식품의약품안전청 고시 제2011-76호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2011. 12. 29.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 고시 제2011-76호

식품의 기준 및 규격 일부 개정고시

1. 개정 이유

농산물 중 중금속 기준 및 식품 중 발기부전치료제 및 비만치료제 유사물질에 대한 안전기준을 마련하여 식품안전관리를 강화하고 냉동제품의 보존 및 유통기준 등을 개정하여 식품업계의 현실 여건을 반영하고 일반시험법을 개정하여 검사의 신뢰성을 확보하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.  또한 「식품등 중 기준규격미설정 물질의 시험방법」중 잔류농약시험법을 「식품의 기준 및 규격」으로 통합하고 「식품등 중 기준규격미설정 물질의 시험방법」은 폐지하고자 함.

2. 주요 내용

가. 식품 중 중금속 기준 신설 [제 2, 5, 5), (3), 제 2, 5, 5), (5), 제 2, 5, 5), (7), 제 5, 1, 5), (12) 및 제 5, 4, 5), (3)]

1) 수입량이 증가되고 있는 농산물(8품목류) 및 어린이들의 섭취가 많은 원유, 우유류, 젤리, 잼의 중금속 관리 필요

2) 곡류, 서류, 콩류, 과실류, 엽채류, 엽경채류, 근채류, 과채류에 대하여 중금속(납, 카드뮴) 기준 신설

3) 축산물에 해당하는 유가공품 중 원유 및 우유류에 대하여 납 기준 신설

4) 과자류 중 젤리, 잼류에 대한 납 기준 신설

5) 식용유지류에 대한 납, 비소 기준 신설

6) 농산물, 원유, 우유류, 젤리, 잼, 식용유지류의 중금속에 대한 안전성 확보

나. 식품 중 곰팡이독소 기준 신설 [제 2, 5, 8), (6), 제 2, 5, 8), (7)]

1) 수확, 저장 중 곰팡이 오염 우려가 높은 곡류를 주원료로 하여 제조한 면류, 시리얼류에 대한 곰팡이독소 안전관리 필요

2) 면류 중 데옥시니발레놀, 시리얼류 중 제랄레논 기준 신설

3) 면류 및 시리얼류의 곰팡이독소에 대한 안전성 확보

다. 발기부전치료제 및 비만치료제 유사물질 기준 및 시험법 추가 [제2, 5, 12), (2), 제2, 5, 12), (3), 제 10. 7, 7.4 및 제 10. 7, 7.5)]

1) 발기부전치료제는 의사의 처방에 따라 복용해야 하는 전문의약품임에도 불구하고 이와 유사한 물질을 합성․제조하여 식품에 혼입하는 사례가 발생함에 따라 유사물질에 대한 기준 및 시험법 추가 필요

2) 새로운 발기부전치료제 유사물질인 하이드록시클로로데나필, 디클로로데나필 및 비만치료제 유사물질인 디데스메틸시부트라민에 대한 불검출 기준 신설 및 시험법 추가

3) 부정 유해식품 근절을 통한 국민 건강 보호

라. 보존 및 유통기준 개정[제 2, 6, 2), 제 2, 6, 3), 제 2, 6, 8) 및 제 2, 6, 10)]

1) 냉동어패류를 즉석에서 당일 판매할 목적인 경우 냉장 유통 할 수 있도록 허용하며, 냉동어패류의 내장 등 비가식부위를 제거할 목적인 경우 재냉동 할 수 있도록 함

2) 식품의 보관기준 및 냉동 떡류의 유통기준 개정

마. 통․병조림식품의 규격 개정[제3, 1, 2)]

통․병조림식품의 진공도 규격 삭제

바. 식품 중 식품첨가물 기준 개정[제 5, 14, 5), 제 5, 18-6, 5) 및 제 5, 25, 5)]

마가린 및 저지방마가린의 산화방지제, 기타음료 및 절임식품의 보존료 기준을 「식품첨가물의 기준 및 규격」의 사용기준과 일치

사. 혼합음료, 액젓 등 식품의 정의 개정[제 1. 2. 37), 제 5, 18-6, 4), 제 5, 24, 4) 및 제5. 29-18. 4)]

1) 유밀과의 정의 신설

2) 먹는 물 뿐만 아니라 동․식물성 원료를 주원료로 하여 혼합음료를 제조할 수 있도록 개정하고 액젓 제조시 젓갈을 여과하거나 분리한 액을 혼합할 수 있도록 함

아. 식염의 불용분 기준 개정[제 5, 29-12, 5), (4)]

토판 염전에서 채취한 천일염의 불용분 기준 완화

자. 일반시험법 개정

1) 지방산 시험법 개정 및 트랜스지방 시험법 삭제[제 10, 1.1.5.4]

2) 콜레스테롤 시험법 개정[제 10, 1.1.5.5]

3) 잔류농약 시험법 신설〔제 10, 4.1.3.29 및 4.1.4.141～4.1.4.147〕

가) 「식품등 중 기준규격미설정 물질의 시험방법」에 고시되었던 시험법 중 이소카보포스 등 11종 농약에 대한 시험법을 「식품의 기준 및 규격」에 신설

나) 「식품등 중 기준규격미설정 물질의 시험방법」 폐지

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조 제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

- ’10.10.29 ～ ’10.11.18(공고 제2010-244호)

․발기부전치료제 및 비만치료제 유사물질 기준 및 시험법 추가

(하이드록시클로로데나필, 디데스메틸시부트라민에 대한 불검출 기준 신설 )

- ’10.12.31 ～ ’11.1.20(공고 제2010-294호)

․발기부전치료제 및 비만치료제 유사물질 기준 및 시험법 추가

(디클로로데나필에 대한 불검출 기준 신설)

- ’11.5.12 ～ ’11.6.30(공고 제2011-72호)

․식품 중 중금속 기준 신설

․식품 중 곰팡이독소 기준 신설

․혼합음료의 정의 개정

․잔류농약시험법 신설

- ’11.9.30 ～ ’11.10.20(공고 제2011-189호)

․보존 및 유통기준 개정

․통․병조림 식품의 규격 개정

․식품 중 식품첨가물 기준 개정

․액젓의 정의 개정

․식염의 불용분 기준 개정

․지방산 시험법 및 콜레스테롤 시험법 개정, 트랜스지방 시험법 삭제

2) 규제심사 : ’11.12.7

식품의약품안전청 고시 제2011-76호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2011- 62호, 2011. 10.14)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2011년 12월 29일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시안

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

식품의 기준 및 규격

제 1, 2, 37)을 다음과 같이 신설한다.

37) “유밀과”라 함은 밀가루를 주원료로 하여 참기름, 당류, 벌꿀 또는 주류 등을 첨가하고 반죽, 유탕처리한 후 당류 또는 벌꿀을 가하여 만든 것이거나 이에 잣 등의 식품을 입힌 것을 말한다.

제 2, 5, 5) 중 (3), (5) 및 (7)을 각각 다음과 같이 한다.

(3) 농산물 중 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
곡류 (현미 제외)	0.2 이하	0.1 이하(밀, 쌀은 0.2 이하)
서류	0.1 이하	0.1 이하
콩류	0.2 이하	0.1 이하(대두는 0.2 이하)
과실류	0.1 이하(사과, 귤, 장과류는 0.2 이하)	-
엽채류(결구 엽채류 포함)	0.3 이하	0.2 이하
엽경채류	0.1 이하	0.05 이하
근채류	0.1 이하	0.1 이하(양파는 0.05 이하)
과채류	0.1 이하(고추, 호박은 0.2 이하)	0.05 이하(고추, 호박은 0.1 이하)
참깨	0.3 이하	0.2 이하

(5) 축산물 중 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
가금류고기	0.1 이하	-
돼지간	0.5 이하	0.5 이하
돼지고기	0.1 이하	0.05 이하
돼지신장	0.5 이하	1.0 이하
소간	0.5 이하	0.5 이하
소고기	0.1 이하	0.05 이하
소신장	0.5 이하	1.0 이하
원유 및 우유류	0.02 이하	-

(7) 식용유지류의 중금속 기준

① 납 : 0.1 mg/kg 이하

② 비소 : 0.1 mg/kg 이하

제 2, 5, 8) 중 (6) 및 (7)을 각각 다음과 같이 한다.

(6) 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

대 상 식 품	기준 (mg/kg)
곡류 및 그 단순가공품 (옥수수 및 그 단순가공품 제외)	1 이하
옥수수 및 그 단순가공품	2 이하
시리얼류	0.5 이하
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	0.2 이하
면류	0.75 이하

(7) 제랄레논(Zearalenone)

대 상 식 품	기준 (μg/kg)
곡류 및 그 단순가공품	200 이하
과자	50 이하
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	20 이하
시리얼류	50 이하

제 2, 5, 12), (2) 중  및 을 각각 다음과 같이 신설한다.

하이드록시클로로데나필 (Hydroxychlorodenafil) : 검출되어서는 아니된다.

디클로로데나필 (Dichlorodenafil) : 검출되어서는 아니된다.

제 2, 5, 12), (3) 중 를 다음과 같이 신설한다.

디데스메틸시부트라민(Didesmethylsibutramine) : 검출되어서는 아니된다.

제 2, 6, 2) 중 “보호될 수 있어야 하며”를 “보호될 수 있도록 하고, 외부로부터의 오염을 방지할 수 있어야 하며”로 한다.

제 2, 6, 3) 중 “식품첨가물 등과는”을 “식품첨가물 및 식품을 오염시키거나 품질에 영향을 미칠 수 있는 물품 등과는”으로 한다.

제 2, 6, 8)을 다음과 같이 한다.

8) 냉동제품을 해동시켜 실온 또는 냉장제품으로 유통시켜서는 아니되며, 실온 또는 냉장제품을 냉동시켜 냉동제품으로 유통시켜서는 아니 된다. 다만, 냉동어패류를 즉석에서 당일 판매를 목적으로 냉장하는 것은 그러하지 아니할 수 있으며, 이때 재냉동하여서는 아니 된다. 또한, 제조업자가 냉동제품인 빵류, 떡류 및 젓갈류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

제 2, 6, 10)을 다음과 같이 한다.

10) 해동된 냉동제품을 재냉동하여서는 아니 된다. 다만, 냉동어패류의 내장 등 비가식부위를 제거하기 위해 해동하는 것은 그러하지 아니할 수 있으며 신속하게 냉동하여야 한다.

제 3, 1, 1), (2) 중 “pH 4.5 이상의 저산성식품은”을 “pH 4.6 이상의 저산성식품(low acid food)은”으로 하고 제 3, 1, 1), (3) 중 “pH 4.5”를 “pH 4.6”으로 한다.

제 3, 1, 2) 중 (2)를 삭제하고 “(3)” 및 “(4)”를 “(2)” 및 “(3)”으로 한다.

제 5, 1, 5) 중 (12)를 다음과 같이 신설한다.

(12) 납 (mg/kg) : 1.0 이하(젤리에 한한다)

제 5, 1, 6) 중 (10) 및 (11)을 각각 다음과 같이 신설한다.

(10) 푸모니신

제 10. 일반시험법 6.1 곰팡이독소에 따라 시험한다.

(11) 납

제 10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

제 5, 4, 5) 중 (3)을 다음과 같이 신설한다.

(3) 납 (mg/kg) : 1.0 이하

제 5, 4, 6) 중 (3)을 다음과 같이 신설한다.

(3) 납

제 10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

제 5, 14, 5) 중 마가린 및 저지방마가린(지방스프레드)의 (4) 산화방지제(g/kg)를 다음과 같이 한다.

(4) 산화방지제(g/kg)	다음에서 정하는 것 이외의 산화방지제가 검출되어서는 아니된다.
	부틸히드록시아니졸 디부틸히드록시톨루엔 터셔리부틸히드로퀴논	0.2 이하(병용할 때에는 부틸히드록시아니졸, 디부틸히드록시톨루엔 및 터셔리부틸히드로퀴논으로서 사용량의 합계가 0.2 이하)
	몰식자산 프로필	0.1 이하
	이.디.티.에이.칼슘이나트륨	0.1 이하(이.디.티.에이.이나트륨과 병용할 때에는 무수 이.디.티.에이.이나트륨으로서 사용량의 합계가 0.1g/kg 이하)

제 5, 18-6, 4), (1) 중 “먹는 물에 식품 또는 식품첨가물을 가한 것을 말한다.”를 “먹는 물 또는 동․식물성 원료에 식품 또는 식품첨가물을 가하여 음용할 수 있도록 가공한 것을 말한다.”로 한다.

제 5, 18-6, 5), (8)를 다음과 같이 한다.

(8) 보존료(g/kg)：다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산메틸과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하이어야 한다. 또한 분말제품은 검출되어서는 아니 된다.)
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.1 이하(안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 파라옥시안식향산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하이어야 한다. 또한 분말제품은 검출되어서는 아니 된다.)

제 5, 19, 19-1, 6) 중 (30)부터 (36)까지를 (31)부터 (37)까지로 하고 (30)을 다음과 같이 신설한다.

(30) 셀레늄

제10. 일반시험법 1.2 미량영양성분시험법 1.2.1.10. 셀레늄에 따라 시험한다.

제 5, 19, 19-2, 6) 중 (27)부터 (32)까지를 (28)부터 (33)까지로 하고 (27)을 다음과 같이 신설한다.

(27) 셀레늄

제10. 일반시험법 1.2 미량영양성분시험법 1.2.1.10. 셀레늄에 따라 시험한다.

제 5, 19-5, 3), (6) 중 “단백질 유래 열량이 총 열량의”를 “단백질은 제품”으로 한다.

제 5, 21-5, 6), (4), ⑤를 삭제한다.

제 5, 24, 4) 중 (3) 및 (4)를 각각 다음과 같이 한다.

(3) 액젓

젓갈을 여과하거나 분리한 액 또는 이에 젓갈을 여과하거나 분리하고 남은 것을 재발효 또는 숙성시킨 후 여과하거나 분리한 액을 혼합한 것을 말한다.

(4) 조미액젓

액젓에 염수 또는 조미료 등을 첨가한 것을 말한다.

제 5, 25, 5), (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니된다.

소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	1.0 이하(소르빈산으로서, 다만, 당절임, 식초절임 제외)
	0.5 이하[소르빈산으로서, 당절임(건조당절임 제외)에 한함]
	0.5 이하(식초절임에 한함, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소르빈산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(식초절임에 한함. 소르빈산, 소르빈산칼륨 및 소르빈산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소르빈산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하)

제 5, 29-12, 5), (4) 중 천일염의 불용분(%)을 “0.15 이하”에서 “0.15 이하(토판염은 0.3 이하)”로 한다.

제 5, 29-18, 4), (2) 중 “스프 등의”를 “수프, 순대 등의”로 한다.

제 10, 1, 1.1, 1.1.5, 1.1.5.4를 다음과 같이 한다.

1.1.5.4. 지방산

가. 제1법

1) 시험법 적용범위

식용유지류에 적용한다.

2) 분석원리

유지를 메탄올성 수산화나트륨용액으로 처리하여 알칼리염을 만든 후 트리플루오로보란메탄올 용액을 가하고 가열하여 에스테르화 한다. 생성된 지방산에스테르를 이소옥탄에 녹여 분석을 행한다. 개별 지방산의 함량 및 대표적인 지방산의 합을 계산하여 포화지방, 단일불포화지방, 다중불포화지방 함량을 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：불꽃이온화검출기(FID)

나) 교반기(vortex mixer)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 14% 트리플루오로보란메탄올 용액(125 g BF3/L MeOH)

(2) 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5 N) :

수산화나트륨 2 g을 메탄올 100 mL로 조제한다. 장시간 방치하는 경우 흰 침전(탄산나트륨)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.

(3) 이소옥탄：기체크로마토그래피용

(4) 내부표준용액：triundecanoin(C11:0) 0.01 g을 이소옥탄용액에 녹여 10 mL가 되게 한다(1 mg/mL).

(5) 표준용액 : 각 지방산 메틸 에스테르와 내부표준물질 undecanoic acid 메틸 에스테르를 이소옥탄에 녹여 각각 0.5 mg/mL이 되도록 조제한다.

5) 시험용액의 조제

가) 지방 및 유지

검체 약 25 mg을 유리 튜브에 정밀히 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다. 이어 0.5 N 메탄올성 수산화나트륨용액 1.5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합한다. 이어 100℃ heating block에서 약 5분간 가온한다. 이를 냉각한 후 14% 트리플루오로보란메탄올 용액 2 mL를 가하고 다시 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합하고 100℃에서 30분간 가온한다. 이어 30～40℃로 냉각하여 이소옥탄용액 1 mL를 가하여 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 이 온도에서 30초간 격렬히 진탕한다. 다음 즉시 포화 염화나트륨용액 5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 진탕한다. 상온으로 냉각한 후 수층으로부터 분리된 이소옥탄층을 무수황산나트륨으로 탈수하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래피 조건

지방산 분석시 C18:3(Linolenic acid, n3 cis)과 C20:1(Eicosenic acid) 및 C22:1(Docosaenoic acid), C20:3(Eicosatrienoic acid)와 C20:4 (Arachidonic acid)의 분리도는 1.0 이상이여야 한다.

(1) 칼럼 : SP-2560 (100 m x 0.25 mm x 0.2 ㎛) 혹은 이와 동등한 것

(2) 주입부온도 : 225℃

(3) 칼럼온도 : 100℃에서 4분간 유지한 후 3℃/min의 비율로 240℃까지 온도를 상승시키고 이후 15분이상 유지한다.

(4) 검출기온도 : 285℃

(5) 유량 : 헬륨  0.75 mL/min

(6) split ratio : 200 : 1

나) 지방산 표준물질의 크로마토그램

C18:1(Elaidic acid)과 C18:2(Linolelaidic acid)의 트랜스형의 이성체의 표준물질을 포함한 37종의 지방산 메틸 에스테르 표준물질의 크로마토그램은 그림 1과 같다. 통상적으로 트랜스형의 이성체는 시스형보다 먼저 분리된다. C18:3(Linolenic acid, n3, cis)과 C20:1(Eicosenic acid)의 피크 순서는 칼럼의 종류 및 분석온도에 따라 상이하며 트랜스지방산의 분리조건을 최적화시키는 데에는 C20:1(Eicosenic acid)의 피크가 C18:3(Linolenic acid, n3, cis)의 바로 앞에 나오는 것이 좋다(SP-2560의 경우, 그림 1)

그림 1. 37종 지방산 메틸 에스테르의 크로마토그램

다) 지방산 전환계수

GC-FID상에서의 분석은 각 지방산의 메틸 에스테르이므로 해당 지방산으로 전환해야 한다. 각 지방산별 전환계수는 8)정량시험 표 1.과 같다. 트랜스형의 지방산인 경우 동일한 분자량을 갖는 시스형 지방산의 경우와 동일한 전환계수를 사용한다.

라) 부분 경화유 중 트랜스지방 크로마토그램

부분 경화유의 크로마토그램 중 트랜스지방의 검출시간은 그림 2.와 같다.

그림 2. 부분 경화유의 크로마토그램

7) 정성시험

시험용액 및 지방산표준용액을 각각 1～2 μL를 주입하여 RRT (Relative Retention Time; 내부표준물질에 대한 각 지방산들의 머무름 시간의 비)를 사용하여 각각의 지방산을 확인한다.

8) 정량시험

정성시험법에 의해 얻은 각 지방산의 피크면적, 내부표준물질의 피크면적으로부터 다음과 같이 정량을 한다.

가) 개별 지방산 메틸 에스테르의 함량 계산

WFAMEi	=	Pti×WtC11:0×1.0067
		PtC11:0×Ri

WFAMEi : 지방산 i의 메틸 에스테르로서의 양(mg)

Pti : 시험용액 중 지방산i의 피크면적

WtC11:0 : 시험용액 중 내부표준물질(C11:0 triundecanoin) 첨가량(mg)

1.0067 : 내부표준물질(C11:0 triundecanoin)의 트리글리세라이드로부터 지방산 메틸 에스테르로의 전환계수

PtC11:0 : 시험용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 피크면적

Ri : 지방산 i의 반응계수(response factor)

※ Ri	=	Psi	×	WC11:0
		PsC11:0		Wi

Psi : 표준용액 중 지방산 메틸 에스테르 i의 피크면적

PsC11:0 : 표준용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 피크면적

WC11:0 : 표준용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 양(mg)

Wi : 표준용액 중 지방산 메틸 에스테르 i의 양(mg)

나) 개별 지방산 및 지방 함량 계산

(1) 개별 지방산

지방산(g/100 g)	=	WFAi × 100
		Wspl

WFAi = WFAMEi × fFAi

fFAi : 지방산 i(메틸 에스테르로서)의 지방산 전환계수(표 1.)

Wspl : 검체량(mg)

(2) 포화지방

포화지방(g/100 g)	=	Σ 포화지방산i × 100
		Wspl

포화지방산i : C4:0(Butyric acid), C6:0(Carproic acid), C8:0(Caprylic acid) 등 이중결합이 없는 지방산

(3) 단일불포화지방

단일불포화지방(g/100 g)	=	Σ 단일불포화지방산i × 100
		Wspl

단일불포화지방산i : C16:1(Palmitic acid), C17:1(Margaroleic acid), C18:1(Oleic acid) 등 하나의 시스형 이중결합이 있는 지방산

(4) 다중불포화지방

다중불포화지방(g/100 g)	=	Σ 다중불포화지방산i × 100
		Wspl

다중불포화지방산i : C18:2(Linoleic acid), C18:3(Linolenic acid), C20:2(Eicosadienoic acid) 등 시스형 이중결합이 두 개 이상인 지방산

(5) 트랜스지방

트랜스지방(g/100 g)	=	Σ 트랜스지방산i × 100
		Wspl

트랜스지방산i : C18:1(Elaidic acid), C18:2(Linolelaidic acid) 등 트랜스 구조를 1개 이상 가지고 있는 모든 불포화지방산을 말한다. 이중결합이 2개 이상일 때에는 메틸렌기에 의해 분리되거나 또는 비공액형의 이중결합을 가지고 있는 지방산으로 한정한다.

표 1. 각 지방산 Methyl ester의 지방산 전환계수
지방산명		fFAi
C4:0	Butyric acid	0.8627
C6:0	Caproic acid	0.8923
C8:0	Caprylic acid	0.9114
C10:0	Capric acid	0.9247
C11:0	Undecanoic acid	0.9300
C12:0	Lauric acid	0.9346
C13:0	Tridecanoic acid	0.9386
C14:0	Myristic acid	0.9421
C14:1	Tetradecenenoic	0.9417
C15:0	Pentadecanoic acid	0.9453
C15:1	Pentadecenoic acid	0.9449
C16:0	Palmitic acid	0.9481
C16:1	Hexadecenoic acid	0.9477
C17:0	Margaric acid	0.9507
C17:1	Margaroleic acid	0.9503
C18:0	Stearic acid	0.9530
C18:1	Octadecenoic acid	0.9527
C18:2	Octadecadienoic acid	0.9524
C18:3	Linolenic acid	0.9520
C20:0	Arachidic acid	0.9570
C20:1	Eicosenic acid	0.9568
C20:2	Eicosadienoic acid	0.9565
C20:3	Eicosatrienoic acid	0.9562
C20:4	Arachidonic acid	0.9560
C20:5	Eicosapentaenoic acid	0.9557
C21:0	Heneicosanoic acid	0.9588
C22:0	Behenic acid	0.9604
C22:1	Docosaenoic acid	0.9602
C22:2	Docosadienoic acid	0.9600
C22:3	Docosatrienoic acid	0.9598
C22:4	Docosatetraenoic acid	0.9595
C22:5	Docosapentaenoic acid	0.9593
C22:6	Docosahexaenoic acid	0.9590
C23:0	Tricosanoic acid	0.9620
C24:0	Lignoceric acid	0.9563
C24:1	Nervonic acid	0.9632

나. 제2법

1) 시험법 적용범위

식품 등에 적용한다.

2) 분석원리

식품 중 지방 및 지방산을 산분해 및 염기분해하여 에테르로 추출하고 트리플루오로보란메탄올 용액으로 지방산을 메틸 에스테르화하여 가스크로마토그래피로 분석한다. 개별 지방산의 함량 및 대표적인 지방산의 합을 계산하여 포화지방, 단일불포화지방, 다중불포화지방 함량을 분석한다.

3) 장치

기체크로마토그래프：불꽃이온화검출기(FID)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 피로갈롤

(2) 8.3 M 및 12 M 염산 용액

(3) 수산화암모늄 용액 : 58%(w/w)

(4) 디에틸에테르 : 지방 추출용

(5) 무수 석유에테르

(6) 에탄올 : 95%(v/v)

(7) 톨루엔

(8) 클로로포름

(9) 무수 황산나트륨(Na2SO4)

(10) 7% 트리플루오로보란메탄올 용액 : 14% 트리플루오로보란메탄올 용액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

(11) 에테르 혼합 추출용매 : 디에틸에테르와 무수 석유에테르(1 : 1) 혼합 용매(v/v)

(12) 내부표준용액：triundecanoin(C11:0) 0.05 g을 클로로포름에 녹여 10 mL가 되게 한다(5 mg/mL).

(13) 표준용액의 조제 : 36종 지방산 메틸 에스테르1)와 내부표준물질 (undecanoic acid methyl ester)를 헥산에 녹여 각각 1 mg/mL가 되도록 조제한다.

1) C4:0-tetranoic methyl ester, C6:0-hexanoic methyl ester, C8:0-octanoic methyl ester, C10:0-decanoic methyl ester, C12:0-dodecanoic methyl ester, C13:0-tridecanoic methyl ester, C14:0-tetradecanoic methyl ester, C14:1-9-tetradecenoic methyl ester, C15:0-pentadecanoic methyl ester, C15:1-10-pentadecenoic methyl ester, C16:0-hexadecanoic methyl ester, C16:1-9-hexadecenoic methyl ester, C17:0-heptadecanoic methyl ester, C17:1-10-heptadecenoic methyl ester, C18:0-octadecanoic methyl ester, C18:1-elaidic methyl ester, C18:1-9-octadecenoic methyl ester, C18:2-6-linolelaidic methyl ester, C18:2-9,12-octadecadienoic methyl ester, C18:3-9,12,15-octadecatrienoic methyl ester, C18:3-6,9,12-octadecatrienoic methyl ester, C20:0-eicosanoic methyl ester, C21:0-heneicosanoic methyl ester, C20:1-8-eicosenoic methyl ester, C20:2-11,14-eicosadienoic methyl ester, C20:3-8,11,14-eicosatrienoic methyl ester, C20:3-11,14,17-eicosatrienoic methyl ester, C20:4-arachidonic methyl ester, C20:5-eicosapentaenoic methyl ester, C22:0-docosanoic methyl ester, C22:1-9-docosaenoic methyl ester, C22:2-docosadienoic methyl ester, C22:6-docosahexaenoic methyl ester, C23:0-tricosanoic methyl ester, C24:0-lignoceric methyl ester, C24:1-nervonic methyl ester

5) 지방 추출

지방 추출에 앞서 검체를 균질화한다. 내부표준물질로 사용하는 undecanoic acid에 대한 간섭을 확인하기 위하여 내부표준물질 없이 시험용액을 조제하여 분석하고 해당 피크가 발견되면 내부표준물질 피크면적을 계산 시 보정한다. 이를 위해 내부표준용액 대신 클로로포름 2 mL을 사용한다.

가) 우유 등 유제품 및 치즈를 제외한 식품

균질화된 검체를 약 100～200 mg의 지방을 포함하는 양으로 정확히 칭량하여 마조니어관에 넣고 약 100 mg의 피로갈롤을 첨가한 후, 2 mL의 내부표준용액을 첨가한다. 마조니어관에 끓임쪽을 넣고 2 mL 에탄올을 첨가하여 전체 검체가 잘 섞일 때까지 혼합한다. 8.3 M 염산용액 10 mL을 넣고 잘 섞는다. 마조니어관의 마개를 고무줄 혹은 테프론테이프 등으로 밀봉한 후, 70～80℃의 수조에서 적당한 속도로 교반하면서 40분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합될 수 있도록 매 10분마다 교반기로 혼합한다. 분해 후, 실온으로 냉각하고 에테르 추출 시 분액이 용이하도록 마조니어관의 아래 부분을 에탄올을 첨가하여 채운 후 부드럽게 섞어준다.

나) 우유 등 유제품

균질화된 검체를 약 100～200 mg의 지방을 포함하는 양으로 정확히 칭량하여 마조니어관에 넣고 약 100 mg의 피로갈롤을 첨가한 후, 2 mL의 내부표준용액을 첨가한다. 마조니어관에 끓임쪽을 넣고 2 mL 에탄올을 첨가하여 전체 검체가 잘 섞일 때까지 혼합한다. 4 mL의 물을 첨가하여 잘 섞은 후 2 mL의 수산화암모늄을 첨가하여 교반하고 마조니어관의 마개를 고무줄 혹은 테프론테이프 등으로 밀봉한 후, 70～80℃의 수조에서 적당한 속도로 교반하면서 10분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합될 수 있도록 매 5분마다 교반기로 혼합한다. 분해 후 페놀프탈레인 용액을 몇 방울 넣고 염기성(분홍색)이 유지될 수 있도록 수산화암모늄을 첨가한다. 에테르 추출 시 분액이 용이하도록 마조니어관의 아래 부분을 에탄올을 첨가하여 채운 후 부드럽게 섞어준다.

다) 치즈

균질화된 검체를 약 100～200 mg의 지방을 포함하는 양으로 정확히 칭량하여 마조니어관에 넣고 약 100 mg의 피로갈롤을 첨가한다. 그리고 2 mL의 내부표준용액을 첨가한다. 마조니어관에 끓임쪽을 넣고 2 mL 에탄올을 첨가하여 전체 검체가 잘 섞일 때까지 혼합한다. 4 mL의 물을 첨가하여 잘 섞은 후 2 mL의 수산화암모늄을 첨가하여 교반하고 마조니어관의 마개를 고무줄 혹은 테프론테이프 등으로 밀봉한 후, 70～80℃의 수조에서 적당한 속도로 교반하면서 20분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합될 수 있도록 매 5분마다 교반기로 혼합한다. 12 M 염산용액 10 mL을 추가하여 첨가하고 20분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합될 수 있도록 매 10분마다 교반기로 혼합한다. 에테르 추출 시 분액이 용이하도록 마조니어관의 아래 부분을 에탄올을 첨가하여 채운 후 부드럽게 섞어준다.

라) 에테르 추출

가), 나), 및 다)에서 준비된 마조니어관의 분해물에 25 mL 디에틸에테르를 첨가하고 마개를 한 후 5분간 진탕하여 추출한다. 에테르 혼합 추출용매로 마개를 씻고 25 mL의 무수 석유에테르를 추가하여 5분간 다시 진탕 추출하고 600 rpm에서 5분간 원심분리한다. 원심분리가 어려울 경우, 상층이 깨끗해질 때까지 적어도 1시간 이상 방치하여 분리한다. 에테르 혼합 추출용매로 마개를 씻고 150 mL 비이커에 에테르 층을 분액한 후 증발시키기 위해 질소를 사용하여 35～40℃ 수조에서 에테르를 천천히 증발시킨다.

6) 시험용액의 조제

2～3 mL 클로로포름과 2～3 mL 디에틸에테르로 추출한 지방을 녹여 15 mL 시험관으로 옮긴 후, 40℃ 수조에서 질소 농축하고 2.0 mL 7% 트리플루오로보란메탄올 용액과 1.0 mL의 톨루엔을 첨가한다. 테프론/실리콘 재질의 마개로 잘 밀봉하여 100℃ 오븐에서 45분간 가열한 후 실온으로 냉각한다. 5.0 mL 증류수, 1.0 mL 헥산 및 약 1.0 g 무수 황산나트륨를 첨가한 후 진탕하여 정치하고 분리된 상층액을 취하여 약 1.0 g의 무수 황산나트륨을 담은 다른 바이알에 넣고 탈수한 후 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

1.1.5.4. 가. 제1법 6) 시험조작에 따라 시험한다.

8) 정성시험

1.1.5.4. 가. 제1법 7) 정성시험에 따라 시험한다.

9) 정량시험

1.1.5.4. 가. 제1법 8) 정량시험에 따라 시험한다.

제 10, 1, 1.1, 1.1.5, 1.1.5.5. 트랜스지방을 삭제한다.

제 10, 1.1.5.6 콜레스테롤을 다음과 같이 한다.

1.1.5.5 콜레스테롤

1) 시험법 적용범위

지질을 함유한 식품 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 지질을 고온에서 수산화칼륨 에탄올 용액으로 비누화한다. 콜레스테롤을 톨루엔으로 추출하고 트리메틸실릴(TMS) 에테르화하여 유도체화한 후, 이를 기체크로마토그래피로 정량한다.

3) 장치 및 기구

가) 장치

기체크로마토그래프/불꽃이온화검출기(GC-FID)

나) 기구

(1) 원심분리관 : 15 mL, Pyrex No. 13.

※ 유도체화를 위해서 원심분리관을 실란화하여 사용한다. 이를 위해 원심분리관에 10% 불산을 채운 후 10분간 정치하고 증류수로 완전히 씻어준 후, 무수 에탄올로 다시 세척한 다음 질소 하에서 시험관을 건조한다. 10% 헥사메틸디실란(HMDS) 톨루엔 용액으로 원심분리관을 채워 1시간 정치한다. 이를 톨루엔으로 완전히 씻어준 후, 무수 에탄올로 다시 세척하고 사용 전에 100℃ 오븐에 건조하여 사용한다. 강 알칼리로 시험관을 세척한 것이 아니라면 실란화를 다시 하지 않고 시험관을 다시 사용할 수 있으나 적어도 6개월에 한번은 실란화하여 사용한다.

(2) 감압 농축기

(3) 자석교반-가열기

(4) 마이크로피펫 : 100, 200 uL

(5) 교반기(Vortex mixer)

(6) 분석저울 : 0.0001 g까지 측정이 가능한 것

(7) 초자기구 : 삼각플라스크(125 mL, 250 mL), 용량 플라스크, 피펫, 매스실린더, 분획여두(500 mL)

4) 시약 및 시액

가) 디메틸포름아미드(Dimethyl formamide) : 기체크로마토그래피용

나) 헥사메틸디실란(Hexamethyldisilane)

다) 5α-콜레스탄 내부표준용액 : 0.1 mg/mL, 5α-콜레스탄 10 mg을 n-헵탄에 녹여 100 mL로 한다.

라) 콜레스테롤 표준원액 : 2.0 mg/mL, 콜레스테롤 20 mg을 디메틸포름아미드에 녹여 10 mL로 한다.

마) 콜레스테롤 표준용액 : 콜레스테롤 표준원액을 디메틸포름아미드로 희석하여 0.0025～0.2 mg/mL 범위에서 6개 농도를 조제한다(0.0025, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.2 mg/mL로 조제한다.)

바) 수산화칼륨 용액 :

(1) 50%(w/w), 500 g 수산화칼륨을 500 g 증류수에 녹여 조제한다.

(2) 1M, 56 g 수산화칼륨을 증류수를 가하여 1 L로 조제한다.

(3) 0.5M, 1M 수산화칼륨 용액을 증류수로 희석하여 조제한다.

사) 트리메틸클로로실란(Trimethyl chlorosilane) : Pierce Chemical사 No. 88531 또는 이와 동등한 것

아) 톨루엔 : 잔류농약급 또는 이와 동등한 것

자) 무수황산나트륨

차) 유리솜

5) 시험용액의 조제

가) 비누화 과정

검체 약 2g을 정밀히 칭량하여 삼각플라스크에 취한다. 이때 검체의 지방량은 1 g이하가 되도록 검체량을 조절한다.(예, 저지방마가린을 제외한 식용유지류는 1 g, 마요네즈는 1.5 g을 취한다).  자석막대를 삼각플라스크에 넣고 95% 에탄올 40 mL과 8 mL 50% 수산화칼륨용액을 가한다(95% 에탄올 40 mL 중 일정량을 50% 수산화칼륨용액 첨가 후 잔류물 세척에 사용하여 플라스크와 콘덴서가 같이 붙어서 떨어지지 않는 것을 방지할 수 있다). 콘덴서를 설치하고 자석교반-가열기를 이용하여 교반하면서 가열하여 70±10분간 환류시킨다. 비누화를 위해 시료를 지속적으로 관찰하면서 덩어리가 생길 경우 유리봉으로 분산시키거나 교반하면서 50% 수산화칼륨용액을 추가하여 시험용액을 교반한다. 환류가 완료되면 가열기를 끄고 교반 중에 콘덴서의 상부를 통해 95% 에탄올 60 mL을 조심하여 첨가한다. 약 15분 후, 콘덴서를 플라스크에서 제거하고 플라스크에 마개를 막아 실온으로 냉각시킨 후, 24시간 동안 시험용액을 안정화한다.

나) 추출

비누화가 끝난 시험용액을 교반하면서 톨루엔 100 mL을 첨가하고 마개를 하여 30초 이상 교반한다. 이를 세척과정 없이 500 mL 분액여두로 옮긴다. 110 mL 1M 수산화칼륨용액을 분액여두에 넣고 10초간 강렬하게 진탕하여 정치하고 분리된 아래층을 버린다. 40 mL 0.5 M 수산화칼륨용액을 분액여두에 넣고 분액여두를 뒤집은 후 천천히 내용물이 소용돌이가 생기도록 10초간 섞어준 후 정치하여 분리된 아래층을 버린다.

톨루엔 층을 40 mL 증류수로 천천히 분액여두를 돌려주며 수세한다. 정치하여 분리된 아래층을 버리고 수세과정을 3회 이상 반복한다. 이 때 수세과정이 반복될수록 더욱 강렬하게 진탕한다. 만약 에멀젼이 발생하면 소량의 95% 알코올을 첨가하여 분액여두의 내용물이 회오리가 생기도록 섞어준 후 정치하여 층을 분리한다. 톨루엔 층이 맑게 보일 때까지 수세과정을 계속한다.

유리솜과 약 20 g의 무수황산나트륨이 채워진 유리깔대기를 통해 수세한 톨루엔을 약 2 g 무수황산나트륨이 채워진 삼각플라스크로 흘려주어 탈수한다. 삼각플라스크에 마개를 막고 교반하여 혼합한 후 15분 이상 정치한다. 이 때 마개의 막음상태가 완벽하더라도 24 시간 이상 방치하여서는 안된다. 추출한 톨루엔 층 25 mL을 바닥이 평평한 125 mL 둥근 플라스크에 취하고 이를 40±3℃에서 감압 농축하여 건고하고 잔류물에 아세톤 약 3 mL을 가한 후 다시 감압 농축하여 완전 건고한다. 잔류물을 3 mL 디메틸포름아미드에 녹여 시험용액으로 한다. 시험용액의 농도는 콜레스테롤 표준용액의 농도범위 안에 있어야 한다.(만약 검체의 콜레스테롤 함량이 적거나 없는 경우, 남아있는 75 mL 톨루엔 추출액을 감압농축하여 건고하고 2 mL 디메틸포름아미드에 다시 녹여 시험용액을 다시 조제한다. 이때 정량한계는  1 mg/100g이다.)

다) 유도체화

6개 농도의 콜레스테롤 표준용액 및 상기의 시험용액 1.0 mL을 15 mL 원심분리관에 각각 취하고 각 원심분리관에 0.2 mL 헥사메틸디실란를 가한 후, 0.1 mL 트리메틸클로로실란를 가하여 마개를 닫고 이를 강렬하게  30초간 교반하거나 손으로 흔들어 혼합하고 15분간 정치한다. 각각의 원심분리관에 1.0 mL 5α-콜레스탄 내부표준용액과 증류수 10 mL을 넣은 후 마개를 닫고 30초간 강렬하게 교반하고 이를 3000 rpm에서 2분간 원심분리한다. 상층의 헵탄 층을 취하여 기체크로마토그래피 측정용 시험용액으로한다. 이때 유도체화된 표준용액과 시험용액은 24시간 내에 분석한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(25m×0.32mm×0.17um) 또는 이와 동등 제품(5%-phenyl-methyl polysiloxane)

(2) 검출기 : FID(불꽃이온화 검출기)

(3) 주입부의 온도 ： 250℃, split

(4) 검출기의 온도 : 300℃

(5) 오븐온도 : 190℃에서 2분간 유지하고 20℃/min의 비율로    230℃까지 상승시켜 3분간 유지하고 40℃/min로 255℃까지 상승시켜 25분간 유지한다.

(6) 캐리어 가스 : 헬륨

(7) 유속 : 2.0 mL/min

나) 검량선의 작성

유도체화한 6개의 콜레스테롤 표준용액을 1 uL 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 콜레스테롤 피크면적을 5α-콜레스탄 피크면적으로 나눈 값(Y축)과 콜레스테롤 농도(mg/mL, X축)로 검량선을 작성한다. 이 때 시험용액의 농도에 따라 0.01～0.2 mg/mL 범위의 고농도 콜레스테롤 표준용액 4개를 이용하여 검량선을 작성하거나 0.0025～0.05 mg/mL 범위의 저농도 콜레스테롤 표준용액 4개를 이용하여 검량선을 작성할 수 있다.

다) 표준품의 크로마토그램

분석에 사용한 칼럼에 특성에 따라 5α-콜레스탄과 콜레스테롤이 각각 11～13분 및 16～18분에 용출되도록 유속 및 오븐온도를 조정한다.

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크면적법에 따라 정량한다.

검체 중 콜레스테롤(mg/100g)

=	C	×	V3×100
			W×[V2/V1]

C : 검량선에서 구한 시험용액의 농도(mg/mL)

W : 검체량(g)

V1 : 추출에 사용한 톨루엔의 량(100 mL)

V2 : 농축에 사용된 톨루엔 추출액의 량(25 mL)

V3 : 유도체화 전 잔사를 녹이는 데 사용한 DMF의 량(3 mL)

제 10, 4.1.3.29를 다음과 같이 신설한다.

4.1.3.29 아트라진(Atrazine), 부피리메이트(Bupirimate), 클로로벤주론 (Chlorobenzuron) 및 클로로톨루론(Chlorotoluron)

1) 시험법 적용범위

곡류, 콩류, 채소류, 과실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 분석대상 농약은 후로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 액체크로마토그래프 분석대상 농약은 아미노-프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 : 질소․인 검출기(NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프․질량분석기 (GC/MS)를 사용한다.

다) 액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기(Ultraviolet Detector)를 사용한다.

라) 액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실(Florisil) 및 아미노-프로필(Amino-propyl) 카트리지：후로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

라) 표준원액 : 각 농약의 표준품을 유기용매(기체크로마토그래프 분석 용은 아세톤, 액체크로마토그래프 분석용은 아세토니트릴에 녹인다)에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

마) 표준용액 : 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 아세토니트릴 추출법

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 분쇄한 50 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(단, 곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 정치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL의 분리병에 담고 마개를 막은 후 1분간 세게 흔들어 섞는다. 이를 약 1시간 정치하여 아세토니트릴층과 물층을 분리시킨다. 상등액(아세토니트릴층) 20 mL를 취하고 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인다.

(2) 아세톤 추출법

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 분쇄한 50 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(단, 곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 정치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인다.

※ 추출은 상기 (1) 또는 (2) 중 선택하여 사용함.

주. 곡류, 콩류 등 지방성 검체의 경우 ★까지 시험하고 잔류물에 미리 아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올) 층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔사를 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 분석 대상 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 분석 대상 농약)에 완전히 녹인다.

나) 정제

(1) 기체크로마토그래프 분석 대상농약

미리 후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3 방울 정도의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 가) 추출 항의 20% 아세톤 함유 헥산에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하의 항온수조 중에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

주. 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

(2) 액체크로마토그래프 측정 대상농약

미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 초당 2～3 방울 정도의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 가) 추출 항의 1% 메탄올 함유 디클로로메탄에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2 방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL로 용출하여 동일 시험관에 합친다. 용출액은 40℃ 이하의 항온수조 중에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프(NPD)의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5 (30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm)

(2) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1.0 mL/min

(3) 오븐온도 : 80℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시킨 후 5℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(4) 주입부 : Splitless mode, 260℃

(5) 검출기온도 : 300℃

(6) 주입량 : 1 μL

나) 액체크로마토그래프(UVD)의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (20/80, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액 (80/20, v/v)으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(5) 검체주입량 : 10 μL

(6) 검출기파장 : UV 254 nm

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

아트라진 (19.2분) 1 ng.

그림 2. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

부피리메이트 (27.9분) 1 ng.

그림 3. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

클로로벤주론 (28.2분)  10 ng.

그림 4. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

클로로톨루론 (17.1분) 20 ng.

마) 정량한계

아트라진 : 0.05 mg/kg

부피리메이트 : 0.05 mg/kg

클로로벤주론 : 0.03 mg/kg

클로로톨루론 : 0.05 mg/kg

7) 정량시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

8) 확인시험

기체 또는 액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

가) 기체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS 캐필러리 칼럼 (30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm) 또는 이와 동등한것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 1.0 mL/min

(3) 칼럼온도 : 80℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시킨 후 5℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(4) 주입부 : Splitless mode, 260℃

(5) Interface 온도 : 280℃

(6) 분자량 범위 : 100 ～ 400

(7) 주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 Fragment ions

화합물	머무름 시간 (분)	분자량	Fragment monitored (m/z)
아트라진	19.3	215	173, 200, 215
부피리메이트	24.8	316	273, 208

나) 액체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (100 mm × 2.0 mm, 3 μm)

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 :

(가) 클로로벤주론 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v), Isocratic

(나) 클로로톨루론 : 아세토니트릴/물 혼합액 (30/70, v/v), Isocratic

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 검체주입량 : 5 μL

(6) 이온화 :

(가) 클로로벤주론 : ESI negative-ion mode

(나) 클로로톨루론 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100 ～ 500

(8) Capillary temperature : 350℃

(9) Cone voltage :

(가) 클로로벤주론 : -94 V

(나) 클로로톨루론 : 98 V

표 2. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

화합물	머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
클로로벤주론	8.9	308	307
클로로톨루론	9.9	212	213

제 10, 4.1.4.141 부터 제10, 4.1.4.147 까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.141 이소카보포스 (Isocarbofos)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과실 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

시료를 아세톤으로 추출한 후 흡인여과 한다. 여과액을 분액깔대기에 옮겨 포화식염수와 증류수를 가하고 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압농축한 후 헥산/아세토니트릴 분배를 거쳐 비극성 불순물을 제거하고 후로리실 칼럼크로마토그래피(용출용매 : 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액 (4/96, v/v)으로 추가 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

기체크로마토그래프/불꽃광도검출기(FPD)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실 (Florisil) : 잔류농약분석용 (60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 표준원액 : 이소카보포스를 아세톤에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.

마) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g을 달아 습윤화하고 과실류 또는 채소류는 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 그 20 g을 단다)를 균질기 용기에 달아 넣고 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 여액은 분액깔대기에 옮겨 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한 후 다시 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 가하고 분배과정을 되풀이 하여 추출된 용액을 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 날려버리고 아세톤/헥산 혼합액 (6/94, v/v) 4 mL로 녹인다.

주. 곡류 등의 지방성 시료의 경우 위의 용매를 날려버린 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴 층을 합친 후 40℃에서 감압농축하고 잔사를 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

나) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 후로리실 10 g, 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL 를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 디클로로메탄 에 녹인 용액 10 mL(또는 아세톤/헥산혼합액(4 mL)에 녹인용액)을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액 (4/96, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 건고물을 아세톤 4 mL를 가하여 잘 녹인 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 가스크로마토그래프의 측정조건

(1) 컬럼 : DB-5 (30 m × 0.53 mm, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨 15.0 mL/min

(3) 칼럼온도 : 180℃

(4) 주입구온도 : 250℃

(5) 검출기온도 : 250℃

(6) 시료주입량 : 2 μL(직접주입법)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

이소카보포스 (5.6분) 2 ng.

라) 정량한계

0.02 mg/kg

마) 기체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5MS (30 m × 0.25 mm, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 1.0 mL/min

(3) 칼럼온도 : 200℃

(4) 주입구온도 : 250℃

(5) 주입부 : Split mode 5:1

(6) Interface 온도 : 280℃

(7) 분자량 범위 : 100～400

(6) 시료주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
6.0	289	121, 136, 230, 289

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

7) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.142 포메사펜(Fomesafen)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과실 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

시료를 아세톤으로 추출한 후 흡인여과한다. 여과액을 분액깔대기에 옮겨 포화식염수와 증류수를 가하고 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압농축하고 후로리실 칼럼크로마토그래피(용출용매 : 디클로로메탄/메탄올 혼합액 (15/85, v/v)으로 정제하여 액체크로마토그프로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(UV Detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실 (Florisil) : 잔류농약분석용 (60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 표준원액 : 포메사펜을 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

마) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 25 g을 단다)를 균질기 용기에 달아 물 20 mL를 넣고 습윤화 한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 여액은 분액깔대기에 옮겨 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을 취하여 위의 디클로로메탄과 합한다. 디클로로메탄액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이한다. 합친 아세토나이트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v) 10 mL로 녹인다.

나) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 후로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v)에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 건고물에 아세토니트릴 5 mL를 가하여 잘 녹이고 인산으로 pH를 3.2로 조절한 증류수 5 mL를 가하여 혼합한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 ㎛)및 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물(인산용액으로 pH를 3.2로 조절) 혼합액 (55/45, v/v)

(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(5) 시료주입량 : 20 μL

(6) 검출기파장 : 290 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

포메사펜 (8.5분) 20 ng.

라) 정량한계

0.04 mg/kg

마) 액체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (100 mm × 2.0 mm, 3 ㎛)

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물(인산용액으로 pH를 3.2로 조절) 혼합액 (55/45, v/v)

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 시료주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100 ～ 500

(8) Capillary temperature : 330℃

(9) Cone voltage : 80 V

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
6.0	439	440

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.143 디펜조쿼트(Difenzoquat)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디펜조쿼트를 2 N 염산 용액과 아세토니트릴로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄/아세톤 혼합액(50/50, v/v)으로 액-액 추출하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD, High Performance Liquid Chromatograph-Ultraviolet Detector)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(HPLC-MS, High Performance Liquid Chromatograph-Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 디펜조쿼트 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 2% 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) 용액 : 인산수소이나트륨 2 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

바) 0.01 M 1-헥산술폰산나트륨염수화물(1-hexanesulfonic acid, sodium salt hydrate) 용액 : 1-헥산술폰산나트륨염수화물 1.88 g을 물 990 mL에 녹여 0.1 M 인산을 첨가하여 pH 3으로 맞춘 다음 물을 첨가하여 1,000 mL가 되게 한다.

사) 0.005 M 암모늄아세테이트(ammonium acetate) 용액 : 암모늄아세테이트 0.39 g을 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 2 N 염산 용액 40 mL를 넣은 후 아세토니트릴 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한다. 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세토니트릴 40 mL로 씻어 상기 여액과 합하여 약 40 mL가 남을 정도까지 감압농축한 후 2% 인산수소이나트륨 용액 40 mL을 넣고 1 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 pH 6으로 맞춘다. 이를 분액깔때기에 옮겨 헥산 50 mL을 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치하여 물층을 별도의 분액깔때기로 옮기고, 분액깔때기에 다시 헥산 50 mL을 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치한다. 별도의 분액깔때기에 상기 물층과 디클로로메탄/아세톤 혼합액(50/50, v/v) 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 30분간 정치한다. 디클로로메탄/아세톤 혼합액층(50/50, v/v)을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한 후 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄/아세톤 혼합액(50/50, v/v) 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 30분간 정치한 후 디클로로메탄/아세톤(50/50, v/v) 혼합액층을 탈수하여 앞의 감압농축플라스크에 합한다. 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하고 잔류물을 아세토니트릴 3 mL을 가하여 녹인 다음 0.01 M 1-헥산술폰산나트륨염수화물 용액 7 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm ×  4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.01 M 1-헥산술폰산나트륨염수화물 혼합액/아세토니트릴(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 256 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

디펜조쿼트

↓

0

4

8

12

16

20

머무름 시간(분)

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

디펜조쿼트(10.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 디펜조쿼트를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(100 mm ×  2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.005 M 암모늄아세테이트/아세토니트릴(80/20, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.5 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 캐필러리 온도 : 350℃

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 콘 볼테이지 : 142 V

(8) 주입량 : 5 μL

(9) 분자량 범위 : 100∼300 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
9.8	249	249

4.1.4.144 아시플루오르펜(Acifluorfen)

1) 시험법 적용범위

두류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아시플루오르펜을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출하여 14% 삼불화붕소 메탄올 용액으로 메틸화한 후 후로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD, Gas Chromatograph -Electron Capture Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 아시플루오르펜 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤으로 희석하여 10 μg/mL가 되게 한 후 이 용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 mL를 마개 달린 시험관에 취하여 질소로 농축한다. 이 잔사를 □5) 시험용액의 조제 나) 메틸화□과정에 따라 실험하여 최종농도가 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 0.2 M 염화암모늄(ammonium chloride) 용액 : 염화암모늄 1.07 g을 물 90 mL에 녹인 후 인산을 첨가하여 pH 2로 맞춘 다음 물을 첨가하여 100 mL가 되게 한다.

바) 2% 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) 용액 : 인산수소이나트륨 2 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

사) 메틸화 용액 : 14% 삼불화붕소(boron trifluoride) 메탄올 용액을 사용한다.

아) 5% 황산나트륨(sodium sulfate) 용액 : 황산나트륨 5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

자) 후로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 후로리실(60∼100 mesh) 5 g을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 0.2 M 염화암모늄 용액 20 mL를 넣은 후 10분간 정치한다. 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화한다. 이를 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 상기 여액과 합한다. 이 액을 500 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 2% 인산수소이나트륨 용액 40 mL와 헥산 50 mL를 가하여 녹인 후 분액깔때기로 옮긴다. 분액깔때기를 흔들어 섞은 후 30분간 정치한 다음 물층을 취하여 2 N 염산 용액을 첨가하여 pH 2로 맞춘다. 물층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 심하게 흔들어 30분간 정치하여 디클로로메탄층을 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치하여 디클로로메탄층을 상기 감압농축플라스크에 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 약 2 mL가 남도록 감압농축한다. 잔류물을 마개 달린 시험관에 옮긴 후 아세톤 10 mL로 농축플라스크를 세척하여 합한 다음 40℃ 이하의 수욕상에서 완전히 질소로 농축한다.

나) 메틸화

위의 마개 달린 시험관에 메탄올 1 mL를 넣어 잔류물을 녹인 후 14% 삼불화붕소 메탄올 용액 1 mL를 첨가한 다음 마개를 닫고 80℃의 수욕상에서 20분간 반응시킨다. 여기에 5% 황산나트륨 용액 10 mL를 첨가하여 반응을 끝내고 분액깔때기로 옮긴 후 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v) 10 mL를 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치하여 상층인 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v)층을 취한다.

다) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 후로리실 5 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충전한 후 헥산 25 mL를 넣고 무수황산나트륨 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 상기 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v) 10 mL를 넣고 유출시킨다. 무수황산나트륨 상단이 노출되기 직전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 50 mL로 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v) 10 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m ×  0.25 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 210℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : split mode(10:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램:

아시플루오르펜 메틸 에스터(12.6분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 아시플루오르펜을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 :	DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 150℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고  15℃/min의 비율로 210℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 1 μL

(10) 분자량 범위 : 100∼400 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
13.9	375	375, 223, 344

(주. 분자량은 아시플루오르펜이 메틸화 된 아시플루오르펜 메틸 에스터의 분자량임)

4.1.4.145 티오설탑(Thiosultap)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 티오설탑을 2% 시스테인 용액, 3% 염화니켈 용액 및 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신으로 전환시켜 헥산 및 에틸아세테이트로 액-액 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD, Gas Chromatograph -Flame Photometric Detector, 황용 간섭필터, 파장 394 nm)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 옥살산수소 네레이스톡신(nereistoxin hydrogen oxalate) 표준품을 메탄올에 녹여 네레이스톡신(nereistoxin)으로서 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL가 되게 한 후 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 단, 환산계수 2.1[티오설탑의 분자량(309)/네레이스톡신 분자량(149)]을 곱하여 티오설탑(thiosultap)으로 환산한다.

마) 2% 시스테인(cysteine) 용액 : 무수염산시스테인  (L-cysteine-HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산 용액 950 mL에 녹인 후 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 pH 4로 맞춘 다음 0.02 N 염산용액을 첨가하여 1,000 mL가 되게 한다.

바) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액 : 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 넣고 2% 시스테인 용액 150 mL를 넣은 후 30분간 진탕 추출한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액 120 mL를 별도의 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 취한다. 여기에 3% 염화니켈 용액과 진한 암모니아수를 각각 4 mL씩 첨가한 다음 5분간 진탕한 후 70℃ 수욕상에서 1시간 동안 진탕 반응시킨다. 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 다음 10 N 황산 용액을 첨가하면서 pH 5로 맞춘 후 헥산 50 mL를 가하여 진탕한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 버린 다음 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하면서 pH 9로 맞춘다. 여기에 염화나트륨 12 g과 에틸아세테이트 100 mL를 가한 후 진탕하고, 다시 7600 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 다음 상등액(에틸아세테이트 층) 80 mL를 감압농축플라스크에 취하여 40℃ 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 메탄올 2 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m ×  0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 100℃

(5) 검출기 온도 : 250℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

머무름 시간(분)

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

네레이스톡신(4.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 네레이스톡신을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 2 μL

(10) 분자량 범위 : 50∼200 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
8.9	149	149, 70, 103

(주. 분자량은 티오설탑이 전환 된 네레이스톡신의 분자량임)

4.1.4.146 이소펜포스-메틸(Isofenphos-methyl)

1) 시험법 적용범위

곡류, 두류, 채소류 및 과실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이소펜포스-메틸을 아세토니트릴로 추출한 후 후로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소 ․ 인 검출기(GC-NPD, Gas Chromatograph -Nitrogen Phosphorous Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 이소펜포스-메틸 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)으로 희석하여 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 1.0, 2.0 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 후로리실(Florisil) 카트리지 : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(500 mg, 6 cc)를 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 정치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화한 다음 이를 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 상기 여액과 합한다. 여액을 염화나트륨 15 g이 들어있는 분액깔때기에 옮긴 후 분액깔때기를 심하게 흔들어 1시간 정치한 다음 아세토니트릴층을 감압농축플라스크에 취하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 4 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 카트리지에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL를 넣고 유출시킨다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 4 mL를 컬럼에 가하여 15 mL 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL를 용출시켜 상기 시험관에 합한다. 이 용출액을 40℃ 이하 수욕상에서 일정량이 남도록 감압농축한 후 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)을 가하여 최종 부피가 5 mL가 되도록 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 270℃까지 승온하여 15분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

머무름 시간(분)

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

이소펜포스-메틸(20.0분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 이소펜포스-메틸을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 270℃까지 승온하여 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 1 μL

(10) 분자량 범위 : 100∼350 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
16.8	331	199, 121, 241

4.1.4.147 클로로피크린(Chloropicrin)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로로피크린을 에틸아세테이트로 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD, Gas Chromatograph -Electron Capture Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 표준원액 : 클로로피크린 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

다) 표준용액 : 표준원액을 에틸아세테이트로 희석하여 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.5 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 5 g을 정밀히 달아 무수황산나트륨 2 g이 들어있는 20 mL 헤드스페이스 바이알에 넣는다. 에틸아세테이트 10 mL를 첨가한 후 헤드스페이스 바이알용 마개로 밀봉한다. 바이알을 10분간 심하게 흔들어 5분간 정치한 다음 주사기로 상층액 약 3 mL를 취한다. 이 추출액을 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 200℃

(4) 오븐 온도 : 40℃에서 시험용액을 주입한 후 10분간 유지하고 20℃/min의 비율로 200℃까지 승온하여 2분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : split mode(10:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.5 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

클로로피크린

↓

머무름 시간(분)

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

클로로피크린(7.4분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 클로로피크린을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 200℃

(4) 오븐 온도 : 40℃에서 시험용액을 주입한 후 10분간 유지하고 20℃/min의 비율로 200℃까지 승온하여 2분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 1 μL

(10) 분자량 범위 : 50∼200 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
4.5	164	117, 121, 82

제10, 7.4, 4), 다) 중 “클로로프레타다라필(Chloropretadalafil)”을 “클로로프레타다라필(Chloropretadalafil), 하이드록시클로로데나필(Hydroxychlorodenafil), 디클로로데나필(Dichlorodenafil)”로 한다.

제10, 7.4, 4), 마)를 바)로 하고 마)를 다음과 같이 한다.

마) sodium-1-hexane sulfonate : ion pair 크로마토그래피용

제10, 7.4, 6), 다)를 다음과 같이 한다.

다) 표준품의 크로마토그램

제10, 7.4, 6), 라)의 “0.5 mg/kg”을 “5 mg/kg”으로 한다.

제10, 7.4, 10) 중 및 을 다음과 같이 신설한다.

하이드록시클로로데나필 (Hydroxychlorodenafil)(C19H23ClN4O3, 390)

디클로로데나필(Dichlorodenafil) (C19H21Cl2N4O2, 406)

제10, 7.5, 4), 다) 중 “데스메틸시부트라민, 시부트라민”을 “데스메틸시부트라민(Desmethylsibutramine), 디데스메틸시부트라민(Didesmethylsibutramine), 시부트라민(sibutramine)”로 한다.

제 7, 7.5, 6), 다)를 다음과 같이 한다.

다) 표준품의 크로마토그램

제10, 7.5, 10) 중 “데스메틸시부트라민”을 “비만치료제 유사물질”로 하고, 을 다음과 같이 신설한다.

② 디데스메틸시부트라민 (Didesmethylsibutramine)(C15H22ClN, 251)

부  칙

제1조(시행일) 이 고시는 2012년 1월 9일부터 시행한다.

제2조(다른 고시의 폐지) 이 고시 시행과 함께 식품의약품안전청장이 고시한 「식품등 중 기준규격미설정 물질의 시험방법」은 폐지한다.

제3조(농산물, 축산물 및 가공식품의 중금속, 곰팡이독소에 관한 경과조치) 제 2. 5. 5). (3), 제 2. 5. 5). (5), 제 2. 5. 5). (7), 제 2. 5. 8), (6), 제 2. 5. 8), (7), 제 5. 1. 5). (12), 제 5. 4. 5). (3)의 개정 규정은 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 제조(출하 포함)·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품 및 유통 중인 가공식품을 포함한다)에 대하여 해당 식품의 유통기한까지 종전의 규정에 따른다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개  정 안

제 1. 총칙

1. (생  략)

2. 용어의 풀이

1) ～ 36) (생  략)

<신  설>

제 2. (생  략)

1. ∼ 4. (생  략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 4) (생  략)

5) 중금속 기준

(1) ～ (2) (생  략)

번호	대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
1	감	0.1 이하	-
2	감자	0.1 이하	0.1 이하
3	고구마	0.1 이하	0.1 이하
4	고추	0.2 이하	0.1 이하
5	당근	0.1 이하	0.1 이하
6	대두	0.2 이하	0.1 이하
7	마늘	0.1 이하	0.1 이하
8	망고	0.1 이하	-
9	무	0.1 이하	0.1 이하
10	밀	0.2 이하	0.2 이하
11	바나나	0.1 이하	-
12	배추	0.3 이하	0.2 이하
13	부추	0.1 이하	0.05 이하
14	시금치	0.3 이하	0.2 이하
15	쌀(현미 제외)	0.2 이하	0.2 이하
16	양파	0.1 이하	0.05 이하
17	오렌지	0.1 이하	-
18	오이	0.1 이하	0.05 이하
19	옥수수	0.2 이하	0.1 이하
20	참깨	0.3 이하	0.2 이하
21	키위	0.1 이하	-
22	파	0.1 이하	0.05 이하
23	팥	0.2 이하	0.1 이하
24	포도	0.2 이하	-

(3) 농산물 중 중금속 기준

(4) (생  략)

(5) 축산물 중 중금속 허용기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
가금류고기	(생 략)	(생 략)
돼지간	(생 략)	(생 략)
돼지고기	(생 략)	(생 략)
돼지신장	(생 략)	(생 략)
소간	(생 략)	(생 략)
소고기	(생 략)	(생 략)
소신장	(생 략)	(생 략)
< 신 설 >

(6) (생  략)

(7) <신  설 >

6) ～ 7) (생  략)

8) 곰팡이독소 기준

(1) ～ (5) (생  략)

(6) 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

대 상 식 품	기준 (mg/kg)
곡류 및 그 단순가공품 (옥수수 및 그 단순가공품 제외)	(생 략)
옥수수 및 그 단순가공품	(생 략)
시리얼류	(생 략)
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	(생 략)
< 신 설 >

(7) 제랄레논(Zearalenone)

대 상 식 품	기준(μg/kg)
곡류 및 그 단순가공품	(생 략)
과자	(생 략)
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	(생 략)
< 신 설 >

9) ～ 11) (생  략)

12) 기타 유해물질 기준

(1) (생  략)

(2) 발기부전치료제 유사물질

～  (생  략)

<신  설>

<신  설>

(3) 비만치료제 유사물질

(생  략)

<신  설>

(4) ～ (6) (생  략)

13) ～ 17) (생  략)

6. 보존 및 유통기준

1) (생  략)

2) 식품의 취급장소는 비․눈 등으로부터 보호될 수 있어야 하며, 인체에 유해한 화공약품, 농약, 독극물 등과 같은 것을 함께 보관하지 말아야 한다.

3) 이물이 혼입되지 않도록 주의하여야 하며 제품의 풍미에 영향을 줄 수 있는 다른 식품 및 식품첨가물 등과는 분리 보관하여야 한다.

4) ～ 7) (생  략)

8) 냉동제품을 해동시켜 실온 또는 냉장제품으로 유통시켜서는 아니되며, 실온 또는 냉장제품을 냉동시켜 냉동제품으로 유통시켜서는 아니된다. 다만, 제조업자가 냉동제품인 빵류 및 젓갈류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

9) (생  략)

10) 해동된 냉동제품을 재냉동하여서는 아니 된다.

11) ～ 18) (생  략)

제 3. 장기보존식품의 기준 및 규격

1. 통․병조림식품

(생  략)

1) 제조․가공기준

(1) (생  략)

(2) pH 4.5 이상의 저산성식품은 제품의 내용물, 가공장소, 제조일자를 확인할 수 있는 기호를 표시하고 멸균공정 작업에 대한 기록을 보관하여야 한다.

(3) 산성식품은 pH가 4.5미만인 것으로 보통 90℃ 이하로 살균처리할 수 있다.

2) 규격

(1) (생  략)

(2) 진공도(cmHg)∶적당한 진공도를 가져야 한다(다만, 원터치캔의 경우는 제외한다).

(3) ～ (4) (생  략)

2. ～3. (생  략)

제 4. (생  략)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (11) (생  략)

<신  설 >

6) 시험방법

(1) ～ (9) (생  략)

<신  설 >

<신  설 >

2. ～ 3. (생  략)

4. 잼류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (2) (생  략)

<신  설 >

6) 시험방법

(1) ～ (2) (생  략)

<신  설 >

5. ～ 13. (생  략)

14. 식용유지류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

콩기름 ～ 쇼트닝 (생  략)

	마가린	저지방마가린(지방스프레드)
(1) 조지방	(생 략)	(생 략)
(2) 산가	(생 략)	(생 략)
(3) 타르색소	(생 략)	(생 략)
(4) 산화방지제(g/kg)	다음에서 정하는 것 이외의 산화방지제가 검출되어서는 아니된다.
	부틸히드록시아니졸 디부틸히드록시톨루엔 터셔리부틸히드로퀴논	(생 략)
	몰식자산 프로필	(생 략)
	E.D.T.A 칼슘이나트륨	0.075 이하 (E.D.T.A이나트륨으로서)
(5) 보존료(g/kg)	(생 략)	(생 략)

15. ～ 17. (생  략)

18-1 ～ 18-5 (생  략)

18-6 기타음료

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 혼합음료

먹는 물에 식품 또는 식품첨가물을 가한 것을 말한다.

(2) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (7) (생  략)

(8) 보존료(g/kg)：다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니된다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산메틸과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하)
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.1 이하(안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 파라옥시안식향산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하)

6) (생  략)

19. 특수용도식품

19-1 영아용 조제식

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (29) (생  략)

< 신  설>

(30) ～ (36) (생  략)

19-2 성장기용 조제식

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (26) (생  략)

< 신  설>

(27) ～ (32) (생  략)

19-3 ～ 19-4 (생  략)

19-5 특수의료용도등식품

1) ～ 2) (생  략)

3) 제조․가공기준

(1) ～ (5) (생  략)

(6) 장질환자용 가수분해 식품은 제품 1000 kcal당 비타민 A, B1, B2, B6, C, D, E, 나이아신, 엽산, 칼슘, 철, 아연을 영양소 기준치의 50% 이상 되도록 원료식품을 조합하고 영양소를 첨가하여야 한다. 또한 단백질 유래 열량이 총 열량의 1000 kcal당 영양소기준치의 30% 이상이 되도록 하고, 단백질은 단백질 가수 분해물 또는 유리아미노산 형태로 공급한다.

(7) ～ (9) (생  략)

4) ～ 6) (생  략)

20. (생  략)

21. 조미식품

21-1.～ 21-4. (생  략)

21-5. 고춧가루 또는 실고추

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (3) (생  략)

(4) 위화물

① ～ ④ (생  략)

⑤ 당류(포도당)

검체 2 g을 환류냉각관이 부착된 환저 플라스크에 넣고 80℃ 수욕상에서 80% 에탄올 100 mL로 2회 반복 환류추출한다. 상층액을 모아 감압 농축시킨 다음 50 mL의 증류수로 정용하고 0.45 ㎛ membrane filter로 여과하여 HPLC로 분석한다. 포도당 표준품 1 g을 정밀하게 달아 물을 넣어 정확하게 100 mL로 하여 표준액으로 한다.

․ HPLC의 조건

— Column : Carbohydrate column

— Column Temp. : 40℃

— 이동상 : Acetonitrile : deionized water = 75 : 25(v/v)

— 유속 : 1.5 mL/min

— 검출기 : 시차굴절계(RI)

(5) ～ (6) (생  략)

22. ～ 23. (생  략)

24. 젓갈류

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) ～ (2) (생  략)

(3) 액젓

젓갈을 여과․분리한 액을 말한다

(4) 조미액젓

액젓을 희석하여 염수나 조미료 등을 첨가한 것을 말한다.

5) ～ 6) (생  략)

25. 절임식품

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (4) (생  략)

(5) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니된다.

소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	(생 략)
	0.5 이하[소르빈산으로서, 당절임(건조당절임 제외), 식초절임(오이초절임 제외)에 한함]
	0.5 이하(오이초절임에 한함, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소르빈산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(오이초절임에 한함. 소르빈산, 소르빈산칼륨 및 소르빈산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소르빈산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하)

26. ～ 28. (생  략)

29. 기타식품류

29-1. ～ 29-11.(생  략)

29-12 식염

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

유형 항목	천일염	재제소금 ～ 가공소금
(1)～(3) (생 략)	(생 략)	(생 략)
(4) 불용분(%)	0.15 이하	(생 략)
(5)～(11) (생 략)	(생 략)	(생 략)

6) (생  략)

29-18. 즉석섭취․편의식품류

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) (생  략)

(2) 즉석조리식품

동․식물성 원료를 식품이나 식품첨가물을 가하여 제조․가공한 것으로서 단순가열 등의 조리과정을 거치거나 이와 동등한 방법을 거쳐 섭취 할 수 있는 국, 탕, 스프 등의 식품을 말한다.

(3) (생  략)

제10. 일반시험법

1. 식품성분시험법

1.1.5.1 ～ 1.1.5.3 (생  략)

1.1.5.4. 지방산

가. 제1법

1) 분석원리

지방질을 메탄올성 수산화나트륨용액으로 처리하여 알칼리염을 만든 후 트리폴루오로보란메탄올을 가하고 가열하여 에스테르화 한다. 생성된 지방산에스테르를 헵탄에 녹여 분석을 행한다.

2) 장치

기체크로마토그래프：불꽃이온화검출기(FID)

3) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 14% 트리폴루오로보란메탄올(125 g BF3/L MeOH)

(2) 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5N)

수산화나트륨 2 g을 메탄올 100 mL에 녹인다. 장시간 방치하는 경우 흰 침전(Na2CO3)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.

(3) 헵탄

(4) 내부표준용액：C11:0 triundecanoin 0.01 g을 헵탄에 녹여 10 mL로 한다.

4) 시험용액의 조제

가) 표준용액의 조제

지방산 표준품 약 100 mg을 100 mL 둥근바닥플라스크에 정밀히 취하고 0.5N 메탄올수산화나트륨용액을 약 4 mL 가한다. 플라스크 위에 환류냉각관을 설치하고 5～10분간 수욕상에서 균질한 용액이 얻어질 때까지 가열한다. 그 후 14% BF3 약 5 mL를 환류냉각관을 통해 가하고 2분동안 계속하여 가열한다. 마지막으로 n□헵탄 5 mL를 냉각기를 통해 가하고 1분간 더 가열한다. 항온수조와 냉각기를 제거하고 수 mL의 염화나트륨 포화용액을 가하여 플라스크를 휘저은 후 염화나트륨 포화용액을 더 가하여 헵탄층이 플라스크의 목부분까지 올라오게 한다. 상층에서 약 1 mL의 헵탄을 취한 후 이에 소량의 무수황산나트륨을 가하여 탈수시킨 것을 표준용액으로 한다.

나) 시험용액의 조제

(1) 지방 및 유지

검체를 둥근바닥플라스크에 정밀히 취하고 0.5N 메탄올성 수산화나트륨용액을 가한다. 플라스크위에 환류냉각관을 설치하고 5～10분간 수욕상에서 균질한 용액이 얻어질 때까지 가열한다. 그 후 14% BF3를 환류냉각관을 통해 가하고 2분동안 계속하여 가열한다. 마지막으로 n□헵탄 2～5 mL를 냉각기를 통해 가하고 1분간 더 가열한다. 항온수조과 냉각기를 제거하고 수 mL의 염화나트륨 포화용액을 가하여 플라스크를 휘저은 후 염화나트륨 포화용액을 더 가하여 헵탄층이 플라스크의 목부분까지 올라오게 한다. 상층에서 약 1 mL의 헵탄을 취한 후 이에 소량의 무수황산나트륨을 가하여 탈수시킨 것을 시험용액으로 한다.

(2) 지방산

검체를 둥근바닥플라스크에 정밀히 취하고 14% BF3를 넣은 후 (1) 지방과 유지의 “2분동안 계속하여 가열한다.” 이후의 과정과 동일하게 조작한 것을 시험용액으로 한다.

주1) 이중결합이 2개 이상인 지방산을 분석하는 경우에는 질소가스를 사용하여 메탄올과 플라스크의 공기를 제거한 후 사용하며, 시험용액은 가능한 한 빨리 분석한다. 장기간 보관할 경우에는 앰플에 넣어 냉동보관하거나 0.005% BHT를 첨가한다.

주2) 검체의 양은 정확히 채취하여야 하며, 검체의 크기에 따라 플라스크의 크기와 시약의 양을 달리하여야 한다.(기체크로마토그래프 분석의 경우 약 350 mg 정도가 적당하다.)

검체(mg)	플라스크(mL)	메탄올수산화나트륨(mL)	BF3시약(mL)
100～250 250～500 500～500 750～1,000	50 50 100 100	4 6 8 10	5 7 9 12

5) 시험조작

가) 기체크로마토그래피 조건

(1) 칼  럼：5% DEGS/크로모솔브 W(AW)

(2) 주입부온도：230℃～ 240℃

(3) 칼럼온도：190℃～ 195℃

(4) 검출기온도：230℃～ 240℃

(5) 캐리어가스 및 유량：질소 40 mL/분

주3) HP-1, Omegawax 등과 같은 모세관 칼럼(capillay column)을 사용할 수도 있다. 이 때 전처리 방법은 위와 동일하며 다만, 검체의 양, 시약의 양, 첨가하는 내부표준물질의 양 및 희석배수를 분석에 맞도록 조절한다. 기기 조건은 나. 제2법의 기기조건을 따른다.

주4) 탄소수가 12이하인 경우에는 칼럼온도가 더 낮아야 하며, 탄소수가 20 이상인 경우에는 주입부, 칼럼, 검출기의 온도가 더 높아야 한다. 다양한 탄소수의 지방산을 한번에 분석할 경우에는 칼럼온도의 승온조작이 필요하다.

6) 정량시험

시험용액 및 지방산표준용액에 대하여 각각 1～5 μL를 주입하여 기체크로마토그래피를 행하고 이의 머무름 시간을 비교하여 정성을 한다. 정성의 경우와 동일한 조건에서 기체스크로마토그래피를 행하여 얻은 각 지방산의 피크면적, 내부표준물질의 피크면적을 얻고 제2법에 따라 정량을 한다.

나. 제2법

1) 분석원리

지방질을 메탄올성 수산화나트륨용액으로 처리하여 알칼리염을 만든 후 트리폴루오로보란메탄올을 가하고 가열하여 에스테르화 한다. 생성된 지방산에스테르를 이소옥탄에  녹여 분석을 행한다.

2) 장치

기체크로마토그래프：불꽃이온화검출기(FID)

3) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 14% 트리플루오로보란메탄올(125 g BF3/L MeOH)

(2) 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5N) : 수산화나트륨 2 g을 메탄올 100 mL에 녹인다. 장시간 방치하는 경우 흰 침전(Na2CO3)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.

(3) 이소옥탄：기체크로마토그래피용

(4)내부표준용액：C11:0 triundecanoin 0.01 g을 이소옥탄용액에 녹여 10 mL가 되게 한다(1000 μg/mL).

(5) 표준용액 : 각 지방산 methyl ester 0.01 g을 이소옥탄에 녹여 1,000 μg/mL로 조제하고 내부표준물질 undecanoic acid methyl ester 0.01 g을 이소옥탄에 녹여 1,000 μg/mL가 되게 한 후 이를 각각 혼합하여 (1:1) 각각이 500 μg/mL로 조제한다.

4) 시험용액의 조제

가) 지방 및 유지

검체 약 25㎎을 유리 튜브에 정밀히 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다. 이어 0.5N 메탄올성 수산화나트륨용액 1.5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합한다. 이어 100˚ heating block에서 약 5분간 가온한다. 이를 냉각한 후 14% 트리플루오르보란메탄올용액 2 mL를 가하고 다시 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합하고 100℃에서 30분간 가온한다. 이어 30～40˚로 냉각하여 이소옥탄용액 1 mL를 가하여 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 이 온도에서 30초간 격렬히 진탕한다. 다음 즉시 포화 염화나트륨용액 5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 진탕한다. 상온으로 냉각한 후 수층으로부터 분리된 이소옥탄층을 무수황산나트륨으로 탈수하여 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 기체크로마토그래피 조건

(1) 칼럼：SP-2560 (100m × 0.25mm × 0.2 μm) 혹은 이와 동등한 것

(2) 주입부온도：225℃

(3) 칼럼온도：100℃에서 4분간 유지한 후 3℃/min의 비율로 240℃까지 온도를 상승시키고 이후 15분이상 유지한다.

(4) 검출기온도：285℃

(5) 유량：헬륨 0.75 mL/min

(6) split ratio : 200 : 1

6) 정성시험

시험용액 및 지방산표준용액을 각각 1～2 μL를 주입하여 RRT(Relative Retention Time; 내부표준물질에 대한 각 지방산들의 머무름 시간의 비)를 사용하여 각각의 지방산을 확인한다.

7) 정량시험

정성시험법에 의해 얻은 각 지방산의 피크면적, 내부표준물질의 피크면적으로부터 다음과 같이 정량을 한다.

계산식：

WFAMEi	=	Pti×WtC11:0×1.0067
		PtC11:0×Ri

WFAMEi : 지방산 I의 methyl ester로서의 양(mg)

Pti : 시험용액 중 지방산 I의 피크면적

WtC11:0  : 시험용액 중 내부표준물질(C11:0 triundecanoin) 첨가량(mg)

1.0067  : 내부표준물질(C11:0 triundecanoin)의 트리글리세라이드로부터 지방산 methyl ester로의 전환계수

PtC11:0 : 시험용액 중 내부표준물질(triundecanoic acid methyl ester)의 피크면적

Ri : 지방산 i의 반응계수(response factor)

Ri	=	Psi	×	WC11:0
		PsC11:0		Wi

Psi : 표준용액 중 지방산 methyl ester i의 피크면적

PsC11:0 : 표준용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 피크면적

WC11:0 : 표준용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 양(mg)

Wi : 표준용액 중 지방산 methyl ester i의 양(mg)

지방산(g/100 g Fat)	=	WFAMEi × fFAi × 100
		Wfat

fFAi :지방산 i(Methyl ester로서)의 지방산 전환계수(표1)

Wfat : 검체량(mg)

표 1 각 지방산 Methyl ester의 지방산 전환계수
지방산명		fFAi
C4:0	Butyric acid	0.8627
C6:0	Caproic acid	0.8923
C8:0	Caprylic acid	0.9114
C10:0	Capric acid	0.9247
C11:0	Undecanoic acid	0.9300
C12:0	Lauric acid	0.9346
C13:0	Tridecanoic acid	0.9386
C14:0	Myristic acid	0.9421
C14:1	Tetradecenenoic	0.9417
C15:0	Pentadecanoic acid	0.9453
C15:1	Pentadecenoic acid	0.9449
C16:0	Palmitic acid	0.9481
C16:1	Hexadecenoic acid	0.9477
C17:0	Margaric acid	0.9507
C17:1	Margaroleic acid	0.9503
C18:0	Stearic acid	0.9530
C18:1	Octadecenoic acid	0.9527
C18:2	Octadecdieoic acid	0.9524
C18:3	Linolenic acid	0.9520
C20:0	Arachidic acid	0.9570
C20:1	Eicosenic acid	0.9568
C20:2	Eicosadienoic acid	0.9565
C20:3	Eicosatrienoic acid	0.9562
C20:4	Arachidonic acid	0.9560
C20:5	Eicosapentaenoic acid	0.9557
C21:0	Heneicosanoic acid	0.9588
C22:0	Behenic acid	0.9604
C22:1	Docosaenoic acid	0.9602
C22:2	Docosadienoic acid	0.9600
C22:3	Docosatrienoic acid	0.9598
C22:4	Docosatetraenoic acid	0.9595
C22:5	Docosapentaenoic acid	0.9593
C22:6	Docosahexaenoic acid	0.9590
C23:0	Tricosanoic acid	0.9620
C24:0	Lignoceric acid	0.9563
C24:1	Nervonic acid	0.9632

1.1.5.5. 트랜스지방

1.1.5.6 콜레스테롤

1) 시험법 적용범위

지질을 함유한 식품 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 클로로포름：메탄올(2：1, v/v) 혼합용액으로 진탕, 혼합 추출하고, 0.5% 수산화나트륨용액으로 세척하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 여과하여 40℃ 이하에서 클로로포름층을 감압 농축한다. 잔류물에 2N 수산화칼륨 에탄올 용액을 가하여 환류냉각기를 붙여 85℃에서 1시간 비누화한 후 냉각하여 에테르로 추출한다. 에테르층을 무수황산나트륨으로 탈수한 후 여과하여 감압 농축하고, 잔류물을 헥산에 녹여 기체크로마토그래피로 측정한다.

3) 장치

기체크로마토그래프/불꽃이온화검출기(GC-FID)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 2N 수산화칼륨 에탄올용액 : 수산화칼륨 13.2 g을 소량의 물로 녹이고 에탄올을 가하여 100 mL로 한다.

라) 콜레스테롤 표준용액 : 콜레스테롤 20 mg을 헥산에 녹여 10 mL로 한다.

마) 5α콜레스탄 내부표준물질용액 : 5α콜레스탄 20 mg을 헥산에 녹여 10 mL로 한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

검체 약 1～10 g(콜레스테롤함량 20～1,000 mg/100g)에 물 약 30 mL와 5α 콜레스탄 1 mL를 가하여 혼합, 균질화한다. 이것을 분액여두에 옮겨 클로로포름 : 메탄올(2:1) 200 mL를 가하여 약 5분간 진탕혼합 추출하여 방치한 후 클로로포름 층을 취하고 검액 잔류물에 다시 클로로포름 : 메탄올(2:1) 100 mL씩 2회 추출을 반복한다. 추출한 클로로포름 층을 합하여 0.5% 수산화나트륨용액 100 mL로 세척하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 여과하여 40℃이하에서 클로로포름 층을 감압 농축한다. 감압 농축한 잔류물에 2N 수산화칼륨 에탄올용액 20 mL를 가하여 환류냉각기를 붙여 85℃에서 1시간 비누화한 후 냉각하여 물 약 20 mL를 분액여두에 옮기고 에테르 약 20 mL씩 4회 추출한다. 에테르추출액을 모두 합하여 물 20 mL씩으로 세척하여 페놀프탈레인 지시약으로 홍색이 나타나지 않을 때까지 세척한다. 에테르 층을 무수황산나트륨으로 탈수한 후 여과하여 감압 농축한다. 건고물을 헥산 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(30m×0.32mm×0.25um) 또는 이와 동등 제품(5%-phenyl- methylpolysiloxane)

(2) 검출기 : FID(불꽃이온화 검출기)

(3) 시험용액 주입부 및 검출기의 온도 ： 290～300℃

(4) 칼럼오븐온도 : 초기의 온도 270℃에서 시험용액을 주입한 후 5분간 유지하고 4℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 290℃에서 5분간 유지한다.

(5) 캐리어 가스 및 유량 : 1.0 mL/min(splitless)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 콜레스테롤

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

가) 환산계수 작성

콜레스테롤 표준물질 및 내부표준물질을 각각 20 mg을 취하여 헥산에 녹인 후 최종 부피를 20 mL로 한다. 가스크로마토그래프 내에 각각 주입한다. 콜레스테롤과 내부표준물질의 면적 비를 이용하여 환산계수(f)를 구한다.

f=	AIS × Wstd
	Astd × WIS

AIS : 내부표준물질의 피크면적 또는 높이

Astd : 콜레스테롤 표준물질의 피크면적 또는 높이

WIS : 내부표준물질의 농도(mg/mL)

Wstd : 콜레스테롤 표준물질의 농도(mg/mL)

나) 계산

검체 중 콜레스테롤(mg/100g)

=	f× Aspl × CIS × 최종희석배수(mL) × 100
	AIS × 검체채취량(g)

f : 환산계수

Aspl : 검체내 함유된 콜레스테롤의 피크면적 또는 높이

AIS : 검체내 함유된 내부표준물질의 피크면적 또는 높이

CIS : 검체내 함유된 내부표준물질의 농도(mg/mL)

2. ～ 3. (생  략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 식품일반

4.1.1.1～ 4.1.3.28 (생  략)

< 신  설 >

4.1.4 단성분분석법

4.1.4.1 ～ 4.1.4.140 (생  략)

< 신  설 >

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

5. ～ 6. (생  략)

7. 식품 중 유해물질시험법

7.1～ 7.3 (생  략)

7.4 발기부전치료제 유사물질

1) ～ 3) (생  략)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생  략)

다) 표준원액 : 호모실데나필(homosildenafil), 홍데나필(hongdenafil), 하이드록시호모실데나필(hydroxyhomosildenafil), 아미노타다라필(aminotadalafil), 슈도바데나필(pseudovardenafil), 하이드록시홍데나필(hydroxyhongdenafil), 디메틸실데나필(dimethylsildenafil), 잔소안트라필(xanthoanthrafil), 하이드록시바데나필(hydroxyvardenafil), 노르네오실데나필(norneosildenafil), 데메틸홍데나필(demethylhongdenafil), 피페리디노홍데나필(piperidinohongdenafil), 카보데나필(carbodenafil), 치오실데나필(thiosildenafil), 디메틸치오실데나필(dimethylthiosildenafil), 아세틸바데나필(acetylvardenafil), 벤질실데나필(benzylsildenafil), 노르네오바데나필(norneovardenafil), 옥소홍데나필(oxohongdenafil), 치오호모실데나필(thiohomosildenafil), 데설포바데나필(desulfovardenafil), 니트로데나필(nitrodenafil), 싸이클로펜티나필(cyclopentynafil), 옥틸노르타다라필(octylnortadalafil), 클로로데바나필(chlorodenafil), 신나밀데나필(cinnamyldenafil), 치오퀴나피페리필(thioquinapiperifil), 하이드록시치오호모실데나필(hydroxythiohomosildenafil), 클로로프레타다라필(Chloropretadalafil), 실데나필(sildenafil), 타다라필(tadalafil), 바데나필(vardenafil), 유데나필(udenafil), 미로데나필(mirodenafil) 각각의 표준품을 메탄올에 녹여 각각 100 mg/L이 되게 한다.

라) (생  략)

<신  설>

마) (생  략)

5) (생  략)

6) 시험조작

가) ～ 나) (생  략)

다) 표준품의 크로마토그램

라) 정량 한계 : 0.5 mg/kg

7) ～ 9) (생  략)

10) 발기부전치료제 유사물질의 분자량 및 화학구조식

① ～  (생  략)

<신  설>

<신  설>

7.5 비만치료제 유사물질

1) ～ 3) (생  략)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생  략)

다) 표준원액  : 데스메틸시부트라민, 시부트라민 각각의 표준품을 메탄올에 녹여 각각 100 mg/L이 되게 한다.

라) ～ 마) (생  략)

5) (생  략)

6) 시험조작

가) ～ 나) (생  략)

다) 표준품의 크로마토그램

라) (생  략)

7) ～ 9) (생  략)

10) 데스메틸시부트라민의 분자량 및 화학구조식

① (생  략)

<신  설>

제 1. 총칙

1. (현행과 같음)

2. 용어의 풀이

1) ～ 36) (현행과 같음)

37) “유밀과”라 함은 밀가루를 주원료로 하여 참기름, 당류, 벌꿀 또는 주류 등을 첨가하고 반죽, 유탕처리한 후 당류 또는 벌꿀을 가하여 만든 것이거나 이에 잣 등의 식품을 입힌 것을 말한다.

제 2. (현행과 같음)

1. ∼ 4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 중금속 기준

(1) ～ (2) (현행과 같음)

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
곡류 (현미 제외)	0.2 이하	0.1 이하(밀, 쌀은 0.2 이하)
서류	0.1 이하	0.1 이하
콩류	0.2 이하	0.1 이하(대두는 0.2 이하)
과실류	0.1 이하 (사과, 귤, 장과류는 0.2 이하)	-
엽채류(결구 엽채류 포함)	0.3 이하	0.2 이하
엽경채류	0.1 이하	0.05 이하
근채류	0.1 이하	0.1 이하 (양파는 0.05 이하)
과채류	0.1 이하 (고추, 호박은 0.2 이하)	0.05 이하 (고추, 호박은 0.1 이하)
참깨	0.3 이하	0.2 이하

(3) 농산물 중 중금속 기준

(4) (현행과 같음)

(5) 축산물 중 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
가금류고기	(현행과 같음)	(현행과 같음)
돼지간	(현행과 같음)	(현행과 같음)
돼지고기	(현행과 같음)	(현행과 같음)
돼지신장	(현행과 같음)	(현행과 같음)
소간	(현행과 같음)	(현행과 같음)
소고기	(현행과 같음)	(현행과 같음)
소신장	(현행과 같음)	(현행과 같음)
원유 및 우유류	0.02 이하	-

(6) (현행과 같음)

(7) 식용유지류의 중금속 기준

① 납 : 0.1 mg/kg 이하

② 비소 : 0.1 mg/kg 이하

6) ～ 7) (현행과 같음)

8) 곰팡이독소 기준

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(6) 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

대 상 식 품	기준 (mg/kg)
곡류 및 그 단순가공품 (옥수수 및 그 단순가공품 제외)	(현행과 같음)
옥수수 및 그 단순가공품	(현행과 같음)
시리얼류	(현행과 같음)
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	(현행과 같음)
면류	0.75 이하

(7) 제랄레논(Zearalenone)

대 상 식 품	기준(μg/kg)
곡류 및 그 단순가공품	(현행과 같음)
과자	(현행과 같음)
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	(현행과 같음)
시리얼류	50 이하

9) ～ 11) (현행과 같음)

12) 기타 유해물질 기준

(1) (현행과 같음)

(2) 발기부전치료제 유사물질

～  (현행과 같음)

하이드록시클로로데나필 (Hydroxychlorodenafil) : 검출되어서는 아니된다.

디클로로데나필 (Dichlorodenafil) : 검출되어서는 아니된다.

(3) 비만치료제 유사물질

(현행과 같음)

디데스메틸시부트라민(Didesmethylsibutramine) : 검출되어서는 아니된다

(4) ～ (6) (현행과 같음)

13) ～ 17) (현행과 같음)

6. 보존 및 유통기준

1) (현행과 같음)

2) -------------------------

----------- 있도록 하고, 외부로부터의 오염을 방지할 수 있어야 하며 -------------------

------------------.

3) -------------------------

-------------------------

------------------ 식품첨가물 및 식품을 오염시키거나  품질에 영향을 미칠 수 있는 물품 등과는 ------------.

4) ～ 7) (현행과 같음)

8) -------------------------

-------------------------

-------------------------

----------- 다만, 냉동어패류를 즉석에서 당일 판매를 목적으로 냉장하는 것은 그러하지 아니할 수 있으며, 이때 재냉동하여서는 아니 된다. 또한, 제조업자가 냉동제품인 빵류, 떡류 및 젓갈류에 --------------

-------------------------.

9) (현행과 같음)

10) -------------------------

아니 된다. 다만, 냉동어패류의 내장 등 비가식부위를 제거하기 위해 해동하는 것은 그러하지 아니할 수 있으며 신속하게 냉동하여야 한다.

11) ～ 18) (현행과 같음)

제 3. 장기보존식품의 기준 및 규격

1. 통․병조림식품

(현행과 같음)

1) 제조․가공기준

(1) (현행과 같음)

(2) pH 4.6 이상의 저산성식품(low acid food)은 -------------

-------------------------

-------------------------

------------------

(3) -------- pH가 4.6미만인 ---

-------------------------

-----.

2) 규격

(1) (현행과 같음)

< 삭  제 >

(2) ～ (3) (현행 (3), (4)와 같음)

2. ～3. (현행과 같음)

제 4. (현행과 같음)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (11) (현행과 같음)

(12) 납 (mg/kg) : 1.0 이하(젤리에 한한다)

6) 시험방법

(1) ～ (9) (현행과 같음)

(10) 푸모니신

제 10. 일반시험법 6.1 곰팡이독소에 따라 시험한다.

(11) 납

제10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

2. ～ 3. (현행과 같음)

4. 잼류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 납 (mg/kg) : 1.0 이하

6) 시험방법

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 납

제10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

5. ～ 13. (현행과 같음)

14. 식용유지류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

콩기름 ～ 쇼트닝 (현행과 같음)

	마가린	저지방마가린(지방스프레드)
(1) 조지방	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(2) 산가	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(3) 타르색소	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(4) 산화방지제(g/kg)	(현행과 같음)
	부틸히드록시아니졸 디부틸히드록시톨루엔 터셔리부틸히드로퀴논	(현행과 같음)
	몰식자산 프로필	(현행과 같음)
	이.디.티.에이.칼슘이나트륨	0.1 이하(이.디.티.에이.이나트륨과 병용할 때에는 무수 이.디.티.에이.이나트륨으로서 사용량의 합계가 0.1g/kg 이하)
(5) 보존료(g/kg)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

15. ～ 17. (현행과 같음)

18-1 ～ 18-5 (현행과 같음)

18-6 기타음료

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) 혼합음료

먹는 물 또는 동․식물성 원료에 식품 또는 식품첨가물을 가하여 음용할 수 있도록 가공한 --------.

(2) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (7) (현행과 같음)

(8) 보존료(g/kg)：다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

(현행과 같음)	------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- 0.1g/kg 이하이어야 한다. 또한 분말제품은 검출되어서는 아니 된다.)
(현행과 같음)	------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- 0.1g/kg 이하이어야 한다. 또한 분말제품은 검출되어서는 아니 된다.)

6) (현행과 같음)

19. 특수용도식품

19-1 영아용 조제식

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (29)  (현행과 같음)

(30) 셀레늄

제10. 일반시험법 1.2 미량영양성분시험법 1.2.1.10. 셀레늄에 따라 시험한다.

(31) ～ (37) (현행 (30)～(36)과 같음)

19-2 성장기용 조제식

1) ～ 5)  (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (26)  (현행과 같음)

(27) 셀레늄

제10. 일반시험법 1.2 미량영양성분시험법 1.2.1.10. 셀레늄에 따라 시험한다.

(28) ～ (33) (현행 (27)～(32)와 같음)

19-3 ～ 19-4 (현행과 같음)

19-5 특수의료용도등식품

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 제조․가공기준

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(6) -----------------------

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--- 단백질은 제품 -------

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---------.

(7) ～ (9) (현행과 같음)

4) ～ 6) (현행과 같음)

20. (현행과 같음)

21. 조미식품

21-1.～ 21-4. (현행과 같음)

21-5. 고춧가루 또는 실고추

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 위화물

① ～ ④ (현행과 같음)

< 삭  제 >

(5) ～ (6) (현행과 같음)

22. ～ 23. (현행과 같음)

24. 젓갈류

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 액젓

젓갈을 여과하거나 분리한 액 또는 이에 젓갈을 여과하거나 분리하고 남은 것을 재발효 또는 숙성시킨 후 여과하거나 분리한 액을 혼합한 것을 말한다.

(4) 조미액젓

액젓에 염수 또는 조미료 등을 첨가한 것을 말한다.

5) ～ 6) (현행과 같음)

25. 절임식품

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니된다.

소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	(현행과 같음)
	-----[-------- 당절임(건조당절임 제외)-----]
	------(식초절임에 한함, --------- ------------------------------ ------------------------------ ------------------------------ ------------------------------ ---)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	------(식초절임에 한함. ------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ------------------------------- ---------------)

26. ～ 28. (현행과 같음)

29. 기타식품류

29-1. ～ 29-11. (현행과 같음)

29-12 식염

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

유형 항목	천일염	재제소금 ～ 가공소금
(1)～(3) (현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(4) 불용분(%)	0.15 이하 (토판염은 0.3 이하)	(현행과 같음)
(5)～(11) (현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

29-18. 즉석섭취․편의식품류

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) (현행과 같음)

(2) 즉석조리식품

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수프, 순대 등의 ---------.

(3) (현행과 같음)

제10. 일반시험법

1. 식품성분시험법

1.1.5.1 ～ 1.1.5.3 (현행과 같음)

1.1.5.4. 지방산

가. 제1법

1) 시험법 적용범위

식용유지류에 적용한다.

2) 분석원리

유지를 메탄올성 수산화나트륨용액으로 처리하여 알칼리염을 만든 후 트리플루오로보란메탄올 용액을 가하고 가열하여 에스테르화 한다. 생성된 지방산에스테르를 이소옥탄에 녹여 분석을 행한다. 개별 지방산의 함량 및 대표적인 지방산의 합을 계산하여 포화지방, 단일불포화지방, 다중불포화지방 함량을 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：불꽃이온화검출기(FID)

나) 교반기(vortex mixer)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 14% 트리플루오로보란메탄올 용액(125 g BF3/L MeOH)

(2) 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5 N) : 수산화나트륨 2 g을 메탄올 100 mL로 조제한다. 장시간 방치하는 경우 흰 침전(탄산나트륨)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.

(3) 이소옥탄：기체크로마토그래피용

(4) 내부표준용액：triundecanoin(C11:0) 0.01 g을 이소옥탄용액에 녹여 10 mL가 되게 한다(1 mg/mL).

(5) 표준용액 : 각 지방산 메틸 에스테르와 내부표준물질 undecanoic acid 메틸 에스테르를 이소옥탄에 녹여 각각 0.5 mg/mL이 되도록 조제한다.

5) 시험용액의 조제

가) 지방 및 유지

검체 약 25 mg을 유리 튜브에 정밀히 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다. 이어 0.5 N 메탄올성 수산화나트륨용액 1.5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합한다. 이어 100℃ heating block에서 약 5분간 가온한다. 이를 냉각한 후 14% 트리플루오로보란메탄올용액 2 mL를 가하고 다시 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합하고 100℃에서 30분간 가온한다. 이어 30～40℃로 냉각하여 이소옥탄용액 1 mL를 가하여 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 이 온도에서 30초간 격렬히 진탕한다. 다음 즉시 포화 염화나트륨용액 5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 진탕한다. 상온으로 냉각한 후 수층으로부터 분리된 이소옥탄층을 무수황산나트륨으로 탈수하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래피 조건

지방산 분석시 C18:3(Linolenic acid, n3 cis)과 C20:1(Eicosenic acid) 및 C22:1(Docosaenoic acid), C20:3(Eicosatrienoic acid)와 C20:4 (Arachidonic acid)의 분리도는 1.0 이상이여야 한다.

(1) 칼럼 : SP-2560 (100 m x 0.25 mm x 0.2 ㎛) 혹은 이와 동등한 것

(2) 주입부온도 : 225℃

(3) 칼럼온도 : 100℃에서 4분간 유지한 후 3℃/min의 비율로 240℃까지 온도를 상승시키고 이후 15분이상 유지한다.

(4) 검출기온도 : 285℃

(5) 유량 : 헬륨  0.75 mL/min

(6) split ratio : 200 : 1

나) 지방산 표준물질의 크로마토그램

C18:1(Elaidic acid)과 C18:2(Linolelaidic acid)의 트랜스형의 이성체의 표준물질을 포함한 37종의 지방산 메틸 에스테르 표준물질의 크로마토그램은 그림 1과 같다. 통상적으로 트랜스형의 이성체는 시스형보다 먼저 분리된다. C18:3(Linolenic acid, n3, cis)과 C20:1(Eicosenic acid)의 피크 순서는 칼럼의 종류 및 분석온도에 따라 상이하며 트랜스지방산의 분리조건을 최적화시키는 데에는 C20:1(Eicosenic acid)의 피크가 C18:3(Linolenic acid, n3, cis)의 바로 앞에 나오는 것이 좋다(SP-2560의 경우, 그림 1)

그림 1. 37종 지방산 메틸 에스테르의 크로마토그램

다) 지방산 전환계수

GC-FID상에서의 분석은 각 지방산의 메틸 에스테르이므로 해당 지방산으로 전환해야 한다. 각 지방산별 전환계수는 8)정량시험 표 1.과 같다. 트랜스형의 지방산인 경우 동일한 분자량을 갖는 시스형 지방산의 경우와 동일한 전환계수를 사용한다.

라) 부분 경화유 중 트랜스지방 크로마토그램

부분 경화유의 크로마토그램 중 트랜스지방의 검출시간은 그림 2.와 같다.

그림 2. 부분 경화유의 크로마토그램

7) 정성시험

시험용액 및 지방산표준용액을 각각 1～2 μL를 주입하여 RRT (Relative Retention Time; 내부표준물질에 대한 각 지방산들의 머무름 시간의 비)를 사용하여 각각의 지방산을 확인한다.

8) 정량시험

정성시험법에 의해 얻은 각 지방산의 피크면적, 내부표준물질의 피크면적으로부터 다음과 같이 정량을 한다.

가) 개별 지방산 메틸 에스테르의 함량 계산

WFAMEi	=	Pti×WtC11:0×1.0067
		PtC11:0×Ri

WFAMEi : 지방산 i의 메틸 에스테르로서의 양(mg)

Pti : 시험용액 중 지방산i의 피크면적

WtC11:0 : 시험용액 중 내부표준물질(C11:0 triundecanoin) 첨가량(mg)

1.0067:내부표준물질(C11:0 triundecanoin)의 트리글리세라이드로부터 지방산 메틸 에스테르로의 전환계수

PtC11:0 : 시험용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 피크면적

Ri : 지방산 i의 반응계수(response factor)

※ Ri	=	Psi	×	WC11:0
		PsC11:0		Wi

Psi : 표준용액 중 지방산 메틸 에스테르 i의 피크면적

PsC11:0 : 표준용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 피크면적

WC11:0 : 표준용액 중 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)의 양(mg)

Wi : 표준용액 중 지방산 메틸 에스테르 i의 양(mg)

나) 개별 지방산 및 지방 함량 계산

(1) 개별 지방산

지방산(g/100 g)	=	WFAi × 100
		Wspl

WFAi = WFAMEi × fFAi

fFAi : 지방산 i(메틸 에스테르로서)의 지방산 전환계수(표 1.)

Wspl : 검체량(mg)

(2) 포화지방

포화지방(g/100 g)	=	Σ 포화지방산i × 100
		Wspl

포화지방산i : C4:0(Butyric acid), C6:0(Carproic acid), C8:0(Caprylic acid) 등 이중결합이 없는 지방산

(3) 단일불포화지방

단일불포화지방(g/100 g)	=	Σ 단일불포화지방산i × 100
		Wspl

단일불포화지방산i : C16:1(Palmitic acid, C17:1(Margaroleic acid), C18:1(Oleic acid) 등 하나의 시스형 이중결합이 있는 지방산

(4) 다중불포화지방

다중불포화지방(g/100 g)	=	Σ 다중불포화지방산i × 100
		Wspl

다중불포화지방산i : C18:2(Linoleic acid), C18:3(Linolenic acid), C20:2(Eicosadienoic acid) 등 시스형 이중결합이 두 개 이상인 지방산

(5) 트랜스지방

트랜스지방(g/100 g)	=	Σ 트랜스지방산i × 100
		Wspl

트랜스지방산i : C18:1(Elaidic acid), C18:2(Linolelaidic acid) 등 트랜스 구조를 1개 이상 가지고 있는 모든 불포화지방산을 말한다. 이중결합이 2개 이상일 때에는 메틸렌기에 의해 분리되거나 또는 비공액형의 이중결합을 가지고 있는 지방산으로 한정한다.

표 1. 각 지방산 Methyl ester의 지방산 전환계수
지방산명		fFAi
C4:0	Butyric acid	0.8627
C6:0	Caproic acid	0.8923
C8:0	Caprylic acid	0.9114
C10:0	Capric acid	0.9247
C11:0	Undecanoic acid	0.9300
C12:0	Lauric acid	0.9346
C13:0	Tridecanoic acid	0.9386
C14:0	Myristic acid	0.9421
C14:1	Tetradecenenoic	0.9417
C15:0	Pentadecanoic acid	0.9453
C15:1	Pentadecenoic acid	0.9449
C16:0	Palmitic acid	0.9481
C16:1	Hexadecenoic acid	0.9477
C17:0	Margaric acid	0.9507
C17:1	Margaroleic acid	0.9503
C18:0	Stearic acid	0.9530
C18:1	Octadecenoic acid	0.9527
C18:2	Octadecadienoic acid	0.9524
C18:3	Linolenic acid	0.9520
C20:0	Arachidic acid	0.9570
C20:1	Eicosenic acid	0.9568
C20:2	Eicosadienoic acid	0.9565
C20:3	Eicosatrienoic acid	0.9562
C20:4	Arachidonic acid	0.9560
C20:5	Eicosapentaenoic acid	0.9557
C21:0	Heneicosanoic acid	0.9588
C22:0	Behenic acid	0.9604
C22:1	Docosaenoic acid	0.9602
C22:2	Docosadienoic acid	0.9600
C22:3	Docosatrienoic acid	0.9598
C22:4	Docosatetraenoic acid	0.9595
C22:5	Docosapentaenoic acid	0.9593
C22:6	Docosahexaenoic acid	0.9590
C23:0	Tricosanoic acid	0.9620
C24:0	Lignoceric acid	0.9563
C24:1	Nervonic acid	0.9632

나. 제2법

1) 시험법 적용범위

식품 등에 적용한다.

2) 분석원리

식품 중 지방 및 지방산을 산분해 및 염기분해하여 에테르로 추출하고 트리플루오로보란메탄올용액으로 지방산을 메틸 에스테르화하여 가스크로마토그래피로 분석한다. 개별 지방산의 함량 및 대표적인 지방산의 합을 계산하여 포화지방, 단일불포화지방, 다중불포화지방 함량을 분석한다.

3) 장치

기체크로마토그래프：불꽃이온화검출기(FID)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 피로갈롤

(2) 8.3 M 및 12 M 염산 용액

(3) 수산화암모늄 용액 : 58%(w/w)

(4) 디에틸에테르 : 지방 추출용

(5) 무수 석유에테르

(6) 에탄올 : 95%(v/v)

(7) 톨루엔

(8) 클로로포름

(9) 무수 황산나트륨(Na2SO4)

(10) 7% 트리플루오로보란메탄올 용액: 14% 트리플루오로보란메탄올 용액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

(11) 에테르 혼합 추출용매 : 디에틸에테르와 무수 석유에테르(1 : 1) 혼합 용매(v/v)

(12) 내부표준용액： triundecanoin(C11:0) 0.05 g을 클로로포름에 녹여 10 mL가 되게 한다(5 mg/mL).

(13) 표준용액의 조제 : 36종 지방산 메틸 에스테르1)와 내부표준물질(undecanoic acid methyl ester)를 헥산에 녹여 각각 1 mg/mL가 되도록 조제한다.

1) C4:0-tetranoic methyl ester, C6:0-hexanoic methyl ester, C8:0-octanoic methyl ester, C10:0-decanoic methyl ester, C12:0-dodecanoic methyl ester, C13:0-tridecanoic methyl ester, C14:0-tetradecanoic methyl ester, C14:1-9-tetradecenoic methyl ester, C15:0-pentadecanoic methyl ester, C15:1-10-pentadecenoic methyl ester, C16:0-hexadecanoic methyl ester, C16:1-9-hexadecenoic methyl ester, C17:0-heptadecanoic methyl ester, C17:1-10-heptadecenoic methyl ester, C18:0-octadecanoic methyl ester, C18:1-elaidic methyl ester, C18:1-9-octadecenoic methyl ester, C18:2-6-linolelaidic methyl ester, C18:2-9,12-octadecadienoic methyl ester, C18:3-9,12,15-octadecatrienoic methyl ester, C18:3-6,9,12-octadecatrienoic methyl ester, C20:0-eicosanoic methyl ester, C21:0-heneicosanoic methyl ester, C20:1-8-eicosenoic methyl ester, C20:2-11,14-eicosadienoic methyl ester, C20:3-8,11,14-eicosatrienoic methyl ester, C20:3-11,14,17-eicosatrienoic methyl ester, C20:4-arachidonic methyl ester, C20:5-eicosapentaenoic methyl ester, C22:0-docosanoic methyl ester, C22:1-9-docosaenoic methyl ester, C22:2-docosadienoic methyl ester, C22:6-docosahexaenoic methyl ester, C23:0-tricosanoic methyl ester, C24:0-lignoceric methyl ester, C24:1-nervonic methyl ester

5) 지방 추출

지방 추출에 앞서 검체를 균질화한다. 내부표준물질로 사용하는 undecanoic acid에 대한 간섭을 확인하기 위하여 내부표준물질 없이 시험용액을 조제하여 분석하고 해당 피크가 발견되면 내부표준물질 피크면적을 계산 시 보정한다. 이를 위해 내부표준용액 대신 클로로포름 2 mL을 사용한다.

가) 우유 등 유제품 및 치즈를 제외한 식품

균질화된 검체를 약 100～200 mg의 지방을 포함하는 양으로 정확히 칭량하여 마조니어관에 넣고 약 100 mg의 피로갈롤을 첨가한 후, 2 mL의 내부표준용액을 첨가한다. 마조니어관에 끓임쪽을 넣고 2 mL 에탄올을 첨가하여 전체 검체가 잘 섞일 때까지 혼합한다. 8.3 M 염산용액 10 mL을 넣고 잘 섞는다. 마조니어관의 마개를 고무줄 혹은 테프론테이프 등으로 밀봉한 후, 70～80℃의 수조에서 적당한 속도로 교반하면서 40분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합될 수 있도록 매 10분마다 교반기로 혼합한다. 분해 후, 실온으로 냉각하고 에테르 추출 시 분액이 용이하도록 마조니어관의 아래 부분을 에탄올을 첨가하여 채운 후 부드럽게 섞어준다.

나) 우유 등 유제품

균질화된 검체를 약 100～200 mg의 지방을 포함하는 양으로 정확히 칭량하여 마조니어관에 넣고 약 100 mg의 피로갈롤을 첨가한 후, 2 mL의 내부표준용액을 첨가한다. 마조니어관에 끓임쪽을 넣고 2 mL 에탄올을 첨가하여 전체 검체가 잘 섞일 때까지 혼합한다. 4 mL의 물을 첨가하여 잘 섞은 후 2 mL의 수산화암모늄을 첨가하여 교반하고 마조니어관의 마개를 고무줄 혹은 테프론테이프 등으로 밀봉한 후, 70～80℃의 수조에서 적당한 속도로 교반하면서 10분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합될 수 있도록 매 5분마다 교반기로 혼합한다. 분해 후 페놀프탈레인 용액을 몇 방울 넣고 염기성(분홍색)이 유지될 수 있도록 수산화암모늄을 첨가한다. 에테르 추출 시 분액이 용이하도록 마조니어관의 아래 부분을 에탄올을 첨가하여 채운 후 부드럽게 섞어준다.

다) 치즈

균질화된 검체를 약 100～200 mg의 지방을 포함하는 양으로 정확히 칭량하여 마조니어관에 넣고 약 100 mg의 피로갈롤을 첨가한다. 그리고 2 mL의 내부표준용액을 첨가한다. 플라스크에 끓임쪽을 넣고 2 mL 에탄올을 첨가하여 전체 검체가 잘 섞일 때까지 혼합한다. 4 mL의 물을 첨가하여 잘 섞은 후 2 mL의 수산화암모늄을 첨가하여 교반하고 마조니어관의 마개를 고무줄 혹은 테프론테이프 등으로 밀봉한 후, 70～80℃의 수조에서 적당한 속도로 교반하면서 20분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합할 수 있도록 매 5분마다 교반기로 혼합한다. 12 M 염산용액 10 mL을 추가하여 첨가하고 20분간 분해한다. 마조니어관의 벽면에 붙어있는 입자들이 잘 혼합될 수 있도록 매 10분마다 교반기로 혼합한다. 에테르 추출 시 분액이 용이하도록 마조니어관의 아래 부분을 에탄올을 첨가하여 채운 후 부드럽게 섞어준다.

라) 에테르 추출

가), 나), 및 다)에서 준비된 마조니어관의 분해물에 25 mL 디에틸에테르를 첨가하고 마개를 한 후  5분간 진탕하여 추출한다. 에테르 혼합 추출용매로 마개를 씻고 25 mL의 무수 석유에테르를 추가하여 5분간 다시 진탕 추출하고 600 rpm에서 5분간 원심분리한다. 원심분리가 어려울 경우, 상층이 깨끗해질 때까지 적어도 1시간 이상 방치하여 분리한다. 에테르 혼합 추출용매로 마개를 씻고 150 mL 비이커에 에테르 층을 분액한 후 증발하기 위해 질소를  사용하여 35～40℃ 수조에서 에테르를 천천히 증발시킨다.

6) 시험용액의 조제

2～3 mL 클로로포름과 2～3 mL 디에틸에테르로 추출한 지방을 녹여 15 mL 시험관으로 옮긴 후, 40℃ 수조에서 질소 농축하고 2.0 mL 7% 트리플루오로보란메탄올  용액과 1.0 mL의 톨루엔을 첨가한다. 테프론/실리콘 재질의 마개로 잘 밀봉하여 100℃ 오븐에서 45분간 가열한 후 실온으로 냉각한다. 5.0 mL 증류수, 1.0 mL 헥산 및 약 1.0 g 무수 황산나트륨를 첨가한 후 진탕하여 정치하고 분리된 상층액을 취하여 약 1.0 g의 무수 황산나트륨을 담은 다른 바이알에 넣고 탈수한 후 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

1.1.5.4. 가. 제1법 6) 시험조작에 따라 시험한다.

8) 정성시험

1.1.5.4. 가. 제1법 7) 정성시험에 따라 시험한다.

9) 정량시험

1.1.5.4. 가. 제1법 8) 정량시험에 따라 시험한다.

<삭  제>

1.1.5.5 콜레스테롤

1) 시험법 적용범위

지질을 함유한 식품 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 지질을 고온에서 수산화칼륨 에탄올 용액으로 비누화한다. 콜레스테롤을 톨루엔으로 추출하고 트리메틸실릴(TMS) 에테르화하여 유도체화한 후, 이를 기체크로마토그래피로 정량한다.

3) 장치 및 기구

가) 장치

기체크로마토그래프/불꽃이온화검출기(GC-FID)

나) 기구

(1) 원심분리관 : 15 mL, Pyrex No. 13.

※ 유도체화를 위해서 원심분리관을 실란화하여 사용한다. 이를 위해 원심분리관에 10% 불산을 채운 후 10분간 정치하고 증류수로 완전히 씻어준 후, 무수 에탄올로 다시 세척한 다음 질소 하에서 시험관을 건조한다. 10% 헥사메틸디실란(HMDS) 톨루엔 용액으로 원심분리관을 채워 1시간 정치한다. 이를 톨루엔으로 완전히 씻어준 후, 무수 에탄올로 다시 세척하고 사용 전에 100℃ 오븐에 건조하여 사용한다. 강 알칼리로 시험관을 세척한 것이 아니라면 실란화를 다시 하지 않고 시험관을 다시 사용할 수 있으나 적어도 6개월에 한번은 실란화하여 사용한다.

(2) 감압 농축기

(3) 자석교반-가열기

(4) 마이크로피펫 : 100, 200 uL

(5) 교반기(Vortex mixer)

(6) 분석저울 : 0.0001 g까지 측정이 가능한 것

(7) 초자기구 : 삼각플라스크(125 mL, 250 mL), 용량 플라스크, 피펫, 매스실린더, 분획여두(500 mL)

4) 시약 및 시액

가) 디메틸포름아미드(Dimethyl formamide) : 기체크로마토그래피용

나) 헥사메틸디실란(Hexamethyldisilane)

다) 5α-콜레스탄 내부표준용액 :   0.1 mg/mL, 5α-콜레스탄 10 mg을 n-헵탄에 녹여 100 mL로 한다.

라) 콜레스테롤 표준원액 : 2.0 mg/mL, 콜레스테롤 20 mg을 디메틸포름아미드에 녹여 10 mL로 한다.

마) 콜레스테롤 표준용액 : 콜레스테롤 표준원액을 디메틸포름아미드로 희석하여 0.0025～0.2 mg/mL 범위에서 6개 농도를 조제한다(0.0025, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.2 mg/mL로 조제한다.)

바) 수산화칼륨 용액 :

(1) 50%(w/w), 500 g 수산화칼륨을 500 g 증류수에 녹여 조제한다.

(2) 1M, 56 g 수산화칼륨을 증류수를 가하여 1 L로 조제한다.

(3) 0.5M, 1M 수산화칼륨 용액을 증류수로 희석하여 조제한다.

사) 트리메틸클로로실란(Trimethyl chlorosilane) : Pierce Chemical사 No. 88531 또는 이와 동등한 것

아) 톨루엔 : 잔류농약급 또는 이와 동등한 것

자) 무수황산나트륨

차) 유리솜

5) 시험용액의 조제

가) 비누화 과정

검체 약 2g을 정밀히 칭량하여 삼각플라스크에 취한다. 이때 검체의 지방량은 1 g이하가 되도록 검체량을 조절한다.(예, 저지방마가린을 제외한 식용유지류는 1 g, 마요네즈는 1.5 g을 취한다). 자석막대를 삼각플라스크에 넣고 95% 에탄올 40 mL과 8 mL 50% 수산화칼륨용액을 가한다(95% 에탄올 40 mL 중 일정량을 50% 수산화칼륨용액 첨가 후 잔류물 세척에 사용하여 플라스크와 콘덴서가 같이 붙어서 떨어지지 않는 것을 방지할 수 있다). 콘덴서를 설치하고 자석교반-가열기를 이용하여 교반하면서 가열하여 70±10분간 환류시킨다. 비누화를 위해 시료를 지속적으로 관찰하면서 덩어리가 생길 경우 유리봉으로 분산시키거나 교반하면서 50% 수산화칼륨용액을 추가하여 시험용액을 교반한다. 환류가 완료되면 가열기를 끄고 교반 중에 콘덴서의 상부를 통해 95% 에탄올 60 mL을 조심하여 첨가한다. 약 15분 후, 콘덴서를 플라스크에서 제거하고 플라스크에 마개를 막아 실온으로 냉각시킨 후, 24시간 동안 시험용액을 안정화한다.

나) 추출

비누화가 끝난 시험용액을 교반하면서 톨루엔 100 mL을 첨가하고 마개를 하여 30초 이상 교반한다. 이를 세척과정 없이 500 mL 분액여두로 옮긴다. 110 mL 1M 수산화칼륨용액을 분액여두에 넣고 10초간 강렬하게 진탕하여 정치하고 분리된 아래층을 버린다. 40 mL 0.5 M 수산화칼륨용액을 분액여두에 넣고 분액여두를 뒤집은 후 천천히 내용물이 소용돌이가 생기도록 10초간 섞어준 후 정치하여 분리된 아래층을 버린다.

톨루엔 층을 40 mL 증류수로 천천히 분액여두를 돌려주며 수세한다. 정치하여 분리된 아래층을 버리고 수세과정을 3회 이상 반복한다. 이 때 수세과정이 반복될수록 더욱 강렬하게 진탕한다. 만약 에멀젼이 발생하면 소량의 95% 알코올을 첨가하여 분액여두의 내용물이 회오리가 생기도록 섞어준 후 정치하여 층을 분리한다. 톨루엔 층이 맑게 보일 때까지 수세과정을 계속한다.

유리솜과 약 20 g의 무수황산나트륨이 채워진 유리깔대기를 통해 수세한 톨루엔을 약 2 g 무수황산나트륨이 채워진 삼각플라스크로 흘려주어 탈수한다. 삼각플라스크에 마개를 막고 교반하여 혼합한 후 15분 이상 정치한다. 이 때 마개의 막음상태가 완벽하더라도 24 시간 이상 방치하여서는 안된다. 추출한 톨루엔 층 25 mL을 바닥이 평평한 125 mL 둥근 플라스크에 취하고 이를 40±3℃에서 감압 농축하여 건고하고 잔류물에 아세톤 약 3 mL을 가한 후 다시 감압 농축하여 완전 건고한다. 잔류물을 3 mL 디메틸포름아미드에 녹여 시험용액으로 한다. 시험용액의 농도는 콜레스테롤 표준용액의 농도범위 안에 있어야 한다.(만약 검체의 콜레스테롤 함량이 적거나 없는 경우, 남아있는 75 mL 톨루엔 추출액을 감압농축하여 건고하고 2 mL 디메틸포름아미드에 다시 녹여 시험용액을 다시 조제한다. 이때 정량한계는  1 mg/100g이다.)

다) 유도체화

6개 농도의 콜레스테롤 표준용액 및 상기의 시험용액 1.0 mL을 15 mL 원심분리관에 각각 취하고 각 원심분리관에 0.2 mL 헥사메틸디실란를 가한 후, 0.1 mL 트리메틸클로로실란를 가하여 마개를 닫고 이를 강렬하게  30초간 교반하거나 손으로 흔들어 혼합하고 15분간 정치한다. 각각의 원심분리관에 1.0 mL 5α-콜레스탄 내부표준용액과 증류수 10 mL을 넣은 후 마개를 닫고 30초간 강렬하게 교반하고 이를 3000 rpm에서 2분간 원심분리한다. 상층의 헵탄 층을 취하여 기체크로마토그래피 측정용 시험용액으로한다. 이때 유도체화된 표준용액과 시험용액은 24시간 내에 분석한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(25m×0.32mm×0.17um) 또는 이와 동등 제품(5%-phenyl-methyl polysiloxane)

(2) 검출기 : FID(불꽃이온화 검출기)

(3) 주입부의 온도 ： 250℃, split

(4) 검출기의 온도 : 300℃

(5) 오븐온도 : 190℃에서 2분간 유지하고 20℃/min의 비율로    230℃까지 상승시켜 3분간 유지하고 40℃/min로 255℃까지 상승시켜 25분간 유지한다.

(6) 캐리어 가스 : 헬륨

(7) 유속 : 2.0 mL/min

나) 검량선의 작성

유도체화한 6개의 콜레스테롤 표준용액을 1 uL 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 콜레스테롤 피크면적을 5α-콜레스탄 피크면적으로 나눈 값(Y축)과 콜레스테롤 농도(mg/mL, X축)로 검량선을 작성한다. 이 때 시험용액의 농도에 따라 0.01～0.2 mg/mL 범위의 고농도 콜레스테롤 표준용액 4개를 이용하여 검량선을 작성하거나 0.0025～0.05 mg/mL 범위의 저농도 콜레스테롤 표준용액 4개를 이용하여 검량선을 작성할 수 있다.

다) 표준품의 크로마토그램

분석에 사용한 칼럼에 특성에 따라 5α-콜레스탄과 콜레스테롤이 각각 11~13분 및 16~18분에 용출되도록 유속 및 오븐온도를 조정한다.

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크면적법에 따라 정량한다.

검체 중 콜레스테롤(mg/100g)

=	C	×	V3×100
			W×[V2/V1]

C : 검량선에서 구한 시험용액의 농도(mg/mL)

W : 검체량(g)

V1 : 추출에 사용한 톨루엔의 량(100 mL)

V2 : 농축에 사용된 톨루엔 추출액의 량(25 mL)

V3 : 유도체화 전 잔사를 녹이는 데 사용한 DMF의 량(3 mL)

2. ～ 3. (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 식품일반

4.1.1.1～ 4.1.3.28 (현행과 같음)

4.1.3.29 아트라진(Atrazine), 부피리메이트(Bupirimate), 클로로벤주론 (Chlorobenzuron) 및 클로로톨루론(Chlorotoluron)

1) 시험법 적용범위

곡류, 콩류, 채소류, 과실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 분석대상 농약은 후로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 액체크로마토그래프 분석대상 농약은 아미노-프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 : 질소․인 검출기(NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프․질량분석기 (GC/MS)를 사용한다.

다) 액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기(Ultraviolet Detector)를 사용한다.

라) 액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실(Florisil) 및 아미노-프로필(Amino-propyl) 카트리지：후로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

라) 표준원액 : 각 농약의 표준품을 유기용매(기체크로마토그래프 분석 용은 아세톤, 액체크로마토그래프 분석용은 아세토니트릴에 녹인다)에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

마) 표준용액 : 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 아세토니트릴 추출법

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 분쇄한 50 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(단, 곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 정치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL의 분리병에 담고 마개를 막은 후 1분간 세게 흔들어 섞는다. 이를 약 1시간 정치하여 아세토니트릴층과 물층을 분리시킨다. 상등액(아세토니트릴층) 20 mL를 취하고 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인다.

(2) 아세톤 추출법

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 분쇄한 50 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(단, 곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 정치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한다. 탈수한 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인다.

※ 추출은 상기 (1) 또는 (2) 중 선택하여 사용함.

주. 곡류, 콩류 등 지방성 검체의 경우 ★까지 시험하고 잔류물에 미리 아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올) 층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔사를 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 분석 대상 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 분석 대상 농약)에 완전히 녹인다.

나) 정제

(1) 기체크로마토그래프 분석 대상농약

미리 후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3 방울 정도의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 가) 추출 항의 20% 아세톤 함유 헥산에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하의 항온수조 중에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

주. 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

(2) 액체크로마토그래프 측정 대상농약

미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 초당 2～3 방울 정도의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 가) 추출 항의 1% 메탄올 함유 디클로로메탄에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2 방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL로 용출하여 동일 시험관에 합친다. 용출액은 40℃ 이하의 항온수조 중에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프(NPD)의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5 (30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm)

(2) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1.0 mL/min

(3) 오븐온도 : 80℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시킨 후 5℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(4) 주입부 : Splitless mode, 260℃

(5) 검출기온도 : 300℃

(6) 주입량 : 1 μL

나) 액체크로마토그래프(UVD)의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액 (20/80, v/v)에서 아세토니트릴/물 혼합액 (80/20, v/v)으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(5) 검체주입량 : 10 μL

(6) 검출기파장 : UV 254 nm

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

아트라진 (19.2분) 1 ng.

그림 2. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 부피리메이트 (27.9분) 1 ng.

그림 3. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :    클로로벤주론 (28.2분)  10 ng.

그림 4. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 클로로톨루론 (17.1분) 20 ng.

마) 정량한계

아트라진 : 0.05 mg/kg

부피리메이트 : 0.05 mg/kg

클로로벤주론 : 0.03 mg/kg

클로로톨루론 : 0.05 mg/kg

7) 정량시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

8) 확인시험

기체 또는 액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

가) 기체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS 캐필러리 칼럼 (30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm) 또는 이와 동등한것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 1.0 mL/min

(3) 칼럼온도 : 80℃에서 검체를 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시킨 후 5℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(4) 주입부 : Splitless mode, 260℃

(5) Interface 온도 : 280℃

(6) 분자량 범위 : 100 ～ 400

(7) 주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 Fragment ions

화합물	머무름 시간 (분)	분자량	Fragment monitored (m/z)
아트라진	19.3	215	173, 200, 215
부피리메이트	24.8	316	273, 208

나) 액체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (100 mm × 2.0 mm, 3 μm)

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 클로로벤주론 : 아세토니트릴/물 혼합액 (50/50, v/v), Isocratic

(나) 클로로톨루론 : 아세토니트릴/물 혼합액 (30/70, v/v), Isocratic

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 검체주입량 : 5 μL

(6) 이온화

(가) 클로로벤주론 : ESI negative-ion mode

(나) 클로로톨루론 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100 ～ 500

(8) Capillary temperature : 350℃

(9) Cone voltage

(가) 클로로벤주론 : -94 V

(나) 클로로톨루론 : 98 V

표 2. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

화합물	머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
클로로벤주론	8.9	308	307
클로로톨루론	9.9	212	213

4.1.4 단성분분석법

4.1.4.1 ～ 4.1.4.140 (현행과 같음)

4.1.4.141 이소카보포스 (Isocarbofos)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과실 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

시료를 아세톤으로 추출한 후 흡인여과 한다. 여과액을 분액깔대기에 옮겨 포화식염수와 증류수를 가하고 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압농축한 후 헥산/아세토니트릴 분배를 거쳐 비극성 불순물을 제거하고 후로리실 칼럼크로마토그래피(용출용매 : 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액 (4/96, v/v)으로 추가 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

기체크로마토그래프/불꽃광도검출기(FPD)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실 (Florisil) : 잔류농약분석용 (60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 표준원액 : 이소카보포스를 아세톤에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.

마) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g을 달아 습윤화하고 과실류 또는 채소류는 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 그 20 g을 단다)를 균질기 용기에 달아 넣고 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화 한다. 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 여액은 분액깔대기에 옮겨 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한 후 다시 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 가하고 분배과정을 되풀이 하여 추출된 용액을 합한다. 합친 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 날려버리고 아세톤/헥산 혼합액 (6/94, v/v) 4 mL로 녹인다.

주. 곡류 등의 지방성 시료의 경우 위의 용매를 날려버린 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴 층을 합친 후 40℃에서 감압농축하고 잔사를 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

나) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 후로리실 10 g, 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL 를 가하여 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 디클로로메탄 에 녹인 용액 10 mL(또는 아세톤/헥산혼합액(4 mL)에 녹인용액)을 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액 (4/96, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 건고물을 아세톤 4 mL를 가하여 잘 녹인 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 가스크로마토그래프의 측정조건

(1) 컬럼 : DB-5 (30 m × 0.53 mm, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨 15.0 mL/min

(3) 칼럼온도 : 180℃

(4) 주입구온도 : 250℃

(5) 검출기온도 : 250℃

(6) 시료주입량 : 2 μL(직접주입법)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :이소카보포스 (5.6분) 2 ng.

라) 정량한계

0.02 mg/kg

마) 기체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5MS (30 m × 0.25 mm, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 1.0 mL/min

(3) 칼럼온도 : 200℃

(4) 주입구온도 : 250℃

(5) 주입부 : Split mode 5:1

(6) Interface 온도 : 280℃

(7) 분자량 범위 : 100～400

(8) 시료주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량	Ion monitored (m/z)
6.0	289	121, 136, 230, 289

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

7) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.142 포메사펜(Fomesafen)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과실 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

시료를 아세톤으로 추출한 후 흡인여과한다. 여과액을 분액깔대기에 옮겨 포화식염수와 증류수를 가하고 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압농축하고 후로리실 칼럼크로마토그래피(용출용매 : 디클로로메탄/메탄올 혼합액 (15/85, v/v)으로 정제하여 액체크로마토그프로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(UV Detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실 (Florisil) : 잔류농약분석용 (60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 표준원액 : 포메사펜을 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

마) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 25 g을 단다)를 균질기 용기에 달아 물 20 mL를 넣고 습윤화 한다. 여기에 아세톤 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 여액은 분액깔대기에 옮겨 증류수 450 mL와 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을 취하여 위의 디클로로메탄과 합한다. 디클로로메탄액을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린다. 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 2분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이한다. 합친 아세토나이트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 날려버리고 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v) 10 mL로 녹인다.

나) 정제

안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리칼럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 후로리실 10 g을 충진하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 위의 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v)에 녹인 검체용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 충진제 표면이 노출되기 직전 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 메탄올/디클로로메탄 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 건고물에 아세토니트릴 5 mL를 가하여 잘 녹이고 인산으로 pH를 3.2로 조절한 증류수 5 mL를 가하여 혼합한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 ㎛)및 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물(인산용액으로 pH를 3.2로 조절) 혼합액 (55/45, v/v)

(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(5) 시료주입량 : 20 μL

(6) 검출기파장 : 290 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

포메사펜 (8.5분) 20 ng.

라) 정량한계

0.04 mg/kg

마) 액체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (100 mm × 2.0 mm, 3 ㎛)

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물(인산용액으로 pH를 3.2로 조절) 혼합액 (55/45, v/v)

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 시료주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100 ～ 500

(8) Capillary temperature : 330℃

(9) Cone voltage : 80 V

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
6.0	439	440

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.143 디펜조쿼트(Difenzoquat)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디펜조쿼트를 2 N 염산 용액과 아세토니트릴로 추출한 후 헥산 및 디클로로메탄/아세톤 혼합액(50/50, v/v)으로 액-액 추출하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD, High Performance Liquid Chromatograph-Ultraviolet Detector)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(HPLC-MS, High Performance Liquid Chromatograph-Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 디펜조쿼트 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 2% 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) 용액 : 인산수소이나트륨 2 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

바) 0.01 M 1-헥산술폰산나트륨염수화물(1-hexanesulfonic acid, sodium salt hydrate) 용액 : 1-헥산술폰산나트륨염수화물 1.88 g을 물 990 mL에 녹여 0.1 M 인산을 첨가하여 pH 3으로 맞춘 다음 물을 첨가하여 1,000 mL가 되게 한다.

사) 0.005 M 암모늄아세테이트(ammonium acetate) 용액 : 암모늄아세테이트 0.39 g을 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 2 N 염산 용액 40 mL를 넣은 후 아세토니트릴 100 mL를 첨가하고 2분간 균질화한다. 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세토니트릴 40 mL로 씻어 상기 여액과 합하여 약 40 mL가 남을 정도까지 감압농축한 후 2% 인산수소이나트륨 용액 40 mL을 넣고 1 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 pH 6으로 맞춘다. 이를 분액깔때기에 옮겨 헥산 50 mL을 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치하여 물층을 별도의 분액깔때기로 옮기고, 분액깔때기에 다시 헥산 50 mL을 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치한다. 별도의 분액깔때기에 상기 물층과 디클로로메탄/아세톤 혼합액(50/50, v/v) 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 30분간 정치한다. 디클로로메탄/아세톤 혼합액층(50/50, v/v)을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한 후 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄/아세톤 혼합액(50/50, v/v) 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 30분간 정치한 후 디클로로메탄/아세톤(50/50, v/v) 혼합액층을 탈수하여 앞의 감압농축플라스크에 합한다. 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하고 잔류물을 아세토니트릴 3 mL을 가하여 녹인 다음 0.01 M 1-헥산술폰산나트륨염수화물 용액 7 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm ×  4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.01 M 1-헥산술폰산나트륨염수화물 혼합액/아세토니트릴(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 256 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

디펜조쿼트

↓

0

4

8

12

16

20

머무름 시간(분)

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 디펜조쿼트(10.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 디펜조쿼트를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(100 mm ×  2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.005 M 암모늄아세테이트/아세토니트릴(80/20, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.5 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 캐필러리 온도 : 350℃

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 콘 볼테이지 : 142 V

(8) 주입량 : 5 μL

(9) 분자량 범위 : 100∼300 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
9.8	249	249

4.1.4.144 아시플루오르펜(Acifluorfen)

1) 시험법 적용범위

두류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아시플루오르펜을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출하여 14% 삼불화붕소 메탄올 용액으로 메틸화한 후 후로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD, Gas Chromatograph -Electron Capture Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 아시플루오르펜 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤으로 희석하여 10 μg/mL가 되게 한 후 이 용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 mL를 마개 달린 시험관에 취하여 질소로 농축한다. 이 잔사를 □5) 시험용액의 조제 나) 메틸화□과정에 따라 실험하여 최종농도가 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 0.2 M 염화암모늄(ammonium chloride) 용액 : 염화암모늄 1.07 g을 물 90 mL에 녹인 후 인산을 첨가하여 pH 2로 맞춘 다음 물을 첨가하여 100 mL가 되게 한다.

바) 2 % 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) 용액 : 인산수소이나트륨 2 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

사) 메틸화 용액 : 14% 삼불화붕소(boron trifluoride) 메탄올 용액을 사용한다.

아) 5% 황산나트륨(sodium sulfate) 용액 : 황산나트륨 5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

자) 후로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 후로리실(60∼100 mesh) 5 g을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 0.2 M 염화암모늄 용액 20 mL를 넣은 후 10분간 정치한다. 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화한다. 이를 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 상기 여액과 합한다. 이 액을 500 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 2% 인산수소이나트륨 용액 40 mL와 헥산 50 mL를 가하여 녹인 후 분액깔때기로 옮긴다. 분액깔때기를 흔들어 섞은 후 30분간 정치한 다음 물층을 취하여 2 N 염산 용액을 첨가하여 pH 2로 맞춘다. 물층에 디클로로메탄 50 mL를 첨가하여 심하게 흔들어 30분간 정치하여 디클로로메탄층을 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치하여 디클로로메탄층을 상기 감압농축플라스크에 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 약 2 mL가 남도록 감압농축한다. 잔류물을 마개 달린 시험관에 옮긴 후 아세톤 10 mL로 농축플라스크를 세척하여 합한 다음 40℃ 이하의 수욕상에서 완전히 질소로 농축한다.

나) 메틸화

위의 마개 달린 시험관에 메탄올 1 mL를 넣어 잔류물을 녹인 후 14% 삼불화붕소 메탄올 용액 1 mL를 첨가한 다음 마개를 닫고 80℃의 수욕상에서 20분간 반응시킨다. 여기에 5% 황산나트륨 용액 10 mL를 첨가하여 반응을 끝내고 분액깔때기로 옮긴 후 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v) 10 mL를 넣고 심하게 흔들어 30분간 정치하여 상층인 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v)층을 취한다

다) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 후로리실 5 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충전한 후 헥산 25 mL를 넣고 무수황산나트륨 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 상기 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v) 10 mL를 넣고 유출시킨다. 무수황산나트륨 상단이 노출되기 직전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 50 mL로 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 벤젠/헥산 혼합액(40/60, v/v) 10 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m ×  0.25 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 210℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : split mode(10:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램: 아시플루오르펜 메틸 에스터(12.6분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 아시플루오르펜을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 :	DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 150℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고  15℃/min의 비율로 210℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 1 μL

(10) 분자량 범위 : 100∼400 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
13.9	375	375, 223, 344

(주. 분자량은 아시플루오르펜이 메틸화 된 아시플루오르펜 메틸 에스터의 분자량임)

4.1.4.145 티오설탑(Thiosultap)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 티오설탑을 2% 시스테인 용액, 3% 염화니켈 용액 및 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신으로 전환시켜 헥산 및 에틸아세테이트로 액-액 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD, Gas Chromatograph -Flame Photometric Detector, 황용 간섭필터, 파장 394 nm)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 옥살산수소 네레이스톡신(nereistoxin hydrogen oxalate) 표준품을 메탄올에 녹여 네레이스톡신(nereistoxin)으로서 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL가 되게 한 후 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 단, 환산계수 2.1[티오설탑의 분자량(309)/네레이스톡신 분자량(149)]을 곱하여 티오설탑(thiosultap)으로 환산한다.

마) 2% 시스테인(cysteine) 용액 : 무수염산시스테인  (L-cysteine-HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산 용액 950 mL에 녹인 후 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 pH 4로 맞춘 다음 0.02 N 염산용액을 첨가하여 1,000 mL가 되게 한다.

바) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액 : 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 넣고 2% 시스테인 용액 150 mL를 넣은 후 30분간 진탕 추출한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액 120 mL를 별도의 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 취한다. 여기에 3% 염화니켈 용액과 진한 암모니아수를 각각 4 mL씩 첨가한 다음 5분간 진탕한 후 70℃ 수욕상에서 1시간 동안 진탕 반응시킨다. 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 다음 10 N 황산 용액을 첨가하면서 pH 5로 맞춘 후 헥산 50 mL를 가하여 진탕한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 버린 다음 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하면서 pH 9로 맞춘다. 여기에 염화나트륨 12 g과 에틸아세테이트 100 mL를 가한 후 진탕하고, 다시 7600 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 다음 상등액(에틸아세테이트 층) 80 mL를 감압농축플라스크에 취하여 40℃ 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 메탄올 2 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m ×  0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 100℃

(5) 검출기 온도 : 250℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

머무름 시간(분)

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 네레이스톡신(4.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 네레이스톡신을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 2 μL

(10) 분자량 범위 : 50∼200 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
8.9	149	149, 70, 103

(주. 분자량은 티오설탑이 전환 된 네레이스톡신의 분자량임)

4.1.4.146 이소펜포스-메틸

(Isofenphos-methyl)

1) 시험법 적용범위

곡류, 두류, 채소류 및 과실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이소펜포스-메틸을 아세토니트릴로 추출한 후 후로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소 ․ 인 검출기(GC-NPD, Gas Chromatograph -Nitrogen Phosphorous Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 이소펜포스-메틸 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)으로 희석하여 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 1.0, 2.0 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 후로리실(Florisil) 카트리지 : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(500 mg, 6 cc)를 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 정치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화한 다음 이를 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 상기 여액과 합한다. 여액을 염화나트륨 15 g이 들어있는 분액깔때기에 옮긴 후 분액깔때기를 심하게 흔들어 1시간 정치한 다음 아세토니트릴층을 감압농축플라스크에 취하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 4 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 카트리지에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL를 넣고 유출시킨다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 4 mL를 컬럼에 가하여 15 mL 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL를 용출시켜 상기 시험관에 합한다. 이 용출액을 40℃ 이하 수욕상에서 일정량이 남도록 감압농축한 후 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)을 가하여 최종 부피가 5 mL가 되도록 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 270℃까지 승온하여 15분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

머무름 시간(분)

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 이소펜포스-메틸(20.0분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 이소펜포스-메틸을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 270℃까지 승온하여 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 1 μL

(10) 분자량 범위 : 100∼350 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
16.8	331	199, 121, 241

4.1.4.147 클로로피크린(Chloropicrin)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로로피크린을 에틸아세테이트로 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD, Gas Chromatograph -Electron Capture Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph -Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 표준원액 : 클로로피크린 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

다) 표준용액 : 표준원액을 에틸아세테이트로 희석하여 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.5 μg/mL가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 5 g을 정밀히 달아 무수황산나트륨 2 g이 들어있는 20 mL 헤드스페이스 바이알에 넣는다. 에틸아세테이트 10 mL를 첨가한 후 헤드스페이스 바이알용 마개로 밀봉한다. 바이알을 10분간 심하게 흔들어 5분간 정치한 다음 주사기로 상층액 약 3 mL를 취한다. 이 추출액을 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 200℃

(4) 오븐 온도 : 40℃에서 시험용액을 주입한 후 10분간 유지하고 20℃/min의 비율로 200℃까지 승온하여 2분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : split mode(10:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.5 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

클로로피크린

↓

머무름 시간(분)

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 클로로피크린(7.4분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 클로로피크린을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 200℃

(4) 오븐 온도 : 40℃에서 시험용액을 주입한 후 10분간 유지하고 20℃/min의 비율로 200℃까지 승온하여 2분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 사중극자 온도 : 150℃

(8) 주입모드 : splitless mode

(9) 주입량 : 1 μL

(10) 분자량 범위 : 50∼200 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
4.5	164	117, 121, 82

5.～ 6 (현행과 같음)

7. 식품 중 유해물질시험법

7.1～ 7.3 (현행과 같음)

7.4 발기부전치료제 유사물질

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) --- : ------------------ -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------클로로프레타다라필(Chloropretadalafil), 하이드록시클로로데나필(Hydroxychlorodenafil), 디클로로데나필(Dichlorodenafil), 실데나필(sildenafil), -----------

-------------------------

-------.

라) (현행과 같음)

마) sodium-1-hexane sulfonate : ion pair 크로마토그래피용

바) (현행 마)와 같음)

5) (현행과 같음)

6) 시험조작

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) 표준품의 크로마토그램

라) 정량 한계 : 5 mg/kg

7) ～ 9) (현행과 같음)

10) 발기부전치료제 유사물질의 분자량 및 화학구조식

① ～  (현행과 같음)

하이드록시클로로데나필

(Hydroxychlorodenafil)

(C19H23ClN4O3, 390)

디클로로데나필(Dichlorodenafil)

(C19H21Cl2N4O2, 406)

7.5 비만치료제 유사물질

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) --------  : 데스메틸시부트라민(Desmethylsibutramine), 디데스메틸시부트라민(Didesmethylsibutramine), 시부트라민(sibutramine) ------ ----------------------.

라) ～ 마) (현행과 같음)

5) (현행과 같음)

6) 시험조작

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) 표준품의 크로마토그램

라) (현행과 같음)

7) ～ 9) (현행과 같음)

10) 비만치료제 유사물질의 분자량 및 화학구조식

① (현행과 같음)

② 디데스메틸시부트라민

(Didesmethylsibutramine)

(C15H22ClN, 251)