식품의약품안전청공고 제2007- 208호

식품의 기준 및 규격 중 개정(안) 입안예고

2007. 10. 16.

식품의약품안전청

식품의약품안전청공고 제2007-208호

식품의 기준 및 규격을 제․개정함에 있어 이를 국민에게 미리 알려 의견을 듣고자 그 개정취지와 주요내용을 행정절차법 제46조의 규정에 의하여 다음과 같이 공고합니다.

2007년 10월 16일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 중 개정(안)

1. 개정이유

농산물, 인삼에 대한 농약 안전성을 확보하기 위하여 농약잔류허용기준의 제․개정 및 동물용의약품의 잔류허용기준 신설, 식육의 원산지등 표시제도에 대한 사후관리를 위하여 쇠고기의 원산지 판별 시험법 등을 제정하고자 함.

2. 주요내용

가. 쇠고기원산지판별 시험법 신설

나. 식품 중 의약품성분(비만치료제, 당뇨병치료제 등) 불검출 기준 마련

다. 나라신 등 11종 동물용의약품 잔류허용기준 신설

라. 농산물에 대한 농약잔류허용기준(신규 4종, 기준추가 81종) 추가신설 및 농산물의 분류 개정

마. 인삼 및 인삼제품에 대한 농약잔류허용기준(신규10종, 기준추가3종) 신설 및 건삼, 홍삼, 인삼농축액 등의 용어정의 신설

바. 스피라마이신, 말라카이트그린, 크리스탈바이올렛 등 시험법 제․개정

3. 의견제출

이 개정(안)에 대하여 의견이 있는 기관, 단체 또는 개인은 2007년 11월 5일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전청장(참조 : ① 위해기준팀  주소 : 서울특별시 은평구 녹번동 5번지, 전화 02-352-4767, 4798, 팩스 02-352-4606)에게 제출하여 주시기 바라며, 더 자세한 내용을 알고 싶으신 분은 식품의약품안전청 홈페이지(http://www.kfda.go.kr)를 참고하시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 전화번호 및 주소

다. 기타사항

식품의 기준 및 규격 중 제․개정(안)

식품의 기준 및 규격 중 다음과 같이 개정한다.

제3. 1. 중 “30) 식품원재료 분류“를 “31)”로 하고, “30)”을 다음과 같이 신설한다.

30) “건삼”(태극삼 포함)은 수삼을 햇볕․열풍 또는 기타의 방법으로 익히지 아니하고 말린 것, “홍삼”은 수삼을 증기 또는 기타의 방법으로 쪄서 익혀 말린 것, “인삼농축액 및 홍삼농축액”은 수삼․건삼 및 홍삼으로부터 물이나 주정 또는 물과 주정을 혼합한 용매로 추출하여 여과하여 그대로 농축한 것을 말한다.

제 3. 6. 1), (1), ①발기부전치료제 유사물질을 ②로 개정하고 ㉹항을 삭제하고 다음의 ①항을 신설한다.

① 아래의 발기부전치료제․비만치료제․당뇨병치료제 성분과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질 : 검출되어서는 아니된다.(단, 동성분과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질로서 따로 기준․규격이 정하여진 것은 제외한다.)

㉮ 발기부전치료제 분자량 및 화학구조식

a. 실데나필(Sildenafil)

(C22H30N6O4S, 474)

b. 타다라필(Tadalafil)

(C22H19N3O4, 389)

c. 바데나필(Vardenafil)

(C23H32N6O4S, 488)

d. 유데나필(Udenafil)

(C25H36N6O4S, 516)

e. 미로데나필(Mirodenafil)

(C26H37N5O5S, 531)

㉯ 비만치료제 분자량 및 화학구조식

a. 펜플루라민(Fenfluramine)

(C12H16F3N, 231)

b. 리오치로닌(Liothyronine)

(C15H12I3NO4, 650)

c. 레보치록신(Levothyroxine)

(C15H11I4NO4, 776)

d. 에페드린(Ephedrine)

(C10H15NO, 165)

e. 시부트라민(Sibutramine)

(C17H26ClN, 279)

㉰ 당뇨병치료제 분자량 및 화학구조식

a. 글리벤클라미드(Glibenclamide)

(C23H28ClN3O5S, 494)

b. 글리클라짓(Gliclazide)

(C15H21N3O3S, 323)

c. 글리피짓(Glipizide)

(C21H27N5O4S, 445)

제 3. 6. 1), (4), ④ 농산물의 분류 중 견과 종실류내 종실류에 “흑임자(검정깨)”를 삭제하고, 채소류내 엽채류에 “겨자채”를 추가하고, 과실류내 장과류에 “오미자”를 추가한다.

제3. 6. 2), (54) 나라신(Narasin), (55) 라살로시드(Lasalocid), (56) 린코마이신(Lincomycin), (57) 마두라마이신(Maduramycin),  (58) 밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol), (59) 샘두라마이신(Semduramicin), (60) 아빌라마이신(Avilamycin), (61) 아프라마이신(Apramycin), (62) 엔라마이신(Enramycin), (63) 콜리스틴(Colistin), (64) 티아물린(Tiamulin)을 아래와 같이 각각 신설한다.

(54) 나라신(Narasin)

가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.1 0.3 0.5 0.3	알	불검출

(55) 라살로시드(Lasalocid)

소근육 소간 소지방 소신장	0.02 0.02 0.02 0.02	가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.02 0.02 0.02 0.02	유알	0.01 0.05

(56) 린코마이신(Lincomycin)

소근육 소간 소지방 소신장 어류 알	0.1 0.5 0.05 1.0 0.1 0.05	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장 갑각류	0.2 0.5 0.1 1.5 0.1	가금근육 가금간 가금지방 가금신장 유	0.2 0.5 0.1 0.5 0.15

(57) 마두라마이신(Maduramycin)

가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.1 0.8 0.4 1.0	알	불검출

(58) 밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)

소근육 소간 소지방 소신장 유	0.01 0.01 0.01 0.01 0.01	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장 알	0.01 0.01 0.01 0.01 0.02	닭근육 닭간 닭지방 닭신장	0.03 0.03 0.03 0.03

(59) 샘두라마이신(Semduramicin)

가금근육 가금간 가금신장 가금지방	0.1 0.5 0.2 0.5	알	불검출

(60) 아빌라마이신(Avilamycin)

돼지근육 돼지간 돼지신장 돼지지방	0.05 0.05 0.05 0.05	가금근육 가금간 가금신장 가금지방	0.05 0.05 0.05 0.05

(61) 아프라마이신(Apramycin)

소근육 소간 소지방 소신장	0.5 6.0 1.0 10.0	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장	0.1 0.1 0.1 0.1	가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.2 0.8 0.2 0.8

(62) 엔라마이신(Enramycin)

돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장	0.03 0.03 0.03 0.03	닭근육 닭간 닭지방 닭신장	0.03 0.03 0.03 0.03

(63) 콜리스틴(Colistin)

소근육 소간 소지방 소신장 돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장	0.15 0.15 0.15 0.2 0.15 0.15 0.15 0.2	양근육 양간 양지방 양신장 염소근육 염소간 염소지방 염소신장	0.15 0.15 0.15 0.2 0.15 0.15 0.15 0.2	가금근육 가금간 가금지방 가금신장 알 유 어류 갑각류	0.15 0.15 0.15 0.2 0.3 0.05 0.15 0.15

(64) 티아물린(Tiamulin)

소근육 소간 소지방 소신장 염소근육 염소간 염소지방 염소신장	0.1 0.5 0.1 0.5 0.1 0.5 0.1 0.5	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장 가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.1 0.5 0.08 0.04 0.1 0.2 0.1 0.1	양근육 양간 양지방 양신장 알	0.1 0.5 0.1 0.5 1.0

제 3. 6. 3), (4) 나프로파마이드(Napropamide) 중 “견과류”를 “기타견과류”로 한다.

제 3. 6. 3), (8) 다이아지논 (Diazinon)중 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	3.0

제 3. 6. 3), (9) 델타메쓰린 (Deltametrin) 중 다음 항목을 신설한다.

구기자(건조)        2.0

제 3. 6. 3), (22) 디크로프루아니드 (Dichlofluanid)중 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	5.0

제 3. 6. 3), (26) 디페노코나졸(Difenoconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

매실	0.2

제 3. 6. 3), (31) 마이클로부타닐(Myclobutanil)중 “고추(건조) 3.0”을 “고추(건조) 5.0“으로 한다.

제 3. 6. 3), (32) 말라치온 (Malathion)중 “밀 8.0 및 밀가루 1.0”을 각각 “밀 0.5 및 밀가루 0.2”로 한다.

제 3. 6. 3), (35) 메소밀 (Methomyl)중 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	5.0

제 3. 6. 3), (38) 메타락실 (Metalaxyl)중 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	5.0

제 3. 6. 3), (66) 싸이퍼메쓰린 (Cypermethrin)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	1.0

구기자(건조)        5.0

제 3. 6. 3), (68) 싸이할로쓰린 (Cyhalothrin) 중 배추 “1.0”을 “0.2”로 하고 다음 항목을 신설한다.

구기자(건조)        2.0

제 3. 6. 3), (85) 에토펜프록스 (Ethofenprox)중 다음 항목을 각각 신설한다.

배추(건조)	7.0

파  (건조)	10

제 3. 6. 3), (101) 이미다크로프리드 (Imidacloprid)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	3.0

파  (건조)	2.0

딸기               0.3

겨자채             5.0

제 3. 6. 3), (105) 이프로디온 (Iprodione)중 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	15

제 3. 6. 3), (114) 카보후란 (Carbofuran) 중 다음 항목을 신설한다.

매실	0.7

제 3. 6. 3), (125) 클로로타로닐 (Chlorothalonil) 중 “감귤류”를 "기타감귤류“로 하고 다음 항목을 각각 신설한다.

마*	0.1

고추(건조)	15

제 3. 6. 3), (137) 테트라디폰 (Tetradifon) 중 다음 항목을 신설한다.

무화과             1.0

제 3. 6. 3) 중 “(140) 트라로메스린 (Tralomethrin)”을 (140) 트라로메스린 (Tralomethrin, 델타메쓰린(Deltamethrin)으로서)“로 한다.

제 3. 6. 3), (148) 트리플루라린 (Trifluralin)중 "견과류“를 ”기타견과류“로 한다.

제 3. 6. 3), (165) 펜부코나졸 (Fenbuconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

오미자*	3.0

제 3. 6. 3), (179) 폴펫 (Folpet)중 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	25

제 3. 6. 3), (183) 풀루아지호프-부틸 (Fluazifop-butyl) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감자	0.05

무(뿌리)	0.05

무(잎)              0.3

제 3. 6. 3), (185) 프로시미돈 (Procymidone)중 "들깻잎 10.0“을 삭제하고 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	15

제 3. 6. 3), (186) 프로클로라즈 (Prochloraz) 중 자두의 “0.05”를 “0.5”로 한다.

제 3. 6. 3), (188) 프로파모카브 (Propamocarb) 중 다음 항목을 신설한다.

수박	0.7

제 3. 6. 3), (200) 헥사코나졸 (Hexaconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

오미자	1.0

제 3. 6. 3), (203) 벤푸라카브 (Benfuracarb)중 다음 항목을 신설한다.

파                 0.3

제 3. 6. 3), (206) 클로르훼나피르 (Chlorfenapyr)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	5.0

배추(건조)	3.0

감                 0.5

무화과             0.5

복분자             0.5

취나물             3.0

제 3. 6. 3), (207) 테부페노자이드 (Tebufenozide)중 다음 항목을 신설한다.

배추(건조)	3.0

제 3. 6. 3), (212) 플루페녹수론 (Flufenoxuron)중 다음 항목을 신설한다.

배추(건조)	2.0

제 3. 6. 3), (218) 디메토모르프 (Dimethomorph)중 다음 항목을 각각 신설한다.

파  (건조)	15

무화과             3.0

제 3. 6. 3), (220) 디에토펜카브 (Diethofencarb)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	3.0

자두               0.5

제 3. 6. 3), (222) 메파니피림 (Mepanipyrim) 중 다음 항목을 신설한다.

양상추	3.0

제 3. 6. 3), (224) 싸이목사닐 (Cymoxanil)중 다음 항목을 신설한다.

배추(건조)	3.0

제 3. 6. 3), (225) 싸이프로디닐 (Cyprodinil) 중 다음 항목을 신설한다.

키위	3.0

제 3. 6. 3), (226) 싸이프로코나졸 (Cyproconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

감                 0.2

제 3. 6. 3), (227) 아세타미프리드 (Acetamiprid)중 다음 항목을 각각 신설한다.

배추(건조)	10

제 3. 6. 3), (228) 아족시스트로빈 (Azoxystrobin)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	7.0

파  (건조)	7.0

매실	0.5

무화과	2.0

제 3. 6. 3), (230) 크레속심-메칠 (Kresoxim-methyl) 중 다음 항목을 신설한다.

대추	0.3

제 3. 6. 3), (231) 클로르플루아주론 (Chlorfluazuron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

복숭아             0.5

대두	0.1

제 3. 6. 3), (233) 펜시쿠론 (Pencycuron) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기               2.0

제 3. 6. 3), (237) 피메트로진 (Pymetrozin) 중 다음 항목을 신설한다.

겨자채             3.0

제 3. 6. 3), (239) 후루아지남 (Fluazinam)중 다음 항목을 각각 신설한다.

파  (건조)	10

자두               0.5

제 3. 6. 3), (242) 루페누론 (Lufenuron)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	2.0

복분자             0.3

제 3. 6. 3), (248) 아바멕틴 (Abamectin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

매실               0.05

무화과             0.05

제 3. 6. 3), (249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

구기자(건조)         0.1

복분자              0.03

제 3. 6. 3), (251) 에톡사졸 (Etoxazole) 중 다음 항목을 신설한다.

무화과              0.3

제 3. 6. 3), (254) 카보설판 (Carbosulfan) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

배	0.2

복숭아             0.2

매실	0.07

제 3. 6. 3), (257) 플루퀸코나졸 (Fluquinconazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

양상추	1.0

오미자*            3.0

제 3. 6. 3), (259) 피리메타닐 (Pyrimethanil) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

양상추	3.0

오미자*	3.0

자두	2.0

제 3. 6. 3), (265) 디메텐아미드 (Dimethenamid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	0.05

피망	0.05

양배추	0.07

제 3. 6. 3), (290) 인독사카브 (Indoxacarb)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	5.0

배추(건조)	10

파  (건조)	2.0

대두	0.2

복분자	0.5

제 3. 6. 3), (291) 족사마이드 (Zoxamide)중 다음 항목을 각각 신설한다.

배추(건조)	15

무화과	0.5

수박	0.05

제 3. 6. 3), (297) 테트라코나졸 (Tetraconazole)중 다음 항목을 신설한다.

고추(건조)	3.0

제 3. 6. 3), (301) 펜헥사미드 (Fenhexamid) 중 다음 항목을 신설한다.

사과	1.0

제 3. 6. 3), (304) 프로베나졸 (Probenazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	0.07

피망	0.07

배추	0.07

제 3. 6. 3), (309) 플루토라닐 (Flutolanil) 중 다음 항목을 신설한다.

양상추             0.7

제 3. 6. 3), (321) 디노테푸란 (Dinotefuran) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

무(뿌리)	0.05

대두	0.05

제 3. 6. 3), (323) 보스칼리드 (Boscalid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	1.0

키위	5.0

제 3. 6. 3), (325) 시아조파미드 (Cyazofamid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

밀감	0.5

멜론	0.5

참외	0.5

제 3. 6. 3), (326) 아세퀴노실 (Acequinocyl )중 다음 항목을 신설한다.

무화과	2.0

제 3. 6. 3), 중 “(327) 아자페니딘(Azafenidine) 사과 0.1”을 삭제한다.

제 3. 6. 3), 중 “(327) 아자디락틴 (Azadirachtin)을 신설한다.

토마토            0.3

제 3. 6. 3), (332) 크로치아니딘 (Clothianidin)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	10

겨자채	3.0

제 3. 6. 3), (335) 트리프록시스트로빈 (Trifloxystrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

더덕	0.2

마*	0.2

제 3. 6. 3), (337) 티아메톡삼 (Thiamethoxam) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

겨자채	5.0

키위	0.2

제 3. 6. 3), (338) 티아클로프리드 (Thiacloprid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

딸기	2.0

토마토	1.0

매실	0.5

제 3. 6. 3), (345) 피라크로스트로빈 (Pyraclostrobin) 중 다음 항목을 신설한다.

대추	2.0

제 3. 6. 3), (349) 노발루론 (Novaluron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

복숭아	1.0

복분자	2.0

구기자(건조)	5.0

취나물	5.0

제 3. 6. 3), (352) 메톡시페노자이드 (Methoxyfenozide)중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추(건조)	5.0

배추(건조)	20

파  (건조)	10

복숭아	1.0

밤	0.1

복분자	1.0

들깻잎	5.0

취나물	3.0

제 3. 6. 3), (355) 스피로디크로펜 (Spirodiclofen) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

딸기	2.0

유자	2.0

차	5.0

제 3. 6. 3), (358) 이프로발리카브 (Iprovalicarb) 중 다음 항목을 신설한다.

무화과	1.0

제 3. 6. 3), (361) 테플루스린 (Tefluthrin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

파	0.05

고구마	0.05

제 3. 6. 3) 중 “(370) 플루피라조포스(Flupyrazofos) 배추 0.5”을 삭제한다.

제 3. 6. 3) 중 “(370) 벤티아발리카브 (Benthiavalicarb)를 다음과 같이 신설한다.

오이              0.07

포도              0.5

기타농산물        0.07

제 3. 6. 3), (374) 알라니카브(Alanycarb) 중 다음 항목을 신설한다.

사과	0.5

제 3. 6. 3), (379) 플루아크리피림 (Fluacrypyrim) 중 다음 항목을 신설한다.

무화과	0.5

제 3. 6. 3), (380) 피리다릴 (Pyridaryl) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

수박	0.2

오이	0.5

참외	0.5

복분자	1.0

취나물	5.0

제 3. 6. 3), (384) 사이플루페나미드 (Cyflufenamid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감	0.05

배	0.2

복숭아	0.2

멜론	0.2

수박	0.2

제 3. 6. 3), (388) 시안화수소 (Hydrogen cyanide) 중 다음 항목을 신설한다.

오렌지	5.0

제 3. 6. 3), (390) 시메코나졸 (Simeconazole)중 다음 항목을 각각 신설한다.

딸기	0.3

사과	0.3

제 3. 6. 3), (392) 메소트리온 (Mesotrion)중 다음 항목을 각각 신설한다.

옥수수	0.2

제 3. 6. 3)에 (399) 내지 (401)을 각각 다음과 같이 신설한다.

(399) 사이플루메토펜 (Cyflumetofen)

밀감              0.5

사과              0.3

기타농산물        0.07

(400) 플루오피콜라이드 (Fluopicolide)

고추              0.3

피망              0.2

오이              0.5

(401) 오리사스트로빈 (Orysastrobin)

쌀                0.1

기타농산물        0.07

제 3. 6. 3) 농산물의 농약잔류허용기준, “주3 기타농산물 --- 적용한다.” 다음에 “(기타농산물의 기준은 해당 농약에서 기준이 설정되지 아니한 농산물에서 농약이 검출될 경우에 적용하는 기준임)”을 추가한고 “주6”다음에 “주7” 및 “주8”을 다음과 같이 신설한다.

주7 실고추 및 고춧가루에서 농약이 검출될 경우 고추(건조)의 기준을 적용한다.

주8 복분자에는 나무딸기와 산딸기가 포함된다.

제 3. 6. 5), (20) “에틸렌비스디치오카바메이트〔Ethylenebis(dithiocarbamate)s〕”를 “에틸렌비스디치오카바메이트*〔Ethylenebis(dithiocarbamate)s〕”로 한다.

제 3. 6. 5), (30) 디메토모르프(Dimethomorph)에 (30) 디메토모르프* (Dimethomorph)로 하고 다음 항목을 각각 신설한다.

건삼	1.0

홍삼	0.7

제 3. 6. 5), (31) 클로로타로닐(Chlorothalonil)을 (31) 클로로타로닐*로 한다

제 3. 6. 5), (32) 테플루스린(Tefluthrin)을 (32) 테플루스린* (Tefluthrin)로 하고 다음 항목을 신설한다.

인삼농축액	0.3

제 3. 6. 5), (33) 플루퀸코나졸(Fluquinconazole)을 (33) 플루퀸코나졸* (Fluquinconazole)로 하고 다음 항목을 각각 신설한다.

건삼	0.5

홍삼	0.5

인삼농축액	0.5

제 3. 6. 5)에 (34) 내지 (43)을 다음과 같이 신설한다.

(34) 아미트라즈(Amitraz : 아미트라즈와 (2,4-Dimethylphenyl)-N'- methyl formamidine의 합계)

수삼                0.05

(35) 부프로페진(Buprofezin)

수삼                0.07

(36) 싸이할로쓰린 (Cyhalothrin)

수삼                0.05

(37) 푸루실라졸 (Flusilazole)

수삼                0.07

(38) 프로클로라즈 (Prochloraz)

수삼                0.3

(39) 디치아논(Dithianon)

수삼                0.2

(40) 싸이목사닐* (Cymoxanil)

수삼                0.2

(41) 클로치아니딘 (Clothianidin)

수삼                0.2

(42) 티아메톡삼 (Thiametoxam)

수삼                0.1

(43) 에타복삼 (Ethaboxam)

수삼                0.2

제4. 2-1. 4). (4)를 다음과 같이한다.

(4)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 2-2. 4). (10)을 다음과 같이한다.

(10)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 2-3. 4). (7)을 다음과 같이한다.

(7)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 2-4. 4). (6)을 다음과 같이한다.

(6)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 2-5. 4). (4)를 다음과 같이한다.

(4)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 2-6. 4). (3)을 다음과 같이한다.

(3)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 2-7. 4). (3)을 다음과 같이한다.

(3)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 10-1. 4). (3)을 다음과 같이한다.

(3)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 10-2. 4). (3) 내지 (4)를 다음과 같이한다.

(3)주석 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 10-3. 4). (3)을 다음과 같이한다.

(3)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 10-4. 4). (3) 내지 (4)를 다음과 같이한다.

(3)주석 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 10-5. 4). (2) 내지 (3)을 다음과 같이한다.

(2)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(3)주석 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 11-1. 4). (2)를 다음과 같이한다.

(2)주석 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 12-5. 4). (9)를 다음과 같이한다.

(9)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 16-4. 4). (3) 내지 (4)를 다음과 같이한다.

(3)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4)주석 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 16-5-1. 4). (2) 내지 (3)을 다음과 같이한다.

(2)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(3)주석 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 16-13. 4). (3) 내지 (4)를 다음과 같이한다.

(3)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4)주석 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 20-4. 4). (3)을 다음과 같이한다.

(3)비소 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 20-15. 4). (8) 내지 (9)를 다음과 같이한다.

(8)비소 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(9)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제4. 20-16. 4). (2)를 다음과 같이한다.

(2)납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제5의2. 1. 3). (4). ②를 다음과 같이한다.

②납 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제7. 6. 3) (4)를 삭제하고 (5)를 (4)로 한다.

제 7. 15. 2), (2), ①중  클로람페니콜(Chloramphenicol) 다음에  스피라마이신(Spiramycin)을 아래와 같이 신설하고, ㉸ 마크로라이드계 항생물질(스피라마이신(Spiramycin), 타이로신(Tylosin))을 ㉸ 타이로신(Tylosin)으로 하고 내용 을 다음과 같이 한다. 또한 제 7. 15. 8), (1) 중 ③ 스피라마이신(Spiramycin)을 삭제한다.

㉸ 타이로신(Tylosin)

Ⓐ 정량법의 원리

검체에 아세토니트릴을 가하여 균질화하고 디클로로메탄으로 추출한 후 농축건조하여 30% 아세토니트릴용액에 용해시킨 후 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 측정한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 표준용액 : 타이로신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 용량플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 μg/mL 농도가 되게 한다.

㉡ 이동상 : 1 L 용량플라스크에 무수제이인산나트륨 1.6 g과 무수제일인산나트륨 5.35 g을 취하여 물 800 mL를 가하여 용해시킨 후 표시선까지 물을 채운 다음 이 액 440 mL와 아세토니트릴 560 mL를 혼합한 후 용매여과장치로 여과하여 이동상으로 사용한다.

㉢ 용액 A : 0.05 M 인산완충액(pH 8.0) : 아세토니트릴(70:30)

㉣ 용액 B : 30% 아세토니트릴

㉤ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심관에 취하고 아세토니트릴 25 mL를 가하여 검체를 완전히 균질화 시킨 다음 다시 아세토니트릴 15 mL를 가하고 진탕기에서 10분간 강하게 진탕한다. 이것을 800 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 120 mL 증발플라스크에 옮기고 40℃에서 2～5 mL까지 농축한 다음 다시 50 mL 원심관에 옮기고 용액 A 10 mL로 증발플라스크를 세척하여 농축액에 합친다. 이것을 헥산 10 mL로 한번 세척한 후 디클로로메탄 10 mL 씩으로 2회 추출한 다음 증발 건조시키고 용액 B 1 mL에 잘 용해하여 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 칼 럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 0.05 M 인산완충액(pH 6.2) : 아세토니트릴(44:56)

- 유 속 : 1.0 mL/분

- 측정파장 : 288 nm

㉡ 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 타이로신의 함량을 각각 구한다.

스피라마이신(Spiramycin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 스피라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 스피라마이신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 용량플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 μg/mL 농도가 되게 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5)과 아세토니트릴 혼합액(70:30)에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5) : 1 L 정용플라스크에 인산이수소나트륨․2수화물(NaH2PO4․2H2O) 3.9 g을 넣고 물 800 mL로 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다. pH는 인산으로 조정한다.

㉥ 0.025 M 인산완충용액(pH 2.5) : 1 L 정용플라스크에 인산이수소나트륨․2수화물(NaH2PO4․2H2O) 2.0 g을 넣고 물 800 mL로 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다. pH는 인산으로 조정한다.

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 1 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 20 mL를 가하여 20분간 균질화 한다. 균질액을 2,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 여과지로 여과하여 분액깔대기에 옮긴다. 위의 과정을 2회 반복하여 상층액을 합한 후 아세토니트릴포화헥산 10 mL를 넣고 진탕한다. 층이 분리될 때까지 정치하여 헥산층을 버리고 추출된 용액을 무수황산나트륨에 통과시키고 45℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물은 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5)과 아세토니트릴 혼합액(70:30) 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 칼    럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이 동 상

이동상 A : 0.025 M 인산완충용액(pH 2.5),

이동상 B : 이동상 A와 아세토니트릴 혼합액(60:40)

시간(분)	A(%)	B(%)
0.00	60	40
20.00	0	100

- 유    속 : 1.0 mL/분

- 측정파장 : 232 nm

㉡ 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 스피라마이신의 함량을 각각 구한다.

제 7. 15. 3), (2)중  디메트리다졸(Dimetridazole)을 삭제하고  디메트리다졸, 메트로니다졸, 로니다졸(Dimetridazole, Metronidazole, Ronidazole)을 아래와 같이 신설한다.

디메트리다졸, 메트로니다졸, 로니다졸

(Dimetridazole, Metronidazole, Ronidazole)

㉮ 정량법의 원리

시료에 아세토니트릴을 가하여 추출하고 헥산으로 지방성분을 제거한다. 추출액은 감압농축하고 메탄올에 녹여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 디메트리다졸, 메트로니다졸 및 로니다졸 표준품을 정밀히 달아 에틸아세테이트에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 에틸아세테이트에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.05 M 인산완충용액(pH 7.0) : 1 L 정용플라스크에 인산이수소암모늄(NH4H2PO4) 5.75 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 20 mL을 넣어 균질화한 후 4℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리 한다. 상등액을 분액깔대기에 옮기고 헥산 20 mL를 넣고 강하게 진탕한 후 층이 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 취하여 프로판올 5 mL을 가하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 잔류물을 메탄올 1 mL에 녹이고 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 0.05 M 인산완충용액 : 아세토니트릴(88:12)

- 유속 : 1.0 mL/min

- 측정파장 : 312 nm

Ⓑ 정량시험

- 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 디메트리다졸, 메트로니다졸 및 로니다졸의 함량을 각각 구한다.

- 정량한계 : 0.02 mg/kg

제 7. 15. 3), (2)중  니트로후란계 대사물질(SEM, AHD, AMOZ, AOZ)을 아래와 같이 개정한다.

니트로푸란계 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)

㉮ 정량법의 원리

시료 중의 푸라졸리돈, 푸랄타돈, 니트로푸라존 및 니트로푸란토인의 대사물질을 염산용액으로 처리하여 니트로벤즈알데히드(NBA)로 유도체화한 후 에틸아세테이트로 추출․농축하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준품 : 3-amino-2-oxazolidinone(AOZ),

3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone(AMOZ),

semicarbazide(SEM),

1-aminohydantoin(AHD)

Ⓓ 내부표준품 : 3-amino-2-oxazolidinone-D4(AOZ-D4),

3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone-D5(AMOZ-D5)

Ⓔ 표준원액 : 니트로푸란계 대사물질 표준품(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓕ 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 각각 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL 농도가 되게 하여 사용한다.

Ⓖ 내부 표준물질 표준원액 : 내부 표준품(AOZ-D4, AMOZ-D5)을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓗ 내부 표준물질 혼합용액 : 내부 표준물질 표준원액을 하나의 정용 플라스크에 메탄올로 희석하여 각각 100 ng/mL가 되게 혼합하여 사용한다.

Ⓘ 0.05 M 유도체화용액 : 2-니트로벤즈알데히드(2-NBA, MW 151.12, 99%) 0.76 g을 디메틸설폭사이드 100 mL에 녹여 유도체화 용액으로 한다. 이 용액은 사용직전에 만들어 사용한다.

Ⓙ 1 M 인산칼륨 용액 : 1 L 정용플라스크에 인산일수소칼륨(K2HPO4,  MW 174.2, 99.2%) 175.6 g을 가하여 물 400 mL에 녹인후 물로 표시선까지 채운다.

Ⓚ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 벌꿀

균질화한 시료 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 ㉠(내부표준물질 혼합용액 100 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 5 mL와 0.05 M 유도체화 용액 200 μL를 넣고 37℃ 수욕조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 1 M 인산칼륨용액 5 mL와 1 M 수산화나트륨용액 100 μL를 가해 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 용액에 헥산 4 mL를 가하여 균질화한 후 2,000 G에서 10분간 원심분리 한다. 하층을 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 4 mL를 가하여 혼합한 후 2,000 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 질소하에서 농축 건조한 후 50% 메탄올 0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 멤브레인필터로 여과하여) 시험용액으로 한다.

Ⓑ 벌꿀을 제외한 모든 식품

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 ㉡(내부표준물질 혼합용액 200 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 10 mL와 0.05 M 유도체화 용액 200 μL를 넣고 37℃ 수욕조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 0.1 M 인산칼륨용액 1 mL와 1 M 수산화나트륨용액 500 μL를 가해서 혼합한다. 0.125 M 염산용액과 0.125 M 수산화나트륨용액으로 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 시험용액의 잔사를 제거하기 위해 2,000 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 원심분리관에 옮겨 헥산 10 mL(우유, 계란의 경우 20 mL)를 가하여 혼합한 후 2,000 G에서 5분간 원심분리 한다. 하층을 새로운 원심관에 취하고 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 혼합하고 2,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 질소하에서 농축 건조한 후 이동상 0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 멤브레인필터로 여과하여) 시험용액으로 한다.

㉲ 표준용액의 유도체화

음성시료 5 g(벌꿀의 경우 2 g)을 50 mL 원심관에 넣고 농도 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL인 표준용액을 각각 100 μL를 첨가하여 ㉱의 ㉡(벌꿀의 경우 ㉠)을 따른 후 분석시 표준용액으로 사용한다.

㉳ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

- 칼  럼 : C18(2.1 × 150 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 메탄올 : 10 mM 암모늄포메이트 (55:45, 개미산으로 pH 3.5로 조정)

- 유  속 : 0.2 mL/분

㉡ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary temperature : 350℃

- Collision gas : Ar

- Collision energy : 10~15 V

Ⓑ 정량

㉠ 유도체화한 시험용액 및 표준용액을 질량분석기에 주입하여 아래표의 분석물질별 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여 내부표준물질 AOZ-D4의 m/z 240 이온에 대한 AOZ m/z 149, SEM m/z 192, AHD m/z 178이온의 면적비와 AMOZ-D5의 m/z 340 이온에 대한 AMOZ m/z 262 이온에 대한 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 니트로푸란계 대사물질의 함량을 구한다.

대상물질	분석물질	Precursor Ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
AOZ	NBAOZ	236	149, 134
AMOZ	NBAMOZ	335	262, 191
SEM	NBSEM	209	192, 166
AHD	NBAHD	249	178, 134
AOZ-D4	NBAOZ-D4	240	134
AMOZ-D5	NBAMOZ-D5	340	296

㉡ 정량한계 : 1 μg/kg

제 7. 15. 3), (2)중  플루메퀸(Flumequin) 다음에  말라카이트 그린(Malachite Green), 크리스탈 바이올렛(Crystal Violet)을 신설한다.

말라카이트 그린(Malachite Green), 크리스탈 바이올렛(Crystal Violet)

㉮ 정량법의 원리

시료를 아세토니트릴과 디클로로메탄으로 추출하고 감압농축한 후, 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ)을 이용하여 류코말라카이트 그린 및 류코크리스탈 바이올렛을 각각 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛으로 산화시키고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/가시부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/가시부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 하고 갈색병에 보관한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(2,3-Dichloro-5,6- dicyano-1,4-benzoquinone, DDQ) 용액 : 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논 0.227 g을 100 mL 용량플라스크에 취하고 아세토니트릴로 녹여 표시선까지 채워 10 mM DDQ 용액을 만들어 냉장 보관한다. 사용직전에 10 mM DDQ 용액을 아세토니트릴로 10배 희석하여 사용한다.

Ⓕ 0.25% 염산수산화아민 용액(Hydroxylamine hydrochloride, HAH) : 염산수산화아민 25 g을 100 mL 용량플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓖ 1 M p-톨루엔설폰산(p-Toluene sulfonic acid, p-TSA) 용액

: p-톨루엔설폰산 9.5 g을 50 mL 용량플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓗ 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 암모늄아세테이트 완충용액

: 7.7 g 암모늄아세테이트를 1 L 용량플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다. 아세트산 8 mL와 1 M p-톨루엔설폰산 5 mL를 넣어 pH 4.5로 조정한다. 이 액은 이동상 A 용액 조제 시 사용한다.

Ⓘ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 암모늄아세테이트 완충용액 5 mL, 25% 염산수산화아민(HAH) 용액 1 mL, 1 M p-톨루엔설폰산(p-TSA) 용액 100 μL를 넣어 30초간 강하게 균질화한다. 여기에 아세토니트릴 25 mL를 넣어 30초간 강하게 진탕하고 다시 알루미나 10 g을 넣어 15초간 강하게 진탕한 후 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리하고 상등액은 미리 물 50 mL와 디에틸렌글리콜 2 mL를 넣은 250 mL 분액깔대기에 옮긴다. 다시 아세토니트릴 25 mL를 넣어 1분간 강하게 진탕하고 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리한 후 상등액을 앞의 액과 합한다. 디클로로메탄 25 mL를 넣고 분액깔대기를 30초간 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층(아래층)을 취한다. 다시 디클로로메탄 25 mL를 넣어 이 과정을 한 번 반복하고 40℃ 수욕 중에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 3 mL에 녹이고 1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ) 용액 3 mL를 넣어 30분간 반응시킨다. 알루미나 카트리지(충진제 1 g) 및 프로필설폰산(Propylsulfonic acid, PRS) 카트리지(충진제 500 mg)를 미리 메탄올 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 활성화시키고, 프로필설폰산 카트리지에 아세토니트릴 5 mL를 넣은 후 알루미나 카트리지를 그 위에 연결한다. 시료를 추출한 액과 추출액이 담겨 있던 플라스크를 아세토니트릴 5 mL로 2회 세척한 액을 알루미나 카트리지에 흡착시키고 감압하여 분당 4 mL로 용출하고 알루미나 카트리지를 제거한다. 프로필설폰산 카트리지를 아세토니트릴 5 mL로 세척하고 감압하여 건조시킨 후 15 mL 원심분리관에 이동상 A 용액 4 mL로 용출한 액을 받아 이동상 A 용액으로 5 mL 눈금에 맞춘 후 0.2 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

ⓐ 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 이동상

- 이동상 A(95%) : 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 암모늄아세테이트 완충용액 : 아세토니트릴(50:50)

- 이동상 B(5%) : 아세토니트릴

ⓒ 유속 : 1.0 mL/min

ⓓ 측정파장 : 618 nm(말라카이트 그린)

588 nm(크리스탈 바이올렛)

Ⓑ 정량시험

- 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛의 함량을 각각 구한다.

- 정량한계 : 2 μg/kg

Ⓒ 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 확인한다.

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

․ 이동상 B : 0.1% 개미산 메탄올용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.5	80	20
6.0	0	100
8.0	0	100
8.5	80	20
10.0	80	20

- 유속 : 0.3 mL/min

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary Temperature : 450℃

- Collision gas : N2

Compound	Precursor Ion (m/z)	Fragment Ion (m/z)	Collision Energy (V)
Malachite green	329	313	51
	329	208	51
	329	165	91
Crystal violet	372	356	55
	372	340	75

제 7. 15. 3), (2)에  클렌부테롤(Clenbuterol)을 아래와 같이 신설한다.

클렌부테롤(Clenbuterol)

㉮ 정량법의 원리

시료를 분해효소로 분해한 후 에틸아세테이트로 추출하거나 아세토니트릴과 에틸아세테이트를 넣어 추출하고 농축한 후 메탄올:물(20:80) 혼합용매를 넣어 용해한 다음 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체 크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 분해효소제 : βꠀ글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/

arylsulfatase)

Ⓓ 내부표준물질 : 클렌부테롤 D9(Clenbuterol D9)

Ⓔ 표준원액 : 클렌부테롤 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓕ 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 10 ng/mL로 한다.

Ⓖ 내부표준용액 : 클렌부테롤 D9의 10 ng/mL 메탄올용액으로 한다.

Ⓗ 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) : 500 mL 정용플라스크에 1 M 인산일수소칼륨(K2HPO4) 용액 6.6 mL와 1 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 용액 43.4 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

Ⓘ 트리스완충용액(Tris-buffer, pH 9.5) : Tris(hydroxymethyl)amino -methane 에 염산을 넣어 pH 9.5로 한다.

Ⓙ Divinylbenzene-N-vinylpyrrolidone Copolymer(충진제) 카트리지 칼럼 : HLB (Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 또는 이와 동등한 것

Ⓚ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

균질화한 시료 5 g를 50 mL 원심분리관에 취하여 내부표준용액 400 μL를 넣고 아세트산 200 μL, 아세토니트릴 5 mL, 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 10분간 균질화한 후 4,000 × g에서 5분간 원심분리 한다. 상등액을 55℃에서 감압하여 농축하고 잔류물에 메탄올:물(20:80) 혼합용액 20 mL를 가하여 용해한 후 염산으로 pH 1.0으로 맞춘다. 이 액에 헵탄 3 mL를 가하여 섞은 다음 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 유기용매층(상층)은 제거하고 이 과정을 한 번 반복한다. 물층에 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH 7.0이 되도록 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 3 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 200 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 유(乳)를 제외한 모든 식품

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 내부표준용액 400 μL를 넣고, 트리스 완충용액(pH 9.5) 5 mL와 프로테아제(Protease) 5 mg을 넣어 60℃에서 16시간 반응시킨다. 실온까지 냉각한 후 아세트산 15 μL와 2 M 암모늄 아세테이트 완충용액(pH 5.2) 1 mL를 넣고 분해효소제 40 μL를 가한다. 37℃에서 2시간 동안 가수분해한 후 포화염화나트륨용액 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액를 사용하여 pH 12로 조정한다. 이 용액에 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 진탕하고 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 2회 추출하고 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물에 메탄올:물(20:80) 혼합용액 20 mL를 가하여 용해한 후 염산으로 pH 1.0이 되도록 한다. 이 액에 헵탄 3 mL를 가하여 섞은 다음 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 유기용매층(상층)은 제거하고 이 과정을 한 번 반복한다. 물층에 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH 7.0이 되도록 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 3 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 200 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상

- 이동상 A : 물:아세토니트릴(95:5) 용액에 10 mM 암모늄 아세테이트가 되도록 녹인 후 아세트산으로 pH 4.3으로 조정한다.

- 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	100	0
2.0	100	0
6.0	10	90
8.0	0	100

ⓓ 유속 : 0.15 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 330℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 16 V

Ⓑ 정량

㉠ 표준용액을 0, 20, 40, 100, 200, 400 μL를 시험관에 취하고 각각 내부표준용액 400 μL를 넣고 질소농축한 후 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 내부표준물질 클렌부테롤 D9의 m/z 204 이온에 대한 클렌부테롤 m/z 203 이온의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 클렌부테롤의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
클렌부테롤	277	203, 259
클렌부테롤 D9	286	204, 268

㉡ 정량한계

ⓐ 유(乳) : 0.05 μg/kg

ⓑ 유(乳)를 제외한 모든 식품 : 0.2 μg/kg

제 7. 22. 1), (6)항을 삭제한다.

제7 일반시험법에 27.소고기원산지판별 시험법을 다음과 같이 신설한다.

27. 쇠고기원산지판별 시험법

쇠고기원산지판별 시험법은 식육원산지 판별 마커*(marker)를 사용하여 한우와 비한우(육우, 젖소, 수입산을 포함한다. 이와 같이 한다)를 판별하는 방법으로서 소의 염색체 내에서 단일염기다형성(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)이 발생하는 빈도를 한우와 비한우에서 각각 측정하여 차이를 보이는 경우, 이를 후보 마커로 이용하여 최적의 마커조합을 구성한 다음, 한우와 비한우를 판별한다.

최종 선발된 70개의 단일염기다형성(SNP) 마커를 조합하여 한우와 비한우를 판별하도록 한다. 본 마커조합은 단일 마커가 아닌 70개의 마커가 지닌 판별력을 동시에 측정함으로써 판별의 정확도가 매우 높아 식육원산지 판별에 적합하다. 쇠고기 시료의 DNA에서 실험을 통해 70개 마커 각각의 유전형을 알아낸 후 각 마커의 유전형에 따른 고유의 판별값을 이용하여 한우와 비한우를 구분한다.

*마커(marker) : 생명체가 가지고 있는 DNA 염기서열중 특수한 목적으로 선별된 표지 유전자 서열 및 부위

1) 검체의 채취

검체의 채취는 식품공전의 “제2. 검체의 채취 및 취급방법”을 기본 원칙으로 다음과 같이 한다.

(1) 검체 채취와 동시에 음식점의 식육 표시내용(한우, 육우, 젖소, 수입육 등)을 채취용 용기에 기입한다.

(2) 채취된 식육 검체가 손상되지 않도록 주의하여야 하고, 미생물의 오염 등이 되지 않도록 주의한다.

(3) 검체채취 기구 및 용기

① 기구 및 용기는 멸균된 일회용 용기를 이용하며 운반시 파손 및 오염의 위험이 없는 것을 사용한다.

② 검체와 직접 접촉하는 기구 및 용기는 검사결과에 영향을 미치지 않는 것으로 한다.

③ 검체채취 및 기구․용기의 종류

- 채취용 기구 : 핀셋, 1회용 칼 등

- 채취용 용기․포장 : 검체봉투 등

- 소독용구 : 비닐 위생장갑, 알코올, 솜 등

- 기 타 : 테이프, 아이스박스, 사진기, 필기구, 아이스팩 등

(4) 검체수거 방법

① 채취자는 일회용 비닐 위생장갑을 착용하고 약 30~50g (손가락 마디 하나 크기)정도를 채취하여 즉시 검체봉투에 넣어 봉인한다.

② 정보 기입시에는 유성펜을 이용하며, 누구나 알아볼 수 있는 관련 정보를 명시한다.

(5) 검체의 운반 요령

① 채취된 검체는 오염, 파손, 손상, 변형 등이 되지 않도록 주의하여 운반한다.

② 장거리 운송시 검체는 냉장상태를 유지하면서 운반한다.

③ 멸균용기에 채취하여 24시간 이내에 식품위생검사기관에 운반하여야 하며 부득이한 사정으로 즉시 송부하지 못할 때에는 냉동 보관한다.

④ ‘음식점 식육 원산지 표시제’와 관련된 검체 수거시에는 서류검사와 시험분석을 병용하기 위해 수거 시료에 대한 정확한 정보가 요구되어, 다음 관련 서류 사본을 함께 확보하도록 한다.

※ 음식점영업자 확인서, 등급판정 확인서, 거래명세표, 검사증명서 등의 관련 서류사본

(6) 검체의 보관 : 검체가 변질되지 않도록 냉동, 밀폐 보관한다.

2) 판별 시험

※ 쇠고기원산지판별에 대한 시험법은 이 공전에 있는 간이시험방법(KoBreed kit)으로 시험함을 원칙으로 한다.

(1) 쇠고기 검체에서 DNA 추출

① 0.5 g의 검체를 잘게 다져 1.5 mL 튜브에 옮긴다.

② 핵산 해리 혼합액을 300 uL 첨가하고 단백질분해효소 K (20㎎/mL 농도)를 10 uL 첨가한다.

③ 잘 혼합한 후 검체가 완전히 용해될 때 까지 55℃ 항온수조에 둔다 (약 40분～1시간 30분). 이때 10분 간격으로 약 10～20초 간 혼합기를 이용하여 잘 혼합한다.

④ 얼음 위에 3분 간 둔 뒤 단백질 침전 용액을 100 uL 첨가한 후 20초 간 혼합기를 이용하여 잘 혼합한다.

⑤ 얼음 위에 5분 간 둔 뒤 14,000 rpm 에서 5분 간 원심분리한다.

⑥ 상층액을 새로운 1.5 mL 튜브에 옮기고 이소프로판올 300uL를 첨가하여 위 아래로 뒤집으며 잘 섞어준다.

⑦ 14,000 rpm 에서 5분 간 원심분리한다.

⑧ 상층액을 피펫으로 DNA 응축물이 없어지지 않도록 조심스럽게 버린다.

⑨ 70% 에탄올을 1 mL 넣고 2~3번 위 아래로 뒤집으며 잘 섞은 뒤 14,000 rpm 에서 5분 간 원심분리한다.

⑩ 상층액을 피펫으로 DNA 응축물이 없어지지 않도록 조심스럽게 버리고 상온에서 DNA 응축물을 건조시킨다 (약 5분 간 상온에 방치).

⑪ RNA 분해효소가 첨가된 DNA 재수화 용액 50 uL를 가한다.

⑫ 튜브 끝을 손가락으로 가볍게 치면서 DNA 응축물을 녹인다.

[시약의 조제]

① 핵산 해리 혼합액

Nucleic lysis solution (Promega A7943 또는 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 제품) 500 uL 당 0.5 M EDTA를 120 uL를 첨가해서 조제한다.

② RNA 분해효소가 첨가된 DNA 재수화(rehydration) 용액

DNA rehydration solution 1mL 당 RNase(4 ㎎/mL) 10 uL를 첨가하여 조제한다.

(2) DNA 농도측정

① 모든 DNA 시료 농도는 피코그린 DNA 정량 용액(Molecular probe Cat# P-7581 또는 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 제품)과 lambda DNA (Invitrogen Cat# 25250-28 또는 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 제품)를 이용하여 측정한다.

② Lambda DNA 표준액을 만들기 위해 lambda DNA 원액을 각각 0, 1.5262, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 ng/uL의 농도로 희석한다.

③ 농도별 lambda DNA 희석 시료 2 uL를 98 uL의 피코그린 희석 용액에 넣고 빛이 없는 곳에서 30분 간 상온에서 반응한 후 자외선흡광광도계 (480 nm/520 nm)로 측정한다.

④ 측정된 값과 희석된 농도값을 기초로 표준곡선을 작성한다.

⑤ DNA 시료는 원액 2 uL를 TE 완충액(pH 8.0)으로 10배 희석하여 위와 같은 방법으로 측정하며 표준곡선을 이용하여 정확한 농도를 산출한다. 이때 DNA의 농도가 100 ng/uL 이상이거나 1 ng/uL 이하일 경우 다시 희석하여 재측정한다.

⑥ 최종 DNA 농도가 50 ng/uL이 되도록 TE 완충액(pH 8.0)에 희석한다.

[시약의 조제]

① 피코그린 희석 용액

피코그린 시약을 TE 완충액(pH 8.0)을 사용하여 1:200으로 희석한다.

② TE 완충액(pH 8.0)

각각의 최종농도가 10mM Tris-염산용액(pH 8.0), 1mM EDTA 용액(pH 8.0)이 되도록 멸균증류수를 사용하여 조제한다.

(3) 판별 마커의 게노타이핑(genotyping)

- 준비된 DNA 시료(50 ng/uL)에 대하여 다음의 과정에 따라 실험한다.

① DNA 플레이트 준비

㉮ DNA 플레이트에 5 uL의 DNA 플레이트 제조용 시약을 넣고 DNA 시료(50 ng/uL)를 옮겨 넣는다.

㉯ DNA 플레이트를 가열기로 봉합하고 90℃로 예열 시켜놓은 가열기에서 30분간 반응시킨다.

㉰ 가열 봉합재를 용액이 튀지 않도록 조심스럽게 제거한 후 5 uL의 침전시약을 넣고 용액이 청색으로 변할 때 까지 충분히 혼합한다.

㉱ 15 uL의 2-프로필알콜을 넣고 3000 G로 20분간 원심분리한 후 상층액을 제거하고 상온에서 15~20분간 말린다.

㉲ DNA 플레이트의 각 칸에 10 uL의 혼탁액을 넣고 청색의 침전물이 완전히 풀어질 때까지 충분히 혼합한다.

② 유전형특이연장반응용(Allele-Specific Extension) 플레이트 준비

㉮ 유전형특이연장반응용 플레이트 각 칸에 10 uL의 올리고시약을 넣고 30 uL의 올리고 혼성 접합시약을 추가로 넣는다.

㉯ DNA 플레이트의 봉합을 조심스럽게 제거하고 10 uL의 DNA 반응액을 유전형특이연장반응용 플레이트로 옮기고 비드가 완전히 풀어질 때까지 충분히 혼합한다.

㉰ 70℃로 예열된 가열기에 유전형특이연장반응용 플레이트를 놓고, 즉시 가열기를 30℃로 맞춘다. 30℃로 온도가 떨어질 때까지 놓아둔다.

③ 연장(Extension) 및 접합(Ligation) 반응

㉮ 2분 동안 또는 비드가 한 곳으로 모일 때까지 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓고 비드를 제외한 상층액(~50 uL)을 제거하고 50 uL의 연장접합반응 혼합용액을 넣는다.

㉯ 비드가 완전히 풀어질 때까지 충분히 혼합한다.

㉰ 다시 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓고 비드를 제외하고 연장접합반응 혼합용액을 제거한다.

㉱ ㉯, ㉰의 과정을 반복한다.

㉲ 8-채널 피펫을 사용하여 50 uL의 범용완충액을 유전형특이연장반응용 플레이트의 각 칸에 넣고 2분 동안 비드가 한 곳으로 모일 때까지 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓는다.

㉳ 8-채널 피펫을 사용하여 비드를 제외하고 범용완충액을 제거한다.

㉴ ㉲, ㉳의 과정을 반복한다.

㉵ 8-채널 피펫을 사용하여 37 uL 연장접합반응 효소를 유전형특이연장반응용 플레이트의 각 칸에 넣어주고 플레이트를 접착 필름으로 봉합한 다음 비드가 풀어지도록 1,600~1,700 rpm으로 비드가 완전히 풀어질 때까지 1분간 충분히 혼합한다.

㉶ 유전형특이연장반응용 플레이트를 45℃로 예열시킨 가열기에서 15분간 반응시킨다.

④ PCR 반응

㉮ PCR 혼합용액 튜브에 64 uL의 DNA 중합효소와 50 uL의 Uracil DNA glucosylase를 넣고 충분히 혼합하고 PCR 플레이트에 PCR 혼합액을 30 uL씩 분주한다.

㉯ 2분 동안 또는 비드가 한곳으로 몰릴 때까지 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓고 비드를 제외한 상층액 (~50 uL)를 제거한 후 50 uL의 범용완충액을 넣어준다.

㉰ 다시 비드가 모일 수 있도록 자석 플레이트 위에 2분 동안 올려고 상층액을 모두 제거하고 35 uL의 DNA 해리용액을 유전형특이연장반응용 플레이트의 각 칸에 넣어준다.

㉱ 비드를 풀어주기 위해 1,800-1,900 rpm 으로 1분간 충분히 혼합하고 95℃로 예열시킨 가열기에 1분 동안 올려놓는다.

㉲ 가열기에서 플레이트를 꺼낸 뒤 2분 동안 또는 비드가 모일때까지 자석 플레이트 위에 플레이트를 올려놓은 후 30 uL 상층액을 PCR 플레이트로 옮긴다.

㉳ PCR 플레이트를 가열 봉합하고 유전자 증폭 장비로 즉시 옮긴다.

㉴ 유전자 증폭 장비의 PCR 반응을 다음 그림과 같이 수행한다.

⑤ PCR 반응체의 결합 과정

㉮ 비드용액을 충분히 혼합한 후, 20 uL씩 PCR 플레이트로 옮겨 잘 섞은 후 필터 플레이트로 옮긴다.

㉯ 커버로 덮고 빛을 차단한 채로 상온에서 60분간 두어 결합이 일어나도록 한다.

⑥ VeraCode 비드 플레이트 용 중간 플레이트 준비

㉮ 빈 96 칸 규격의 폐물 수거 플레이트 위에 필터 플레이트 어댑터를 놓고 PCR 반응액이 들어있는 필터 플레이트를 올려놓는다.

㉯ 25℃ 에서 1,000 G(~2,000 G)로 5분 동안 원심분리한다.

㉰ 50 uL의 범용완충액을 필터 플레이트에 넣고 25℃에서 1,000 G (~2,000 G)로 5분 동안 원심분리한다.

㉱ 30 uL의 혼성용액을 중간 플레이트에 분주한다.

㉲ 중간 플레이트와 폐물 수거 플레이트를 교체하고 30 uL의 0.1 N 수산화 나트륨를 필터 플레이트에 분주한다.

㉳ 즉시 25℃에서 1000 G(~2,000 G)로 5분간 원심분리한다.

⑦ VeraCode 비드 플레이트의 혼성 반응

㉮ 15 mL 튜브에 3 mL의 혼성용액과 3 mL의 0.1N 수산화나트륨 용액을 넣고 충분히 혼합하여 혼성용액을 중화시킨다.

㉯ 50 uL의 중화된 혼성용액을 중간 플레이트의 각 칸에 분주하고 중간 플레이트 안의 시료를 4~5회 피펫으로 섞어준다.

㉰ 100 uL의 반응체를 VeraCode 비드 플레이트에 옮긴다.

㉱ 시료가 들어있는 VeraCode 비드 플레이트를 3시간 동안 혼성 (850 G, 45℃) 시킨다.

㉲ VeraCode 비드 플레이트에 200 uL의 세척액을 첨가하고 각 칸의 용액을 피펫으로 섞어준다.

㉳ 각 칸 바닥에 비드가 모이도록 2분 동안 기다린 후 상층액을 제거한다.

㉴ ㉲, ㉳의 과정을 반복한다.

⑧ VeraCode 비드 플레이트 스캐닝

- 반응과정이 끝난 VeraCode 비드 플레이트를 BeadXpress reader로 스캐닝한다. 스캐닝이 완료되면 비드스튜디오 소프트웨어를 이용하여 게노타입을 결정한다.

⑨ 최종 게노타입은 키트 내의 설명에 따라 비드스튜디오 소프트웨어의 보고서 형식을 이용하여 파일 형태로 출력한다.

(4) 결과판정

① 최종 게노타입 파일을 표 1의 쇠고기원산지 판별식*에 의하여 자동 분석하여 판정한다.

* 쇠고기원산지 판별식

SNP별 각각의 게노타입을 표 2와 같이 AA형=0, AB형=1, BB형=2에 해당하는 값을 넣고 한우와 수입육을 각각 0과 1로 판별하는 표 1의 공식에 대입한다. 이때 게노타입에 손실이 있을 경우, 표 2의 해당 값(평균값)을 넣는다.

② 식육판별분석에 의한 추정값이 0.4 이하이면  “한우”로 판정하며, 0.4 보다 크면 “비한우”로 판정한다.

표 1. 쇠고기원산지 판별식

추정값=0.42777+Btau02349×0.03515+Btau03932×0.0469+Btau03016×-0.03033+Btau04630×0.02072+Btau05555×0.03638+Btau03690×-0.01483+Btau03567×0.02053+Btau03413×-0.02079+Btau05032×0.01148+Btau03853×-0.01343+Btau05673×-0.0195+Btau04104×-0.01962+Btau00969×-0.0194+Btau03782×0.02418+Btau03931×-0.02349+Btau01636×0.01319+Btau01748×-0.00863+Btau04647×-0.01528+Btau03717×-0.02244+Btau05169×0.01566+Btau04361×-0.01702+Btau03391×-0.02048+Btau05398×0.02453+Btau00673×-0.0368+Btau00664×0.03165+Btau03806×-0.02264+Btau05707×0.0234+Btau04942×0.01619+Btau03306×-0.01782+Btau04236×0.01198+Btau03623×0.01112+Btau03217×0.01716+Btau04963×-0.0328+Btau03234×-0.01452+Btau04636×-0.0153+Btau04172×0.01795+Btau04394×-0.01164+Btau03816×0.01925+Btau05450×-0.01839+Btau01591×0.02089+Btau00852×-0.01391+Btau03097×-0.0246+Btau05500×-0.01784+Btau01376×-0.0138+Btau05023×0.0182+Btau03654×0.01371+Btau04989×-0.01674+Btau03113×-0.01543+Btau03502×-0.01207+Btau05594×0.02518+Btau04242×0.01787+Btau03432×-0.0111+Btau02169×-0.01168+Btau00951×-0.01366+Btau02080×0.01984+Btau03357×-0.02218+Btau03845×0.05348+Btau05607×-0.01297+Btau02018×0.01858+Btau03735×-0.01353+Btau03246×0.01814+Btau03395×0.01055+Btau03665×-0.0131+Btau04838×0.01021+Btau05640×-0.01577+Btau05638×-0.01154+Btau04511×-0.02096+Btau03324×0.01181+Btau02109×0.01549+Btau03129×0.01808

표 2. 식육원산지 판별 마커의 게노타입 대치값 및 게노타입 손실값

SNPID	Genotype 대치값			Missing	SNPID	Genotype 대치값			Missing
Btau00664	AA=0	AG=1	GG=2	0.768	Btau03735	TT=0	TC=1	CC=2	0.62
Btau00673	TT=0	TA=1	AA=2	0.746	Btau03782	CC=0	TC=1	TT=2	0.575
Btau00852	TT=0	TG=1	GG=2	0.752	Btau03806	CC=0	TC=1	TT=2	0.827
Btau00951	AA=0	AC=1	CC=2	0.348	Btau03816	GG=0	AG=1	AA=2	0.39
Btau00969	GG=0	AG=1	AA=2	0.77	Btau03845	AA=0	AG=1	GG=2	0.401
Btau01376	AA=0	AC=1	CC=2	0.755	Btau03853	CC=0	GC=1	GG=2	0.915
Btau01591	TT=0	TC=1	CC=2	0.941	Btau03931	GG=0	AG=1	AA=2	0.391
Btau01636	TT=0	TC=1	CC=2	0.948	Btau03932	TT=0	TC=1	CC=2	0.616
Btau01748	AA=0	AC=1	CC=2	0.91	Btau04104	GG=0	AG=1	AA=2	0.703
Btau02018	GG=0	AG=1	AA=2	0.729	Btau04172	TT=0	TC=1	CC=2	0.788
Btau02080	AA=0	AG=1	GG=2	0.587	Btau04236	CC=0	GC=1	GG=2	0.632
Btau02109	AA=0	AG=1	GG=2	0.863	Btau04242	CC=0	TC=1	TT=2	0.861
Btau02169	GG=0	AG=1	AA=2	0.906	Btau04361	CC=0	TC=1	TT=2	0.932
Btau02349	CC=0	TC=1	TT=2	0.633	Btau04394	CC=0	AC=1	AA=2	0.987
Btau03016	GG=0	AG=1	AA=2	0.863	Btau04511	CC=0	AC=1	AA=2	0.572
Btau03097	GG=0	AG=1	AA=2	0.773	Btau04630	TT=0	TG=1	GG=2	0.723
Btau03113	CC=0	TC=1	TT=2	0.963	Btau04636	TT=0	TC=1	CC=2	0.612
Btau03129	AA=0	AG=1	GG=2	0.946	Btau04647	AA=0	AG=1	GG=2	0.802
Btau03217	CC=0	AC=1	AA=2	0.83	Btau04838	AA=0	AG=1	GG=2	0.951
Btau03234	TT=0	TC=1	CC=2	0.883	Btau04942	TT=0	TC=1	CC=2	0.544
Btau03246	TT=0	TA=1	AA=2	0.805	Btau04963	GG=0	AG=1	AA=2	0.333
Btau03306	TT=0	TC=1	CC=2	0.584	Btau04989	TT=0	TC=1	CC=2	0.429
Btau03324	GG=0	AG=1	AA=2	0.831	Btau05023	AA=0	AC=1	CC=2	0.69
Btau03357	GG=0	AG=1	AA=2	0.389	Btau05032	GG=0	GC=1	CC=2	0.988
Btau03391	AA=0	AG=1	GG=2	0.945	Btau05169	CC=0	TC=1	TT=2	0.834
Btau03395	AA=0	TA=1	TT=2	0.976	Btau05398	CC=0	TC=1	TT=2	0.378
Btau03413	GG=0	AG=1	AA=2	0.992	Btau05450	CC=0	TC=1	TT=2	0.834
Btau03432	TT=0	TA=1	AA=2	0.915	Btau05500	CC=0	TC=1	TT=2	0.966
Btau03502	GG=0	GC=1	CC=2	0.995	Btau05555	TT=0	TA=1	AA=2	0.843
Btau03567	TT=0	TC=1	CC=2	0.738	Btau05594	GG=0	TG=1	TT=2	0.86
Btau03623	TT=0	TC=1	CC=2	0.845	Btau05607	AA=0	AG=1	GG=2	0.549
Btau03654	CC=0	TC=1	TT=2	0.956	Btau05638	TT=0	TC=1	CC=2	0.962
Btau03665	AA=0	TA=1	TT=2	0.9	Btau05640	AA=0	AG=1	GG=2	0.685
Btau03690	CC=0	TC=1	TT=2	0.868	Btau05673	CC=0	TC=1	TT=2	0.894
Btau03717	AA=0	AG=1	GG=2	0.98	Btau05707	CC=0	AC=1	AA=2	0.884

부  칙

①(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제3. 6. 3), 4) 및 5)의 농약 및 동물용의약품의 잔류허용기준은 2008년 5월 1일부터 시행한다.

②(경과조치) 이 고시 시행 전에 접수되어 검사가 진행 중인 사항에 대해서는 종전의 규정에 의한다. 다만, 제 3. 6. 1), (1), ①항 및 ②항에 대해서는 이 고시 시행전 접수되어 검사가 진행 중인 사항에 대해서도 이 고시를 적용한다.

③(다른 고시의 개정) 건강기능식품에 관한 법률 제14조에 의한 건강기능식품의 기준 및 규격 중 제3. 2.인삼제품 4) 규격 (11)을 “(11) 잔류농약 : 식품공전에서 정한 인삼의 농약잔류허용기준에 따른다. 단, 인삼분말은 건삼의 기준을, 인삼농축액분말은 인삼농축액의 기준을 적용한다.”로. 제3. 3.홍삼제품 4) 규격 (11)을 “(11) 잔류농약 : 식품공전에서 정한 인삼의 농약잔류허용기준에 따른다. 단, 홍삼분말은 홍삼의 기준을, 홍삼농축액분말은 홍삼농축액의 기준을 적용한다.”로 건강기능식품공전 개정시행과 함께 적용한다.

신․구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제 3. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 용어의 풀이

1)～ 29) (생  략)

<신 설>

30) 식품원재료 분류

2.~5.  (생  략)

6. 기준 및 규격의 적용

1) 식품일반의 규격

(1) 식품 중 유해물질

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

① 발기부전 치료제 유사물질

㉮～㉸ (생  략)

㉹ 발기부전치료제 성분(실데나필, 타다라필, 바데나필, 유데나필, 미로데나필)과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질 : 검출되어서는 아니된다.(단, 발기부전치료제와 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질로서 따로 기준․규격이 정하여진 것은 제외한다.)

(2)～(3) (생  략)

(4) 농산물의 잔류농약 잠정기준적용

①～③ (생  략)

④ 농산물의 분류

대분류	소분류	품 목
곡류	-	생략
서류	-	생략
콩류	-	생략
견과 종실류	견과류	생략
	종실류	참깨, --- 흑임자(검정깨), --- 홍화씨 등
과실류	이과류	생략
	감귤류	생략
	핵과류	생략
	장과류	포도, --- 구기자 등
	열대과일류	생략
채소류	엽채류	배추, --- 우엉잎 등
	엽경채류	생략
	근채류	생략
	과채류	생략
버섯류	-	생략
차	-	생략
인삼	-	생략
호프	-	생략
기타식물류	-	생략

(5) ~ (9) (생 략)

2) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1)~(53) (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

3) 농산물의 농약잔류허용기준

(1)～(3) (생  략)

(4) 나프로파마이드(Napropamide)

--- 견과류 ---

(5)～(7) (생  략)

(8) 다이아지논 (Diazinon)

--- 호프 0.1

(9) 델타메쓰린 (Deltametrin)

--- 호프 5.0

(10) ～ (21) (생략)

(22) 디크로프루아니드 (Dichlofluanid)

--- 호프 5.0

(23) ～ (25) (생략)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

--- 호박 0.3

(27) ～ (30) (생략)

(31) 마이클로부타닐 (Myclobutanil)

--- 호박 1.0, 고추(건조) 3.0,

(32) 말라치온 (Malathion)

---호프 0.5, 밀 8.0, 밀가루 1.0 ---

(33) ～ (34) (생략)

(35) 메소밀 (Methomyl)

--- 호밀 2.0

(36) ～ (37) (생략)

(38) 메타락실 (Metalaxyl)

--- 호프 10.0

(39) ～ (65) (생략)

(66) 싸이퍼메쓰린 (Cypermethrin)

--- 호박 5.0

(67) (생략)

(68) 싸이할로쓰린 (Cyhalothrin)

--- 배추 1.0 --- 호박 0.5

(69) ～ (84) (생략)

(85) 에토펜프록스 (Ethofenprox)

--- 호밀 0.005

(86) ～ (100) (생략)

(101) 이미다크로프리드 (Imidacloprid)

--- 호프 3.0

(101) ～ (104) (생략)

(105) 이프로디온 (Iprodione)

--- 피망 5.0

(106) ～ (113) (생략)

(114) 카보후란 (Carbofuran)

--- 호프 0.5

(115)～(124) (생  략)

(125) 클로로타로닐 (Chlorothalonil)

--- 호박 2.0, 감귤류 5.0

(126) ～ (136) (생  략)

(137) 테트라디폰 (Tetradifon)

--- 호프 1.0

(138)～(139) (생  략)

(140) 트라로메스린 (Tralomethrin)

(141)～(147) (생  략)

(148) 트리플루라린 (Trifluralin)

--- 견과류 ---

(149)～(164) (생  략)

(165) 펜부코나졸 (Fenbuconazole)

--- 피칸 0.1

(166)～(178) (생  략)

(179) 폴펫 (Folpet)

--- 호박 5.0

(180) ～ (182) (생략)

(183) 풀루아지호프-부틸 (Fluazifop-butyl)

--- 피칸 0.05

(185) 프로시미돈 (Procymidone)

--- 들깻잎 10.0, --- 해바라기씨 2.0

(186) 프로클로라즈 (Prochloraz)

--- 자두 0.05 ---

(187) (생  략)

(188) 프로파모카브 (Propamocarb)

--- 피망 1.0

(189)～(199) (생  략)

(200) 헥사코나졸 (Hexaconazole)

--- 포도 0.1

(201)～(202) (생  략)

(203) 벤푸라카브 (Benfuracarb)

--- 쌀 0.01

(204)～(205) (생  략)

(206) 클로르훼나피르 (Chlorfenapyr)

--- 피망 0.7

(207) ～ (206) (생  략)

(207) 테부페노자이드 (Tebufenozide)

--- 파 0.7

(208) ～ (211) (생  략)

(212) 플루페녹수론 (Flufenoxuron)

--- 피망 0.3

(213) ～ (217) (생  략)

(218) 디메토모르프 (Dimethomorph)

--- 피망 0.5

(219) (생  략)

(220) 디에토펜카브 (Diethofencarb)

--- 피망 5.0

(221) (생  략)

(222) 메파니피림 (Mepanipyrim)

--- 포도 5.0

(223) (생  략)

(224) 싸이목사닐 (Cymoxanil)

--- 피망 0.1

(225) 싸이프로디닐 (Cyprodinil)

--- 포도 5.0

(226) 싸이프로코나졸 (Cyproconazole).

--- 사과 0.1

(227) 아세타미프리드 (Acetamiprid)

--- 피망 5.0

(228) 아족시스트로빈 (Azoxystrobin)

--- 호박 0.1

(229) (생  략)

(230) 크레속심-메틸 (Kresoxim-methyl)

--- 피망 2.0

(231) 클로르플루아주론 (Chlorfluazuron)

--- 피망 0.5

(232) (생  략)

(233) 펜시쿠론 (Pencycuron)

--- 쌀 0.3

(234)～(236) (생  략)

(237) 피메트로진 (Pymetrozin)

--- 피망 1.0

(238) (생  략)

(239) 후루아지남 (Fluazinam)

--- 피망 0.3

(240) ～ (241) (생략)

(242) 루페누론 (Lufenuron)

--- 호박 0.5

(243) ～ (247) (생  략)

(248) 아바멕틴 (Abamectin)

--- 호박 0.01

(249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

--- 호박 0.05

(250) (생  략)

(251) 에톡사졸 (Etoxazole)

--- 수박 0.1

(252)～(253) (생  략)

(254) 카보설판 (Carbosulfan)

--- 포도 0.1

(255)～(256) (생  략)

(257) 플루퀸코나졸 (Fluquinconazole)

--- 포도 1.0

(258) (생  략)

(259) 피리메타닐 (Pyrimethanil)

--- 포도 5.0

(260)～(264) (생  략)

(265) 디메텐아미드 (Dimethenamid)

--- 옥수수 0.1

(266)～(289) (생  략)

(290) 인독사카브 (Indoxacarb)

--- 피망 1.0

(291) 족사마이드 (Zoxamide)

--- 피망 0.3

(292) ～ (296) (생  략)

(297) 테트라코나졸 (Tetraconazole)

--- 피망 1.0

(298) ～ (300) (생  략)

(301) 펜헥사미드 (Fenhexamid)

--- 포도 3.0

(302)～(303) (생  략)

(304) 프로베나졸 (Probenazole)

--- 쌀 0.1

(305)～(308) (생  략)

(309) 플루토라닐 (Flutolanil)

--- 쌀 1.0

(310) ～ (320) (생  략)

(321) 디노테푸란 (Dinotefuran)

--- 오이 1.0

(322) (생  략)

(323) 보스칼리드 (Boscalid)

--- 토마토 2.0

(324) (생  략)

(325) 시아조파미드 (Cyazofamid)

--- 피망 2.0

(326) 아세퀴노실 (Acequinocyl)

--- 수박 0.2

(327) 아자훼니딘(Azafenidine)

사과 0.1

<신  설>

(328) ～ (331) (생  략)

(332) 크로치아니딘 (Clothianidin)

--- 피망 2.0

(333) ～ (334) (생  략)

(335) 트리프록시스트로빈 (Trifloxystrobin)

--- 포도 0.5

(336) (생  략)

(337) 티아메톡삼 (Thiamethoxam)

--- 피망 1.0

(338) 티아크로프리드 (Thiacloprid)

--- 피망 1.0

(339)～(344) (생  략)

(345) 피라크로스트로빈 (Pyraclostrobin)

--- 피망 0.5

(346)～(348) (생  략)

(349) 노발루론 (Novaluron)

--- 사과 1.0

(350)～(351) (생  략)

(352) 메톡시페노자이드 (Methoxyfenozide)

--- 파 2.0

(353)～(354) (생  략)

(355) 스피로디크로펜 (Spirodiclofen)

--- 포도 1.0

(356) ～ (357) (생  략)

(358) 이프로발리카브 (Iprovalicarb)

--- 포도 2.0

(359)～(360) (생  략)

(361) 테플루스린 (Tefluthrin)

--- 땅콩 0.05

(362)～(369) (생  략)

(370) 플루피라조포스(Flupyrazofos)

배추 0.5

<신  설>

(371)～(373) (생  략)

(374) 알라니카브(Alanycarb)

--- 오이 0.1

(375)～(378) (생  략)

(379) 플루아크리피림 (Fluacrypyrim)

--- 사과 1.0

(380) 피리다릴 (Pyridaryl)

--- 파 0.5

(381)～(383) (생  략)

(384) 사이플루페나미드 (Cyflufenamid)

--- 포도 0.5

(385)～(387) (생  략)

(388) 시안화수소 (Hydrogen cyanide)

--- 피망 5.0

(389) (생  략)

(390) 시메코나졸 (Simeconazole)

--- 포도 1.0

(391) (생  략)

(392) 메소트리온 (Mesotrion)

--- 쌀 0.2

(393)～(398) (생  략)

<신설>

<신설>

<신설>

주1 ～주2(생략)

주3. 기타농산물의 기준적용은 CODEX 기준이 없을 경우에만 적용한다.

주4～주6(생략)

<신설>

<신설>

4) 축산물의 농약잔류허용기준

(생  략)

5) 인삼의 농약잔류허용기준

(1)~(19) (생  략)

(20) 에틸렌비스디치오카바메이트

〔Ethylenebis(dithiocarbamate)s〕

(21)~(29) (생  략)

(30) 디메토모르프 (Dimethomorph)

--- 수삼 0.2

(31) 클로로타로닐 (Chlorothalonil)

(32) 테플루스린 (Tefluthrin)

--- 수삼 0.2

(33) 플루퀸코나졸 (Fluquinconazole)

--- 수삼 0.2

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

제 4. 식품별 기준 및 규격

2-1 설탕

4) 시험방법

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

2-2 포도당

4) 시험방법

(10) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

2-3 과당

4) 시험방법

(7) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

2-4 엿류

4) 시험방법

(6) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

2-5 당시럽류

4) 시험방법

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

2-6 덱스트린

4) 시험방범

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

2-7 올리고당

4) 시험방범

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

10-1 침출차

4) 시험방법

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

10-2 추출차

4) 시험방법

(3) 주석

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (3) 주석에 따라 시험한다.

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

10-3 분말차

4) 시험방법

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

10-4 과실차

4) 시험방법

(3) 주석

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 ③ 주석에 따라 시험한다.

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

10-5 커피

4) 시험방법

(2) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

(3) 주석

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 ③ 주석에 따라 시험한다.

11. 음료류

11-1 과실채소음료

4) 시험방법

(2) 주석

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 (3) 주석에 따라 시험한다.

12-5 기타 영․유아식

4) 시험방법

(9) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

16-4 인삼음료

4) 시험방법

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

(4) 주석

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (3) 주석에 따라 시험한다.

16—5—1 인삼통‧병조림

4) 시험방법

(2) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (3) 납에 따라 시험한다.

(3) 주석

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (3) 주석에 따라 시험한다.

16—13 홍삼음료

4) 시험방법

(3) 납

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

(4) 주석

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (3) 주석에 따라 시험한다.

20—4 캅셀류

4) 시험방법

(3) 비소

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (1) 비소 ① 굿짜이트법에 따라 시험한다.

20—15 재제‧가공․정제소금

4) 시험방법

(8) 비소

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (1) 비소에 따라 시험한다.

(9) 납

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

20—16 코코아가공품류

4) 시험방법

(2) 납

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

제 5의 2. 수산물에 대한 잠정규격

1. 규격

(4) 시험방법

② 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법 3) 금속별시험 (2) 납에 따라 시험한다.

제7. 일반시험법

1. ~ 5 (생  략)

6. 유해성금속시험법

1)~2) (현행과 같음)

3) 금속별 시험

(1)～(3) (생  략)

(4) 동

(5) 수은 (생  략)

4) (생  략)

7 ~ 14.  (생  략)

15. 식품중의 잔류물질시험법

1) (생  략)

2) 항생물질

(1) (생  략)

(2) 정량시험법

① 기기분석법

㉮～㉷ (생  략)

㉸ 마크로라이드계 항생물질(스피라마이신(Spiramycin), 타이로신(Tylosin))

Ⓐ 정량법의 원리

검체에 아세토니트릴을 가하여 균질화하고 디클로로메탄으로 추출한 후 농축건조하여 30% 아세토니트릴용액에 용해시킨 후 HPLC로 측정한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그라프/자외부검출기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 표준용액 : 각각의 표준품 10㎎을 정밀히 달아 100ml 용량플라스크에 취하고 메탄올 80ml에 잘 녹인 다음 메탄올로 표시선까지 채워 잘 혼합한다(100 ppm). 이 액 10ml을 정확히 취하여 100ml 용량플라스크에 옮기고 이동상으로 표시선까지 채운 다음 잘 혼합하여 표준용액으로 사용한다(10 ppm).

㉡ 이동상 : 1,000ml 용량플라스크에 무수제이인산나트륨 1.6g과 무수제일인산나트륨 5.35g을 취하여 물 800ml를 가하여 용해 시킨 후 표시선까지 물을 채운 다음 이 액 440ml와 아세토니트릴 560ml를 혼합한 후 용매여과장치(0.45㎛ 멤브레인 필터)로 여과하여 이동상으로 사용한다.

㉢ ~ ㉤ (생  략)

Ⓓ 시험용액의 조제

검체 5g을 50ml 원심관에 취하고 아세토니트릴 25ml를 가하여 검체를 완전히 균질화시킨 다음 다시 아세토니트릴 15ml를 가하고 진탕기에서 10분간 강하게 진탕한다. 이것을 2,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 120ml 증발플라스크에 옮기고 40°에서 2～5ml까지 농축한 다음 다시 50ml 원심관에 옮기고 용액 A 10ml로 증발플라스크를 세척하여 농축액에 합친다. 이것을 헥산 10ml로 한번 세척한 후 디클로로메탄 10ml 씩으로 2회 추출한 다음 증발 건조시키고 용액 B 1ml에 잘 용해하여 0.45μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 칼 럼 : Zorbax SB-C18(HP사, 4.6× 250㎜, 5㎛) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 0.05M 인산완충액(pH 6.2) : 아세토니트릴(44:56)

- 유 속 : 1.0ml/min

- 측정파장 : UV 232㎚(스피라마이신) 및 288㎚(타이로신)

㉡ 검량선 작성

스피라마이신은 표준용액을 100ml 용량플라스크에 5, 2.5, 1.25, 0.625ml씩 취하고 용액 B로 표시선까지 채워 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625 ppm으로 희석한다. 타이로신은 표준용액을 50ml 용량플라스크에 20, 10, 5, 2.5ml씩 취하고 용액 B로 표시선까지 채워 4, 2, 1, 0.5 ppm으로 희석한다. 4개 농도의 희석된 표준용액을 50[eqn: mu]l씩 3회 반복 주입하여 얻은 크로마토그람으로부터 각 농도별 평균면적을 구하여 X축을 농도, Y축을 면적으로 하여 검량선을 작성한다.

㉢ 계산

시험용액 분석에서 얻은 크로마토그람으로부터 각 성분에 대하여 머무름 시간이 일치되는 각각의 피크에 대한 평균면적을 구한 다음 검량선 좌표의 Y축에 동일한 값을 표시하고 이 값과 검량선상 만나는 점에서 수직으로 X축과 만나는 점이 시험용액의 농도를 나타낸다. 이 농도에 시험용액의 희석배수를 곱하고 검체 무게로 나누어 최종 검체 중 각 성분의 농도를 산출한다.

㉹  ~ (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

② (생  략)

3) 합성항균제

(1) (생  략)

(2) 정량시험법

①~ (생  략)

디메트리다졸(Dimetridazole)

㉮ 정량법의 원리

디클로로메탄으로 검체를 추출한 후 헥산과 이동상으로 다시 녹이고 원심분리를 한다. 하층액을 분리하여 전기화학검출기(Electrochemical detector)가 장착된 액체크로마토그라프로 분리, 검출한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그라프/전기화학검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 표준용액 : 디메트리다졸 표준품 10㎎을 정확히 달아 물에 용해한 후 희석하여 100㎍/ml 농도가 되게 한다. 냉장고에 보관하며 적절한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓑ 헥산 : 500ml의 헥산을 하룻밤 100ml 진한 황산으로 저어주 고 100ml 물로 세 번 씻어준다.

Ⓒ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

10g의 검체를 50ml 시험관에 넣어 15g 무수황산나트륨과 25ml 디클로로메탄을 넣는다. 1분 동안 균질화한 다음 수평 교반기에서 5분간 흔든다. 600G에서 5분간 원심분리한다. 추출한 상층액을 250ml 플라스크에 종이 여과지를 이용해 옮겨 담는다. 이 과정을 25ml 디클로로메탄으로 2번이상 반복한다. 같은 플라스크에 모든 추출액을 모은다. 갑자기 끓어 넘침을 막기 위해 약간의 끓임쪽을 넣고 20ml 에탄올을 넣고 40-45°수조에서 회전증발기를 이용해 약 1ml로 증발시킨다. 이때 거품이 발생하면 10ml 에탄올을 한 두번 넣어준다. 남아 있는 용매는 질소를 이용해 건조시킨다. 잔류물에 2.0ml 이동상과 4.0ml 정제 헥산을 넣어준다. 용액을 작은 시험관에 옮긴 후 4̊에서 20분간 원심분리(4,000xg) 다음 하층액의 수층을 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 :

A ; Spheri-10RP-18 C18(Brownlee Labs사, 4.6×250㎜, 10㎛) 또는 이와 동등한 것.

B ; Ultrashere ODS C18(Beckman사, 4.6×150㎜, 5㎛) 또는 이와 동등한 것.

- 이동상

: 50ml 1M 초산과 3ml 트리메틸아민 800ml 물을 혼합한다. 희석된 수산화암모늄(1+1)으로 pH 5.0±0.05가 되게 한다. 150ml 아세토니트릴을 넣고 잘 섞어 0.2㎛ 멤브레인 필터로 여과한다.

- 유속 : 1.0ml/min

Ⓑ 정량시험

시험용액 및 표준용액 200[eqn: mu]l를 위의 조건에 따라 액체 크로마토그라프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교해서 피크의 높이로 검량선을 작성하여 검체 중 디메트리다졸의 함량을 구한다. 다음의 식을 이용하여 검체 중 농도를 정량한다. 검체 중 농도(ppb) = Hu × C × 0.2/Hs (Hu; 표준물질의 피크높이, Hs ; 검체의 피크높이, C= 표준물질의 농도 ng/ml)

<신  설>

<신  설>

~ (생  략)

니트로후란계 대사물질(SEM, AHD, AMOZ, AOZ)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 후라졸리돈, 후랄타돈, 니트로후라존 및 니트로후란토인의 대사물질을 염산용액으로 처리하여 니트로벤즈알데히드(NBA)로 유도체화한 후 에틸아세테이트로 추출․농축하여 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그라프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 표준품 : semicarbazide(SEM),

1-aminohydantoin(AHD),

3-amino-5-morpholinomethyl-2

-oxazolidinone(AMOZ),

3-amino-2-oxazolidinone(AOZ)

Ⓑ 내부표준품 : 3-amino-2-oxazolidinone  -D4(AOZ-D4),3-amino-5-morpholinomethyl        -2-oxazolidinone-D5     (AMOZ-D5)

Ⓒ 표준원액 : 니트로후란계 표준품 10mg을 각각 달아 메탄올에 녹인 후 100㎍/ml 농도가 되게 하여 사용한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 각각 40ng/ml, 100ng/ml 농도가 되게 하여 표준용액으로 사용한다.

Ⓔ 내부 표준물질 표준원액 : 내부 표준품 AOZ-D4, AMOZ-D5 10㎎을 각각 달아 메탄올로 용해시켜 100㎍/ml 농도가 되게 하여 사용한다.

Ⓕ 내부 표준물질 표준용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 100ng/ml가 되게 하여 사용한다.

Ⓖ 0.05M 유도체화 용액 : 2-니트로벤즈알데히드(MW 151.12, 99%) 0.76g을 디메틸설폭사이드 100ml에 녹여 유도체화 용액으로 사용한다.

Ⓗ 0.125M 염산 : 증류수 975ml에 5M 염산용액 25ml를 가하여 혼합하여 사용한다.

Ⓘ 0.1M 인산칼륨 : 증류수 900ml에 제2 인산칼륨(K2HPO4, 인산수소이칼륨; MW 174.2, 99.2%) 17.56g을 가하여 녹인후 1l로 조정하여 사용한다.

Ⓙ 0.8M 수산화나트륨 : 1M 수산화나트륨용액 80ml에 증류수 20ml를 혼합하여 사용한다.

Ⓚ 10mM 암모늄아세테이트 : 증류수 900ml에 암모늄아세테이트(MW 77.08, 98%) 0.79g을 가하여 녹인후 1l가 되게 한다.

㉱ 시험용액의 조제

시료 1g을 달고 이 시료에 Ⓐ(농도 100ng/ ml가 되는 내부표준물질 혼합용액 50μl를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125M 염산 10ml와 0.05M 유도체화용액 100μl를 넣고 37° 수욕조에서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 0.1M 인산칼륨용액 10ml와 0.8M 수산화나트륨용액 500μl를 가해 약 pH 7.4로 조정한다. 이 시험용액의 잔사를 제거하기 위해 4,000rpm에서 5분간 원심분리하고 상층액을 원심관에 옮겨 헥산 10ml를 가하여 혼합한 후 4,000rpm에서 5분간 원심분리한다. 하층을 새로운 원심관에 취하고 에틸아세테이트 7ml를 가하여 혼합하고 4,400rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 질소하에서 농축 건조한 후 50% 메탄올 0.5ml에 용해시켜 15,000rpm에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 0.2㎛ 멤브레인필터로 여과하여) 시험용액으로 한다.

<신  설>

㉲ 표준용액의 유도체화

음성시료 1g을 50ml 원심관에 넣고 농도 40ng/ml, 100ng/ml인 표준용액을 각각 50μl를 첨가하여 ㉱의Ⓐ를 따른 후 분석시 표준용액으로 사용한다.

㉳ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그라프 조건

- 칼럼 : C18(125mm × 4mm, 5㎛) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : A(메탄올) : B(10mM 암모늄아세테이트)

시간(분)	%A	%B	유속(ml/분)
0.00	30	70	0.5
20.00	30	70	0.5
30.00	100	0	0.5
35.00	100	0	1.00

㉡ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Scan range : 100-400 m/z

- Drying gas : 질소(350℃, 10l/분)

- Nebulizer gas : 질소(50psi)

- Fragmentor voltage : 120V(SEM) 또는 140V(AOZ, AMOZ, AHD)

- Capillary voltage : 2000V

- SIM ion :

Method	Time	Group	SIM ion	Fragment v.
1	0.00	2-NBA-AHD	249	140
			271	140
	15.00	2-NBA-AOZ,	209	120	Parent
		2-NBA-SEM,	231	120	ion,
		2-NBA-AOZ-D4	236	140	Qualifier
			240	140	ion
			258	140
	25.00	2-NBA-AMOZ,	335	140
		2-NBA-AMOZ-D5	340	140
			357	140
2	0.00	2-NBA-AHD	134	140
			178	200
	15.00	2-NBA-AOZ,	134	140	Fragment
		2-NBA-SEM	149	140	ion
			166	150
			192	150
	25.00	2-NBA-AMOZ	262	200
			291	140

Ⓑ 정량

유도체화한 시험용액 및 표준용액을 질량분석기에 주입하여 아래표의 분석물질별 특이이온을 확인한다. 이후, 시험용액에서 얻은 크로마토그램 각각의 니트로후란계에 대해 주요 이온이 일치되는 물질피크에 대한 평균면적을 구한 다음 표준곡선 좌표의 Y축에 동일한 값을 표시하고 이 값과 표준곡선상 만나는 점에서 수직으로 X축과 만나는 점이 시료용액의 농도를 나타낸다. 이 농도에 시험용액의 희석배수를 곱하고 시료무게로 나누어 시료중 각 니트로후란계의 함량을 산출한다.

□ 니트로후란계 대사물질 분석물질별 특이이온

대상물질	분석물질	Parent ion	Qualifier ion	Fragment ion
후라졸리돈	2-NBA-AOZ	236	258	134, 149
후랄타돈	2-NBA-AMOZ	335	357	262, 291
니트로후라존	2-NBA-SEM	209	231	166, 192
니트로후란토인	2-NBA-AHD	249	271	134, 178

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

4)~7) (생  략)

8) 어류 및 갑각류중 잔류물질 시험법

(1) 항생물질

①~② (생  략)

③ 스피라마이신(Spiramycin)

㉮ 정량법의 원리

시료에 인산완충액 : 메탄올(3:7) 혼합액을 가해 균질화시켜 원심분리한 후 감압농축하여 농축액을 SCX 카트리지에 흡착시키고 메탄올 : 암모늄아세테이트 혼합용액으로 용출시키고 농축건조시킨 후 이동상에 녹여 측정한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그라프/자외부검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 표준원액 : 스피라마이신 표준품 10mg을 달아 메탄올 2ml에 녹인 후 이동상으로 100㎍/ml 농도가 되게 하여 사용한다.

Ⓑ 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 10㎍/ml 농도가 되게 한 후 희석하여 사용한다.

Ⓒ Bond Elut SCX Cartridges : Strata50㎛, Tri-Func., SCX cartridges, 500mg/3ml, Phenomenex사 또는 이와 동등한 것

Ⓓ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

검체를 잘게 마쇄한 후 10g을 취하여 메탄올 : 0.05M 인산(pH 3.0)(7:3) 혼합액 40ml를 첨가하여 균질기로 2분간 균질화한다. 균질액은 8,000rpm에서 20분간 원심분리하고, 상층액은 전량 수거하여 분액여두로 옮겨 160ml의 헥산을 가하여 혼합하고 층분리한 후 아래층을 받아 45°에서 10분간 가열처리한다. 이 처리액을 8,000rpm, 10분간 원심분리하여 고형물을 제거하고 상층액을 3ml 정도가 되도록 45°에서 감압농축한다. 이 농축액은 Bond Elut SCX 카트리지에 흘린 후, 증류수 40ml를 흘려 세척하고, 2.5% 암모늄아세테이트를 함유한 50% 메탄올 40ml를 흘려 흡착물을 용출시킨다. 용출액은 다시 45°에서 감압농축하여 건조시킨 후, 이동상 2ml로 녹이고 0.45㎛ 멤브레인필터로 여과한 후 분석한다.

※ SCX 카트리지 활성화

진공음압기에 장착하여 증류수를 가하여 1시간 정도 팽윤시키고, 메탄올 및 증류수를 각각 25ml씩 순차적으로 흘려 카트리지를 세척하고, 40ml의 0.01M 염화칼슘으로 활성화시킨 다음 증류수 30ml로 세척한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼    럼 : Shisheido C18(4.6mm × 250mm, 5㎛) 또는 이와 동등한 것

- 이 동 상 : 0.05M 인산(pH 3.0) : 아세토니트릴(750:250)

- 유    속 : 1.0ml/분

- 측정파장 : UV 232nm

Ⓑ 검량선 작성

스피라마이신 표준용액(10㎍/ml)을 각각의 10ml 용량플라스크에 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1ml씩 취하고 이동상으로 표시선까지 채워 2.0, 1.0, 0.5, 0.2 0.1㎍/ml로 희석한다. 5개 농도의 희석된 표준용액을 20μl씩 3회 반복 주입하여 얻은 크로마토그램으로부터 스피라마이신에 대한 농도별 평균면적을 구하여 X축을 농도, Y축을 면적으로 하여 검량선을 작성한다.

Ⓒ 계산

시험용액 분석에서 얻은 크로마토그램으로부터 각 성분에 대하여 머무름시간이 일치되는 각각의 피크에 대한 평균면적을 구한 다음 검량선 좌표의 Y축에 동일한 값을 표시하고 이 값과 검량선상 만나는 점에서 수직으로 X축과 만나는 점이 시험용액의 농도를 나타낸다. 이 농도에 시험용액의 희석배수(잔류물에 가한 이동상의 부피)를 곱하고 검체 무게로 나누어 최종 검체중 각 성분의 농도를 산출한다.

16~21 (생 략)

22. 식품 중 유해물질 시험법

1) 발기부전 치료제 유사물질 시험법

(1) (생  략)

(2) 시약 및 시액

①～⑥ (생 략)

(3) (생  략)

(4) (생  략)

①～④ (생  략)

(5) 발기부전치료제 유사물질 분자량 및 화학구조식

①～⑧ (생  략)

(6) 발기부전치료제 분자량 및 화학구조식

①～⑤ (생  략)

23~26 (생 략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

제 3. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 용어의 풀이

1)～ 29) (현행과 같음)

30) “건삼”(태극삼 포함)은 수삼을 햇볕․열풍 또는 기타의 방법으로 익히지 아니하고 말린 것, “홍삼”은 수삼을 증기 또는 기타의 방법으로 쪄서 익혀 말린 것, “인삼농축액 및 홍삼농축액”은 수삼․건삼 및 홍삼으로부터 물이나 주정 또는 물과 주정을 혼합한 용매로 추출하여 여과하여 그대로 농축한 것을 말한다.

31) 식품원재료 분류(현행 30)과 같음)

2.~5. (현행과 같음)

6. 기준 및 규격의 적용

1) 식품일반의 규격

(1) 식품 중 유해물질

① 아래의 발기부전치료제․비만치료제․당뇨병치료제 성분과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질 : 검출되어서는 아니된다.(단, 동성분과 화학구조가 근원적으로 유사한 합성물질로서 따로 기준․규격이 정하여진 것은 제외한다.)

㉮ 발기부전치료제 분자량 및 화학구조식

a. 실데나필(Sildenafil)

(C22H30N6O4S, 474)

b. 타다라필(Tadalafil)

(C22H19N3O4, 389)

c. 바데나필(Vardenafil)

(C23H32N6O4S, 488)

d. 유데나필(Udenafil)

(C25H36N6O4S, 516)

e. 미로데나필(Mirodenafil)

(C26H37N5O5S, 531)

㉯ 비만치료제 분자량 및 화학구조식

a. 펜플루라민(Fenfluramine)

(C12H16F3N, 231)

b. 리오치로닌(Liothyronine)

(C15H12I3NO4, 650)

c. 레보치록신(Levothyroxine)

(C15H11I4NO4, 776)

d. 에페드린(Ephedrine)

(C10H15NO, 165)

e. 시부트라민(Sibutramine)

(C17H26ClN, 279)

㉰ 당뇨병치료제 분자량 및 화학구조식

a. 글리벤클라미드(Glibenclamide)

(C23H28ClN3O5S, 494)

b. 글리클라짓(Gliclazide)

(C15H21N3O3S, 323)

c. 글리피짓(Glipizide)

(C21H27N5O4S, 445)

② 발기부전 치료제 유사물질

㉮～㉸  (현행과 같음)

<삭  제>

(2)～(3) (현행과 같음)

(4) 농산물의 잔류농약 잠정기준적용

①～③ (현행과 같음)

④ 농산물의 분류

대분류	소분류	품 목
곡류	-	생략
서류	-	생략
콩류	-	생략
견과 종실류	견과류	생략
	종실류	참깨, --- 〈삭제〉, --- 홍화씨 등
과실류	이과류	생략
	감귤류	생략
	핵과류	생략
	장과류	포도, --- 구기자, 오미자 등
	열대과일류	생략
채소류	엽채류	배추, --- 우엉잎 , 겨자채 등
	엽경채류	생략
	근채류	생략
	과채류	생략
버섯류	-	생략
차	-	생략
인삼	-	생략
호프	-	생략
기타식물류	-	생략

(5) ~ (9) (현행과 같음)

2) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1)～(53) (현행과 같음)

(54) 나라신(Narasin)

가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.1 0.3 0.5 0.3	알	불검출

(55) 라살로시드(Lasalocid)

소근육 소간 소지방 소신장 유 알	0.02 0.02 0.02 0.02 0.01 0.05	가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.02 0.02 0.02 0.02

(56) 린코마이신(Lincomycin)

소근육 소간 소지방 소신장 가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.1 0.5 0.05 1.0 0.2 0.5 0.1 0.5	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장 유 알 어류 갑각류	0.2 0.5 0.1 1.5 0.15 0.05 0.1 0.1

(57) 마두라마이신(Maduramycin)

가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.1 0.8 0.4 1.0	알	불검출

(58) 밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)

소근육 소간 소지방 소신장 닭근육 닭간 닭지방 닭신장	0.01 0.01 0.01 0.01 0.03 0.03 0.03 0.03	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장 유 알	0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.02

(59) 샘두라마이신(Semduramicin)

가금근육 가금간 가금신장 가금지방	0.1 0.5 0.2 0.5	알	불검출

(60) 아빌라마이신(Avilamycin)

돼지근육 돼지간 돼지신장 돼지지방	0.05 0.05 0.05 0.05	가금근육 가금간 가금신장 가금지방	0.05 0.05 0.05 0.05

(61) 아프라마이신(Apramycin)

소근육 소간 소지방 소신장 가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.5 6.0 1.0 10.0 0.2 0.8 0.2 0.8	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장	0.1 0.1 0.1 0.1

(62) 엔라마이신(Enramycin)

돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장	0.03 0.03 0.03 0.03	닭근육 닭간 닭지방 닭신장	0.03 0.03 0.03 0.03

(63) 콜리스틴(Colistin)

소근육 소간 소지방 소신장 돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장 가금근육 가금간 가금지방 가금신장	0.15 0.15 0.15 0.2 0.15 0.15 0.15 0.2 0.15 0.15 0.15 0.2	양근육 양간 양지방 양신장 염소근육 염소간 염소지방 염소신장 알 유 어류 갑각류	0.15 0.15 0.15 0.2 0.15 0.15 0.15 0.2 0.3 0.05 0.15 0.15

(64) 티아물린(Tiamulin)

소근육 소간 소지방 소신장 염소근육 염소간 염소지방 염소신장 양근육 양간 양지방 양신장	0.1 0.5 0.1 0.5 0.1 0.5 0.1 0.5 0.1 0.5 0.1 0.5	돼지근육 돼지간 돼지지방 돼지신장 가금근육 가금간 가금지방 가금신장 알	0.1 0.5 0.08 0.04 0.1 0.2 0.1 0.1 1.0

3) 농산물의 농약잔류허용기준

(1)～(3) (현행과 같음)

(4) 나프로파마이드(Napropamide)

--- 기타견과류 ---

(5)～(7) (현행과 같음)

(8) 다이아지논 (Diazinon)

--- 호프 0.1, 고추(건조) 3.0

(9) 델타메쓰린 (Deltametrin)

--- 호프 5.0, 구기자(건조) 2.0

(10) ～ (21) (현행과 같음)

(22) 디크로프루아니드 (Dichlofluanid)

--- 호프 5.0, 고추(건조) 5.0

(23) ～ (25) (현행과 같음)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

--- 호박 0.3, 매실 0.2

(27) ～ (30) (현행과 같음)

(31) 마이클로부타닐 (Myclobutanil)

--- 호박 1.0, 고추(건조) 5.0,

(32) 말라치온 (Malathion)

-----호프 0.5, 밀 0.5, 밀가루 0.2 ---

(33) ～ (34) (현행과 같음)

(35) 메소밀 (Methomyl)

--- 호밀 2.0, 고추(건조) 5.0

(36) ～ (37) (현행과 같음)

(38) 메타락실 (Metalaxyl)

--- 호프 10.0, 고추(건조) 5.0

(39) ～ (65) (현행과 같음)

(66) 싸이퍼메쓰린 (Cypermethrin)

--- 호박 5.0, 고추(건조) 1.0, 구기자(건조) 5.0

(67) (현행과 같음)

(68) 싸이할로쓰린 (Cyhalothrin)

--- 배추 0.2 --- 호박 0.5, 구기자(건조) 2.0

(69) ～ (84) (현행과 같음)

(85) 에토펜프록스 (Ethofenprox)

--- 호밀 0.005, 배추(건조) 7.0, 파(건조) 10

(86) ～ (100) (현행과 같음)

(101) 이미다크로프리드 (Imidacloprid)

--- 호프 3.0, 고추(건조) 3.0, 파(건조) 2.0, 딸기 0.3, 겨자채 5.0

(101) ～ (104) (현행과 같음)

(105) 이프로디온 (Iprodione)

--- 피망 5.0, 고추(건조) 15

(106) ～ (113) (현행과 같음)

(114) 카보후란 (Carbofuran)

--- 호프 0.5, 매실 0.7

(115)～(124) (현행과 같음)

(125) 클로로타로닐 (Chlorothalonil)

--- 호박 2.0, 기타감귤류 5.0, 고추(건조) 15, 마* 0.1

(126) ～ (136) (현행과 같음)

(137) 테트라디폰 (Tetradifon)

--- 호프 1.0, 무화과 1.0

(138)～(139) (현행과 같음)

(140) 트라로메스린 (Tralomethrin, 델타메쓰린(Deltamethrin)으로서)

(141)～(147) (현행과 같음)

(148) 트리플루라린 (Trifluralin)

--- 기타견과류 ---

(149)～(164) (현행과 같음)

(165) 펜부코나졸 (Fenbuconazole)

--- 피칸 0.1, 오미자* 3.0

(166)～(178) (현행과 같음)

(179) 폴펫 (Folpet)

--- 호박 5.0, 고추(건조) 25

(180) ～ (182) (현행과 같음)

(183) 풀루아지호프-부틸 (Fluazifop-butyl)

--- 피칸 0.05, 감자 0.05, 무(뿌리) 0.05, 무(잎) 0.3

(185) 프로시미돈 (Procymidone)

--- <삭제>, --- 해바라기씨 2.0, 고추(건조) 15

(186) 프로클로라즈 (Prochloraz)

--- 자두 0.5 ---

(187) (현행과 같음)

(188) 프로파모카브 (Propamocarb)

--- 피망 1.0, 수박 0.7

(189)～(199) (현행과 같음)

(200) 헥사코나졸 (Hexaconazole)

--- 포도 0.1, 오미자 1.0

(201)～(202) (현행과 같음)

(203) 벤푸라카브 (Benfuracarb)

--- 쌀 0.01, 파  0.3

(204)～(205) (현행과 같음)

(206) 클로르훼나피르 (Chlorfenapyr)

--- 피망 0.7, 감 0.5, 무화과 0.5, 복분자 0.5, 취나물 3.0,  고추(건조) 5.0, 배추(건조) 3.0

(207) ～ (206) (현행과 같음)

(207) 테부페노자이드 (Tebufenozide)

--- 파 0.7, 배추(건조) 3.0

(208) ～ (211) (현행과 같음)

(212) 플루페녹수론 (Flufenoxuron)

--- 피망 0.3, 배추(건조) 2.0

(213) ～ (217) (현행과 같음)

(218) 디메토모르프 (Dimethomorph)

--- 피망 0.5, 무화과 3.0, 파(건조) 15

(219) (현행과 같음)

(220) 디에토펜카브 (Diethofencarb)

--- 피망 5.0, 자두 0.5, 고추(건조) 3.0

(221) (현행과 같음)

(222) 메파니피림 (Mepanipyrim)

--- 포도 5.0, 양상추 3.0

(223) (현행과 같음)

(224) 싸이목사닐 (Cymoxanil)

--- 피망 0.1, 배추(건조) 3.0

(225) 싸이프로디닐 (Cyprodinil)

--- 포도 5.0, 키위 3.0

(226) 싸이프로코나졸 (Cyproconazole).

--- 사과 0.1, 감 0.2

(227) 아세타미프리드 (Acetamiprid)

--- 피망 5.0, 배추(건조) 10

(228) 아족시스트로빈 (Azoxystrobin)

--- 호박 0.1, 매실 0.5, 무화과 2.0, 고추(건조) 7.0, 파(건조) 7.0

(229) (현행과 같음)

(230) 크레속심-메틸 (Kresoxim-methyl)

--- 피망 2.0, 대추 0.3

(231) 클로르플루아주론 (Chlorfluazuron)

--- 피망 0.5, 복숭아  0.5, 대두 0.1

(232) (현행과 같음)

(233) 펜시쿠론 (Pencycuron)

--- 쌀 0.3, 딸기 2.0

(234)～(236) (현행과 같음)

(237) 피메트로진 (Pymetrozin)

--- 피망 1.0, 겨자채 3.0

(238) (현행과 같음)

(239) 후루아지남 (Fluazinam)

--- 피망 0.3,  자두 0.5, 파(건조)  10

(240) ～ (241) (현행과 같음)

(242) 루페누론 (Lufenuron)

--- 호박 0.5, 복분자  0.3, 고추(건조) 2.0

(243) ～ (247) (현행과 같음)

(248) 아바멕틴 (Abamectin)

--- 호박 0.01, 매실 0.05, 무화과 0.05

(249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

--- 호박 0.05, 구기자(건조) 0.1, 복분자0.03

(250) (현행과 같음)

(251) 에톡사졸 (Etoxazole)

--- 수박 0.1, 무화과 0.3

(252)～(253) (현행과 같음)

(254) 카보설판 (Carbosulfan)

--- 포도 0.1, 배 0.2, 복숭아 0.2, 매실 0.07

(255)～(256) (현행과 같음)

(257) 플루퀸코나졸 (Fluquinconazole)

--- 포도 1.0, 양상추 1.0, 오미자* 3.0

(258) (현행과 같음)

(259) 피리메타닐 (Pyrimethanil)

--- 포도 5.0, 양상추 3.0, 오미자* 3.0, 자두 2.0

(260)～(264) (현행과 같음)

(265) 디메텐아미드 (Dimethenamid)

--- 옥수수 0.1, 고추 0.05, 피망 0.05, 양배추 0.07

(266)～(289) (현행과 같음)

(290) 인독사카브 (Indoxacarb)

--- 피망 1.0, 대두 0.2, 복분자 0.5, 고추(건조) 5.0, 배추(건조) 10, 파(건조) 2.0

(291) 족사마이드 (Zoxamide)

--- 피망 0.3, 무화과 0.5, 수박 0.05, 배추(건조) 15

(292) ～ (296) (현행과 같음)

(297) 테트라코나졸 (Tetraconazole)

--- 피망 1.0, 고추(건조) 3.0

(298) ～ (300) (현행과 같음)

(301) 펜헥사미드 (Fenhexamid)

--- 포도 3.0, 사과 1.0

(302)～(303) (현행과 같음)

(304) 프로베나졸 (Probenazole)

--- 쌀 0.1, 고추 0.07, 피망 0.07, 배추 0.07

(305)～(308) (현행과 같음)

(309) 플루토톨라닐 (Flutolanil)

--- 쌀 1.0, 양상추 0.7

(310) ～ (320) (현행과 같음)

(321) 디노테푸란 (Dinotefuran)

--- 오이 1.0, 무(뿌리) 0.05, 대두 0.05

(322) (현행과 같음)

(323) 보스칼리드 (Boscalid)

--- 토마토 2.0, 대두 1.0, 키위 5.0

(324) (현행과 같음)

(325) 시아조파미드 (Cyazofamid)

--- 피망 2.0, 밀감 0.5, 멜론 0.5, 참외 0.5

(326) 아세퀴노실 (Acequinocyl)

--- 수박 0.2, 무화과 2.0

<삭  제>

(327) 아자디락틴 (Azadirachtin)

토마토 0.3

(328)～(331) (현행과 같음)

(332) 크로치아니딘 (Clothianidin)

--- 피망 2.0, 겨자채 3.0, 고추(건조) 10

(333)～(334) (현행과 같음)

(335) 트리프록시스트로빈 (Trifloxystrobin)

--- 포도 0.5, 더덕 0.2, 마* 0.2

(336) (현행과 같음)

(337) 티아메톡삼 (Thiamethoxam)

--- 피망 1.0, 겨자채 5.0, 키위 0.2

(338) 티아크로프리드 (Thiacloprid)

--- 피망 1.0, 딸기 2.0 토마토 1.0, 매실 0.5

(339)～(344) (현행과 같음)

(345) 피라크로스트로빈 (Pyraclostrobin)

--- 피망 0.5, 대추 2.0

(346)～(348) (현행과 같음)

(349) 노발루론 (Novaluron)

--- 사과 1.0, 복숭아 1.0, 복분자 2.0, 구기자(건조) 5.0, 취나물 5.0

(350)～(351) (현행과 같음)

(352) 메톡시페노자이드 (Methoxyfenozide)

--- 파 2.0, 복숭아 1.0, 밤 0.1, 복분자 1.0, 들깻잎 5.0, 취나물 3.0, 고추(건조) 5.0, 배추(건조) 20, 파(건조) 10

(353)～(354) (현행과 같음)

(355) 스피로디크로펜 (Spirodiclofen)

--- 포도 1.0, 딸기 2.0, 유자 2.0, 차 5.0

(356)～(357) (현행과 같음)

(358) 이프로발리카브 (Iprovalicarb)

--- 포도 2.0, 무화과 1.0

(359)～(360) (현행과 같음)

(361) 테플루스린 (Tefluthrin)

--- 땅콩 0.05, 파 0.05, 고구마 0.05

(362)～(369) (현행과 같음)

<삭  제>

(370) 벤티아발리카브 (Benthiavalicarb)

오이 0.07, 포도 0.5, 기타농산물 0.07

(371)～(373) (현행과 같음)

(374) 알라니카브(Alanycarb)

--- 오이 0.1, 사과 0.5

(375)～(378) (현행과 같음)

(379) 플루아크리피림 (Fluacrypyrim)

--- 사과 1.0, 무화과 0.5

(380) 피리다릴 (Pyridaryl)

--- 파 0.5, 수박 0.2, 오이 0.5, 참외 0.5, 복분자 1.0, 취나물 5.0

(381)～(383) (현행과 같음)

(384) 사이플루페나미드 (Cyflufenamid)

--- 포도 0.5, 감 0.05, 배 0.2, 복숭아 0.2, 멜론 0.2, 수박 0.2

(385)～(387) (현행과 같음)

(388) 시안화수소 (Hydrogen cyanide)

--- 피망 5.0, 오렌지 5.0

(389) (현행과 같음)

(390) 시메코나졸 (Simeconazole)

--- 포도 1.0, 딸기 0.3, 사과 0.3

(391) (현행과 같음)

(392) 메소트리온 (Mesotrion)

--- 쌀 0.2, 옥수수 0.2

(393)～(398) (현행과 같음)

(399) 사이플루메토펜 (Cyflumetofen)

밀감 0.5, 사과 0.3, 기타농산물 0.07

(400) 플루오피콜라이드 (Fluopicolide)

고추 0.3, 피망 0.2, 오이 0.5

(401) 오리사스트로빈 (Orysastrobin)

쌀 0.1, 기타농산물 0.07

주1 ～주2(현행과 같음)

주3. 기타농산물의 기준적용은 CODEX 기준이 없을 경우에만 적용한다(기타농산물의 기준은 해당 농약에서 기준이 설정되지 아니한 농산물에서 농약이 검출될 경우에 적용하는 기준임).

주4～주6(현행과 같음)

주7 실고추 및 고춧가루에서 농약이 검출될 경우 고추(건조)의 기준을 적용한다.

주8 복분자에는 나무딸기와 산딸기가 포함된다.

4) 축산물의 농약잔류허용기준

(현행과 같음)

5) 인삼의 농약잔류허용기준

(1)~(19) (현행과 같음)

(20) 에틸렌비스디치오카바메이트*

〔Ethylenebis(dithiocarbamate)s〕

(21)~(29) (현행과 같음)

(30) 디메토모르프* (Dimethomorph)

--- 수삼 0.2, 건삼 1.0, 홍삼 0.7

(31) 클로로타로닐* (Chlorothalonil)

(32) 테플루스린* (Tefluthrin)

--- 수삼 0.2, 인삼농축액 0.3

(33) 플루퀸코나졸* (Fluquinconazole)

--- 수삼 0.2, 건삼 0.5, 홍삼 0.5, 인삼농축액 0.5

(34) 아미트라즈 (Amitraz : 아미트라즈와 (2,4- Dimethylphenyl)-N'- methylformamidine의 합계)

수삼 0.05

(35) 부프로페진(Buprofezin)

수삼 0.07

(36) 싸이할로쓰린 (Cyhalothrin)

수삼 0.05

(37) 푸루실라졸 (Flusilazole)

수삼 0.07

(38) 프로클로라즈 (Prochloraz)

수삼 0.3

(39) 디치아논(Dithianon)

수삼 0.2

(40) 싸이목사닐* (Cymoxanil)

수삼 0.2

(41) 클로치아니딘 (Clothianidin)

수삼 0.2

(42) 티아메톡삼 (Thiametoxam)

수삼 0.1

(43) 에타복삼 (Ethaboxam)

수삼 0.2

제 4. 식품별 기준 및 규격

2-1 설탕

4) 시험방법

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

2-2 포도당

4) 시험방법

(10) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

2-3 설탕

4) 시험방법

(7) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

2-4 엿류

4) 시험방법

(6) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

2-5 당시럽류

4) 시험방법

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

2-6 덱스트린

4) 시험방범

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

2-7 올리고당

4) 시험방범

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

10-1 침출차

4) 시험방법

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다

10-2 추출차

4) 시험방법

(3) 주석

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

10-3 분말차

4) 시험방법

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

10-4 과실차

4) 시험방법

(3) 주석

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

10-5 커피

4) 시험방법

(2) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(3) 주석

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

11. 음료류

11-1 과실채소음료

4) 시험방법

(2) 주석

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

12-5 기타 영․유아식

4) 시험방법

(9) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

16-4 인삼음료

4) 시험방법

(3) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4) 주석

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

16—5—1 인삼통‧병조림

4) 시험방법

(2) 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(3) 주석

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

16—13 홍삼음료

4) 시험방법

(3) 납

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(4) 주석

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

20—4 캅셀류

4) 시험방법

(3) 비소

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

20—15 재제‧가공․정제소금

4) 시험방법

(8) 비소

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

(9) 납

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

20—16 코코아가공품류

4) 시험방법

(2) 납

:  제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제 5의 2. 수산물에 대한 잠정규격

1. 규격

(4) 시험방법

② 납

: 제7. 일반시험법 6. 유해성금속시험법에 따라 시험한다.

제7. 일반시험법

1. ~ 5 (현행과 같음)

6. 유해성금속시험법

1)~2) (현행과 같음)

3) 금속별 시험

(1)～(3) (현행과 같음)

<삭  제>

(4) 수은 (현행과 같음)

4) (현행과 같음)

7 ~ 14.  (현행과 같음)

15. 식품중의 잔류물질시험법

1) (현행과 같음)

2) 항생물질

(1) (현행과 같음)

(2) 정량시험법

① 기기분석법

㉮～㉷ (현행과 같음)

㉸ 타이로신(Tylosin)

Ⓐ 정량법의 원리

검체에 아세토니트릴을 가하여 균질화하고 디클로로메탄으로 추출한 후 농축건조하여 30% 아세토니트릴용액에 용해시킨 후 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 측정한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 표준용액 : 타이로신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 용량플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 μg/mL 농도가 되게 한다.

㉡ 이동상 : 1 L 용량플라스크에 무수제이인산나트륨 1.6 g과 무수제일인산나트륨 5.35 g을 취하여 물 800 mL를 가하여 용해시킨 후 표시선까지 물을 채운 다음 이 액 440 mL와 아세토니트릴 560 mL를 혼합한 후 용매여과장치로 여과하여 이동상으로 사용한다.

㉢ ~ ㉤ (현행과 같음)

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심관에 취하고 아세토니트릴 25 mL를 가하여 검체를 완전히 균질화 시킨 다음 다시 아세토니트릴 15 mL를 가하고 진탕기에서 10분간 강하게 진탕한다. 이것을 800 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 120 mL 증발플라스크에 옮기고 40℃에서 2～5 mL까지 농축한 다음 다시 50 mL 원심관에 옮기고 용액 A 10 mL로 증발플라스크를 세척하여 농축액에 합친다. 이것을 헥산 10 mL로 한번 세척한 후 디클로로메탄 10 mL 씩으로 2회 추출한 다음 증발 건조시키고 용액 B 1 mL에 잘 용해하여 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 칼 럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 0.05 M 인산완충액(pH 6.2) : 아세토니트릴(44:56)

- 유 속 : 1.0 mL/분

- 측정파장 : 288 nm

㉡ 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 타이로신의 함량을 각각 구한다.

<삭  제>

㉹ ~  (현행과 같음)

스피라마이신(Spiramycin)

Ⓐ 정량법의 원리

시료 중 스피라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

Ⓑ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

Ⓒ 시약 및 시액

㉠ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

㉡ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

㉢ 표준원액 : 스피라마이신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 용량플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 μg/mL 농도가 되게 한다.

㉣ 표준용액 : 표준원액을 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5)과 아세토니트릴 혼합액(70:30)에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

㉤ 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5) : 1 L 정용플라스크에 인산이수소나트륨․2수화물(NaH2PO4․2H2O) 3.9 g을 넣고 물 800 mL로 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다. pH는 인산으로 조정한다.

㉥ 0.025 M 인산완충용액(pH 2.5) : 1 L 정용플라스크에 인산이수소나트륨․2수화물(NaH2PO4․2H2O) 2.0 g을 넣고 물 800 mL로 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다. pH는 인산으로 조정한다.

㉦ 기타시약 : 특급

Ⓓ 시험용액의 조제

균질화한 시료 1 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 20 mL를 가하여 20분간 균질화 한다. 균질액을 2,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 여과지로 여과하여 분액깔대기에 옮긴다. 위의 과정을 2회 반복하여 상층액을 합한 후 아세토니트릴포화헥산 10 mL를 넣고 진탕한다. 층이 분리될 때까지 정치하여 헥산층을 버리고 추출된 용액을 무수황산나트륨에 통과시키고 45℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물은 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5)과 아세토니트릴 혼합액(70:30) 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓔ 시험조작

㉠ 측정조건

- 칼    럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이 동 상

이동상 A : 0.025 M 인산완충용액(pH 2.5)

이동상 B : 이동상 A와 아세토니트릴 혼합액(60:40)

시간(분)	A(%)	B(%)
0.00	60	40
20.00	0	100

- 유    속 : 1.0 mL/분

- 측정파장 : 232 nm

㉡ 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 스피라마이신의 함량을 각각 구한다.

② (현행과 같음)

3) 합성항균제

(1) (현행과 같음)

(2) 정량시험법

①~ (현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

디메트리다졸, 메트로니다졸, 로니다졸

(Dimetridazole, Metronidazole, Ronidazole)

㉮ 정량법의 원리

시료에 아세토니트릴을 가하여 추출하고 헥산으로 지방성분을 제거한다. 추출액은 감압농축하고 메탄올에 녹여 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 디메트리다졸, 메트로니다졸 및 로니다졸 표준품을 정밀히 달아 에틸아세테이트에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 에틸아세테이트에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 0.05 M 인산완충용액(pH 7.0) : 1 L 정용플라스크에 인산이수소암모늄(NH4H2PO4) 5.75 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

Ⓕ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 20 mL을 넣어 균질화한 후 4℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리 한다. 상등액을 분액깔대기에 옮기고 헥산 20 mL를 넣고 강하게 진탕한 후 층이 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 취하여 프로판올 5 mL을 가하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 잔류물을 메탄올 1 mL에 녹이고 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

- 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 0.05 M 인산완충용액 : 아세토니트릴(88:12)

- 유속 : 1.0 mL/min

- 측정파장 : 312 nm

Ⓑ 정량시험

- 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 디메트리다졸, 메트로니다졸 및 로니다졸의 함량을 각각 구한다.

- 정량한계 : 0.02 mg/kg

~ (현행과 같음)

니트로푸란계 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)

㉮ 정량법의 원리

시료중의 푸라졸리돈, 푸랄타돈, 니트로푸라존 및 니트로푸란토인의 대사물질을 염산용액으로 처리하여 니트로벤즈알데히드(NBA)로 유도체화한 후 에틸아세테이트로 추출․농축하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준품 : 3-amino-2-oxazolidinone(AOZ),

3-amino-5-morpholinomethyl-2

-oxazolidinone(AMOZ),

semicarbazide(SEM),

1-aminohydantoin(AHD)

Ⓓ 내부표준품 : 3-amino-2-oxazolidinone   -D4(AOZ-D4),          3-amino-5-morpholinomethyl  -2-oxazolidinone-D5      (AMOZ-D5)

Ⓔ 표준원액 : 니트로푸란계 대사물질 표준품(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓕ 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 각각 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL 농도가 되게 하여 사용한다.

Ⓖ 내부 표준물질 표준원액 : 내부 표준품(AOZ-D4, AMOZ-D5)을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓗ 내부 표준물질 혼합용액 : 내부 표준물질 표준원액을 하나의 정용 플라스크에 메탄올로 희석하여 각각 100 ng/mL가 되게 혼합하여 사용한다.

Ⓘ 0.05 M 유도체화용액 : 2-니트로벤즈알데히드(2-NBA, MW 151.12, 99%) 0.76 g을 디메틸설폭사이드 100 mL에 녹여 유도체화 용액으로 한다. 이 용액은 사용직전에 만들어 사용한다.

Ⓙ 1 M 인산칼륨 용액 : 1 L 정용플라스크에 인산일수소칼륨(K2HPO4,  MW 174.2, 99.2%) 175.6 g을 가하여 물 400 mL에 녹인후 물로 표시선까지 채운다.

Ⓚ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 벌꿀

균질화한 시료 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 ㉠(내부표준물질 혼합용액 100 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 5 mL와 0.05 M 유도체화용액 200 μL를 넣고 37℃ 수욕조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 1 M 인산칼륨용액 5 mL와 1 M 수산화나트륨용액 100 μL를 가해 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 용액에 헥산 4 mL를 가하여 균질화한 후 2,000 G에서 10분간 원심분리 한다. 하층을 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 4 mL를 가하여 혼합한 후 2,000 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 질소하에서 농축 건조한 후 50% 메탄올 0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 멤브레인 필터로 여과하여) 시험용액으로 한다.

Ⓑ 벌꿀을 제외한 모든 식품

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 ㉡(내부표준물질 혼합용액 200 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 10 mL와 0.05 M 유도체화용액 200 μL를 넣고 37℃ 수욕조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 0.1 M 인산칼륨용액 1 mL와 1 M 수산화나트륨용액 500 μL를 가해서 혼합한다. 0.125 M 염산용액과 0.125 M 수산화나트륨용액으로 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 시험용액의 잔사를 제거하기 위해 2,000 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 원심분리관에 옮겨 헥산 10 mL(우유, 계란의 경우 20 mL)를 가하여 혼합한 후 2,000 G에서 5분간 원심분리 한다. 하층을 새로운 원심관에 취하고 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 혼합하고 2,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 질소하에서 농축 건조한 후 이동상 0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 멤브레인필터로 여과하여) 시험용액으로 한다.

㉲ 표준용액의 유도체화

음성시료 5 g(벌꿀의 경우 2 g)을 50 mL 원심관에 넣고 농도 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL인 표준용액을 각각 100 μL를 첨가하여 ㉱의 ㉡(벌꿀의 경우 ㉠)을 따른 후 분석시 표준용액으로 사용한다.

㉳ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

- 칼  럼 : C18(2.1 × 150 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

- 이동상 : 메탄올 : 10 mM 암모늄포메이트 (55:45, 개미산으로 pH 3.5로 조정)

- 유  속 : 0.2 mL/분

㉡ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary temperature : 350℃

- Collision gas : Ar

- Collision energy : 10~15 V

<삭  제>

Ⓑ 정량

㉠ 유도체화한 시험용액 및 표준용액을 질량분석기에 주입하여 아래표의 분석물질별 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여 내부표준물질 AOZ-D4의 m/z 240 이온에 대한 AOZ m/z 149, SEM m/z 192, AHD m/z 178이온의 면적비와 AMOZ-D5의 m/z 340 이온에 대한 AMOZ m/z 262 이온에 대한 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 니트로푸란계 대사물질의 함량을 구한다.

대상물질	분석물질	Precursor Ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
AOZ	NBAOZ	236	149, 134
AMOZ	NBAMOZ	335	262, 191
SEM	NBSEM	209	192, 166
AHD	NBAHD	249	178, 134
AOZ-D4	NBAOZ-D4	240	134
AMOZ-D5	NBAMOZ-D5	340	296

㉡ 정량한계 : 1 μg/kg

(현행과 같음)

말라카이트 그린(Malachite Green) 및 크리스탈 바이올렛(Crystal Violet)

㉮ 정량법의 원리

시료를 아세토니트릴과 디클로로메탄으로 추출하고 감압농축한 후, 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ)을 이용하여 류코말라카이트 그린 및 류코크리스탈 바이올렛을 각각 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛으로 산화시키고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/가시부흡광광도검출기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/가시부흡광광도검출기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 표준원액 : 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 하고 갈색병에 보관한다.

Ⓓ 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

Ⓔ 1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(2,3-Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzo -quinone, DDQ) 용액 : 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논 0.227 g을 100 mL 용량플라스크에 취하고 아세토니트릴로 녹여 표시선까지 채워 10 mM DDQ 용액을 만들어 냉장 보관한다. 사용직전에 10 mM DDQ 용액을 아세토니트릴로 10배 희석하여 사용한다.

Ⓕ 0.25% 염산수산화아민 용액(Hydroxylamine hydrochloride, HAH) : 염산수산화아민 25 g을 100 mL 용량플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓖ 1 M p-톨루엔설폰산(p-Toluene sulfonic acid, p-TSA) 용액 : p-톨루엔설폰산 9.5 g을 50 mL 용량플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

Ⓗ 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 암모늄아세테이트 완충용액 : 7.7 g 암모늄아세테이트를 1 L 용량플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다. 아세트산 8 mL와 1 M p-톨루엔설폰산 5 mL를 넣어 pH 4.5로 조정한다. 이 액은 이동상 A 용액 조제 시 사용한다.

Ⓘ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 암모늄아세테이트 완충용액 5 mL, 25% 염산수산화아민(HAH) 용액 1 mL, 1 M p-톨루엔설폰산(p-TSA) 용액 100 μL를 넣어 30초간 강하게 균질화한다. 여기에 아세토니트릴 25 mL를 넣어 30초간 강하게 진탕하고 다시 알루미나 10 g을 넣어 15초간 강하게 진탕한 후 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리하고 상등액은 미리 물 50 mL와 디에틸렌글리콜 2 mL를 넣은 250 mL 분액깔대기에 옮긴다. 다시 아세토니트릴 25 mL를 넣어 1분간 강하게 진탕하고 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리한 후 상등액을 앞의 액과 합한다. 디클로로메탄 25 mL를 넣고 분액깔대기를 30초간 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층(아래층)을 취한다. 다시 디클로로메탄 25 mL를 넣어 이 과정을 한 번 반복하고 40℃ 수욕 중에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 3 mL에 녹이고 1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ) 용액 3 mL를 넣어 30분간 반응시킨다. 알루미나 카트리지(충진제 1 g) 및 프로필설폰산(Propylsulfonic acid, PRS) 카트리지(충진제 500 mg)를 미리 메탄올 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 활성화시키고, 프로필설폰산 카트리지에 아세토니트릴 5 mL를 넣은 후 알루미나 카트리지를 그 위에 연결한다. 시료를 추출한 액과 추출액이 담겨 있던 플라스크를 아세토니트릴 5 mL로 2회 세척한 액을 알루미나 카트리지에 흡착시키고 감압하여 분당 4 mL로 용출하고 알루미나 카트리지를 제거한다. 프로필설폰산 카트리지를 아세토니트릴 5 mL로 세척하고 감압하여 건조시킨 후 15 mL 원심분리관에 이동상 A 용액 4 mL로 용출한 액을 받아 이동상 A 용액으로 5 mL 눈금에 맞춘 후 0.2 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

ⓐ 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 이동상

- 이동상 A(95%) : 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 암모늄아세테이트 완충용액 : 아세토니트릴(50:50)

- 이동상 B(5%) : 아세토니트릴

ⓒ 유속 : 1.0 mL/min

ⓓ 측정파장 : 618 nm(말라카이트 그린)

588 nm(크리스탈 바이올렛)

Ⓑ 정량시험

- 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛의 함량을 각각 구한다.

- 정량한계 : 2 μg/kg

Ⓒ 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 확인한다.

ⓐ 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

- 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

․ 이동상 B : 0.1% 개미산 메탄올용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	80	20
1.5	80	20
6.0	0	100
8.0	0	100
8.5	80	20
10.0	80	20

- 유속 : 0.3 mL/min

ⓑ 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary Temperature : 450℃

- Collision gas : N2

Compound	Precursor Ion (m/z)	Fragment Ion (m/z)	Collision Energy (V)
Malachite green	329	313	51
	329	208	51
	329	165	91
Crystal violet	372	356	55
	372	340	75

클렌부테롤(Clenbuterol)

㉮ 정량법의 원리

시료를 분해효소로 분해한 후 에틸아세테이트로 추출하거나 아세토니트릴과 에틸아세테이트를 넣어 추출하고 농축한 후 메탄올:물(20:80) 혼합용매를 넣어 용해한 다음 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체 크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

㉯ 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

㉰ 시약 및 시액

Ⓐ 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

Ⓑ 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

Ⓒ 분해효소제 : βꠀ글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/ arylsulfatase)

Ⓓ 내부표준물질 : 클렌부테롤 D9(Clenbuterol D9)

Ⓔ 표준원액 : 클렌부테롤 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

Ⓕ 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 10 ng/mL로 한다.

Ⓖ 내부표준용액 : 클렌부테롤 D9의 10 ng/mL 메탄올용액으로 한다.

Ⓗ 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) : 500 mL 정용플라스크에 1 M 인산일수소칼륨(K2HPO4) 용액 6.6 mL와 1 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 용액 43.4 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

Ⓘ 트리스완충용액(Tris-buffer, pH 9.5) : Tris (hydroxymethyl)amino -methane 에 염산을 넣어 pH 9.5로 한다.

Ⓙ Divinylbenzene-N-vinylpyrrolidone Copolymer (충진제) 카트리지 칼럼 : HLB (Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 또는 이와 동등한 것

Ⓚ 기타시약 : 특급

㉱ 시험용액의 조제

Ⓐ 유(乳)

균질화한 시료 5 g를 50 mL 원심분리관에 취하여 내부표준용액 400 μL를 넣고 아세트산 200 μL, 아세토니트릴 5 mL, 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 10분간 균질화한 후 4,000 × g에서 5분간 원심분리한다. 상등액을 55℃에서 감압하여 농축하고 잔류물에 메탄올:물(20:80) 혼합용액 20 mL를 가하여 용해한 후 염산으로 pH 1.0으로 맞춘다. 이 액에 헵탄 3 mL를 가하여 섞은 다음 4,000 × g에서 5분간 원심분리하고 유기용매층(상층)은 제거하고 이 과정을 한 번 반복한다. 물층에 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH 7.0이 되도록 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 3 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 200 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

Ⓑ 유(乳)를 제외한 모든 식품

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 내부표준용액 400 μL를 넣고, 트리스 완충용액(pH 9.5) 5 mL와 프로테아제(Protease) 5 mg을 넣어 60℃에서 16시간 반응시킨다. 실온까지 냉각한 후 아세트산 15 μL와 2 M 암모늄 아세테이트 완충용액(pH 5.2) 1 mL를 넣고 분해효소제 40 μL를 가한다. 37℃에서 2시간 동안 가수분해한 후 포화염화나트륨용액 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액를 사용하여 pH 12로 조정한다. 이 용액에 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 진탕하고 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 2회 추출하고 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물에 메탄올:물(20:80) 혼합용액 20 mL를 가하여 용해한 후 염산으로 pH 1.0이 되도록 한다. 이 액에 헵탄 3 mL를 가하여 섞은 다음 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 유기용매층(상층)은 제거하고 이 과정을 한 번 반복한다. 물층에 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH 7.0이 되도록 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 3 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 200 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

㉲ 시험조작

Ⓐ 측정조건

㉠ 액체크로마토그래프 조건

ⓐ 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

ⓑ 칼럼온도 : 40℃

ⓒ 이동상

- 이동상 A : 물:아세토니트릴(95:5) 용액에 10 mM 암모늄 아세테이트가 되도록 녹인 후 아세트산으로 pH 4.3으로 조정한다.

- 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	100	0
2.0	100	0
6.0	10	90
8.0	0	100

ⓓ 유속 : 0.15 mL/min

㉡ 질량분석기 조건

ⓐ Ionization : ESI(positive)

ⓑ Capillary Temperature : 330℃

ⓒ Collision gas : Ar

ⓓ Collision energy : 16 V

Ⓑ 정량

㉠ 표준용액을 0, 20, 40, 100, 200, 400 μL를 시험관에 취하고 각각 내부표준용액 400 μL를 넣고 질소농축한 후 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 내부표준물질 클렌부테롤 D9의 m/z 204 이온에 대한 클렌부테롤 m/z 203 이온의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 클렌부테롤의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
클렌부테롤	277	203, 259
클렌부테롤 D9	286	204, 268

㉡ 정량한계

ⓐ 유(乳) : 0.05 μg/kg

ⓑ 유(乳)를 제외한 모든 식품 : 0.2 μg/kg

4)~7) (현행과 같음)

8) 어류 및 갑각류중 잔류물질 시험법

(1) 항생물질

①~② (현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

16~21 (현행과 같음)

22. 식품 중 유해물질 시험법

1) 발기부전 치료제 유사물질 시험법

(1) (현행과 같음)

(2) 시약 및 시액

①～⑥ (현행과 같음)

(3) (현행과 같음)

(4) (현행과 같음)

①～④ (현행과 같음)

(5) 발기부전치료제 유사물질 분자량 및 화학구조식

①～⑧ (현행과 같음)

<삭  제>

23~26 (현행과 같음)

27. 쇠고기원산지판별 시험법

쇠고기원산지판별 시험법은 식육원산지 판별 마커*(marker)를 사용하여 한우와 비한우(육우, 젖소, 수입산을 포함한다. 이와 같이 한다)를 판별하는 방법으로서 소의 염색체 내에서 단일염기다형성(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)이 발생하는 빈도를 한우와 비한우에서 각각 측정하여 차이를 보이는 경우, 이를 후보 마커로 이용하여 최적의 마커조합을 구성한 다음, 한우와 비한우를 판별한다.

최종 선발된 70개의 단일염기다형성(SNP) 마커를 조합하여 한우와 비한우를 판별하도록 한다. 본 마커조합은 단일 마커가 아닌 70개의 마커가 지닌 판별력을 동시에 측정함으로써 판별의 정확도가 매우 높아 식육원산지 판별에 적합하다. 쇠고기 시료의 DNA에서 실험을 통해 70개 마커 각각의 유전형을 알아낸 후 각 마커의 유전형에 따른 고유의 판별값을 이용하여 한우와 비한우를 구분한다.

*마커(marker) : 생명체가 가지고 있는 DNA 염기서열중 특수한 목적으로 선별된 표지 유전자 서열 및 부위

1) 검체의 채취

검체의 채취는 식품공전의 “제2. 검체의 채취 및 취급방법”을 기본 원칙으로 다음과 같이 한다.

(1) 검체 채취와 동시에 음식점의 식육 표시내용(한우, 육우, 젖소, 수입육 등)을 채취용 용기에 기입한다.

(2) 채취된 식육 검체가 손상되지 않도록 주의하여야 하고, 미생물의 오염 등이 되지 않도록 주의한다.

(3) 검체채취 기구 및 용기

① 기구 및 용기는 멸균된 일회용 용기를 이용하며 운반시 파손 및 오염의 위험이 없는 것을 사용한다.

② 검체와 직접 접촉하는 기구 및 용기는 검사결과에 영향을 미치지 않는 것으로 한다.

③ 검체채취 및 기구․용기의 종류

- 채취용 기구 : 핀셋, 1회용 칼 등

- 채취용 용기․포장 : 검체봉투 등

- 소독용구 : 비닐 위생장갑, 알코올, 솜 등

- 기 타 : 테이프, 아이스박스, 사진기, 필기구, 아이스팩 등

(4) 검체수거 방법

① 채취자는 일회용 비닐 위생장갑을 착용하고 약 30~50g (손가락 마디 하나 크기)정도를 채취하여 즉시 검체봉투에 넣어 봉인한다.

② 정보 기입시에는 유성펜을 이용하며, 누구나 알아볼 수 있는 관련 정보를 명시한다.

(5) 검체의 운반 요령

① 채취된 검체는 오염, 파손, 손상, 변형 등이 되지 않도록 주의하여 운반한다.

② 장거리 운송시 검체는 냉장상태를 유지하면서 운반한다.

③ 멸균용기에 채취하여 24시간 이내에 식품위생검사기관에 운반하여야 하며 부득이한 사정으로 즉시 송부하지 못할 때에는 냉동 보관한다.

④ ‘음식점 식육 원산지 표시제’와 관련된 검체 수거시에는 서류검사와 시험분석을 병용하기 위해 수거 시료에 대한 정확한 정보가 요구되어, 다음 관련 서류 사본을 함께 확보하도록 한다.

※ 음식점영업자 확인서, 등급판정 확인서, 거래명세표, 검사증명서 등의 관련 서류사본

(6) 검체의 보관 : 검체가 변질되지 않도록 냉동, 밀폐 보관한다.

2) 판별 시험

※ 쇠고기원산지판별에 대한 시험법은 이 공전에 있는 간이시험방법(KoBreed kit)으로 시험함을 원칙으로 한다.

(1) 쇠고기 검체에서 DNA 추출

① 0.5 g의 검체를 잘게 다져 1.5 mL 튜브에 옮긴다.

② 핵산 해리 혼합액을 300 uL 첨가하고 단백질분해효소 K (20㎎/mL 농도)를 10 uL 첨가한다.

③ 잘 혼합한 후 검체가 완전히 용해될 때 까지 55℃ 항온수조에 둔다 (약 40분～1시간 30분). 이때 10분 간격으로 약 10～20초 간 혼합기를 이용하여 잘 혼합한다.

④ 얼음 위에 3분 간 둔 뒤 단백질 침전 용액을 100 uL 첨가한 후 20초 간 혼합기를 이용하여 잘 혼합한다.

⑤ 얼음 위에 5분 간 둔 뒤 14,000 rpm 에서 5분 간 원심분리한다.

⑥ 상층액을 새로운 1.5 mL 튜브에 옮기고 이소프로판올 300uL를 첨가하여 위 아래로 뒤집으며 잘 섞어준다.

⑦ 14,000 rpm 에서 5분 간 원심분리한다.

⑧ 상층액을 피펫으로 DNA 응축물이 없어지지 않도록 조심스럽게 버린다.

⑨ 70% 에탄올을 1 mL 넣고 2~3번 위 아래로 뒤집으며 잘 섞은 뒤 14,000 rpm 에서 5분 간 원심분리한다.

⑩ 상층액을 피펫으로 DNA 응축물이 없어지지 않도록 조심스럽게 버리고 상온에서 DNA 응축물을 건조시킨다 (약 5분 간 상온에 방치).

⑪ RNA 분해효소가 첨가된 DNA 재수화 용액 50 uL를 가한다.

⑫ 튜브 끝을 손가락으로 가볍게 치면서 DNA 응축물을 녹인다.

[시약의 조제]

① 핵산 해리 혼합액

Nucleic lysis solution (Promega A7943 또는 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 제품) 500 uL 당 0.5 M EDTA를 120 uL를 첨가해서 조제한다.

② RNA 분해효소가 첨가된 DNA 재수화(rehydration) 용액

DNA rehydration solution 1mL 당 RNase(4 ㎎/mL) 10 uL를 첨가하여 조제한다.

(2) DNA 농도측정

① 모든 DNA 시료 농도는 피코그린 DNA 정량 용액(Molecular probe Cat# P-7581 또는 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 제품)과 lambda DNA (Invitrogen Cat# 25250-28 또는 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 제품)를 이용하여 측정한다.

② Lambda DNA 표준액을 만들기 위해 lambda DNA 원액을 각각 0, 1.5262, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 ng/uL의 농도로 희석한다.

③ 농도별 lambda DNA 희석 시료 2 uL를 98 uL의 피코그린 희석 용액에 넣고 빛이 없는 곳에서 30분 간 상온에서 반응한 후 자외선흡광광도계 (480 nm/520 nm)로 측정한다.

④ 측정된 값과 희석된 농도값을 기초로 표준곡선을 작성한다.

⑤ DNA 시료는 원액 2 uL를 TE 완충액(pH 8.0)으로 10배 희석하여 위와 같은 방법으로 측정하며 표준곡선을 이용하여 정확한 농도를 산출한다. 이때 DNA의 농도가 100 ng/uL 이상이거나 1 ng/uL 이하일 경우 다시 희석하여 재측정한다.

⑥ 최종 DNA 농도가 50 ng/uL이 되도록 TE 완충액(pH 8.0)에 희석한다.

[시약의 조제]

① 피코그린 희석 용액

피코그린 시약을 TE 완충액(pH 8.0)을 사용하여 1:200으로 희석한다.

② TE 완충액(pH 8.0)

각각의 최종농도가 10mM Tris-염산용액(pH 8.0), 1mM EDTA 용액(pH 8.0)이 되도록 멸균증류수를 사용하여 조제한다.

(3) 판별 마커의 게노타이핑(genotyping)

- 준비된 DNA 시료(50 ng/uL)에 대하여 다음의 과정에 따라 실험한다.

① DNA 플레이트 준비

㉮  DNA 플레이트에 5 uL의 DNA 플레이트 제조용 시약을 넣고 DNA 시료(50 ng/uL)를 옮겨 넣는다.

㉯ DNA 플레이트를 가열기로 봉합하고 90℃로 예열 시켜놓은 가열기에서 30분간 반응시킨다.

㉰ 가열 봉합재를 용액이 튀지 않도록 조심스럽게 제거한 후 5 uL의 침전시약을 넣고 용액이 청색으로 변할 때 까지 충분히 혼합한다.

㉱ 15 uL의 2-프로필알콜을 넣고 3000 G로 20분간 원심분리한 후 상층액을 제거하고 상온에서 15~20분간 말린다.

㉲ DNA 플레이트의 각 칸에 10 uL의 혼탁액을 넣고 청색의 침전물이 완전히 풀어질 때까지 충분히 혼합한다.

② 유전형특이연장반응용(Allele-Specific Extension) 플레이트 준비

㉮ 유전형특이연장반응용 플레이트 각 칸에 10 uL의 올리고시약을 넣고 30 uL의 올리고 혼성 접합시약을 추가로 넣는다.

㉯ DNA 플레이트의 봉합을 조심스럽게 제거하고 10 uL의 DNA 반응액을 유전형특이연장반응용 플레이트로 옮기고 비드가 완전히 풀어질 때까지 충분히 혼합한다.

㉰ 70℃로 예열된 가열기에 유전형특이연장반응용 플레이트를 놓고, 즉시 가열기를 30℃로 맞춘다. 30℃로 온도가 떨어질 때까지 놓아둔다.

③ 연장(Extension) 및 접합(Ligation) 반응

㉮ 2분 동안 또는 비드가 한 곳으로 모일 때까지 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓고 비드를 제외한 상층액(~50 uL)을 제거하고 50 uL의 연장접합반응 혼합용액을 넣는다.

㉯ 비드가 완전히 풀어질 때까지 충분히 혼합한다.

㉰ 다시 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓고 비드를 제외하고 연장접합반응 혼합용액을 제거한다.

㉱ ㉯, ㉰의 과정을 반복한다.

㉲ 8-채널 피펫을 사용하여 50 uL의 범용완충액을 유전형특이연장반응용 플레이트의 각 칸에 넣고 2분 동안 비드가 한 곳으로 모일 때까지 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓는다.

㉳ 8-채널 피펫을 사용하여 비드를 제외하고 범용완충액을 제거한다.

㉴ ㉲, ㉳의 과정을 반복한다.

㉵ 8-채널 피펫을 사용하여 37 uL 연장접합반응 효소를 유전형특이연장반응용 플레이트의 각 칸에 넣어주고 플레이트를 접착 필름으로 봉합한 다음 비드가 풀어지도록 1,600~1,700 rpm으로 비드가 완전히 풀어질 때까지 1분간 충분히 혼합한다.

㉶ 유전형특이연장반응용 플레이트를 45℃로 예열시킨 가열기에서 15분간 반응시킨다.

④ PCR 반응

㉮ PCR 혼합용액 튜브에 64 uL의 DNA 중합효소와 50 uL의 Uracil DNA glucosylase를 넣고 충분히 혼합하고 PCR 플레이트에 PCR 혼합액을 30 uL씩 분주한다.

㉯ 2분 동안 또는 비드가 한곳으로 몰릴 때까지 자석 플레이트 위에 유전형특이연장반응용 플레이트를 올려놓고 비드를 제외한 상층액 (~50 uL)를 제거한 후 50 uL의 범용완충액을 넣어준다.

㉰ 다시 비드가 모일 수 있도록 자석 플레이트 위에 2분 동안 올려고 상층액을 모두 제거하고 35 uL의 DNA 해리용액을 유전형특이연장반응용 플레이트의 각 칸에 넣어준다.

㉱ 비드를 풀어주기 위해 1,800-1,900 rpm 으로 1분간 충분히 혼합하고 95℃로 예열시킨 가열기에 1분 동안 올려놓는다.

㉲ 가열기에서 플레이트를 꺼낸 뒤 2분 동안 또는 비드가 모일때까지 자석 플레이트 위에 플레이트를 올려놓은 후 30 uL 상층액을 PCR 플레이트로 옮긴다.

㉳ PCR 플레이트를 가열 봉합하고 유전자 증폭 장비로 즉시 옮긴다.

㉴ 유전자 증폭 장비의 PCR 반응을 다음 그림과 같이 수행한다.

⑤ PCR 반응체의 결합 과정

㉮ 비드용액을 충분히 혼합한 후, 20 uL씩 PCR 플레이트로 옮겨 잘 섞은 후 필터 플레이트로 옮긴다.

㉯ 커버로 덮고 빛을 차단한 채로 상온에서 60분간 두어 결합이 일어나도록 한다.

⑥ VeraCode 비드 플레이트 용 중간 플레이트 준비

㉮ 빈 96 칸 규격의 폐물 수거 플레이트 위에 필터 플레이트 어댑터를 놓고 PCR 반응액이 들어있는 필터 플레이트를 올려놓는다.

㉯ 25℃ 에서 1,000 G(~2,000 G)로 5분 동안 원심분리한다.

㉰ 50 uL의 범용완충액을 필터 플레이트에 넣고 25℃에서 1,000 G (~2,000 G)로 5분 동안 원심분리한다.

㉱ 30 uL의 혼성용액을 중간 플레이트에 분주한다.

㉲ 중간 플레이트와 폐물 수거 플레이트를 교체하고 30 uL의 0.1N 수산화 나트륨를 필터 플레이트에 분주한다.

㉳ 즉시 25℃에서 1000 G(~2,000 G)로 5분간 원심분리한다.

⑦ VeraCode 비드 플레이트의 혼성 반응

㉮ 15 mL 튜브에 3 mL의 혼성용액과 3 mL의 0.1N 수산화나트륨 용액을 넣고 충분히 혼합하여 혼성용액을 중화시킨다.

㉯ 50 uL의 중화된 혼성용액을 중간 플레이트의 각 칸에 분주하고 중간 플레이트 안의 시료를 4~5회 피펫으로 섞어준다.

㉰ 100 uL의 반응체를 VeraCode 비드 플레이트에 옮긴다.

㉱ 시료가 들어있는 VeraCode 비드 플레이트를 3시간 동안 혼성 (850 G, 45℃) 시킨다.

㉲ VeraCode 비드 플레이트에 200 uL의 세척액을 첨가하고 각 칸의 용액을 피펫으로 섞어준다.

㉳ 각 칸 바닥에 비드가 모이도록 2분 동안 기다린 후 상층액을 제거한다.

㉴ ㉲, ㉳의 과정을 반복한다.

⑧ VeraCode 비드 플레이트 스캐닝

- 반응과정이 끝난 VeraCode 비드 플레이트를 BeadXpress reader로 스캐닝한다. 스캐닝이 완료되면 비드스튜디오 소프트웨어를 이용하여 게노타입을 결정한다.

⑨ 최종 게노타입은 키트 내의 설명에 따라 비드스튜디오 소프트웨어의 보고서 형식을 이용하여 파일 형태로 출력한다.

(4) 결과판정

① 최종 게노타입 파일을 표 1의 쇠고기원산지 판별식*에 의하여 자동 분석하여 판정한다.

* 쇠고기원산지 판별식

SNP별 각각의 게노타입을 표 2와 같이 AA형=0, AB형=1, BB형=2에 해당하는 값을 넣고 한우와 수입육을 각각 0과 1로 판별하는 표 1의 공식에 대입한다. 이때 게노타입에 손실이 있을 경우, 표 2의 해당 값(평균값)을 넣는다.

② 식육판별분석에 의한 추정값이 0.4 이하이면  “한우”로 판정하며, 0.4 보다 크면 “비한우”로 판정한다.

표 1. 쇠고기원산지 판별식

추정값=0.42777+Btau02349×0.03515+Btau03932×0.0469+Btau03016×-0.03033+Btau04630×0.02072+Btau05555×0.03638+Btau03690×-0.01483+Btau03567×0.02053+Btau03413×-0.02079+Btau05032×0.01148+Btau03853×-0.01343+Btau05673×-0.0195+Btau04104×-0.01962+Btau00969×-0.0194+Btau03782×0.02418+Btau03931×-0.02349+Btau01636×0.01319+Btau01748×-0.00863+Btau04647×-0.01528+Btau03717×-0.02244+Btau05169×0.01566+Btau04361×-0.01702+Btau03391×-0.02048+Btau05398×0.02453+Btau00673×-0.0368+Btau00664×0.03165+Btau03806×-0.02264+Btau05707×0.0234+Btau04942×0.01619+Btau03306×-0.01782+Btau04236×0.01198+Btau03623×0.01112+Btau03217×0.01716+Btau04963×-0.0328+Btau03234×-0.01452+Btau04636×-0.0153+Btau04172×0.01795+Btau04394×-0.01164+Btau03816×0.01925+Btau05450×-0.01839+Btau01591×0.02089+Btau00852×-0.01391+Btau03097×-0.0246+Btau05500×-0.01784+Btau01376×-0.0138+Btau05023×0.0182+Btau03654×0.01371+Btau04989×-0.01674+Btau03113×-0.01543+Btau03502×-0.01207+Btau05594×0.02518+Btau04242×0.01787+Btau03432×-0.0111+Btau02169×-0.01168+Btau00951×-0.01366+Btau02080×0.01984+Btau03357×-0.02218+Btau03845×0.05348+Btau05607×-0.01297+Btau02018×0.01858+Btau03735×-0.01353+Btau03246×0.01814+Btau03395×0.01055+Btau03665×-0.0131+Btau04838×0.01021+Btau05640×-0.01577+Btau05638×-0.01154+Btau04511×-0.02096+Btau03324×0.01181+Btau02109×0.01549+Btau03129×0.01808

표 2. 식육원산지 판별 마커의 게노타입 대치값 및 게노타입 손실값

SNPID	Genotype 대치값			Missing	SNPID	Genotype 대치값			Missing
Btau00664	AA=0	AG=1	GG=2	0.768	Btau03735	TT=0	TC=1	CC=2	0.62
Btau00673	TT=0	TA=1	AA=2	0.746	Btau03782	CC=0	TC=1	TT=2	0.575
Btau00852	TT=0	TG=1	GG=2	0.752	Btau03806	CC=0	TC=1	TT=2	0.827
Btau00951	AA=0	AC=1	CC=2	0.348	Btau03816	GG=0	AG=1	AA=2	0.39
Btau00969	GG=0	AG=1	AA=2	0.77	Btau03845	AA=0	AG=1	GG=2	0.401
Btau01376	AA=0	AC=1	CC=2	0.755	Btau03853	CC=0	GC=1	GG=2	0.915
Btau01591	TT=0	TC=1	CC=2	0.941	Btau03931	GG=0	AG=1	AA=2	0.391
Btau01636	TT=0	TC=1	CC=2	0.948	Btau03932	TT=0	TC=1	CC=2	0.616
Btau01748	AA=0	AC=1	CC=2	0.91	Btau04104	GG=0	AG=1	AA=2	0.703
Btau02018	GG=0	AG=1	AA=2	0.729	Btau04172	TT=0	TC=1	CC=2	0.788
Btau02080	AA=0	AG=1	GG=2	0.587	Btau04236	CC=0	GC=1	GG=2	0.632
Btau02109	AA=0	AG=1	GG=2	0.863	Btau04242	CC=0	TC=1	TT=2	0.861
Btau02169	GG=0	AG=1	AA=2	0.906	Btau04361	CC=0	TC=1	TT=2	0.932
Btau02349	CC=0	TC=1	TT=2	0.633	Btau04394	CC=0	AC=1	AA=2	0.987
Btau03016	GG=0	AG=1	AA=2	0.863	Btau04511	CC=0	AC=1	AA=2	0.572
Btau03097	GG=0	AG=1	AA=2	0.773	Btau04630	TT=0	TG=1	GG=2	0.723
Btau03113	CC=0	TC=1	TT=2	0.963	Btau04636	TT=0	TC=1	CC=2	0.612
Btau03129	AA=0	AG=1	GG=2	0.946	Btau04647	AA=0	AG=1	GG=2	0.802
Btau03217	CC=0	AC=1	AA=2	0.83	Btau04838	AA=0	AG=1	GG=2	0.951
Btau03234	TT=0	TC=1	CC=2	0.883	Btau04942	TT=0	TC=1	CC=2	0.544
Btau03246	TT=0	TA=1	AA=2	0.805	Btau04963	GG=0	AG=1	AA=2	0.333
Btau03306	TT=0	TC=1	CC=2	0.584	Btau04989	TT=0	TC=1	CC=2	0.429
Btau03324	GG=0	AG=1	AA=2	0.831	Btau05023	AA=0	AC=1	CC=2	0.69
Btau03357	GG=0	AG=1	AA=2	0.389	Btau05032	GG=0	GC=1	CC=2	0.988
Btau03391	AA=0	AG=1	GG=2	0.945	Btau05169	CC=0	TC=1	TT=2	0.834
Btau03395	AA=0	TA=1	TT=2	0.976	Btau05398	CC=0	TC=1	TT=2	0.378
Btau03413	GG=0	AG=1	AA=2	0.992	Btau05450	CC=0	TC=1	TT=2	0.834
Btau03432	TT=0	TA=1	AA=2	0.915	Btau05500	CC=0	TC=1	TT=2	0.966
Btau03502	GG=0	GC=1	CC=2	0.995	Btau05555	TT=0	TA=1	AA=2	0.843
Btau03567	TT=0	TC=1	CC=2	0.738	Btau05594	GG=0	TG=1	TT=2	0.86
Btau03623	TT=0	TC=1	CC=2	0.845	Btau05607	AA=0	AG=1	GG=2	0.549
Btau03654	CC=0	TC=1	TT=2	0.956	Btau05638	TT=0	TC=1	CC=2	0.962
Btau03665	AA=0	TA=1	TT=2	0.9	Btau05640	AA=0	AG=1	GG=2	0.685
Btau03690	CC=0	TC=1	TT=2	0.868	Btau05673	CC=0	TC=1	TT=2	0.894
Btau03717	AA=0	AG=1	GG=2	0.98	Btau05707	CC=0	AC=1	AA=2	0.884