식품의약품안전청공고 제2007-162호

식품의 기준 및 규격 중 개정(안) 입안예고

2007. 8. 3.

식품의약품안전청

식품의약품안전청공고 제2007-162호

식품의 기준 및 규격을 제․개정함에 있어 이를 국민에게 미리 알려 의견을 듣고자 그 개정취지와 주요내용을 행정절차법 제46조의 규정에 의하여 다음과 같이 공고합니다.

2007년 8월 3일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 중 개정(안)

1. 개정이유

식품 중 동물용의약품의 잔류기준적용 원칙, 플루오로퀴놀론계 동물용의약품 잔류허용기준 신설 및 어류, 연체류 중 중금속기준 등을 제․개정하여 국민에게 안전한 식품을 제공하고자 함.

2. 주요내용

가. 식품 중 동물용의약품의 잔류기준 적용 개정

- 외삽동물 적용원칙 및 일률기준 적용원칙 신설

나. 노르플록사신 등 플루오로퀴놀론계 동물용의약품 잔류허용기준 신설

다. 네오마이신 등 동물용의약품 잔류시험법 신설 및 개정

라. 식품 중 검출되어서는 아니되는 발기부전치료제 및 그 유사물질 4종(치오실데나필, 디메틸치오실데나필, 아세틸바데나필, 미로데나필) 추가신설

마. 어류 및 연체류 중 중금속 기준 개정

바. 냉동식용대구머리의 납 기준 강화

3. 의견제출

이 개정(안)에 대하여 의견이 있는 기관, 단체 또는 개인은 2007년 22월  일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전청장(참조 : ① 위해기준팀  주소 : 서울특별시 은평구 녹번동 5번지, 전화 02-352-4676, 4798, 팩스 02-352-4606)에게 제출하여 주시기 바라며, 더 자세한 내용을 알고 싶으신 분은 식품의약품안전청 홈페이지(http://www.kfda.go.kr)를 참고하시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 전화번호 및 주소

다. 기타사항

식품의 기준 및 규격 중 제․개정(안)

식품의 기준 및 규격 중 다음과 같이 제․개정한다.

제 3. 6. 1), (1), ①에 ㉸를 ㉻로 하고 ㉸, ㉹, ㉺를 다음과 같이 신설한다.

㉸ 치오실데나필 (thiosildenafil) : 검출되어서는 아니된다.

㉹ 디메틸치오실데나필 (dimethylthiosildenafil) : 검출되어서는 아니된다.

㉺ 아세틸바데나필 (acetylvardenafil) : 검출되어서는 아니된다.

제 3. 6. 1), (1), ①에 ㉻에 미로데나필을 추가한다.

㉻ 발기부전치료제 성분(실데나필, 타다라필, 바데나필, 유데나필, 미로데나필)과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질 : 검출되어서는 아니된다.(단, 발기부전치료제와 화학적구조가 근원적으로 유사한 합성물질로서 따로 기준․규격이 정하여진 것은 제외한다.)

제 3. 6. 1), (2)에 ① 내지 ③을 다음과 같이 ① 내지 ②로 하고 ③을 삭제 한다.

(2) 중금속

① 어류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

㉮ 총수은 : 0.5 mg/kg 이하(심해성 어류, 다랑어류 및 새치류 제외)

㉯ 메틸수은 : 1.0 mg/kg 이하(심해성 어류, 다랑어류 및 새치류에 한함)

㉰ 납 : 0.5mg/kg이하

② 연체류 및 패류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

㉮ 총수은 : 0.5 mg/kg 이하

㉯ 납 : 2.0mg/kg이하

㉰ 카드뮴 : 2.0mg/kg이하

제3. 6. 1), (10) 잔류동물용의약품의 기준 적용에서 ① 및 ②항을 아래와 같이 신설한다.

(10) 잔류동물용의약품의 기준 적용

① 개별동물에 대한 국내 및 국제식품규격위원회의 기준이 없을 시 유사축종의 잔류허용기준 중 최저기준을 준용한다. 즉, 포유류 중 기준이 없는 반추동물은 기준이 정해진 반추동물 기준 중 최저기준을, 기준이 없는 비반추동물은 기준이 정해진 비반추동물 기준 중 최저기준을 적용하고, 기준이 없는 가금류는 기준이 정해진 가금류 기준 중 최저기준을 적용하며, 로얄젤리 및 프로폴리스는 벌꿀의 기준을 적용한다.

② 식품공전, 국제식품규격위원회 및 잔류동물용의약품 기준 적용에도 잔류기준이 없는 동물용의약품 중 항생물질 및 합성항균제에 대하여 축․수산물(유, 알 포함) 및 벌꿀(로얄젤리, 프로폴리스 포함)의 잔류기준을 0.01 mg/kg으로 적용한다.

제 3. 6. 2), (59) 노르플록사신(Norfloxacin), (60) 오플록사신(Ofloxacin), (61) 페플록사신(Pefloxacin)을 아래와 같이 신설한다.

(59) 노르플록사신(Norfloxacin)

축․수산물(유, 알 포함)    불검출

(60) 오플록사신(Ofloxacin)

축․수산물(유, 알 포함)    불검출

(61) 페플록사신(Pefloxacin)

축․수산물(유, 알 포함)    불검출

제5의2. 1. 3), (3) ②에 나.를 다음과 같이 한다.

나. 납 : 0.5 mg/kg이하

제7. 6. 5). “농산물 중 중금속 시험법”을 “농산물 및 어류 중 중금속 시험법”으로 한다.

제7. 6. 5). (1)을 다음과 같이 한다

농산물의 종류에 따라 아래 표에서와 같이 처리한 것을 검체로 한다. 다만, 이 표에서 정하지 아니한 농산물과 어류는 원칙적으로 가식부를 시험부위로 한다.

제 7. 15. 2) (2), ①,  네오마이신(Neomycin)을 아래와 같이 신설한다.

네오마이신(Neomycin)

Ⓐ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 네오마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 하고 영하 20 ℃에 보관한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ MCX(Mixed Mode Cation Exchange) 카트리지 또는 이와 동등한 것

㉥ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g에 물 20 mL를 넣고 진탕하여 충분히 녹이고 0.1 M 염산을 사용하여 pH 2로 조정한다. 이 액을 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 MCX 카트리지(충진제 60 mg)에 흡착시키고 5 mL의 10% 메탄올성 수산화암모늄용액으로 용출한다. 용출액은 45 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 0.1 M 염산 1 mL로 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 액체크로마토그래프 조건

․ 칼럼 : C18 (2.1×100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

․ 이동상

이동상 A : 20 mM 개미산, 10 mM 노나플루오로펜탄산(nonafluoropentanoic acid) 수용액

이동상 B : 20 mM 개미산, 10 mM 노나플루오로펜탄산(nonafluoropentanoic acid) 메탄올용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
0.5	30	70
5.0	5	95
5.1	50	50
12.0	50	59
10.0	20	80

․ 유속 : 0.2 mL/min

․ 주입량 : 10 μL

- 질량분석기 조건

․ Ionization : ESI(positive)

․ Gas Temp. : 350 ℃

․ Gas Flow : 8 L/min (질소)

․ Nebulizer : 35 psi

․ Collision energy : 30 V

㉡ 정량

- 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하고 m/z 455의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 네오마이신의 함량을 구한다. 검량선 작성은 표준용액 2.5, 5.0, 10, 25, 50 μg/L의 5개 농도를 이용한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
네오마이신	615	455, 323, 163, 161

제 7. 15. 2) (2), ①,  스트렙토마이신(Streptomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin)을 아래와 같이 신설한다.

스트렙토마이신(Streptomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin)

Ⓐ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제한 후 칼럼 후 유도체화 장치가 장착된 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/형광검출기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 스트렙토마이신, 디히드로스트렙토마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 물에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ Divinylbenzene-N-vinylpyrrolidone Copolymer(충진제) 카트리지 칼럼 : HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 또는 이와 동등한 것

㉥ 0.2 M HSA(sodium hexane-1-sulfonic acid) 완충액 : 2.0225 g HSA를 50 mL 물에 녹인다.

㉦ 0.01 M HSA 완충액 : 2.0225 g HSA를 물 1 L에 녹인다.

㉥ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 물 20 mL에 녹여 15분간 균질화한 후 0.2 M HSA 1 mL를 가한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 60 mg)에 추출액을 흡착시키고 5 mL 물로 세척한 후 5 mL의 메탄올로 용출한다. 용출액은 45 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 0.01 M HSA(아세트산으로 pH 3.3으로 조정) 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 칼럼 : C18 (3.0×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 0.01 M HSA 완충액 800 mL에 1,2-나프토퀴논-4-설폰산(1,2-naphthoquinone-4-sulfonic acid) 0.10408 g을 녹인 용액과 아세토니트릴 200 mL를 혼합하고 아세트산으로 pH 3.5로 조정한 후 갈색병에 보관한다.

- 유속 : 0.8 mL/min

- 측정파장 : 여기파장 260 nm, 형광파장 435 nm

- 칼럼 후 유도체화 장치

․ 이동상 : 0.2 M 수산화나트륨용액

․ 유속 : 0.5 mL/min

․ 반응코일 : 10 m

․ 반응온도 : 55 ℃

㉡ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

㉢ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

- 정량한계(0.1 mg/kg)

제 7. 15. 3) (2),  엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin) 및 다노플록사신(Danofloxacin)을 아래와 같이 개정한다.

엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin), 다노플록사신(Danofloxacin), 노르플록사신(Norfloxacin), 오플록사신(Ofloxacin) 및 페플록사신(Pefloxacin)

㉮ 정량법의 원리

식육, 유(乳), 알(卵), 어류 및 갑각류 등 모든 식품 중 플루오로퀴놀론계를 시료고체상분산법(MSPD, Matrix Solid Phase Dispersion) 또는 인산, 이동상 및 아세토니트릴 등으로 추출하여 헥산 또는 SPE(Solid Phase Extraction) 컬럼을 이용하여 정제하고 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/형광검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 표준원액 : 엔로플록사신, 시프로플록사신, 다노플록사신, 노르플록사신, 오플록사신 및 페플록사신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 용량플라스크에 취하고 메탄올로 표시선 까지 채워 100 μg/mL 농도가 되게 한다.

Ⓑ 표준용액 : 표준원액 10 mL를 취해 이동상에 10 μg/mL 농도가 되게 희석하여 사용한다.

Ⓒ 0.05 M 인산완충용액(pH 7.4) : 1 L 정용플라스크에 0.2 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 250 mL와 0.2 M 수산화나트륨 197.5 mL를 혼합한 후 물로 표시선 까지 채운다.

Ⓓ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

시료를 균질화하여 5 g을 원심분리관에 취한 후 20% 메탄올성 삼염화초산 2.5 mL를 넣고 15초간 균질화 한다. 이 용액을 1,500 g에서 10분간 원심분리한 후 0.05 M 인산완충용액(pH 7.4) 12.5 mL을 가하고 1,500 g에서 15분간 다시 원심분리 한다. 상층액을 메탄올 6 mL, 물 6 mL, 0.05 M 인산완충용액(pH 7.4) 6 mL로 차례로 미리 활성화시킨 C18 카트리지에 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후, 3분간 vacuum하에서 건조시키고 아세토니트릴성 1% trifluoroacetic acid 6 mL로 용출한다. 용출액은 45 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 이동상 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 어류 및 갑각류

시료를 마쇄한 후 5 g을 취한 후 이동상과 아세토니트릴을 1:1로 섞은 혼합액 40 mL를 가하여 균질기로 2분간 균질화 시킨다. 이 액을 80 ℃에서 10분간 열처리하여 방냉 한 다음 5,000 rpm에서 10분간 원심분리 하여 상등액을 취한다. 이 상등액을 분액여두로 옮겨 헥산 50 mL을 가하여 액층이 분리될 때까지 정치한다. 분리된 하층액은 40 ℃에서 잔사만이 남을 때까지 감압농축하고 이 건고물은 이동상 2.5 mL을 가하여 충분히 용해시킨 다음 0.45 μm 멤브레인필터로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

Ⓒ 유(乳), 어류 및 갑각류를 제외한 모든 식품

C18 분말 2 g을 유발에 취하고 시료 0.5 g을 정확히 달고 수산 0.05 g과 무수황산나트륨 0.03 g을 첨가한 후 유봉으로 C18과 시료가 완전히 균질화 되도록 한다. 여과지(Whatman No. 1) 2장을 10 mL 주사기에 넣고 균질화 된 혼합물을 주사기에 옮겨 담는다. 혼합물 위에 여과지 1장을 놓고 주사봉을 이용하여 혼합물의 부피가 약 4.0 mL 되게 압축한다. 헥산 8 mL를 가하여 흘려보내고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 혼합물 내에 남아있는 헥산을 음압 하에서 제거한다. 다시 에틸아세테이트 8 mL로 세척하고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 음압 하에서 완전히 건조시킨다. 메탄올 13 mL로 용출시킨 후 그 용출액을 질소 농축하여 건조시키고 이동상 0.5 mL를 가하여 10분간 초음파를 통과시키고 용해시킨 후 4°, 15,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취해 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼    럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이 동 상 : 0.4% 트리에틸아민, 0.4% 인산의 혼합액 : 아세토니트릴 : 테트라히드로퓨란(920 : 78 : 2)

- 유    속 : 1.0 mL/분

- 측정파장 : 여기파장 278 nm, 측정파장 455 nm

Ⓑ 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그라프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체중 엔로플록사신, 시프로플록사신, 다노플록사신, 노르플록사신, 오플록사신 및 페플록사신의 함량을 각각 구한다.

- 정량한계(0.05 mg/kg)

제 7. 15. 3) (2),  아미트라즈(Amitraz), 2,4-디메틸아닐린(2,4-Dimethylaniline)을 신설한다.

아미트라즈(Amitraz), 2,4-디메틸아닐린(2,4-Dimethylaniline)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 아세톤:헥산(1:49) 혼합액으로 추출하고 0.25% 암모니아수를 넣어 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 아미트라즈 및 2,4-디메틸아닐린 표준품을 정밀히 달아 아세톤:헥산(1:24) 혼합액에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 아세톤:헥산(1:49) 혼합액에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 추출용액 : 아세톤:헥산(1:49) 혼합액

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 삼각플라스크에 정밀히 달고 물 70 mL와 암모니아수 10 μL를 넣어 알칼리 조건에서 5분간 균질화한 후 추출용액 70 mL를 넣고 25분간 실온에서 교반한다. 이 액을 분액깔때기에 옮기고 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 2회 세척한 액과 합친다. 분액깔대기를 1분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층(아래층)은 다른 분액깔대기에 옮기고  여기에 추출용액 30 mL를 넣어 위와 같이 반복한 후 물층(아래층)은 버리고 유기용매층(윗층)을 앞의 분액 깔대기에 합친다. 0.25% 암모니아수 70 mL를 넣고 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층을 버리고 이 과정을 한번 반복한 후 유기용매층을 삼각플라스크에 옮긴다. 여기에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 약하게 흔들어 섞으면서 방치한 후 여과하고 다시 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 씻고, 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 2회 반복하여 씻고 여과한다. 여액을 합쳐 35  ℃ 이하의 수욕조에서 유기용매를 감압 하에 날려 보낸다. 잔사를 내부표준물이 포함된 아세톤∶헥산(1:24)의 혼합액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18 (4.6×300 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 70% 아세토니트릴

- 유속 : 1.2 mL/min

- 측정파장 : 233 nm

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 정량한다.

제 7. 15. 3) (2),  코마포스(Coumaphos)를 신설한다.

코마포스(Coumaphos)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 아세톤:헥산(1:49) 혼합액으로 추출하고 0.25% 암모니아수를 넣어 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 코마포스 표준품을 정밀히 달아 아세톤:헥산(1:24) 혼합액에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 아세톤:헥산(1:49) 혼합액에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 추출용액 : 아세톤:헥산(1:49) 혼합액

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 삼각플라스크에 정밀히 달고 물 70 mL와 암모니아수 10 μL를 넣어 알칼리 조건에서 5분간 균질화한 후 추출용액 70 mL를 넣고 25분간 실온에서 교반한다. 이 액을 분액깔때기에 옮기고 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 2회 세척한 액과 합친다. 분액깔대기를 1분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층(아래층)은 다른 분액깔대기에 옮기고  여기에 추출용액 30 mL를 넣어 위와 같이 반복한 후 물층(아래층)은 버리고 유기용매층(윗층)을 앞의 분액깔대기에 합친다. 0.25% 암모니아수 70 mL를 넣고 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층을 버리고 이 과정을 한번 반복한 후 유기용매층을 삼각플라스크에 옮긴다. 여기에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 약하게 흔들어 섞으면서 방치한 후 여과하고 다시 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 씻고, 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 2회 반복하여 씻고 여과한다. 여액을 합쳐 35 ℃ 이하의 수욕조에서 유기용매를 감압 하에 날려 보낸다. 잔사를 내부표준물이 포함된 아세톤∶헥산(1:24)의 혼합액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18 (4.6×300 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 70% 아세토니트릴

- 유속 : 1.2 mL/min

- 측정파장 : 313 nm

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 7. 15. 3) (2),  플루메쓰린(Flumethrin)을 신설한다.

플루메쓰린(Flumethrin)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물과 아세토니트릴을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 플루메쓰린 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 5 mL 물에 녹여 균질화한 뒤, 10 mL 아세토니트릴을 첨가하여 균질화 하고 3000 rpm, 4 ℃에서 5분간 원심분리한다. 상등액을 새로운 원심분리관에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 가한 다음 3000 rpm, 4 ℃에서 5분간 원심분리한 뒤 상등액을 앞의 상등액과 합한다. 이 액에 염화나트륨 소량을 첨가하여 진탕 후 3000 rpm, 4 ℃에서 5분간 원심분리 한 다음, 상등액을 40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 헥산 5 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 헥산 10 mL로 활성화시킨 실리카 카트리지(충진제 500 mg)에 추출액 2 mL를 흡착시키고 헥산:디클로로메탄 혼합액(55:45) 10 mL로 용출한다. 용출액은 40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 메탄올 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18 (4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 85% 아세토니트릴

- 유속 : 1.0 mL/min

- 측정파장 : 266 nm

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 7. 15. 3) (2),  플루발리네이트(Fluvalinate)를 신설한다.

플루발리네이트(Fluvalinate)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 가스크로마토그래프/전자포획검출기(GC/ECD)로 분석한다.

㉯ 측정기기

가스크로마토그래프/전자포획검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 타우플루발리네이트(tau-Fluvalinate) 표준품을 정밀히 달아 헥산에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 헥산에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 증류수 20 mL에 녹여 균질화한 후, 15분간 초음파를 통과시킨다. 이 액에 디클로로메탄 10 mL를 가한 후 강하게 1분간 균질화 하고 3000 rpm, -10 ℃에서 10분간 원심분리 한다. 물층에 디클로로메탄 10 mL를 가하고 강하게 1분간 균질화하여 3000 rpm, -10 ℃에서 10분간 원심분리한 후 앞의 디클로로메탄층과 합하여 황산나트륨층을 통과시켜 탈수하고  40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 50% 메탄올 4 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 8 mL와 50% 메탄올 8 mL로 활성화시킨 Sep-pak C8 카트리지(충진제 500 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 8 mL와 50% 메탄올 8 mL로 세척한 후, 디클로로메탄 8 mL와 에틸아세테이트 4 mL로 용출한다. 용출액은 40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 헥산 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : DB-17 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

- 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1 mL/분

- 오븐온도 : 100 ℃에서 시료를 주입하고 2분간 유지 후 15 ℃/분의 비율로 280 ℃까지 온도를 상승시켜 30분간 유지한다.

- 주입부 : 260 ℃

- 검출기온도 : 280 ℃

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

제 7. 15. 6), (2)에 ⑤ 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)을 삭제한다.

제 7. 15. 7), (2)에 ② 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)을 삭제한다.

제 7. 15. 8), (2)에 ② 플루오로퀴놀론계 합성항균제[엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)]를 삭제한다.

제 7. 22. 1), (2)의 ③을 다음과 같이 한다.

③ 표준원액：호모실데나필(homosildenafil), 홍데나필(hongdenafil), 하이드록시호모실데나필(hydroxyhomosildenafil), 아미노타다라필(aminotadalafil), 슈도바데나필(pseudovardenafil), 하이드록시홍데나필(hydroxyhongdenafil), 디메칠실데나필(dimethylsildenafil), 잔소안트라필(xanthoanthrafil), 하이드록시바데나필(hydroxyvardenafil), 노르네오실데나필(norneosildenafil), 치오실데나필(thiosildenafil), 디메틸치오실데나필(dimethylthiosildenafil), 아세틸바데나필(acetylvardenafil), 실데나필(sildenafil), 바데나필(vardenafil), 타다라필(tadalafil), 유데나필(udenafil), 미로데나필(mirodenafil) 각각의 표준품을 메탄올에 녹여 각각 100㎎/ℓ이 되게 한다.”로 한다.

제 7. 22. 1), (5), ⑩다음에 ⑪ 내지 ⑬를 다음과 같이 신설한다.

⑪ 치오실데나필(Thiosildenafil)

(C22H30N6O3S2, 490)

⑫ 디메틸치오실데나필(Dimethylthiosildenafil)

(C23H32N6O3S2, 504)

⑬ 아세틸바데나필(Acetylvardenafil)

(C25H34N6O3, 466)

제 7. 22. 1), (6), ④다음에 ⑤를 다음과 같이 신설한다.

⑤ 미로데나필(Mirodenafil)

(C26H37N5O5S, 531)

부  칙

①(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제3. 6. 1), (10) 잔류동물용의약품의 기준 적용 ②항은 2008. 9. 1부터 시행한다.

②(경과조치) 이 고시가 시행되기 전에 제조․수입한 제품의 경우는 종전의 규정에 의한다. (단, 발기부전치료제 유사물질의 경우 이 고시 시행 전 접수되어 검사가 진행 중인 사항도 이 고시를 적용한다).

신․ 구조문 대비표

현   행

개   정 (안)

제 3. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1.~5.  (생  략)

6. 기준 및 규격의 적용

1) 식품 일반의 규격

(1) 식품 중 유해물질

① 발기부전 치료제 유사물질

㉮～㉷ (생  략)

<신 설>

㉸ 발기부전치료제 성분(실데나필, 타다라필, 바데나필, 유데나필)과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질 : 검출되어서는 아니된다.(단, 발기부전치료제와 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질로서 따로 기준․규격이 정하여진 것은 제외한다.)

(2) 중금속

① 해산 어․패류(연체류 포함)의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

㉮ (생 략)

㉯ (생 략)

㉰ 납 : 2.0mg/kg이하

② 담수어 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

㉮ (생 략)

㉯ 납 : 2.0mg/kg이하

㉰ <신  설>

③ 패류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

㉮ 카드뮴 : 2.0mg/kg 이하

(3)~(9)  (생  략)

<신  설>

2) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1)～(58) (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

제 5의2. 수산물에 대한 규격

1. 규격

1)~2) (생 략)

3) 냉동식용대구머리

(3) 규격

② 중금속

가. (생 략)

나. 납 : 2.0 mg/kg이하

제 7. 일반시험법

1～5  (생  략)

6. 유해성금속시험법

1) ~ 4) (생 략)

5) 농산물 중 중금속 시험법

(1) 검체

농산물의 종류에 따라 아래 표에서와 같이 처리한 것을 검체로 한다. 다만, 이 표에서 정하지 아니한 농산물은 원칙적으로 가식부를 시험부위로 한다.

표 (생  략)

(2) ~ (3) (생  략)

6~14  (생  략)

15. 식품중의 잔류물질시험법

1) (생  략)

2) 항생물질

(1) (생  략)

(2) 정량시험법

① 기기분석법

㉮～ (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

3) 합성항균제

(1) (생  략)

(2) 정량시험법

①~ (생  략)

엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin) 및 다노플록사신(Danofloxacin)

㉮ 정량법의 원리

시료와 C18 분말, 수산, 무수황산나트륨을 유발에 넣고 균질화한 다음 균질화된 혼합물을 유리컬럼에 넣고 헥산, 에틸아세테이트로 세척한 후 메탄올로 용출하여 건조시킨 다음 이동상으로 녹여 측정한다.

㉯ (생  략)

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 표준원액 : 엔로플록사신, 시프로플록사신 및 다노플록사신 표준품을 정밀히 달아 100㎖ 용량플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100㎎/ℓ농도가 되게 한다.

Ⓑ~Ⓒ (생  략)

㉱ 시험용액의 조제

<신  설>

<신  설>

C18 분말 2g을 유발에 취하고 시료 0.5g을 정확히 달고 수산 0.05g과 무수황산나트륨 0.03g을 첨가한 후 유봉으로 C18과 시료가 완전히 균질화되도록 한다. 여과지(Whatman No. 1) 2장을 10ml 주사기에 넣고 균질화된 혼합물을 주사기에 옮겨 담는다. 혼합물 위에 여과지 1장을 놓고 주사봉을 이용하여 혼합물의 부피가 약 4.0ml되게 압축한다. 헥산 8ml를 가하여 흘려 보내고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 혼합물 내에 남아있는 헥산을 음압하에서 제거한다. 다시 에틸아세테이트 8ml로 세척하고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 음압하에서 완전히 건조시킨다. 메탄올 13ml로 용출시킨 후 그 용출액을 질소농축하여 건조시키고 이동상 0.5ml를 가하여 10분간 초음파를 통과시키고 용해시킨 후 4°, 15,000rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취해 0.45㎛ 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

㉲시험조작

Ⓐ측정조건

- 이동상 : 0.4% 트리에틸아민, 0.4% 인산의 혼합액 : 아세토니트릴(90:10)

Ⓑ 정량시험

시험용액 및 표준용액을 ---- 검량선을 작성하여 검체중 엔로플록사신, 시프로플록사신 및 다노플록사신의 함량을 각각 구한다.

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

4)～5) (생  략)

6) 유(乳) 중 잔류물질 시험법

(1)(생  략)

(2) 합성항균제

①~④ (생  략)

⑤ 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)

7)알(卵) 중 잔류물질 시험법

(1) (생  략)

(2) 합성항균제

① (생  략)

② 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)

8) 어류 및 갑각류중 잔류물질 시험법

(1) (생  략)

(2) 합성항균제

① (생  략)

② 플루오로퀴놀론계 합성항균제[엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin)]

16 ~ 21 (생 략)

22. 식품 중 유해물질 시험법

1) 발기부전 치료제 유사물질 시험법

(1) (생  략)

(2) 시약 및 시액

① (생  략)

② (생  략)

③ 표준원액：-----, 노르네오실데나필(norneosildenafil),  실데나필(sildenafil), 바데나필(vardenafil), 타다라필(tadalafil), 유데나필(udenafil), ----

④～⑥ (생 략)

(3) (생  략)

(5) 발기부전치료제 유사물질 분자량 및 화학구조식

①～⑩ (생 략)

<신 설>

<신  설>

(6) 발기부전치료제 분자량 및 화학구조식

①～④ (생 략)

<신  설>

2) (생  략)

제 3. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1.~5.  (현행과 같음)

6. 기준 및 규격의 적용

1) 식품 일반의 규격

(1) 식품 중 유해물질

① 발기부전 치료제 유사물질

㉮～㉷ (현행과 같음)

㉸ 치오실데나필(thiosildenafil) : 검출되어서는 아니된다.

㉹ 디메틸치오실데나필(dimethylthiosildenafil) : 검출되어서는 아니된다.

㉺ 아세틸바데나필(acetylvardenafil) : 검출되어서는 아니된다.

㉻ 발기부전치료제 성분(실데나필, 타다라필, 바데나필, 유데나필, 미로데나필)과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질 : 검출되어서는 아니된다.(단, 발기부전치료제와 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질로서 따로 기준․규격이 정하여진 것은 제외한다.)

(2) 중금속

① 어류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

㉮ (현행과 같음)

㉯ (현행과 같음)

㉰ 납 : 0.5mg/kg이하

② 연체류 및 패류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

㉮ (현행과 같음)

㉯ 납 : 2.0mg/kg이하

㉰ 카드뮴 : 2.0mg/kg이하

<삭  제>

(3)~(9)  (현행과 같음)

(10) 잔류동물용의약품의 기준 적용

① 개별동물에 대한 국내 및 국제식품규격위원회의 기준이 없을 시 유사축종의 잔류허용기준 중 최저기준을 준용한다. 즉, 포유류 중 기준이 없는 반추동물은 기준이 정해진 반추동물 기준 중 최저기준을, 기준이 없는 비반추동물은 기준이 정해진 비반추동물 기준 중 최저기준을 적용하고, 기준이 없는 가금류는 기준이 정해진 가금류 기준 중 최저기준을 적용한다.

② 식품공전, 국제식품규격위원회 및 잔류동물용의약품의 기준 적용에도 잔류기준이 없는 동물용의약품 중 항생물질 및 합성항균제에 대하여 축․수산물(유, 알 포함) 및 벌꿀의 잔류기준을 0.01 mg/kg으로 적용한다.

2) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1)～(58) (현행과 같음)

(59) 노르플록사신(Norfloxacin)

축․수산물(유, 알 포함)    불검출

(60) 오플록사신(Ofloxacin)

축․수산물(유, 알 포함)    불검출

(61) 페플록사신(Pefloxacin)

축․수산물(유, 알 포함)    불검출

제 5의2. 수산물에 대한 규격

1. 규격

1)~2) (현행과 같음)

3) 냉동식용대구머리

(3) 규격

② 중금속

가.  (현행과 같음)

나. 납 : 0.5 mg/kg이하

제 7. 일반시험법

1～5  (현행과 같음)

6. 유해성금속시험법

1) ~ 4) (현행과 같음)

5) 농산물 및 어류 중 중금속 시험법

(1) 검체

농산물의 종류에 따라 아래 표에서와 같이 처리한 것을 검체로 한다. 다만, 이 표에서 정하지 아니한 농산물과 어류는 원칙적으로 가식부를 시험부위로 한다.

표 (현행과 같음)

(2) ~ (3) (현행과 같음)

6～14  (현행과 같음)

15. 식품중의 잔류물질시험법

1) (현행과 같음)

2) 항생물질

(1) (현행과 같음)

(2)정량시험법

①기기분석법

㉮～ (현행과 같음)

네오마이신(Neomycin)

Ⓐ정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 네오마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 하고 영하 20 ℃에 보관한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ MCX(Mixed Mode Cation Exchange) 카트리지 또는 이와 동등한 것

㉥ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g에 물 20 mL를 넣고 진탕하여 충분히 녹이고 0.1 M 염산을 사용하여 pH 2로 조정한다. 이 액을 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 MCX 카트리지(충진제 60 mg)에 흡착시키고 5 mL의 10% 메탄올성 수산화암모늄용액으로 용출한다. 용출액은 45 ℃ 이하의 수욕중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 0.1 M 염산 1 mL로 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 액체크로마토그래프 조건

․ 칼럼 : C18 (2.1×100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

․ 이동상

이동상 A : 20 mM 개미산, 10 mM 노나플루오로펜탄산(nonafluoropentanoic acid) 수용액

이동상 B : 20 mM 개미산, 10 mM 노나플루오로펜탄산(nonafluoropentanoic acid) 메탄올용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
0.5	30	70
5.0	5	95
5.1	50	50
12.0	50	59
10.0	20	80

․ 유속 : 0.2 mL/min

․ 주입량 : 10 μL

- 질량분석기 조건

․ Ionization : ESI(positive)

․ Gas Temp. : 350 ℃

․ Gas Flow : 8 L/min (질소)

․ Nebulizer : 35 psi

․ Collision energy : 30 V

㉡ 정량

- 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 m/z 455의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 네오마이신의 함량을 구한다. 검량선 작성은 표준용액 2.5, 5.0, 10, 25, 50 μg/L의 5개 농도를 이용한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
네오마이신	615	455, 323, 163, 161

스트렙토마이신(Streptomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin)

Ⓐ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제한 후 칼럼 후 유도체화 장치가 장착된 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/형광검출기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 스트렙토마이신, 디히드로스트렙토마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 물에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ Divinylbenzene-N-vinylpyrrolidone Copolymer(충진제) 카트리지 칼럼 : HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 또는 이와 동등한 것

㉥ 0.2 M HSA(sodium hexane-1-sulfonic acid) 완충액 : 2.0225 g HSA를 50 mL 물에 녹인다.

㉦ 0.01 M HSA 완충액 : 2.0225 g HSA를 물 1 L에 녹인다.

㉥ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 물 20 mL에 녹여 15분간 균질화한 후 0.2 M HSA 1 mL를 가한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 60 mg)에 추출액을 흡착시키고 5 mL 물로 세척한 후 5 mL의 메탄올로 용출한다. 용출액은 45 ℃ 이하의 수욕중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 0.01 M HSA(아세트산으로 pH 3.3으로 조정) 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 칼럼 : C18 (3.0×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 0.01 M HSA 완충액 800 mL에 1,2-나프토퀴논-4-설폰산(1,2-naphthoquinone-4-sulfonic acid) 0.10408 g을 녹인 용액과 아세토니트릴 200 mL를 혼합하고 아세트산으로 pH 3.5으로 조정한 후 갈색병에 보관한다.

- 유속 : 0.8 mL/min

- 측정파장 : 여기파장 260 nm, 형광파장 435 nm

- 칼럼후 유도체화 장치

․ 이동상 : 0.2 M 수산화나트륨용액

․ 유속 : 0.5 mL/min

․ 반응코일 : 10 m

․ 반응온도 : 55 ℃

㉡ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

㉢ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

- 정량한계(0.1 mg/kg)

3) 합성항균제

(1) (현행과 같음)

(2) 정량시험법

①~ (현행과 같음)

엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin), 다노플록사신(Danofloxacin), 노르플록사신(Norfloxacin), 오플록사신(Ofloxacin) 및 페플록사신(Pefloxacin)

㉮ 정량법의 원리

식육, 유(乳), 알(卵), 어류 및 갑각류 등 모든 식품 중 플루오로퀴놀론계를 시료고체상분산법(MSPD, Matrix Solid Phase Dispersion) 또는 인산, 이동상 및 아세토니트릴 등으로 추출하여 헥산 또는 SPE(Solid Phase Extraction) 컬럼을 이용하여 정제하고 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

㉯ (현행과 같음)

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 표준원액 : 엔로플록사신, 시프로플록사신, 다노플록사신, 노르플록사신, 오플록사신 및 페플록사신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 용량플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 μg/mL 농도가 되게 한다.

Ⓑ (현행과 같음)

Ⓒ 0.05 M 인산완충용액(pH 7.4) : 1 L 정용플라스크에 0.2 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 250 mL와 0.2 M 수산화나트륨 197.5 mL를 혼합한 후 물로 표시선까지 채운다.

Ⓓ (현행Ⓒ와 같음)

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

시료를 균질화하여 5 g을 원심분리관에 취한 후 20% 메탄올성 삼염화초산 2.5 mL를 넣고 15초간 균질화한다. 이 용액을 1,500 g에서 10분간 원심분리한 후 0.05 M 인산완충용액(pH 7.4) 12.5 mL을 가하고 1,500 g에서 15분간 다시 원심분리 한다. 상층액을 메탄올 6 mL, 물 6 mL, 0.05 M 인산완충용액(pH 7.4) 6 mL로 차례로 미리 활성화시킨 C18 카트리지에 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후, 3분간 vacuum하에서 건조시키고 아세토니트릴성 1% trifluoroacetic acid 6 mL로 용출한다. 용출액은 45 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 이동상 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 어류 및 갑각류

시료를 마쇄한 후 5 g을 취한 후 이동상과 아세토니트릴을 1:1로 섞은 혼합액 40 mL를 가하여 균질기로 2분간 균질화 시킨다. 이 액을 80 ℃에서 10분간 열처리하여 방냉 한 다음 5,000 rpm에서 10분간 원심분리 하여 상등액을 취한다. 이 상등액을 분액여두로 옮겨 헥산 50  mL을 가하여 액층이 분리될 때까지 정치한다. 분리된 하층액은 40 ℃에서 잔사만이 남을 때까지 감압농축하고 이 건고물은 이동상 2.5 mL을 가하여 충분히 용해시킨 다음 0.45 μm 멤브레인필터로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

Ⓒ 유(乳), 어류 및 갑각류를 제외한 모든 식품

C18 분말 2 g을 유발에 취하고 시료 0.5 g을 정확히 달고 수산 0.05 g과 무수황산나트륨 0.03 g을 첨가한 후 유봉으로 C18과 시료가 완전히 균질화되도록 한다. 여과지(Whatman No. 1) 2장을 10 mL 주사기에 넣고 균질화된 혼합물을 주사기에 옮겨 담는다. 혼합물 위에 여과지 1장을 놓고 주사봉을 이용하여 혼합물의 부피가 약 4.0 mL 되게 압축한다. 헥산 8 mL를 가하여 흘려보내고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 혼합물 내에 남아있는 헥산을 음압 하에서 제거한다. 다시 에틸아세테이트 8 mL로 세척하고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 음압 하에서 완전히 건조시킨다. 메탄올 13 mL로 용출시킨 후 그 용출액을 질소 농축하여 건조시키고 이동상 0.5 mL를 가하여 10분간 초음파를 통과시키고 용해시킨 후 4°, 15,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취해 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 이동상 : 0.4% 트리에틸아민, 0.4% 인산의 혼합액 : 아세토니트릴 : 테트라히드로퓨란(920 : 78 : 2)

Ⓑ 정량시험

시험용액 및 표준용액을 ---- 검량선을 작성하여 검체중 엔로플록사신, 시프로플록사신, 다노플록사신, 노르플록사신, 오플록사신 및 페플록사신의 함량을 각각 구한다.

- 정량한계(0.05 mg/kg)

(현행과 같음)

아미트라즈(Amitraz), 2,4-디메틸아닐린(2,4-Dimethylaniline)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 아세톤:헥산(1:49) 혼합액으로 추출하고 0.25% 암모니아수를 넣어 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 아미트라즈 및 2,4-디메틸아닐린 표준품을 정밀히 달아 아세톤:헥산(1:24) 혼합액에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 아세톤:헥산(1:49) 혼합액에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 추출용액 : 아세톤:헥산(1:49) 혼합액

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 삼각플라스크에 정밀히 달고 물 70 mL와 암모니아수 10 μL를 넣어 알칼리 조건에서 5분간 균질화한 후 추출용액 70 mL를 넣고 25분간 실온에서 교반한다. 이 액을 분액깔때기에 옮기고 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 2회 세척한 액과 합친다. 분액깔대기를 1분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층(아래층)은 다른 분액깔대기에 옮기고  여기에 추출용액 30 mL를 넣어 위와 같이 반복한 후 물층(아래층)은 버리고 유기용매층(윗층)을 앞의 분액 깔대기에 합친다. 0.25% 암모니아수 70 mL를 넣고 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층을 버리고 이 과정을 한번 반복한 후 유기용매층을 삼각플라스크에 옮긴다. 여기에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 약하게 흔들어 섞으면서 방치한 후 여과하고 다시 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 씻고, 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 2회 반복하여 씻고 여과한다. 여액을 합쳐 35 ℃ 이하의 수욕조에서 유기용매를 감압 하에 날려 보낸다. 잔사를 내부표준물이 포함된 아세톤∶헥산(1:24)의 혼합액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18 (4.6×300 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 70% 아세토니트릴

- 유속 : 1.2 mL/min

- 측정파장 : 233 nm

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 정량한다.

코마포스(Coumaphos)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 아세톤:헥산(1:49) 혼합액으로 추출하고 0.25% 암모니아수를 넣어 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 코마포스 표준품을 정밀히 달아 아세톤:헥산(1:24) 혼합액에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 아세톤:헥산(1:49) 혼합액에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 추출용액 : 아세톤:헥산(1:49) 혼합액

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 삼각플라스크에 정밀히 달고 물 70 mL와 암모니아수 10 μL를 넣어 알칼리 조건에서 5분간 균질화한 후 추출용액 70 mL를 넣고 25분간 실온에서 교반한다. 이 액을 분액깔때기에 옮기고 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 2회 세척한 액과 합친다. 분액깔대기를 1분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층(아래층)은 다른 분액깔대기에 옮기고  여기에 추출용액 30 mL를 넣어 위와 같이 반복한 후 물층(아래층)은 버리고 유기용매층(윗층)을 앞의 분액깔대기에 합친다. 0.25% 암모니아수 70 mL를 넣고 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 물층을 버리고 이 과정을 한번 반복한 후 유기용매층을 삼각플라스크에 옮긴다. 여기에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 약하게 흔들어 섞으면서 방치한 후 여과하고 다시 추출용액 10 mL로 삼각플라스크를 씻고, 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 2회 반복하여 씻고 여과한다. 여액을 합쳐 35 ℃ 이하의 수욕조에서 유기용매를 감압 하에 날려 보낸다. 잔사를 내부표준물이 포함된 아세톤∶헥산(1:24)의 혼합액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18 (4.6×300 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 70% 아세토니트릴

- 유속 : 1.2 mL/min

- 측정파장 : 313 nm

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

플루메쓰린(Flumethrin)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물과 아세토니트릴을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 플루메쓰린 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 5 mL 물에 녹여 균질화한 뒤, 10 mL 아세토니트릴을 첨가하여 균질화하고 3000 rpm, 4 ℃에서 5분간 원심분리한다. 상등액을 새로운 원심분리관에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 가한 다음 3000 rpm, 4 ℃에서 5분간 원심분리한 뒤 상등액을 앞의 상등액과 합한다. 이 액에 염화나트륨 소량을 첨가하여 진탕 후 3000 rpm, 4 ℃에서 5분간 원심분리 한 다음, 상등액을 40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 헥산 5 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 헥산 10 mL로 활성화시킨 실리카 카트리지(충진제 500 mg)에 추출액 2 mL를 흡착시키고 헥산:디클로로메탄 혼합액(55:45) 10 mL로 용출한다. 용출액은 40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 메탄올 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18 (4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 85% 아세토니트릴

- 유속 : 1.0 mL/min

- 측정파장 : 266 nm

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

플루발리네이트(Fluvalinate)

㉮ 정량법의 원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 가스크로마토그래프/전자포획검출기(GC/ECD)로 분석한다.

㉯ 측정기기

가스크로마토그래프/전자포획검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 타우플루발리네이트(tau-Fluvalinate) 표준품을 정밀히 달아 헥산에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 헥산에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 증류수 20 mL에 녹여 균질화한 후, 15분간 초음파를 통과시킨다. 이 액에 디클로로메탄 10 mL를 가한 후 강하게 1분간 균질화하고 3000 rpm, -10 ℃에서 10분간 원심분리한다. 물층에 디클로로메탄 10 mL를 가하고 강하게 1분간 균질화하여 3000 rpm, -10 ℃에서 10분간 원심분리한 후 앞의 디클로로메탄층과 합하여 황산나트륨층을 통과하여 탈수하고  40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 50% 메탄올 4 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 8 mL와 50% 메탄올 8 mL로 활성화시킨 Sep-pak C8 카트리지(충진제 500 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 8 mL와 50% 메탄올 8 mL로 세척한 후, 디클로로메탄 8 mL와 에틸아세테이트 4 mL로 용출한다. 용출액은 40 ℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 헥산 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : DB-17 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

- 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1 mL/분

- 오븐온도 : 100 ℃에서 시료를 주입하고 2분간 유지 후 15 ℃/분의 비율로 280 ℃까지 온도를 상승시켜 30분간 유지한다.

- 주입부 : 260 ℃

- 검출기온도 : 280 ℃

Ⓑ 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

Ⓒ 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4)～5) (생  략)

6) 유(乳) 중 잔류물질 시험법

(1) (현행과 같음)

(2) 합성항균제

①~④ (현행과 같음)

<삭  제>

7)알(卵) 중 잔류물질 시험법

(1) (현행과 같음)

(2) 합성항균제

① (현행과 같음)

<삭  제>

8) 어류 및 갑각류중 잔류물질 시험법

(1) (생  략)

(2) 합성항균제

① (생  략)

<삭  제>

16 ~ 21 (현행과 같음)

22. 식품 중 유해물질 시험법

1) 발기부전 치료제 유사물질 시험법

(1) (현행과 같음)

(2) 시약 및 시액

① (현행과 같음)

② (현행과 같음)

③ 표준원액：----, 노르네오실데나필(norneosildenafil), 치오실데나필(thiosildenafil), 디메틸치오실데나필(dimethylthiosildenafil),아세틸바데나필(acethylvardenafil), 실데나필(sildenafil), 바데나필(vardenafil), 타다라필(tadalafil), 유데나필(udenafil), 미로데나필(mirodenafil), ----

④～⑥ (현행과 같음)

(3) (현행과 같음)

(5) 발기부전치료제 유사물질 분자량 및 화학구조식

①～⑩ (현행과 같음)

⑪ 치오실데나필(Thiosildenafil)

(C22H30N6O3S2, 490)

⑫ 디메틸치오실데나필(Dimethylthiosildenafil)

(C23H32N6O3S2, 504)

⑬ 아세틸바데나필(Acetylvardenafil)

(C25H34N6O3, 466)

(6) 발기부전치료제 분자량 및 화학구조식

①～④ (현행과 같음)

⑤미로데나필(Mirodenafil)

(C26H37N5O5S, 531)

2) (현행과 같음)