국립수의과학검역원 고시 제 2007-21호

축산물가공처리법 제4조 제2항의 규정에 의한 “축산물의가공기준및성분규격(국립수의과학검역원고시 제2007-20호, ’2007. 6. 5.)”을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2007년 10월 5일

국립수의과학검역원장

축산물의가공기준및성분규격 중 개정

Ⅰ. 개정사유

축산물의 가공기준 및 성분규격을 미생물의 위해도, 제품의 특성 및 규정체계를 고려하여 안전한 축산물을 공급할 수 있는 과학적 미생물기준을 설정코자 함.

Ⅱ. 주요내용

축산물별기준및규격 중 조제유류에서 ‘바실러스 세레우스(Bacillus cereus)’ 규격기준을 신설하고, 관련 검사법을 신설함.

축산물의가공기준및성분규격중 개정

축산물의가공기준및성분규격중 다음과 같이 개정한다.

제2. 더. (3)중 ‘조제분유․조제우유, 성장기용 조제분유․성장기용 조제우유, 기타 조제분유․기타 조제우유’ 항목에 “(소) 바실러스 세레우스 : 1g당 100이하(멸균제품의 경우 음성이어야 한다)”를 신설한다.

제3. Ⅲ. 9. 버.를 다음과 같이 신설한다.

버. 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)

(1) 기구 및 재료

(가) 멸균기(건열 및 고압증기)

(나) 인큐베이터(부란기) 또는 항온수조

(다) 냉동 및 냉장고

(라) 수소이온농도측정기(pH meter)

(마) 균질기 : 스토마커(Stomacher) 및 Stomacher bag

(사) 피펫 : 0.1mL, 10mL 등

(아) 샤레 (직경 85 mm, 깊이 15 mm 이상)

(자) 루프(백금이) : 직경 3 mm

(2) 배지 및 시액

(가) Bacillus cereus Supplement

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 1.시액 너.에 따라 제조한다.

(나) MYP agar

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 2.배지 히에 따라 제조한다.

(다) Nutriet Agar(보통한천배지)

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 2. 배지 초.에 따라 제조한다.

(라) 희석액 : BPD 등

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 1. 나.에 따라 제조한다.

(3) 시험방법

(가) 정성시험법

① 분리배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 멸균 인산완충희석액에 가하여 균질화한 검액을 MYP한천배지에 접종하여 30℃에서 24시간 배양한다. 배양 후 혼탁한 환을 갖는 분홍색 집락을 선별한다. 이 때 명확하지 않을 경우 24시간 더 배양하여 관찰한다.

② 확인시험

MYP 한천배지에서 전형적인 집락을 선별하여 보통 한천배지에 접종하고 30℃에서 24시간 배양한다. 배양 후 그람염색을 실시하여 포자를 갖는 그람양성, 긴 형태의 간균으로 확인된 균은 운동성, nitrate환원능, VP, β-hemolysis, 혐기배양시 포도당 이용 등의 생화학시험을 실시한다.

(나) 정량시험법

① 균수측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 멸균 인산완충희석액에 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 한다. 멸균 인산완충희석액을 사용하여 10-2에서 10-6까지의 10배 단계 희석액을 만든다. MYP 한천평판배지(배지46)에 단계별 희석용액 0.2 mL씩 5장을 도말하여 총 접종액이 1 mL이 되게 한 후 30℃에서 24시간 배양한 후 집락 주변에 lecithinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수한다.

② 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지에 접종하고 30℃에서 24시간 배양한 후 머. 바실러스 세레우스 (1) 정성시험법 (나) 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.

③ 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다. 예로 10-1 희석용액을 0.2 mL씩 5장 도말 배양하여 5장의 집락을 합한 결과 100개의 전형적인 집락이 계수되었고 5개의 집락을 확인한 결과 3개의 집락이 바실러스 세레우스로 확인되었을 경우 100×(3/5)×10= 600으로 계산한다.

제3. Ⅷ. 1. “너”를 다음과 같이 신설한다.

너. Bacillus cereus Supplement

Polymyxin B 50,000IU에 2ml의 멸균증류수를 첨가하여 사용한다.

제3. Ⅷ. 2. “히”를 다음과 같이 신설한다.

히. MYP agar

Meat extract	1.0g

Peptone	10.0g

Mannitol                                         10.0g

Sodium chloride                                  10.0g

Phenol Red                                      0.025g

Agar	12.0g

pH 7.2±0.2

위의 성분 21.5g을 450㎖의 증류수에 가한 후 121℃에서 15분간 autoclave 해서 살균한 후 49℃정도로 식히고 50ml의 Egg Yolk Emulsion을 지시에 따라 녹인 후 Bacillus cereus Supplement를 무균적으로 첨가한 후 페트리디쉬에 분주한다.

부  칙

①(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.