL)

S : 시료의 채취량(g)

D : 희석배수

2) 오카다익산으로의 당량 계산(Okadaic acid Equivalents)

계산된 OA, DTX-1, DTX-2의 독소별 함량을 각 독소에 해당하는 독성등가계수(Toxic Equivalency Factors : TEFs)로 곱하고, 이들의 합계를 오카다익산 당량(mg OA 당량/kg)로 한다.

설사성패독	WHO-TEFs
Okadaic acid	1
DTX-1	1
DTX-2	0.5

별표 4 (66) 사이퍼메트린(Cypermethrin) 중 “조 1.0T”을 “조 0.5”로 하고, “키위 2.0T”을 “키위 0.5”로 한다.

별표 4 (67) 사이플루트린(Cyfluthrin) 중 “토란 0.1T”을 “토란 0.05”로 한다.

별표 4 (73) 아세페이트(Acephate) 중 “땅콩 0.2T”를 “땅콩 0.02†”로 한다.

별표 4 (112) 카벤다짐(Carbendazim) 중 “후추 0.15†”를 삭제한다.

별표 4 (114) 카보퓨란(Carbofuran) 중 “피망 0.5T”를 “피망 0.05”로 한다.

별표 4 (131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos) 중 “가지 0.05”, “감귤류 1.0†”, “감자 0.05”, “겨자채 0.15”, “견과류 0.05†”, “고구마 0.05”, “고구마줄기 0.05”, “고추 1.0”, “고추(건조) 1.0”, “당근 0.09†”, “대두 0.04†”, “두리안 0.4†”, “들깻잎 0.2”, “마늘 0.05”, “매실 1.0”, “면실 0.15†”, “모과 1.0”, “무(뿌리) 0.07”, “무(잎) 0.05”, “밀 0.4†”, “바나나 2.0†”, “밤 0.05”, “배추 0.2”, “복숭아 0.5”, “브로콜리 0.05”, “수수 0.5†”, “순무 0.05”, “시금치 0.05”, “양배추 0.05”, “양파 0.05”, “엇갈이배추 0.2”, “오이 0.5”, “옥수수 0.05†”, “용안 0.9†”, “우엉 0.05”, “우엉잎 0.05”, “율무 0.1”, “인과류 1.0”, “자두 0.2”, “차 2.0†”, “차즈기(잎) 0.2”, “커피원두 0.05†”, “케일 0.15”, “콜라비 0.05”, “크랜베리 1.0†”, “파 0.05”, “팥 0.05”, “풋마늘 0.05”, “피망 1.0”, “향신씨 5.0†”, “향신열매 1.0†”, “호박 0.3”을 삭제한다.

별표 4 (421) 레피멕틴(Lepimectin) 중 “상추 1.0”을 “상추 0.7”로 한다.

별표 4 중 (525)를 다음과 같이 신설한다.

(525) 플루인다피르(Fluindapyr)

◎ 잔류물의 정의 : Fluindapyr

쌀	0.05

부칙

제1조(시행일) ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

② 제1조제1항에도 불구하고 별표 4 중 (131) 클로르피리포스의 개정규정은 2024년 1월 1일부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

신․구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제1. (생  략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 2. (생   략)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 4) (생  략)

5) 오염물질

(1) ∼ (8) (생  략)

제1. (현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 오염물질

(1) ∼ (8) (현행과 같음)

(9) 패독소 기준

① (생  략)

② 설사성 패독 (Okadaic acid 및 Dinophysistoxin-1의 합계)

대 상 식 품	기 준(mg/kg)
이매패류	0.16 이하

<신  설>

③ (생  략)

(10) (생  략)

6) ∼ 17) (생  략)

4. (생  략)

(9) 패독소 기준

① (현행과 같음)

② 설사성 패독

대 상 식 품	기 준(mg OA 당량*/kg)
이매패류	0.16 이하

* Okadaic acid 및 Dinophysistoxin-1, Dinophysistoxin-2를 Okadaic acid로 환산하여 합한 값

③ (현행과 같음)

(10) (현행과 같음)

6) ∼ 17) (현행과 같음)

4. (현행과 같음)

제3. ∼ 제7. (생  략)

제3. ∼ 제7. (현행과 같음)

제8. 일반시험법

1. ∼ 6. (생  략)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.1.3.111 (생  략)

제8. 일반시험법

1. ∼ 6. (현행과 같음)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.1.3.111 (현행과 같음)

<신  설>

7.1.3.112 플루인다피르(Fluindapyr)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 플루인다피르 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제

무수황산마그네슘 150 mg과 1차 2차 아민 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 와류교반기 등을 이용하여 충분히 혼합한 후 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18계 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	30	70
2.0	30	70
4.0	40	60
5.0	80	20
7.0	100	0
8.0	100	0
8.5	30	70
10.0	30	70

라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.0 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루인다피르 (Fluindapyr)	351.4	351.1	352	2561)	25
				276	24
				312	25

1) 정량이온

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1.

액체크로마토그래프-질량분석기에서

표준품의 크로마토그램 예시.

플루인다피르(6.0분)

* 분석기기: LC(WatersⓇ Acquity UPLC),

MS/MS(WatersⓇ Xevo TQ-S),

컬럼(XbridgeⓇ C18, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 3.5 μm)

5) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정성시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 플루인다피르를 확인한다.

아. 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8. (생  략)

9. 식품 중 유해물질 시험법

9.1 ∼ 9.7 (생  략)

9.8 패독소

9.8.1 ∼ 9.8.2. (생 략)

9.8.3 설사성 패독

가. (생 략)

나. 분석원리

이매패류의 패육을 취하여 균질화한 후 90% 메탄올로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기

2) 막 여과지(membrane filter) : 0.45 μm 또는 이와 동등한 것

<신  설>

라. 시약 및 시액

1) ∼ 2) (생  략)

3) 표준원액 : Okadaic acid(OA)와 Dinophysistoxin-1(DTX-1) 표준품을 정밀히 달아 메탄올로 용해하여 50 μg/mL이 되도록 한다. 표준원액은 영하 20℃ 이하에서 보관한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 0.005, 0.010, 0.020, 0.050 및 0.100 μg/mL 농도가 되도록 90% 메탄올로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다(사용 시 조제한다).

5) 이동상 원액 : 90% 개미산 (Formic acid; HCOOH) 12.79 g (96% 개미산은 11.99 g, 98% 개미산은 11.74 g)과 개미산암모늄(Ammonium formate; NH4COOH) 0.63 g을 250 mL 용량플라스크에 취하여 100 mL의 물로 용해하고 암모니아수를 이용하여 pH 2.3으로 조절한 후 물로 표시선까지 채운다.

6) 추출용액 : 90% 메탄올(v/v)

마. 시험용액의 조제

1) ∼ 2) (생 략)

3) 추출

균질화한 시료 1 g을 비커에 달아 90% 메탄올 9 mL를 가하고  교반기를 이용하여 3분 동안 추출한다. 추출액을 15 mL 원심분리관에 넣고 90% 메탄올로 10 mL 눈금에 맞춘 후 원심분리(1,000 × G, 5분)한다. 상등액 중 2 mL를 막 여과지(membrane filter)를 이용하여 여과한 것을 시험용액으로 한다.

<신  설>

<신  설>

<신  설>

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18 (2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상은 A 및 B 용액의 농도 구배조건에 따라 사용한다

이동상 A : 증류수․이동상원액(95:5, v/v)

이동상 B : 95% 아세토니트릴․이동상원액(95:5, v/v)

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	80	20
10.0	0	100
15.0	0	100
17.0	80	20
20.0	80	20

다) 유속 : 0.2 mL/분

라) 주입량 : 5 μL

마) 칼럼온도 : 35℃

2) 질량분석기/질량분석기의 조건

가) Ionization : ESI(Negative)

나) Source voltage : - 4.0 kV

다) Gas : 헬륨 또는 질소

라) Capillary Temperature : 300℃

<신  설>

3) 검량선 작성

표준용액을 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기에 주입한 후 얻어진 크로마토그램 상의 특성이온의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.

<신  설>

4) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 시험용액 크로마토그램상의 특성이온 피크는 표준용액 특성이온 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치 여부를 확인한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion(m/z)
OA	804	255
DTX-1	818	255

5) 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액 특성이온의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 설사성 패독의 함량을 정량한다.

사. 계산

설사성 패독의 함량(μg/g) = (COA + CDTX-1) × V/S

COA : 검량선에서 구한 Okadaic acid의 농도(μg/mL)

CDTX-1 : 검량선에서 구한 Dinophysistoxin-1의 농도(μg/mL)

V : 시험용액의 최종부피(mL)

S : 시료의 채취량(g)

<신  설>

9.8.4 ∼ 12. (생 략)

8. (현행과 같음)

9. 식품 중 유해물질 시험법

9.1 ∼ 9.7 (현행과 같음)

9.8 패독소

9.8.1 ∼ 9.8.2. (현행과 같음)

9.8.3 설사성 패독

가. (현행과 같음)

나. 분석원리

이매패류의 패육을 취하여 균질화한 후 메탄올로 추출하고 가수분해하여 Dinophysistoxin-3(DTX-3)를 Okadaic acid(OA), DTX-1, DTX-2로 전환 시킨 후 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기(HPLC/MS/MS)

2) 시린지 필터(Syringe filter) : 0.2 μm 또는 이와 동등한 것

3) SPE 카트리지 : Sep-pak C18(6cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

라. 시약 및 시액

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 기타 시약 ： 특급 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액 : OA와 DTX-1, DTX-2 표준품을 메탄올로 용해하여 1 μg/mL이 되도록 한다. 표준원액은 영하 20℃ 이하에서 보관한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 0.0025, 0.0050, 0.010, 0.020 및 0.040 μg/mL 농도가 되도록 메탄올로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다(사용 시 조제한다).

6) 이동상 용액 A (2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 물) : 128 mg 개미산암모늄을 소량의 물에 녹인 후, 개미산 (>98%) 1.88 mL와 물로 1,000 mL 부피플라스크의 표시선까지 채운다.
이동상 용액 B (2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 95% 아세토니트릴 용액) : 128 mg 개미산암모늄을 물로 녹여 부피플라스크를 이용하여 50 mL으로 맞춘 후, 개미산 1.88 mL와 100% 아세토니트릴로 1,000 mL 부피플라스크의 표시선까지 채운다.

마. 시험용액의 조제

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 추출

균질화한 시료 2 g을 50 mL 원심분리관에 넣고 메탄올 9 mL를 가하여 교반기를 이용하여 최고 속도로 3분 동안 추출한 후 원심분리(2,000 ×G, 10분)하여 상층액을 20 mL 부피플라스크에 취한다. 남은 잔사에 메탄올 9 mL를 가하고 위와 같은 방법으로 추출하여 상등액을 이전에 모아둔 상등액과 합한 다음 표시선까지 메탄올로 채운 뒤 균질화한다. 상등액 20 mL 중 2 mL를 취하여 가수분해한다.

4) 가수분해
밀봉이 가능한 바이알에 추출액 2 mL과 2.5 M 수산화나트륨 0.25 mL을 넣고 교반기로 30초간 교반한 후 76℃에서 40분간 가수분해하고 상온에서 방냉 후 2.5 M 염산 0.25 mL을 넣어 Vortex로 30초간 교반하여 중화한다(가수분해 전 추출액 높이를 표시하고, 방냉 후 증발하여 추출액이 줄어든 경우 메탄올을 가하여 높이를 맞춘다).

5) 탈지

가수분해한 용액 2.5 mL에 헥산 2.5 mL을 가하여 30초간 진탕 후 상층액인 헥산층을 제거하고 증류수 2.5 mL을 가하여 희석한다.

6) 정제

탈지한 용액 5 mL을 미리 메탄올 5 mL과 증류수 5 mL 순으로 각각 세척한 C18 카트리지에 초당 1방울의 속도로 주입한다. 여기에 40% 메탄올 3 mL, 물 3 mL, 40% 메탄올 3 mL 순으로 세척하여 버리고 감압펌프를 이용하여 여액을 제거한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 건고한 다음 메탄올 2 mL로 재용해하여 0.2 μm 시린지 필터(PVDF syringe filter)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 조건

가) 칼럼 : Xbridge C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A : 2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 물

(2) 이동상 B: 2 mM 개미산암모늄과 50 mM 개미산을 함유한 95% 아세토니트릴 용액

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상 용액 A(%)	이동상 용액 B(%)
0	90	10
1	90	10
10	10	90
13	10	90
15	90	10
19	90	10

다) 유속 : 0.4 mL/min

라) 칼럼온도 : 40℃

마) 주입량 : 5 µL

2) 질량분석기/질량분석기(MS/MS)의 분석조건

가) Ionization mode : ESI(Negative)

나) Source voltage : 4.5 kV

다) Collision Gas : 헬륨 또는 질소

라) Capillary Temperature : 650℃

마) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석성분 (Compound)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
OA	803.5	255	62
		113	60
		563	46
DTX-1	817.5	255	62
		113	60
		563	54
DTX-2	803.5	255	62
		113	60
		563	44

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 정성이온 이외의 생성이온도 적용 가능함

3) 검량선 작성
표준용액을 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기에 주입한 후 얻어진 크로마토그램 상의 정량이온의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다

4) 표준물질의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기/질량분석기의 표준용액 크로마토그램
(OA : 8.58분, DTX-1 : 9.68분, DTX-2 : 8.89분)

사. 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위(상대값)
> 50 %	± 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	± 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	± 30 %

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액 크로마토그램 상의 피크 머무름 시간과 특성이온이 표준용액과 일치할 때 정량이온에 대한 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

1) 계산

OA, DTX-1, DTX-2의 독소별 함량은 다음 식으로부터 각각 구한다.

설사성 패독(OA)의 함량(mg/kg) = COA × V/S × D

설사성 패독(DTX-1)의 함량(mg/kg) = CDTX-1 × V/S × D

설사성 패독(DTX-2)의 함량(mg/kg) = CDTX-2 × V/S × D

COA : 검량선에서 구한 Okadaic acid의 농도(μg/mL)

CDTX-1 : 검량선에서 구한 DTX-1의 농도(μg/mL)

CDTX-2 : 검량선에서 구한 DTX-2의 농도(μg/mL)

V : 시험용액의 최종부피(mL)

S : 시료의 채취량(g)

D : 희석배수

2) 오카다익산으로의 당량 계산(Okadaic acid Equivalents)
계산된 OA, DTX-1, DTX-2의 독소별 함량을 각 독소에 해당하는 독성등가계수(Toxic Equivalency Factors : TEFs)로 곱하고, 이들의 합계를 오카다익산 당량(mg OA 당량/kg)로 한다.

설사성패독	WHO-TEFs
Okadaic acid	1
DTX-1	1
DTX-2	0.5

9.8.4 ∼ 12. (현행과 같음)

[별표 1] ∼ [별표 3] (생  략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (65) (생  략)

(66) 사이퍼메트린(Cypermethrin)

(생   략)

조	1.0T

키위	2.0T

(67) 사이플루트린(Cyfluthrin)

(생   략)

토란	0.1T

(68) ∼ (72) (생   략)

(73) 아세페이트(Acephate)

(생   략)

땅콩	0.2T

(74) ∼ (111) (생   략)

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(생   략)

후추	0.15†

(113) (생   략)

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

(생   략)

피망	0.5T

(115) ∼ (130) (생   략)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(생   략)

가지	0.05

감귤류	1.0†

감자	0.05

겨자채	0.15

견과류	0.05†

고구마	0.05

고구마줄기	0.05

고추	1.0

고추(건조)	1.0

당근	0.09†

대두	0.04†

두리안	0.4†

들깻잎	0.2

마늘	0.05

매실	1.0

면실	0.15†

모과	1.0

무(뿌리)	0.07

무(잎)	0.05

밀	0.4†

바나나	2.0†

밤	0.05

배추	0.2

복숭아	0.5

브로콜리	0.05

수수	0.5†

순무	0.05

시금치	0.05

양배추	0.05

양파	0.05

엇갈이배추	0.2

오이	0.5

옥수수	0.05†

용안	0.9†

우엉	0.05

우엉잎	0.05

율무	0.1

인과류	1.0

자두	0.2

차	2.0†

차즈기(잎)	0.2

커피원두	0.05†

케일	0.15

콜라비	0.05

크랜베리	1.0†

파	0.05

팥	0.05

풋마늘	0.05

피망	1.0

향신씨	5.0†

향신열매	1.0†

호박	0.3

(132) ∼ (420) (생   략)

(421) 레피멕틴(Lepimectin)

(생   략)

상추	1.0

(422) ∼ (524) (생   략)

<신  설>

주1. ∼ 주11. (생  략)

[별표 1] ∼ [별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (65) (현행과 같음)

(66) 사이퍼메트린(Cypermethrin)

(현행과 같음)

조	0.5

키위	0.5

(67) 사이플루트린(Cyfluthrin)

(현행과 같음)

토란	0.05

(68) ∼ (72) (현행과 같음)

(73) 아세페이트(Acephate)

(현행과 같음)

땅콩	0.02†

(74) ∼ (111) (현행과 같음)

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(현행과 같음)

<삭    제>

(113) (현행과 같음)

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

(현행과 같음)

피망	0.05

(115) ∼ (130) (현행과 같음)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(현행과 같음)

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

(132) ∼ (420) (현행과 같음)

(421) 레피멕틴(Lepimectin)

(현행과 같음)

상추	0.7

(422) ∼ (524) (현행과 같음)

(525) 플루인다피르(Fluindapyr)

◎ 잔류물의 정의 : Fluindapyr

쌀	0.05

주1. ∼ 주11. (현행과 같음)

[별표 5] ∼ [별표 8] (생  략)

[별표 5] ∼ [별표 8] (현행과 같음)