식품의약품안전청 공고 제2009-290호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시안

행정예고

2009. 11. 19.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 공고 제2009-290호

「식품의 기준 및 규격」을 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 「행정절차법」제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2009년 11월 19일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시안 행정예고

1. 개정이유

즉석섭취․편의식품류 중 장염비브리오균 규격적용 범위의 단서조항 신설과 면류의 식품유형 정의 및 품목을 확대하여 합리적인 식품안전관리 기준을 마련하고, 노로바이러스 시험법을 개정하여 식품용수의 안전관리를 강화하고자 함.

2. 주요내용

가. 면류의 정의 및 식품유형 개선 [안 제5, 15, 4)]

(1) 면류의 정의 중 주원료 범위를 곡분으로만 제한하고 있고 수제비 및 만두피를 국수로 분류하고 있어, 현실적으로 정의확대 및 식품유형 개선필요

나. 즉석섭취․편의식품류 중 장염비브리오 규격 적용의 단서조항 신설〔안 제 5, 29-18, 5)]

(1) 호염성 세균의 일종인 장염비브리오균은 특정식품인 해산물에서 기인되므로 이러한 특성을 고려하여 규격적용 범위를 정함으로써 안전관리의 합리화 도모

(2) 즉석섭취․편의식품류 중 장염비브리오 규격을 해산물 함유 제품에 한하여 적용하도록 개정

다. 식품제조용수 등의 노로바이러스 시험법 개정 [안 제10, 3, 3.25, 1), 2), 3)]

(1) 식품제조용수를 이 고시에서 이미 사용하고 있는 용어와 통일시킴

(2) 노로바이러스 검출효능을 높이도록 현행 채수 필터와 동등이상인 필터를 추가 사용하도록 개정

(3) 시험법의 객관성을 높이기 위해 양성대조군 확인방법 개선

3. 의견제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는  단체 또는 개인은 2009년 12월 10일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전청장(주소 : 서울특별시 은평구 통일로 194, 참조 : 식품기준과, 전화 02-380-1690, 1699, 팩스 02-382-4892)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 전화번호 및 주소

다. 기타사항

식품의약품안전청 고시 제2009- 호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2009-154호, 2009. 9. 14.)을 다음과 같이 개정합니다.

2009년  월  일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시안

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제5, 3, 6) 중 (5)를 다음과 같이 신설한다.

(5) 유산균수

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.9 유산균수에 따라 시험한다.

제 5, 15, 1)을 다음과 같이 한다.

면류란 곡분 또는 전분 등을 주원료로 하여 성형, 열처리, 건조 등을 한 것으로 국수, 냉면, 당면, 유탕면류, 파스타류, 기타 면류를 말한다.

제 5, 15, 4), (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 국수

곡분 또는 전분 등을 주원료로 하여 제조한 것을 말한다.

제 5, 15, 4) 중 (6)을 다음과 같이 신설한다.

(6) 기타면류

면류 중 위 식품유형 (1)부터 (5)까지에 정하여지지 아니한 것으로 수제비나 만두피 등을 말한다.

제 5, 17, 6), (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 대장균군

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군 3.7.1 정성시험      다. 데스옥시콜레이트 유당한천 배지법에 따라 시험한다.

제 5, 29-18, 5), (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 장염비브리오균 : 음성이어야 한다(해산물 함유 제품에 한한다).

제10, 3, 3.25. 제목 중 “식품제조용수”를 “식품용수”로 하고, 제10, 3, 3.25, 1), 다)의 제목 “1.5% 쇠고기 액기스(Beef extract, desiccated power) 용액”을 “15%  Beef extract(desiccated powder)용액”으로 하고, 본문 중 “소고기엑기스 용액”을 “Beef extract”으로 한다.

제10, 3, 3.25, 2), 가), (1)과 (7)을 각각 다음과 같이 하고, (2)부터 (4)까지 중 “식품제조용수”를 각각 “식품용수”로 하며, (5) 중 “식품제조용수”를 “식품용수”로, “1-MDS 카트리지”를 “양전하 카트리지 필터”로 하고, (6) 중 “1-MDS 카트리지”를 “양전하 카트리지 필터”로 한다.

(1) 표준필터장치： 식품용수 1,500～1,800 L을 채수하는 장치

구성 : 용수 유입구, 단일주입기, 유량조절밸브, 압력게이지, 탈리액 주입구, 양전하 카트리지 필터, 카트리지 하우징, 탈리액 유출구, 유량계, 용수 유출구

※ 양전하 카트리지 필터 : 1-MDS, NanoCeram 또는 이와 동등한 것

(7) 기타：공구상자, 2 L 멸균 비커, 멸균된 알루미늄박, 클램프, 바이러스시료 검체기록부, 멸균장갑, 수은온도계, 멸균 메스실린더, 채수용 호스

ⓐ용수 유입구 ⓑ단일주입기 ⓒ유량조절밸브 ⓓ압력게이지 ⓔ탈리액 주입구 ⓕ감압단추 ⓖ양전하 카트리지 필터 ⓗ카트리지 하우징 ⓘ탈리액 유출구 ⓙ유량계 ⓚ용수 유출구

《표준필터장치》

제10, 3, 3.25, 2), 나), (1) 중 “1L 소고기 액기스용액(1.5%)을 1-MDS 필터 카트리지”를 “1.5% Beef extract 용액을 양전하 카트리지 필터”로 하고, (4)를 다음과 같이 신설한다.

(4) 하우징 거치대, 탈리액 유입구, 탈리액 유출구, 압력게이지

제10, 3, 3.25, 3) 중 가)의 제목, (1), (4), (5) 중 “식품제조용수”를 각각 “식품용수”로 하고, (3) 중 “1-MDS 필터 카트리지”를 “양전하 카트리지 필터”로 한다.

제10, 3, 3.25, 3) 중 가), (6), (나) 중 “식품제조용수”를 “식품용수”로 하고, (8), (12), (13) 중 “1-MDS 필터 카트리지”를 각각 “양전하 카트리지 필터”로 하며, (9), (12) 중 “1-MDS 필터 카트리지 하우징”을 각각 “카트리지 하우징”으로 하고, (10) 중 “식품제조용수”를 “식품용수”로 한다.

제10, 3, 3.25, 3), 나), (2) 중 “표준필터장치에 1-MDS 필터 하우징”을 “탈리용 거치대에 카트리지 하우징”으로 하고, (3) 중 “표준필터장치의 탈리액”을 “탈리액”으로, “1L 쇠고기 액기스 용액(1.5%)”을 “1.5% Beef extract용액”으로 하며, “연결한다.”를 “연결하되 1-MDS 필터는 1 L, NanoCeram 필터에는 0.5 L의 Beef extract 용액(1.5%)을 사용한다.”로 한다. (4) 중 “1L 쇠고기 액기스 용액(1.5%)”을 “1.5% Beef extract용액”으로 하며, (6) 중 “완충액”을 “1.5% Beef extract용액”으로, “1L 쇠고기 액기스 용액(1.5%)”을 “1.5% Beef extract용액”으로 하며, (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 연동정량펌프를 가동하여 양전하 카트리지 필터 하우징 안으로 1.5% Beef extract 용액이 양전하 카트리지 필터 내에 완전히 차도록 한 후 감압단추를 통해 1.5% Beef extract 용액이 넘쳐 흘러나오기 시작하면 감압단추에서 손을 떼고, 연동정량펌프 가동을 멈춘 후 5분간 정치한다.

※ 감압단추는 탈리액이 양전하 카트리지 필터 안으로 가득 채워질 때까지  눌러준다.

제10, 3, 3.25, 3), 라), (1) 중 “양성대조군(positive control) 및 음성대조군(negative control)”을 “음성대조군(negative control)”으로 하고, (2) 중 “양성대조군, 음성대조군은 각 280 μL의 AVL buffer(guanidine thiocyanate 함유) 1,120 μL에”를 “음성대조군은 각 280 μL에 AVL buffer(guanidine thiocyanate 함유) 1,120 μL를”로 한다.

제10, 3, 3.25, 3), 마) 중 “프라이머 조합을 달리하여 수행한다. PCR은 RT-PCR(Reversetranscription- Polymerase chain reaction)과 1차 PCR을 한 시험관에서 동시에 수행하는 One-step RT-PCR 방법을 사용하고 2차 PCR에서는 반응 프라이머를 바꿔 Semi-nested PCR을 한다.”를 “프라이머를 바꿔 Semi-nested PCR을 한다. RT-PCR(Reverse transcription- Polymerase chain reaction)과정에서는 노로바이러스 유전자와 로타바이러스 유전자를 조합하여 합성한 RNA(GI, GII)를 PCR 양성 대조군으로 사용한다.”로 하고, 제10, 3, 3.25, 3), 마), (1), (가) 중 “맞춘다”를 “맞추고 양성대조군의 경우 검체의  RT-PCR 혼합 조성과 동일하게 한 후 GI과  GII 양성대조군 RNA  5 μL를 각각 넣어 총 25 μL로 반응시킨다.”로 하며, 표 1을 다음과 같이 한다.

표 1. 노로바이러스 One-step RT-PCR 조성

Component	Volume	Genogroup
		GI primers	GII primers
Mastermix(2X)	9.5 μL	-	-
Reverse transcriptase (50unit/μL)	0.5 μL	-	-
D.W.	6 μL	-	-
Forward primer(20pmol)	2 μL	GI-FIM	GII-FIM
Reverse primer(20pmol)	2 μL	GI-RIM	GII-RIM
Extracted RNA, PCR control	5 μL	-	-
Total	25 μL

제10, 3, 3.25, 3), 마), (3), (가) 중 “확인한다.”를 “확인하되, 양성대조군 GI 형은 689 bp, GII 형은 686 bp 로 확인 되어야 한다.”로 하고 (나) 중 “음성대조군(negative control) 중에서”를 “음성대조군(negative control)이나 검체에서”로 하며, 제10, 3, 3.25, 3), 마), (4), (다) 중 단서를 삭제한다.

부  칙(2009.11.19)

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

현 행

개 정(안)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1.～2. (생  략)

3. 코코아가공품류 또는 초콜릿류

1)～5) (생 략)

6) 시험방법

(1)～(4) (생 략)

<신 설>

15. 면류

1) 정의

면류라 함은 곡분 또는 전분류를 주원료로 하여 성형하거나 이를 열처리, 건조 등을 한 것으로 국수, 냉면, 당면, 유탕면류, 파스타류를 말한다.

2)～3)(생  략)

4) 식품유형

(1) 국수

밀가루 등의 곡분을 주원료로 하여 제조한 것을 말하며, 수제비나 만두피를 포함한다.

(2)～(5) (생 략)

<신 설>

17. 커피

1)～5) (생 략)

6) 시험방법

(1)～(4) (생 략)

(5) 대장균군

제10. 일반시험법 3. 미생물시험법

3.7 대장균군 3.7.2 정량시험 나.    데스옥시콜레이트 유당한천배지법    에 따라 시험한다.

28-18. 즉석섭취․편의식품류

1)～4) (생 략)

5) 규격

(5) 장염비브리오균 : 음성이어야        한다.

제 10. 일반시험법

1.～2.  (생  략)

3. 미생물 시험법

3.1～3.2 (생  략)

3.3.1～3.3.24 (생  략)

3.25 식품제조용수 등의 노로바이러스  시험법

1) 시약 및 시액

가)～나)  (생 략)

다)1.5% 쇠고기 액기스(Beef extract, desiccated powder) 용액

1,900 mL의 증류수에 Beef extract 분말 30 g 과 glycine 7.5 g(최종농도 = 0.05 M)을 넣고 1M  NaOH를 이용하여 pH 9.5로 조정한 후 최종 2 L로 제조하고 121℃, 15분간 고압증기 멸균한다.  소고기엑기스 용액은 4℃에서 일주일간 혹은 -20℃에서 장기간 동안 보관할 수 있다.

라)～바)  (생 략)

2) 장치 및 기구

가) 검체 채수과정

(1) 표준필터장치：식품제조용수

1,500～1,800 L을 채수하는 장치

구성 : 용수 유입구, 단일주입기, 유량조절밸브, 압력게이지, 탈리액 주입구, 1-MDS 필터 카트리지, 1-MDS 필터 하우징, 탈리액 유출구, 유량계, 용수 유출구

<신 설>

(2) 휴대용 pH 측정기：식품제조용수의 수소이온농도를 측정한다.

(3) 휴대용 탁도 측정기：식품제조용수의 혼탁도를 측정한다.

(4) 휴대용 염소 농도 측정기：식품제조용수의 잔류염소농도를 측정한다.

(5) 휴대용 아이스박스：식품제조용수 채수 후 1-MDS 카트리지를 운반하기 위해 사용한다.

(6) 상업용 얼음팩：1-MDS 카트리지 운반 시 냉장상태 유지용으로 사용한다.

(7)  (생 략)

ⓐ용수 유입구 ⓑ단일주입기 ⓒ유량조절밸브 ⓓ압력게이지 ⓔ탈리액 주입구 ⓕ감압단추 ⓖ1-MDS 필터 카트리지 ⓗ 1-MDS 필터 하우징 ⓘ탈리액 유출구 ⓙ유량계 ⓚ용수 유출구

《표준필터장치》

나) 바이러스 탈리과정

(1) 연동정량펌프：1L 소고기 액기스용액(1.5%)을 1-MDS 필터 카트리지로 유입시켜  흡착된 바이러스를 탈리하기 위한 장치

(2)～(3)  (생 략)

<신 설>

다) 바이러스 농축과정

(1)～(3)  (생 략)

3) 시험방법

가) 식품제조용수 채수

(생 략)

(1) 채수하려는 검체의 배출구(수도 꼭지 등)를 2～3분 정도 열고 식품제조용수를 흘려보낸다. 배출구에 채수호스를 장착 시 누수가 되지 않도록 클램프를 이용하여 단단히 연결하고 탁도가 균일할 때까지 흘려보낸 후 배출구를 잠근다.

(2)  (생 략)

(3) 채수용 호스의 알루미늄박을 제거한 후 채수 할 배출구에 연결하고 표준필터장치 용수 유입구(ⓐ)에 호스를 연결한다. 이 단계에서 1-MDS 필터 카트리지(ⓖ)는 연결하지 않는다.

(4) 천천히 배출구를 열어 압력게이지가 30 PSI가 넘지 않도록 배출구를  조절하고 76 L(20 gal)의 식품제조용수를 흘려보낸다.

(5) 식품제조용수 76 L를 흘려 보낸 후 일부를 2 L 멸균 비커에 받아 용수의 탁도, pH, 온도, 염소농도를 각각 측정하여 검체번호, 채수위치, 채수자의 이름과 함께 바이러스 검체채수기록부에 기록한다. pH 측정기는 사용 전 calibration 한다.

(6) (생 략)

(가) (생 략)

(나) 잔류염소 제거를 위해 위와 같이   단일주입기를 연결하여 식품제조용수 3.8 L(1 gal) 당 2% 티오황산나트륨 용액 10 mL이 주입되도록 한다.

(7)  (생 략)

(8) 알루미늄박을 제거한 1-MDS 필터 카트리지를 탈리액 주입구(ⓔ)와 유출구(ⓘ) 사이에 연결한다.

(9) 용수를 천천히 흐르게 하면서 1-MDS 필터 카트리지 하우징 상단의 감압단추(ⓕ,vent button)를 눌러 내부공기가 완전히 빠지도록 한 후, 수도꼭지를 완전히 열어 준다.

(10) 압력게이지가 30 PSI 이하로 유지되도록 유량조절 밸브를 조정하고 식품제조용수 1,500～1,800 L를 통과시킨 후, 용수 배출구(수도꼭지 등)를 잠근다.

(11)  (생 략)

(12) 표준필터장치로부터 1-MDS 필터 카트리지 하우징(ⓗ)을 분리하고 1-MDS 필터 카트리지를 거꾸로 하여 남은 물을 버린 후 하우징 양끝의 연결된 개구부를 멸균된 알루미늄박으로 싼다.

(13) 1-MDS 필터 카트리지를 아이스박스에 담고 얼음팩 등을 사용하여 냉장상태(냉동시켜서는 아니 된다)로 유지하여 즉시 실험실로 운반한다.

나) 노로바이러스 탈리과정

(1)  (생 략)

(2) 표준필터장치에 1-MDS 필터 하우징을 장착한 후 유량조절 밸브를 모두 닫는다.

(3) 표준필터장치의 탈리액 주입구에 연동정량펌프 호스를 연결한 후 연동정량펌프와 1L 쇠고기 액기스 용액(1.5%)이 채워져 있는 유리병에 호스를 차례로 연결한다.

(4) 탈리액 유출구에 유출용 호스를 연결 하여 1L 쇠고기 액기스 용액(1.5%)이 들어 있는 유리병에 넣고 탈리액 유출구를 닫는다.

(5) 연동정량펌프를 가동하여 1-MDS 필터 카트리지 하우징 안으로 1L 쇠고기 액기스 용액(1.5%)이 1-MDS 필터카트리지 내에 완전히 차도록 한 후 감압단추를 통해 쇠고기 액기스 용액(1.5%)이 넘쳐 흘러나오기 시작하면 감압단추에서 손을 떼고, 연동정량펌프 가동을 멈춘 후 5분간 정치한다.

※ 감압단추는 탈리액이 1-MDS 필터 카트리지 안으로 가득 채워질 때까지 눌러준다.

(6) 탈리액 유출구를 열고 연동정량펌프를 다시 가동한 후 하우징에 채워져 있는  완충액이 서서히 필터를 통과하도록 한다. 통과한 완충액은 1L 소고기 액기스 용액(1.5%)이 들어있던  유리병에 수집한다. 탈리액을 회수할 때는 거품이 없도록 주의하여야 한다.

※ (생 략)

(7)～(9)  (생 략)

다) 노로바이러스 농축과정

(1)～(8)  (생 략)

라) 노로바이러스 유전자 추출과정

(생 략)

(1) 바이러스 유전자 추출 시 검체와 동일한 과정으로 양성대조군(positive control) 및 음성대조군(negative control)을 사용하여 유전자를 추출하며검체의 경우 시험 진행 중 오염 여부를 확인하기 위해 2개의 RNA를 추출한다.

(2) 검체 농축액과 양성대조군, 음성대조군은 각 280 μL의 AVL buffer(guanidine thiocyanate 함유) 1,120 μL에 각각 혼합하여 실온에서 10분 동안 방치한 후 가볍게 원심분리기를 이용하여 spin-down한다.

(3)～(7)  (생 략)

마) 노로바이러스 유전자 PCR

과정 및 결과판정

PCR로 노로바이러스의 유전자형  (GI과 GII)을 각각 확인하기 위하여 유전자형에 따라 프라이머 조합을 달리하여 수행한다.

PCR은 RT-PCR(Reverse

transcription- Polymerase chain reaction)과 1차 PCR을 한 시험관에서 동시에 수행하는 One-step RT-PCR 방법을 사용하고 2차 PCR에서는 반응 프라이머를 바꿔 Semi-nested PCR을 한다.

(1) (생 략)

(가) PCR 조성조건은 RT-PCR pre-mix 10 μL(Reverse transcriptase 0.5 μL 포함), 프라이머는 GI과 GII type  별로 달리하여 GI type (GI-F1M,       GI-R1M), GII type (GII-F1M,   GII-R1M) 각 2 μL, 추출 RNA

5 μL를 첨가하여 증류수로 총   25 μL로 맞춘다.

(나)  (생 략)

표 1. 노로바이러스 One-step RT-PCR 조성

Component	Volume	Genogroup
		GI primers	GII primers
생략	생략	-	-
생략	생략	-	-
생략	생략	-	-
생략	생략	생략	생략
생략	생략	생략	생략
Extracted RNA	생략	-	-
생략	생략

표 2.  (생 략)

(2)  (생 략)

(가)～(나)  (생 략)

표 3.～표 4.  (생 략)

(다)～(라)  (생 략)

표 5.  (생 략)

(3) 1차 결과 확인

(가) agarose gel상에서 시료에 313bp의 밴드가 있을 경우 GI형 노로바이러스로, 310bp의 밴드가 있을 경우 GII형 노로바이러스로 일차 확인한다.

(나) 만일 음성대조군(negative control) 중에서 양성대조군(positive control)  과 같은 크기의 밴드가 확인되거나 또는 양성대조군에서 밴드가 확인이 되지 않을 경우 등은 재시험을 실시해야한다(표 6참고).

(다)  (생 략)

표 6.  (생 략)

(4)  최종 검출 판정

(가)～(나)  (생 략)

(다) PCR 산물은 직접 Sequencing

(Direct DNA Sequencing)하되 2종 이상의 유전자가 혼합되어 있는 경우에는 클로닝 하여 Sequencing

(Cloning DNA Sequencing)을 재실시 한다. DNA Sequencing에 의해 결정된 염기서열은 노로바이러스 유전자 데이터베이스와 비교하여 노로바이러스로 확인되었을 경우 검출된 것으로 최종 확인한다. 단, 시료와 양성대조군의 염기서열 일치 등으로 교차오염이 의심 될 경우 유전자 추출 과정부터 재실시 하여 판정하여야 한다.

제 5. 식품별 기준 및 규격

1.～2. (현행과 같음)

3. 코코아가공품류 또는 초콜릿류

1)～5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1)～(4) (현행과 같음)

(5) 유산균수

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법

3.9 유산균수에 따라 시험한다.

15. 면류

1) 정의

면류란 곡분 또는 전분 등을 -----

-------------성형, 열처리,------

------------------------파스타류, 기타 면류를 ------.

2)～3)(현행과 같음)

4) 식품유형

(1) 국수

곡분 또는 전분 등을-----------

--------------------------- 말한다.

(2)～(5) (현행과 같음)

(6) 기타 면류

면류 중 위 식품유형 (1)부터 (5)까지에 정하여지지 아니한 것으로 수제비나 만두피 등을 말한다.

17. 커피

1)～5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1)～(4) (현행과 같음)

(5) 대장균군

----------------------------

---------- 3.7.1 정성시험 다. 데

스옥시콜레이트 유당한천 배지법--

------------

28-18. 즉석섭취․편의식품류

1)～4) (현행과 같음)

5) 규격

(5) 장염비브리오균 : ---------

한다(해산물 함유 제품에 한한다).

제 10. 일반시험법

1.～2. (현행과 같음)

3. 미생물 시험법

3.1～3.2 (현행과 같음)

3.3.1～3.3.24 (현행과 같음)

3.25 식품용수 ----------------

------

1) 시약 및 시액

가)～나)  (현행과 같음)

다) 1.5%  Beef extract(desiccated powder)용액

-------------------------   --------------------------  --------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

--------. Beef extract 용액- -------------------------------------------------------------.

라)～바)  (현행과 같음)

2) 장치 및 기구

가) 검체 채수과정

(1) ---------------  식품용수

--------------------------

---------------------------

---------------------------

-------------양전하 카트리지 필터, 카트리지 하우징  ------

--------------------------

---------

※ 양전하 카트리지 필터 : 1-MDS, NanoCeram 또는 이와 동등한 것

(2) -------------------식품용수

----------------------.

(3)-------------------식품용수     ----------------------.

(4)--------------------식품용     수 ----------------------

---------.

(5) ----------------  식품용수

----------양전하 카트리지 필터

------------------------.

(6) --------------양전하 카트리지 필터-----------------------

-----------.

(7)  (현행과 같음)

--------------------------

--------------------------

--------ⓖ양전하 카트리지 필터

ⓗ카트리지 하우징 ----------

-------------------------

-----------

-----------

나) 바이러스 탈리과정

(1)----------1.5% Beef extract 용액을 양전하 카트리지 필터--  ---------------------------   ------------------------

(2)～(3)  (현행과 같음)

(4)하우징 거치대, 탈리액 유입구, 탈리액 유출구, 압력게이지

다) 바이러스 농축과정

(1)～(3)  (현행과 같음)

3) 시험방법

가) 식품용수 ----

(현행과 같음)

(1) ------------------------

-------------------------

식품용수 -----------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

------------------.

(2)  (현행과 같음)

(3) --------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--양전하 카트리지 필터-------

-------.

(4) --------------------------

----------------------------

----------------------------

-------식품용수 -------------

----.

(5)식품용수 -------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

------------------------.

(6)  (현행과 같음)

(가) (현행과 같음)

(나) -----------------------

-----------------식품용수    -------------------------

-------------------------

---------.

(7)  (현행과 같음)

(8) ---------양전하 카트리지 필터  --------------------------  ----------------------------------.

(9) ----------- 카트리지 하우징-------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

-----------.

(10) -----------------------

------------------------

-----------------식품용수

------------------------

-----------------------.

(11)  (현행과 같음)

(12) ----------------- 카트리지 하우징---------------------

양전하 카트리지 필터---------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------.

(13) 양전하 카트리지 필터-------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

----------------.

나) 노로바이러스 탈리과정

(1)  (현행과 같음)

(2) 탈리용 거치대에 카트리지 하우징-----------------------   ------------------.

(3)탈리액----------------------

---------------------------

--------------------1.5% Beef extract용액-------------

---------------------------

----------연결하되 1-MDS 필터는 1 L, NanoCeram 필터에는 0.5 L의 Beef extract 용액(1.5%)을 사용한다.

(4) -------------------------

---------1.5% Beef extract용액-----------------------

-------------------------

------ .

(5) -------------양전하 카트리지 필터--------------------- ------1.5% Beef extract용액이

양전하 카트리지 필터-----------

-------------------------

--------1.5%Beef extract용액

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------

※---------양전하 카트리지 필터 -------------------------------------------.

(6) -------------------------

-------------------------

--1.5% Beef extract 용액----

-------------------------

-------------------------

1.5% Beef extract 용액-------

-------------------------

-------------------------

-----------.

※ (현행과 같음)

(7)～(9)  (현행과 같음)

다) 노로바이러스 농축과정

(1)～(8)  (현행과 같음)

라) 노로바이러스 유전자 추출과정

(현행과 같음)

(1)-------------------------

-----음성대조군(negative     control)-------------------

--------------------------

---------------------------

--------------------------

--------------------------

---------------.

(2) --------------음성대조군은

각 280 μL에 AVL  buffer     (guanidine thiocyanate 함유)     1,120 μL를-----------------   ------------------------    ------------------------    ------------------------

(3)～(7)  (현행과 같음)

마) 노로바이러스 유전자 PCR 과정 및 결과판정

--------------------------

--------------------------

-----------------  프라이머를 바꿔 Semi-nested PCR을 한다.

RT-PCR(Reverse transcription- Polymerase chain reaction)과정에서는 노로바이러스 유전자와 로타바이러스 유전자를 조합하여 합성한 RNA(GI, GII)를 PCR 양성 대조군으로 사용한다.

(1)  (현행과 같음)

(가) -----------------------

------------------------

------------------------

-----------------------

------------------------

------------------------

------------------ 맞추고

양성대조군의 경우 검체의  RT-PCR 혼합 조성과 동일하게 한 후 GI과  GII 양성대조군 RNA  5 μL를 각각 넣어 총 25 μL로 반응시킨다.

(나)  (현행과 같음)

표 1. 노로바이러스 One-step RT-PCR 조성

Component	Volume	Genogroup
		GI primers	GII primers
(현행과 같음)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
Extracted RNA, PCR control	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)

표 2.  (현행과 같음)

(2) (현행과 같음)

(가)～(나)  (현행과 같음)

표 3.～표 4.  (현행과 같음)

(다)～(라)  (현행과 같음)

표 5.  (현행과 같음)

(3) 1차 결과 확인

(가) -----------------------

------------------------

------------------------

------------------------

--------------------확인하되, 양성대조군 GI 형은 689 bp, GII 형은 686 bp 로 확인 되어야 한다.

(나) --------음성대조군(negative control)이나 검체에서 --------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

-----------.

(다)  (현행과 같음)

표 6.  (현행과 같음)

(4)  최종 검출 판정

(가)～(나)  (현행과 같음)

(다)  -----------------------

-----------------------

-----------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

-----------------------

-----------------------.

<단서 삭제>

신․ 구조문 대비표