식품의약품안전처 고시 제2013-204호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2013.8.5

식품의약품안전처

식품의약품안전처 고시 제2013-204호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

식중독균 중 대장균O157:H7의 규격을 장출혈성대장균으로 확대하고, 소비자가 그대로 섭취하는 생식용 굴에 분변오염지표인 대장균 기준·규격을 신설하며, 소비량이 많은 버섯류에 중금속 기준을 신설하고, 수산물 중 냉동어류, 염장어류, 통조림, 건조/절단 등 단순처리한 어류에 히스타민 기준을 신설하여 식품 안전관리를 강화하고자 함

또한 영‧유아 대상 식품의 곰팡이독소 기준을 신설하고, 수입식품에 대한 농약잔류허용기준을 마련하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

아울러 벌꿀류에 통합 관리되고 있는 벌꿀과 로얄젤리가공식품을 각각의 특성에 맞게 별도의 식품종으로 분리하고 벌집꿀의 기준 및 규격을 신설하여 벌집꿀의 안전관리를 도모하고자 함

2. 주요 내용

가. 식품 중 식중독균 기준 개정[제 2, 5, 4), 제 5, 11, 5), (7) 및 6), (7), 29-18, 5), (7) 및 6), (7), 제 8, 4, (5) 및 5, 8)]

1) 대장균O157:H7 이외의 장출혈성 대장균에 의한 식중독이 증가하고 있어 이를 예방하기 위해 대장균O157:H7을 포함한 장출혈성 대장균으로 관리 확대 필요

2) 대장균O157:H7 규격을 장출혈성 대장균 규격으로 확대 신설하고, 장출혈성 대장균 검출을 위한 시험법 개정

3) 장출혈성 대장균으로 규격을 확대하여 국·내외 식품에 대한 안전관리 강화

나. 버섯류에 대한 중금속 기준 신설 [제 2, 5, 5)]

1) 식품 중 중금속 관리 강화를 위해 중금속 오염 가능성이 높은 다소비 버섯류에 대한 중금속 기준 필요

2) 버섯류에 대한 납, 카드뮴 기준 신설

3) 버섯류의 중금속 안전관리로 안전한 식품 공급

다. 유성분을 함유한 영‧유아용식품에 대한 아플라톡신 M1 기준 신설 [제 2, 5, 8)]

1) 영‧유아의 유해오염물질에 대한 민감성을 고려하여 영‧유아가 섭취하는 식품의 안전관리 강화 필요

2) 조제(분)유류 및 유성분 함유 특수용도식품에 대한 아플라톡신 M1 기준 신설

3) 아플라톡신 M1 안전관리로 영‧유아에게 안전한 식품 공급

라. 농산물의 농약잔류허용기준 개정[제 2, 5, 10), (4), [별표 4] 중 (72), (136)]

1) 콩나물(숙주나물)에 이산화황을 불법적으로 사용하는 경우가 있어 검출되어서는 아니되는 항목에 이산화황 추가 및 아세토클로르의 재평가에 따른 기준 강화 필요

2) 콩나물(숙주나물)의 이산화황 불검출 기준 신설, 대두의 아세토클로르 기준 강화, 중복 등재된 마늘의 펜디메타린 기준 삭제

3) 농약의 과다사용으로부터 국민건강 보호

마. 수산물에 대한 히스타민 기준 신설 [제 2, 5, 22)]

1) 제외국(CODEX, EU 등)에서는 어류 및 가공품에 대해 바이오제닉아민 중 독성이 가장 강하고 식중독을 유발하는 것으로 알려진 히스타민의 기준을 관리하고 있어 우리나라에서도 관리 필요성이 제기됨

2) 냉동어류, 염장어류, 통조림, 건조/절단 등 단순 처리한 어류에 대한 히스타민 기준 신설

3) 제외국과의 기준 조화 및 수산물 섭취로 인한 국민 불안감 해소

바. 벌집꿀의 기준 및 규격 신설[제 5, 29-7]

1) 벌집꿀에 대한 기준․규격 마련을 통한 안전관리 요구

2) 벌꿀류에서 로얄젤리가공식품을 분리하고 벌집꿀의 기준․규격 신설

3) 벌집꿀에 대한 기준을 신설하여 관리함으로써 안전한 식품을 국민에게 제공

사. 수산물 중 굴의 기준 및 규격 신설[제 6, 1, 6)]

1) 굴은 날 것으로 먹는 경우가 많기 때문에 생식용 굴에 대해서는 보다 위생적이고 안전한 굴 생산·관리가 필요함.

2) 생식용으로 소비자에게 판매되는 굴의 위생적인 생산을 유도하기 위해 원료 등의 구비요건을 신설하고 식중독 예방을 위해 분변오염의 지표균인 대장균 기준·규격을 신설함.

3) 생식용 굴의 위생적인 생산·관리를 통한 식중독예방 및 국내·외 수산물 안전성에 대한 신뢰도 향상

아. 일반시험법 개정

1) 미생물 배지 및 시액 신설[제 10, 3, 3.4, 3.4.1, 72), 73) 및 74), 3.4.2, 9)]

2) 굴 중 대장균 시험법 개정[제 10, 3, 3.8]

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조 제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

공고 제2012-219호(2012. 10. 12～2012. 12. 12)

2) 식품위생심의위원회

가) 2012. 8. 10  잔류농약분과 심의

나) 2013. 1. 18  유해오염물질분과 심의

다) 2013. 1. 24  미생물분과 심의

라) 2013. 1. 30  위생제도분과 심의

3) 규제심사

가) 규제개혁위원회 규제심사결과: 비중요 규제(2013. 5. 31)

식품의약품안전처 고시 제2013-204호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2013-14호, 2013. 4. 5.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2013년  8월  5일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제 2, 5, 4) 중 “대장균 O157:H7(Escherichia coli O157:H7)”을 “장출혈성대장균”으로 하고, “검출되어서는 아니되며”를 “음성이어야 하며”로 하며 “검출되어서는 아니된다”를 “음성이어야 한다”로 한다.

제 2, 5, 5), (5) 중 버섯류를 다음과 같이 신설한다.

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
버섯류	0.3 이하(양송이버섯, 느타리버섯, 새송이버섯, 표고버섯, 송이버섯, 팽이버섯, 목이버섯에 한한다)	0.3 이하(양송이버섯, 느타리버섯, 새송이버섯, 표고버섯, 송이버섯, 팽이버섯, 목이버섯에 한한다)

(5) 농산물의 중금속 기준

제 2, 5, 8) 중 (2)를 다음과 같이 한다.

(2) 아플라톡신 M1

대 상 식 품	기 준
조제유류(조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유, 기타조제분유, 기타조제우유), 특수용도식품(영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 영·아용 특수조제식품) 중 유성분 함유제품	0.025 μg/kg 이하 [분말제품의 경우 희석하여 섭취하는 형태(제조사가 제시한 섭취방법)를 고려하여 기준 적용]

제 2, 5, 10) (4)에 콩나물(숙주나물)의 농약 잔류허용기준

카벤다짐, 티아벤다졸, 치람, 캡탄, 이산화황이 검출되어서는 아니 된다.

제 2, 5 중 22)를 다음과 같이 신설한다.

22) 수산물의 히스타민 기준

냉동어류, 염장어류, 통조림, 건조/절단 등 단순 처리한 것(어육살, 필렛, 건멸치 등) : 200 mg/kg 이하(고등어, 다랑어류, 연어, 꽁치, 청어, 멸치, 삼치, 정어리, 몽치다래, 물치다래에 한한다)

제 5, 11, 5), (7)을 다음과 같이 한다.

(7) 장출혈성 대장균 : 음성이어야 한다(원료용 분쇄육에 한한다).

제 5, 11, 6), (7)을 다음과 같이 한다.

(7) 장출혈성 대장균

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.16 장출혈성 대장균에 따라 시험한다.

제 5, 29-7, 1)을 다음과 같이 한다.

1) 정의

벌꿀류란 꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집에 저장한 벌집꿀과 이것에서 채밀한 벌꿀로서 화분, 로얄젤리, 당류, 감미료 등 다른 식품이나 식품첨가물을 첨가하지 아니한 것을 말한다.

제 5, 29-7, 4) 및 5)를 다음과 같이 한다.

4) 식품유형

(1) 벌집꿀

꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집 속에 저장한 후 벌집의 전체 또는 일부를 봉한 것으로, 벌집 고유의 형태를 유지하고 있는 것을 말한다.

(2) 벌꿀

꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집에 저장한 것을 채밀한 것으로 숙성된 것을 말한다.

5) 규격

유형 항목	벌집꿀	벌꿀
수분(%)	23.0 이하	20.0 이하
물불용물(%)	-	0.5 이하
산도(meq/kg)	-	40.0 이하
전화당(%)	50.0 이상	60.0 이상
자당(%)	15.0 이하	7.0 이하
히드록시메틸푸르푸랄(mg/kg)	80.0 이하	80.0 이하
타르색소	-	검출되어서는 아니 된다.
인공감미료	-	검출되어서는 아니 된다.
이성화당	-	음성이어야 한다.

제 5, 29-7, 6), (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 검체

① 벌집꿀 : 유리 깔대기에 10mesh의 체를 깔고 그 위에 벌집꿀 100g을 올려놓고 40℃에서 2시간 방치하여 흘러내린 액을 모아 잘 섞은 것을 검체로 한다.

② 벌꿀 : 벌꿀이 결정을 함유하지 않을 때는 잘 섞고, 결정을 함유할 때는 밀봉용기에 넣고 60～65℃의 수욕중에서 30분간 가열하여 완전히 녹인 다음 빨리 식히고 잘 섞은 것을 검체로 한다(다만, 히드록시메틸푸르푸랄 시험에서의 검체는 가열해서는 아니 된다).

제 5, 29-7, 6) 중 “(1) 벌꿀”을 삭제하고, “① 수분”을 “(2) 수분”으로 하고 “벌꿀이 결정을 함유하지 않을 때는 잘 섞고, 결정을 함유할 때는 밀봉용기에 넣고 60～65℃의 수욕중에서 30분간 가열하여 완전히 녹인 다음 빨리 식히고 잘 섞은 것을 검체로 한다(다만, 히드록시메틸푸르푸랄 시험에서의 검체는 가열해서는 아니 된다). 이하 벌꿀항에서 검체라 함은 이와 같이 만든 것을 말한다.”를 삭제한다.

제 5, 29-7, 6) 중 “②부터 ⑧까지”를 각각 “(3)부터 (9)까지”로 한다.

제 5. 29-7, 6) 중 (2)를 삭제한다.

제 5, 29-18, 5), (7)을 다음과 같이 한다.

(7) 장출혈성 대장균 : 음성이어야 한다(신선편의식품에 한한다).

제 5, 29-18, 6), (7)을 다음과 같이 한다.

(7) 장출혈성 대장균

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.16 장출혈성 대장균에 따라 시험한다.

제 5, 29-24 로얄젤리가공식품을 다음과 같이 신설한다.

1) 정의

로얄젤리가공식품이란 일벌의 인두선에서 분비되는 분비물을 그대로 또는 섭취가 용이하도록 가공한 것을 말한다.

2) 원료 등의 구비요건

3) 제조․가공기준

4) 식품유형

(1) 생로얄젤리

일벌의 인두선에서 분비되는 분비물인 로얄젤리를 식용에 적합하도록 이물을 제거한 것

(2) 동결건조로얄젤리

생로얄젤리를 동결건조한 것

(3) 로얄젤리제품

위 (1), (2) 외의 로얄젤리가공식품으로 로얄젤리(생로얄젤리 35.0% 이상, 동결건조로얄젤리 14.0% 이상)를 제조․가공한 것

5) 규격

유형 항목	생로얄젤리	동결건조 로얄젤리	로얄젤리제품
① 10-히드록시-2-데센산(%)	1.6 이상	4.0 이상	0.56 이상
② 수분(%)	65.5～68.5	5.0 이하	-
③ 조단백질(%)	11.0～14.5	30.0～41.0	-
④ 산도(1 N NaOH mL/100 g)	32～53	-	-
⑤ 대장균	음성	음성	음성
⑥ 붕해시험	적합하여야 한다(정제 또는 캡슐제품에 한한다. 단, 씹어 먹는 것은 제외한다.).

6) 시험방법

(1) 10-히드록시-2-데센산(10-HDA)

① 장치

고속액체크로마토그래프

② 표준용액의 조제

10□HDA 표준품을 황산데시케이타에서 건조시킨 후 약 50 mg을 정밀히 취하여 넣고 메탄올로 녹여 50 mL로 한 것을 표준원액(1,000 ppm)으로 하여 필요시 희석하여 사용한다.

③ 시험용액의 조제

10□HDA로서 48 mg에 해당하는 양의 검체(연질캡슐 제품은 내용물과 피막을 함께 취한다)를 취하여 500 mL 용량 플라스크에 넣고, 물 약 50 mL를 넣어 50℃로 가온하고 진탕 혼화하고, 연질캡슐은 피막과 내용물을 균질하게 혼화시킨 후 메탄올 약 350 mL를 넣어 약 30분간 초음파 진탕 추출하고 메탄올을 넣어 500 mL로 한다. 이 액을 여과하여 검액으로 한다.

캡슐 제품의 경우에는 20캡슐 이상을 취하여, 캡슐을 절개하고 개개의 내용물의 무게를 정밀하게 달아 평균무게를 구하여 1캡슐의 평균무게로 한다.

④ 시험조작

㉮ 고속액체크로마토그래피 측정조건

Ⓐ 칼럼∶μ—Bondapak C18 또는 이와 유사한 칼럼

Ⓑ 이동상∶0.02 M (NH4)2HPO4‧메탄올(7∶3) 혼합액(단, 인산을 가하여 pH 7.0으로 조정한다)

Ⓒ 검출기∶UV 214 nm

Ⓓ 유속∶1.4 mL/min(유속은 10□HDA 주피크의 유지시간이 7～10분 되도록 적절히 조정한다).

㉯ 정량시험

검액 및 표준액 10 μL를 액체크로마토그래프내에 주입하여 10□HDA의 그래프를 얻는다. 이 그래프를 표준 그래프와 비교하여 10□HDA에 해당하는 피크를 확인한다. 10□HDA의 함량은 피크의 면적 또는 높이로 다음 식에 따라 산출한다.

<계 산>

10-DHA 함량(%) =[eqn: {eqalign{검액`중의`10-HDA의# `````````````````````피크면적}} over {eqalign{````````````표준용액`중의# 10-HDA의`피크면적}} ` TIMES ` {표준품`취한`량(mg)} over {검체`채취량(mg)} ` TIMES `100]

(2) 수분

제 10. 일반시험법 1. 식품성분시험법 1.1 일반성분시험법 1.1.1 수분 1.1.1.3 칼피셔법에 따라 시험한다. 또는 칭량병에 정제해사(20～40메쉬의 것)를 약 절반정도 채우고 유리봉을 넣어 항량시킨 후 이에 검체 2～3 g을 정밀히 달아 넣고 유리봉으로 잘 혼합한 후 이를 70±2℃의 감압건조기에 넣고 25±5 mmHg로 감압하여 4시간 건조시킨다.

건조 후 데시케이타에서 약 30분간 항량시킨 후 다음 식에 따라 수분함량을 구한다.

수분(%) = [eqn: {B`-`C} over {B`-`A} ` TIMES `100]

A∶칭량병(해사, 유리봉 포함)무게(g)

B∶검체 및 칭량병 무게(g)

C∶건조 후 무게(g)

(3) 조단백질

제 10. 일반시험법 1. 식품성분시험법 1.1 일반성분시험법 1.1.3 질소화합물 1.1.3.1 총질소 및 조단백질에 따라 시험한다.

(4) 산도

검체 0.5 g에 탄산가스를 함유하지 않은 물 50 mL를 가하고 페놀프탈레인 시액 0.5 mL를 가하여 0.1 N 수산화나트륨용액으로 30초간 홍색이 지속될 때까지 적정한다.

산도(1N NaOH mL/100g) = [eqn: {a` TIMES `f` TIMES `10} over {검체`채취량(g)}]

a∶0.1 N NaOH 용액의 소비 mL수

f∶0.1 N NaOH 용액의 역가

(5) 대장균

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

(6) 붕해시험

제 10. 일반시험법 9. 일반시험법 9.6 붕해시험에 따라 시험한다.

제 6, 1 중 “1) 수산물”을 “1) 수산물일반에 대한 공통 기준 및 규격”으로 한다.

제 6, 1, 1), (4)를 다음과 같이 한다.

최종소비자가 그대로 섭취할 수 있도록 유통판매를 목적으로 위생처리하여 용기·포장에 넣은 수산물은 살모넬라(Salmonella spp.) 및 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 음성, 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus) 및 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) g당 100 이하이어야 한다.

제 6, 1, 1) 중 “(6)”을 “2)”로 하고, 제 6, 1 중 “2)부터 4)까지”를 각각 “3)부터 5)까지”로 한다.

제 6, 1, 6)를 다음과 같이 신설한다.

6) 생식용 굴

(1) 정의

생식용 굴이란 소비자가 날로 섭취할 수 있는 전각굴, 반각굴, 탈각굴로서 포장한 것을 말한다(냉동굴을 포함한다).

(2) 원료 등의 구비요건

(가) 생식용 굴은 「정착성 수산동식물 생산해역의 등급설정 기준」(농림수산식품부 고시)에 따라 청정해역의 수질기준에 적합한 해역에서 생산된 것이거나 자연정화1) 또는 인공정화2) 작업을 통해 청정해역의 기준에 적합하도록 처리되어야 한다.

(나) 굴은 채취 후 신속하게 위생적인 물로서 충분히 세척하여야 하며, 화학적합성품(차아염소산나트륨 제외)을 사용하여서는 안 된다.

(다) 생식용 굴은 덮개가 있는 용기(합성수지, 알루미늄 상자 또는 내수성의 가공용지) 등으로 포장해서 10℃이하로 보존·유통하여야 한다.

※ 용어 풀이

1) 자연정화 : 굴 내에 존재하는 미생물 수치를 줄이기 위해 굴을 수질기준에 적합한 지역으로 옮겨서 자연 정화 능력을 이용하여 처리하는 과정

2) 인공정화 : 굴 내부의 병원체를 줄이기 위하여 육상 시설 등의 제한된 수중 환경으로 처리하는 과정

(3) 규격

① 대장균 : 230 MPN/100g 이하

(4) 시험방법

① 대장균

제 10. 일반시험법 3. 미생물 시험법 3.8 대장균 가. 최확수법 2)제2법에 따라 시험한다.

제 8, 4, 가), (5) 중 “대장균 O157:H7(Escherichia coli O157:H7)”을 “장출혈성 대장균”으로 하고 “검출되어서는 아니되며”를 “음성이어야 하며”로 한다.

제 8, 5, 8)을 다음과 같이 한다.

8) 장출혈성 대장균

제10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.16 장출혈성 대장균에 따라 시험한다.

제 10, 3, 3.4, 3.4.1, 72)부터 74)까지를 다음과 같이 신설한다.

72) MMGM(Minerals modified glutamate medium)

Lactose	10.0 g

L(+) Glutamic acid	6.35 g

L(+) Arginine monohydrochloride	0.02 g

L(-) Aspartic acid	0.024 g

L(-) Cystine	0.02 g

Sodium formate	0.25 g

Disodium potassium hydrogen phosphate	0.9 g

Ammonium chloride	2.5 g

Magnesium sulphate heptahydrate	0.1 g

Calcium chloride dihydrate	0.01 g

Ferric citrate scales	0.01 g

Nicotinic acid	0.001 g

Thiamine (Aneurin hydrochloride)	0.001 g

Pantothenic acid	0.001 g

Bromocresol purple	0.01 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.7 ± 0.1로 조정한 후 시험관에 10 mL 씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

73) BCIG 한천배지(5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide (BCIG) agar)

Tryptone	20.0 g

Bile salts No. 3	1.5 g

Agar	15.0 g

BCIG (as cyclohexylammonium salt)	0.075 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

74) mTSB 배지

Peptone from casein	17.0 g

Peptone from soymeal	3.0 g

Sodium chloride	1.5 g

Bile salts No. 3	2.5 g

D(+)glucose	2.5 g

Di-potassium hydrogen phosphate	4.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고, Novobiocin Sodium 0.02 g을 여과 멸균하여 가한다.

제 10, 3, 3.4, 3.4.2, 9)를 다음과 같이 신설한다.

9) 0.1% Peptone solution

Peptone	1.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0 ± 0.2 로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

제 10, 3, 3.8, 3.8.2, 가를 다음과 같이 한다.

가. 최확수법

1) 제1법

3.3 제조법에 따른 시험용액 10 mL, 1 mL 및 0.1 mL를 각각 5개 또는 3개의 EC 배지(배지 10) 발효관에 접종한 다음 44.5±0.2℃ 항온수조에서 24±2시간 배양한다. 시험용액 10 mL를 첨가할 경우 배농도의 배지 10 mL를 이용한다. 가스발생을 인정한 발효관을 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표 1 또는 별표 2 최확수표에 따라 검체 100 g(또는 100 mL)중의 대장균수를 산출한다.

2) 제2법

(1) 시험용액의 제조

패각을 제거한 검체 200 g에 0.1% peptone solution(시액 9) 200mL을 첨가하여 마쇄한 후 마쇄액 20 mL과 동일한 희석액(시액 9) 80 mL을 혼합하여 최종 10배 희석한 것을 시험용액으로 사용한다. 시험용액은 필요에 따라 100배, 1,000배 등으로 희석하여 사용할 수 있다.

(2) 추정시험

제조법에 따른 시험용액 10 mL을 5개의 2배 농도 MMGM 배지(배지 72)가 들어있는 시험관에 접종하고, 또 시험용액 1 mL 및 0.1 mL을 각각 5개의 MMGM 배지가 들어있는 시험관에 접종하여 37±1℃에서 24±2시간 배양한다. 배양 결과 시험관내의 배지의 색깔이 노란색으로 되었을 때 추정시험 양성으로 하며 확정시험을 실시한다.

(3) 확정시험

추정시험에서 양성으로 확인된 MMGM 시험관 배양액을 BCIG 한천배지(배지 73)에 분리 배양한다. 44±1℃에서 24±2시간 배양 후 청녹색의(blue-green) 전형적인 집락이 발생되면 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표 1 최확수표에 따라 검체 100 g중의 대장균수를 산출한다.

제 10, 3 중 “3.16 대장균O157:H7(Escherichia coli O157:H7)”을 “3.16 장출혈성 대장균”으로 하고, 3.26 장출혈성 대장균을 삭제한다.

제 10, 3, 3.16, 1), 2), 3) 및 4)를 다음과 같이 하고 5)를 신설한다.

본 시험법은 대장균 O157:H7과 대장균 O157:H7이 아닌  베로독소 생성 대장균(VTEC)을 모두 검출하는 시험법이다. 장출혈성대장균의 낮은 최소감염량을 고려하여 검출 민감도 증가와 신속 검사를 위한 스크리닝 목적으로 증균 배양 후 배양액(1〜2 mL)에서 베로독소 유전자 확인시험을 우선 실시한다. 베로독소(VT1 그리고/또는 VT2) 유전자가 확인되지 않을 경우 불검출로 판정할 수 있으나, 베로독소 유전자가 확인된 경우에는 반드시 순수 분리하여 분리된 균의 베로독소 유전자 보유 유무를 재확인한다. 베로독소가 확인된 집락에 대하여 생화학적 검사를 통하여 대장균으로 동정된 경우 장출혈성대장균으로 판정한다.

1) 증균배양

검체 25 g(25 mL)을 취하여 225 mL mTSB(배지 74)를 가한 후 35～37℃에서 24시간 증균배양한다.

2) 분리배양

장출혈성대장균의 분리를 위해 TC-SMAC 배지(배지 66)와 BCIG 한천배지(배지 73)에 각각 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 배양한다.

3) 확인시험

TC-SMAC배지에서는 sorbitol을 분해하지 않은 무색집락을, BCIG 한천배지에서는 청록색 집락 각 5개 이상을 취하여 보통한천배지(배지 8)에 옮겨 35～37℃에서 18～24시간 배양한다. 전형적인 집락이 5개 이하일 경우 취할 수 있는 모든 집락에 대하여 확인시험을 실시한다. 배양 후 집락에 대하여 다음의 베로독소 유전자 PCR 확인 시험을 수행한 후 베로독소 양성 집락을 대상으로 그람음성간균을 확인하고 생화학시험을 실시하여 대장균으로 확인된 경우 장출혈성대장균으로 판정한다.

4) 베로독소 유전자 확인실험

베로독소 유전자는 다음의 PCR법에 따라 실시한다.

(1) 주형유전자 준비

전형적인 집락을 취하여 멸균증류수 200 μL에 현탁한 후, 10분간 끓여 원심분리하고, 상등액 5 μL를 취하여 시료로 사용한다.

(2) PCR 프라이머 염기서열

유전자	염기서열(5‘→3’)	결과확인
VT1	(F) CTG GAT TTA ATG TCG CAT AGT G (R) AGA ACG CCC ACT GAG ATC ATC	150bp
VT2	(F) ATC CTA TTC CCG GGA GTT TAC G (R) GCG TAT CGT ATA CAC AGG AGG	584bp

(3) PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
완충액	1×	10×	5 μL
MgCl2	2.5mM	25mM	5 μL
dNTPs	200uM	2.5mM	4 μL
VT1 프라이머(F)	20 pmol/tube	20 pmol/μL	1 μL
VT1 프라이머(R)	20 pmol/tube	20 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(F)	20 pmol/tube	20 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(R)	20 pmol/tube	20 pmol/㎕	1 μL
주형 DNA	25～50ng 또는 5μL	-	5 μL
Taq	2.5U/tube	5U/μL	0.5 μL
증류수	-	-	26.5 μL
총량	-	-	50 μL

(4) PCR 반응조건

구분	온도	시간	반응회수
초기변성	95℃	5분	1회
변성(denaturation)	95℃	30초	35회
결합(annealing)	50℃	40초
신장(extension)	72℃	1분
최종신장(elongation)	72℃	10분	1회
보존(store)	4℃	-	-

(5) 결과 확인

최종산물의 반응액 5 μL를 취하여 2.0% agarose로 100V에서 25분간 전기영동하고 EtBr(1ug/mL)로 염색한후 UV를 이용하여 반응생성물을 확인한다. 이때, DNA 크기를 알 수 있도록 100bp Ladder를 동시에 전기영동 한다. VT1 유전자는 150bp, VT2 유전자는 584bp에서 반응생성물을 확인할 수 있다. VT1 또는 VT2 유전자가 확인된 것은 장출혈성대장균이 검출된 것으로 판정한다.

5) 장출혈성대장균 중 대장균O157:H7의 확정이 필요할 경우 분리배양 시 TC-SMAC(배지66) 배지를 사용하여 sorbitol을 분해하지 않는 무색집락에 대하여 최종적으로 베로독소 보유 및 대장균 동정 확인한다. 양성균주에 대하여  O157과 H7의 혈청형의 결정은 제조사가 제시하는 방법에 따라 시험한다. 최종적으로 베로독소 유전자(VT1 또는/그리고 VT2) 양성, O157 및 H7 혈청 확인, 대장균으로 확인할 때 O157:H7으로 판정한다.

별표 4 (72) 아세토클로르(Acetochlor) 중 “대두 0.1”을 “대두 0.03”으로 하고 “밀, 수수, 옥수수는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임”을 “밀, 수수, 옥수수, 대두는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임”으로 한다.

별표 4 (163) 펜디메타린(Pendimethalin) 중 "마늘 0.2“를 삭제한다.

부칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제 2. 5. 4),  제 5. 11, 제 5.  29-18, 제 6. 1 및 제 8, 제 10. 3의 개정규정은 2013년 9월 1일부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조․가공 또는 수입(선적일 기준)한 식품부터 적용한다.

제3조(검사가 진행중인 식품등에 관한 경과조치) 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

제4조(이미 제조된 식품등에 관한 경과조치) 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 제조·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품 및 유통 중인 농산물을 포함한다)은 해당 식품의 유통기한까지 판매하거나 판매의 목적으로 진열 또는 운반하거나 영업상 사용할 수 있다.

현  행

개 정 안

제 1. (생  략)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 4. (생  략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (생  략)

4) 식중독균

식육(제조, 가공용원료는 제외한다), 살균 또는 멸균처리하였거나 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공식품에서는 특성에 따라 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 대장균 O157:H7(Escherichia coli O157:H7), 캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni), 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 등 식중독균이 검출되어서는 아니되며, 또한 식육 및 식육제품에 있어서는 결핵균, 탄저균, 브루셀라균이 검출되어서는 아니된다. 다만, ‘제 5. 식품별 기준 및 규격’에서 식중독균에 대한 규격이 정하여진 식품에는 해당식품의 규격을 적용하며, 그 외의 가공식품 중 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)와 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)는 다음과 같이 적용한다.

( 생  략)

5) 중금속 기준

(1) ～ (4) (생  략)

(5) 농산물의 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
< 신 설 >
(생 략)	(생 략)	(생 략)

(6) ～ (9) (생  략)

6) ～ 7) (생  략)

8) 곰팡이독소 기준

(1) (생  략)

(2) 아플라톡신 M1

대 상 식 품	기 준
(생 략)	(생 략)
< 신 설 >

(3) ～ (7) (생  략)

9) (생  략)

10) 농약의 잔류허용기준

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 콩나물(숙주나물)의 농약 잔류허용기준

카벤다짐, 티아벤다졸, 치람, 캡탄이 검출되어서는 아니된다.

(5) ∼ (7) (생  략)

11) ～ 21) (생  략)

< 신  설 >

6. (생  략)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 10. (생  략)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (6) (생  략)

(7) 대장균O157:H7 : 음성이어야 한다(원료용분쇄육에 한한다)

(8) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (6) (생  략)

(7) 대장균 O157:H7

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.16 대장균 O157:H7에 따라 시험한다.

(8) (생  략)

12. ～ 28. (생  략)

29. 기타식품류

29-1. ～ 29-6. (생  략)

29-7 벌꿀류

1) 정의

벌꿀류란 꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집에 저장한 것을 채밀한 것 또는 일벌의 인두선에서 분비되는 분비물을 그대로 또는 섭취가 용이하도록 가공한 것을 말한다.

2) 원료 등의 구비요건

3) 제조․가공기준

4) 식품유형

<신 설>

(1) 벌꿀

꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집에 저장한 것을 채밀한 것으로, 채밀 후 화분, 로얄젤리, 당류, 감미료 등 다른 식품이나 식품첨가물을 첨가하지 아니한 것을 말한다.

(2) 로얄젤리가공식품

5) 규격

(1) 벌꿀

① 수분(%)∶20.0 이하

② 물불용물(%)∶0.5 이하

③ 산도(meq/kg)∶40.0 이하

④ 전화당(%)∶60.0 이상

⑤ 자당(%)∶7.0 이하

⑥ 히드록시메틸푸르푸랄(mg/kg)∶80.0 이하

⑦ 타르색소∶검출되어서는 아니된다.

⑧ 인공감미료∶검출되어서는 아니된다.

⑨ 이성화당∶음성이어야 한다.

(2) 로얄젤리가공식품

6) 시험방법

(1) 벌꿀

<신 설>

① 수분

벌꿀이 결정을 함유하지 않을 때는 잘 섞고, 결정을 함유할 때는 밀봉용기에 넣고 60~65℃의 수욕중에서 30분간 가열하여 완전히 녹인 다음 빨리 식히고 잘 섞은 것을 검체로 한다(다만, 히드록시메틸푸르푸랄 시험에서의 검체는 가열해서는 아니된다). 이하 벌꿀항에서 검체라 함은 이와 같이 만든 것을 말한다.

(생  략)

② ～ ⑧ (생 략)

(2) 로얄젤리가공식품

29-8. ～ 29-17. (생  략)

29-18 즉석섭취·편의식품류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (6) (생  략)

(7) 대장균 O157:H7 : 음성이어야 한다(신선편의식품에 한한다).

(8) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (6) (생  략)

(7) 대장균 O157:H7

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.16 대장균 O157:H7에 따라 시험한다.

29-19 ～ 29-23 (생  략)

< 신  설 >

제 6. 수산물에 대한 규격

1. 규격

1) 수산물

(1) ～ (3) (생  략)

(4) 더 이상의 가공, 가열조리를 하지않고 그대로 섭취하는 수산물의 미생물 규격 중 살모넬라(Salmonella spp.), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)가 음성, 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 g당 100 이하이어야 한다.

(5) (생  략)

(6) 복어독

① 육질 : 10 MU/g 이하

② 껍질 : 10 MU/g 이하

③ 식용가능한 복어의 종류

표 (생  략)

2) 한천

(1) ～ (6) (생  략)

3) 냉동식용어류머리

(1) ～ (4) (생  략)

4) 냉동식용어류내장

(1) ～ (4) (생  략)

<신  설>

2. (생  략)

제 7. (생  략)

제 8. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. ～ 3. (생  략)

4. 규격

가) 조리식품 등

(1) ～ (4) (생  략)

(5) 식중독균 : 식품접객업소(집단급식소 포함)에서 조리된 식품은 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 대장균 O157:H7(Escherichia coli O157:H7), 캠필로박터 제주니(Camplyobacter jejuni), 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 등 식중독균이 검출되어서는 아니되며, 장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens) g당 100 이하, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) g당 10,000 이하이어야 한다. 다만, 조리과정 중 가열처리를 하지 않거나 가열 후 조리한 식품의 경우 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 g당 100 이하이어야 한다.

(6) (생  략)

나) ～ 다) (생  략)

5. 시험방법

1) ～ 7) (생  략)

8) 대장균 O157:H7

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.16 대장균 O157:H7에 따라 시험한다.

9) (생  략)

제 9. (생  략)

제10. 일반시험법

1 ～ 2. (생  략)

3. 미생물 시험법

3.1 ～ 3.3 (생  략)

3.4 배지 및 시액

3.4.1 배지

1) ～ 71) (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

3.4.2 시액

1) ～ 8) (생  략)

<신  설>

3.5 ～ 3.7 (생  략)

3.8 대장균

3.8.1 (생  략)

3.8.2 정량시험

가. 최확수법

3.3 제조법에 따른 시험용액 10 mL, 1 mL 및 0.1 mL를 각각 5개 또는 3개의 EC 배지(배지 10) 발효관에 접종한 다음 44.5±0.2℃ 항온수조에서 24±2시간 배양한다. 시험용액 10 mL를 첨가할 경우 배농도의 배지 10 mL를 이용한다. 가스발생을 인정한 발효관을 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표1 또는 별표2 최확수표에 따라 검체 100 g(또는 100 mL)중의 대장균수를 산출한다.

나. (생  략)

3.9 ～ 3.15 (생  략)

3.16 대장균O157:H7(Escherichia coli O157:H7)

<신설>

1) 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 mEC 배지(배지 42)에 가한 후 35～37℃에서 24±2시간 증균배양한다.

2) 분리배양

증균배양액을 cefixime(0.05 mg/L) 및 potassium tellurite(2.5 mg/L)가 첨가된 MacConkey sorbitol 한천배지(배지 43)에 접종하여 35~37℃에서 18시간 배양한다. Sorbitol을 분해하지 않는 무색집락을 취하여 EMB 한천배지(배지 6)에 접종하여 35~37℃에서 24±2시간 배양하고, 녹색의 금속성 광택이 확인된 집락은 확인시험을 실시한다.

3) 확인시험

EMB 한천배지에서 녹색의 금속성 광택을 보이는 집락을 보통한천배지(배지 8)에 옮겨 35~37℃에서 18~24시간 배양 후 그람음성간균임을 확인하고 생화학시험을 실시한다.

4) 혈청형 시험

대장균으로 확인 동정된 균은 O157 항혈청을 사용하여 혈청형을 결정하고, O157이 확인된 균은 H7의 혈청형시험을 한다.

< 신  설 >

3.17 ～ 3.25 (생  략)

3.26 장출혈성 대장균(Enterohemorrhagic Escherichia coli)

4. ～ 9. (생  략)

제11. ～ 12. (생  략)

[별표 1] ～ [별표 3] ( 생  략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (71) (생  략)

(72) 아세토클로르(Acetochlor)

(생  략)

대두	0.1

※ 밀, 수수, 옥수수는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임.

(73) ∼ (162) (생  략)

(163) 펜디메타린(Pendimethalin)

(생  략)

마늘             0.2

(164) ∼ (431) (생  략)

제 1. (현행과 같음)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 4. (생  략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식중독균

--------------------------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 장출혈성 대장균, ----------------------

--------------------------- -----------------------------------------------------음성이어야 하며,--------------

----------------------------

-------------------음성이어야 한다. -----------------------

--------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

(현행과 같음)

5) 중금속 기준

(1) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 농산물의 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
버섯류	0.3 이하(양송이버섯, 느타리버섯, 새송이버섯, 표고버섯, 송이버섯, 팽이버섯, 목이버섯에 한한다)	0.3 이하(양송이버섯, 느타리버섯, 새송이버섯, 표고버섯, 송이버섯, 팽이버섯, 목이버섯에 한한다)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

(6) ～ (9) (현행과 같음)

6) ～ 7) (현행과 같음)

8) 곰팡이독소 기준

(1) (현행과 같음)

(2) 아플라톡신 M1

대 상 식 품	기 준
(현행과 같음)	(현행과 같음)
조제유류(조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유, 기타조제분유, 기타조제우유), 특수용도식품(영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 영·아용 특수조제식품) 중 유성분 함유제품	0.025 μg/kg 이하 [분말제품의 경우 희석하여 섭취하는 형태(제조사가 제시한 섭취방법)를 고려하여 기준적용]

(3) ～ (7) (현행과 같음)

9) (현행과 같음)

10) 농약의 잔류허용기준

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 콩나물(숙주나물)의 농약 잔류허용기준

---------------------- 캡탄, 이산화황이 --------- 아니 된다.

(5) ∼ (7) (현행과 같음)

11) ～ 21) (현행과 같음)

22) 수산물의 히스타민 기준

(1) 냉동어류, 염장어류, 통조림, 건조/절단 등 단순 처리한 것(어육, 필렛, 건멸치 등) : 200 mg/kg 이하(고등어, 다랑어류, 연어, 꽁치, 청어, 멸치, 삼치, 정어리, 몽치다래, 물치다래에 한한다)

6. (현행과 같음)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 10. (현행과 같음)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 장출혈성 대장균 :

(원료용 분쇄육에     )

(8) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 장출혈성 대장균

3.16 장출혈성 대장균에

(8) (현행과 같음)

12. ～ 28. (현행과 같음)

29. 기타식품류

29-1. ～ 29-6. (현행과 같음)

29-7 벌꿀류

1) 정의

벌꿀류란 꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집에 저장한 벌집꿀과 이것에서 채밀한 벌꿀로서 화분, 로얄젤리, 당류, 감미료 등 다른 식품이나 식품첨가물을 첨가하지 아니한 것을 말한다.

2) 원료 등의 구비요건

3) 제조․가공기준

4) 식품유형

(1) 벌집꿀

꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집 속에 저장한 후 벌집의 전체 또는 일부를 봉한 것으로, 벌집 고유의 형태를 유지하고 있는 것을 말한다.

(2) 벌꿀

꿀벌들이 꽃꿀, 수액 등 자연물을 채집하여 벌집에 저장한 것을 채밀한 것으로 숙성된 것을 말한다.

<삭 제>

5) 규격

유형 항목	벌집꿀	벌꿀
수분(%)	23.0 이하	20.0 이하
물불용물(%)	-	0.5 이하
산도(meq/kg)	-	40.0 이하
전화당(%)	50.0 이상	60.0 이상
자당(%)	15.0 이하	7.0 이하
히드록시메틸푸르푸랄(mg/kg)	80.0 이하	80.0 이하
타르색소	-	검출되어서는 아니 된다.
인공감미료	-	검출되어서는 아니 된다.
이성화당	-	음성이어야 한다.

< 삭  제 >

6) 시험방법

(1) 검체

① 벌집꿀 : 유리 깔대기에 10mesh의 체를 깔고 그 위에 벌집꿀 100g을 올려놓고 40℃에서 2시간 방치하여 흘러내린 액을 모아 잘 섞은 것을 검체로 한다.

② 벌꿀 : 벌꿀이 결정을 함유하지 않을 때는 잘 섞고, 결정을 함유할 때는 밀봉용기에 넣고 60～65℃의 수욕중에서 30분간 가열하여 완전히 녹인 다음 빨리 식히고 잘 섞은 것을 검체로 한다(다만, 히드록시메틸푸르푸랄 시험에서의 검체는 가열해서는 아니 된다).

(2) 수분

< 삭  제 >

(현행과 같음)

(3) ～ (9) (현행과 같음)

< 삭  제 >

29-8. ～ 29-17. (현행과 같음)

29-18 즉석섭취·편의식품류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 장출혈성 대장균 : --------

------------------.

(8) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 장출혈성 대장균

---------------------------

3.16 장출혈성 대장균에 -------

-----.

29-19 ～ 29-23 (현행과 같음)

29-24 로얄젤리가공식품

1) 정의

로얄젤리가공식품이란 일벌의 인두선에서 분비되는 분비물을 그대로 또는 섭취가 용이하도록 가공한 것을 말한다.

2) 원료 등의 구비요건

3) 제조․가공기준

4) 식품유형

(1) 생로얄젤리

일벌의 인두선에서 분비되는 분비물인 로얄젤리를 식용에 적합하도록 이물을 제거한 것

(2) 동결건조로얄젤리

생로얄젤리를 동결건조한 것

(3) 로얄젤리제품

위 (1), (2) 외의 로얄젤리가공식품으로 로얄젤리(생로얄젤리 35.0% 이상, 동결건조로얄젤리 14.0% 이상)를 제조․가공한 것

5) 규격

유형 항목	생로얄젤리	동결건조 로얄젤리	로얄젤리제품
① 10-히드록시-2-데센산(%)	1.6 이상	4.0 이상	0.56 이상
② 수분(%)	65.5～68.5	5.0 이하	-
③ 조단백질(%)	11.0～14.5	30.0～41.0	-
④ 산도(1 N NaOH mL/100 g)	32～53	-	-
⑤ 대장균	음성	음성	음성
⑥ 붕해시험	적합하여야 한다(정제 또는 캡슐제품에 한한다. 단, 씹어 먹는 것은 제외한다.).

6) 시험방법

(1) 10-히드록시-2-데센산(10-HDA)

① 장치

고속액체크로마토그래프

② 표준용액의 조제

10□HDA 표준품을 황산데시케이타에서 건조시킨 후 약 50 mg을 정밀히 취하여 넣고 메탄올로 녹여 50 mL로 한 것을 표준원액(1,000 ppm)으로 하여 필요시 희석하여 사용한다.

③ 시험용액의 조제

10□HDA로서 48 mg에 해당하는 양의 검체(연질캡슐 제품은 내용물과 피막을 함께 취한다)를 취하여 500 mL 용량 플라스크에 넣고, 물 약 50 mL를 넣어 50℃로 가온하고 진탕 혼화하고, 연질캡슐은 피막과 내용물을 균질하게 혼화시킨 후 메탄올 약 350 mL를 넣어 약 30분간 초음파 진탕 추출하고 메탄올을 넣어 500 mL로 한다. 이 액을 여과하여 검액으로 한다.

캡슐 제품의 경우에는 20캡슐 이상을 취하여, 캡슐을 절개하고 개개의 내용물의 무게를 정밀하게 달아 평균무게를 구하여 1캡슐의 평균무게로 한다.

④ 시험조작

㉮ 고속액체크로마토그래피 측정조건

Ⓐ 칼럼∶μ—Bondapak C18 또는 이와 유사한 칼럼

Ⓑ 이동상∶0.02 M (NH4)2HPO4‧메탄올(7∶3) 혼합액(단, 인산을 가하여 pH 7.0으로 조정한다)

Ⓒ 검출기∶UV 214 nm

Ⓓ 유속∶1.4 mL/min(유속은 10□HDA 주피크의 유지시간이 7～10분 되도록 적절히 조정한다).

㉯ 정량시험

검액 및 표준액 10 μL를 액체크로마토그래프내에 주입하여 10□HDA의 그래프를 얻는다. 이 그래프를 표준 그래프와 비교하여 10□HDA에 해당하는 피크를 확인한다. 10□HDA의 함량은 피크의 면적 또는 높이로 다음 식에 따라 산출한다.

<계 산>

10-DHA 함량(%) =

[eqn: {eqalign{검액`중의`10-HDA의# `````````````````````피크면적}} over {eqalign{````````````표준용액`중의# 10-HDA의`피크면적}} ` TIMES ` {표준품`취한`량(mg)} over {검체`채취량(mg)} ` TIMES `100]

(2) 수분

제 10. 일반시험법 1. 식품성분시험법 1.1 일반성분시험법 1.1.1 수분 1.1.1.3 칼피셔법에 따라 시험한다. 또는 칭량병에 정제해사(20～40메쉬의 것)를 약 절반정도 채우고 유리봉을 넣어 항량시킨 후 이에 검체 2～3 g을 정밀히 달아 넣고 유리봉으로 잘 혼합한 후 이를 70±2℃의 감압건조기에 넣고 25±5 mmHg로 감압하여 4시간 건조시킨다.

건조 후 데시케이타에서 약 30분간 항량시킨 후 다음 식에 따라 수분함량을 구한다.

수분(%) = [eqn: {B`-`C} over {B`-`A} ` TIMES `100]

A∶칭량병(해사, 유리봉 포함)무게(g)

B∶검체 및 칭량병 무게(g)

C∶건조 후 무게(g)

(3) 조단백질

제 10. 일반시험법 1. 식품성분시험법 1.1 일반성분시험법 1.1.3 질소화합물 1.1.3.1 총질소 및 조단백질에 따라 시험한다.

(4) 산도

검체 0.5 g에 탄산가스를 함유하지 않은 물 50 mL를 가하고 페놀프탈레인 시액 0.5 mL를 가하여 0.1 N 수산화나트륨용액으로 30초간 홍색이 지속될 때까지 적정한다.

산도(1N NaOH mL/100g) = [eqn: {a` TIMES `f` TIMES `10} over {검체`채취량(g)}]

a∶0.1 N NaOH 용액의 소비 mL수

f∶0.1 N NaOH 용액의 역가

(5) 대장균

제 10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

(6) 붕해시험

제 10. 일반시험법 9. 일반시험법 9.6 붕해시험에 따라 시험한다.

제 6. 수산물에 대한 규격

1. 규격

1) 수산물일반에 대한 공통기준 및 규격

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 최종소비자가 그대로 섭취할 수 있도록 유통판매를 목적으로 위생처리하여 용기·포장에 넣은 수산물은 살모넬라(Salmonella spp.) 및 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 음성, 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus) 및 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) g당 100 이하이어야 한다.

(5) (현행과 같음)

2) 복어독

(1) 육질 : 10 MU/g 이하

(2) 껍질 : 10 MU/g 이하

(3) 식용가능한 복어의 종류

표 (현행과 같음)

3) 한천

(1) ～ (6) (현행과 같음)

4) 냉동식용어류머리

(1) ～ (4) (현행과 같음)

5) 냉동식용어류내장

(1) ～ (4)  (현행과 같음)

6)  생식용 굴

(1) 정의

생식용 굴이란 소비자가 날로 섭취할 수 있는 전각굴, 반각굴, 탈각굴로서 포장한 것을 말한다(냉동굴을 포함한다).

(2) 원료 등의 구비요건

(가) 생식용 굴은 「정착성 수산동식물 생산해역의 등급설정 기준」(농림수산식품부 고시)에 따라 청정해역의 수질기준에 적합한 해역에서 생산된 것이거나 자연정화1) 또는 인공정화2) 작업을 통해 청정해역의 기준에 적합하도록 처리되어야 한다.

(나) 굴은 채취 후 신속하게 위생적인 물로써 충분히 세척하여야 하며, 화학적합성품(차아염소산나트륨 제외)을 사용하여서는 안 된다.

(다) 생식용 굴은 덮개가 있는 용기(합성수지, 알루미늄 상자 또는 내수성의 가공용지) 등으로 포장해서 10℃이하로 보존·유통하여야 한다.

※ 용어 풀이

1) 자연정화 : 굴 내에 존재하는 미생물 수치를 줄이기 위해 굴을 수질기준에 적합한 지역으로 옮겨서 자연 정화 능력을 이용하여 처리하는 과정

2) 인공정화 : 굴 내부의 병원체를 줄이기 위하여 육상 시설 등의 제한된 수중 환경으로 처리하는 과정

(3) 규격

① 대장균 : 230 MPN/100g 이하

(4) 시험방법

① 대장균

제 10. 일반시험법 3. 미생물 시험법 3.8 대장균 가. 최확수법 2) 제2법에 따라 시험한다.

2. (현행과 같음)

제 7. (현행과 같음)

제 8. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. ～ 3. (현행과 같음)

4. 규격

가) 조리식품 등

(1) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 식중독균 : ---------------  ------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------ 장출혈성 대장균,----------------- ---------------------------

------------------------- ------------------------------------------------------- 음성이어야 하며, --------  ------------------------- -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

(6) (현행과 같음)

나) ～ 다) (현행과 같음)

5. 시험방법

1) ～ 7) (현행과 같음)

8) 장출혈성 대장균

-------------------------        3.16 장출혈성 대장균에

9) (현행과 같음)

제 9. (현행과 같음)

제10. 일반시험법

1 ～ 2. (현행과 같음)

3. 미생물 시험법

3.1 ～ 3.3 (현행과 같음)

3.4 배지 및 시액

3.4.1 배지

1) ～ 71) (생  략)

72) MMGM(Minerals modified glutamate medium)

Lactose	10.0 g

L(+) Glutamic acid	6.35 g

L(+) Arginine

monohydrochloride        0.02 g

L(-) Aspartic acid	0.024 g

L(-) Cystine	0.02 g

Sodium formate	0.25 g

Disodium potassium hydrogen phosphate	0.9 g

Ammonium chloride       2.5 g

Magnesium sulphate heptahydrate              0.1 g

Calcium chloride dihydrate	0.01 g

Ferric citrate scales      0.01 g

Nicotinic acid	0.001 g

Thiamine (Aneurinhydrochloride)

0.001 g

Pantothenic acid         0.001 g

Bromocresol purple	0.01 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.7 ± 0.1로 조정한 후 시험관에 10 mL 씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

73) BCIG 한천배지

(5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide (BCIG) agar)

Tryptone	20.0 g

Bile salts No. 3            1.5 g

Agar                     15.0 g

BCIG (as cyclohexylammonium salt)	0.075 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

74) mTSB 배지

Peptone from casein	17.0 g

Peptone from soymeal	3.0 g

Sodium chloride	1.5 g

Bile salts No. 3	2.5 g

D(+)glucose	2.5 g

Di-potassium hydrogen phosphate 4.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고, Novobiocin sodium 0.02 g을 여과 멸균하여 가한다.

3.4.2 시액

1) ～ 8) (현행과 같음)

9) 0.1% Peptone solution

Peptone                    1.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0 ± 0.2 로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

3.5 ～ 3.7 (현행과 같음)

3.8 대장균

3.8.1 (현행과 같음)

3.8.2 정량시험

가. 최확수법

1) 제1법

3.3 제조법에 따른 시험용액 10 mL, 1 mL 및 0.1 mL를 각각 5개 또는 3개의 EC 배지(배지 10) 발효관에 접종한 다음 44.5±0.2℃ 항온수조에서 24±2시간 배양한다. 시험용액 10 mL를 첨가할 경우 배농도의 배지 10 mL를 이용한다. 가스발생을 인정한 발효관을 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표 1 또는 별표 2 최확수표에 따라 검체 100 g(또는 100 mL)중의 대장균수를 산출한다.

2) 제2법

(1) 시험용액의 제조

패각을 제거한 검체 200 g에 0.1% peptone solution(시액 9) 200mL을 첨가하여 마쇄한 후 마쇄액 20 mL과 동일한 희석액(시액 9) 80 mL을 혼합하여 최종 10배 희석한 것을 시험용액으로 사용한다. 시험용액은 필요에 따라 100배, 1,000배 등으로 희석하여 사용할 수 있다.

(2) 추정시험

제조법에 따른 시험용액 10 mL을 5개의 2배 농도 MMGM 배지(배지 72)가 들어있는 시험관에 접종하고, 또 시험용액 1 mL 및 0.1 mL을 각각 5개의 MMGM 배지가 들어있는 시험관에 접종하여 37±1℃에서 24±2시간 배양한다. 배양 결과 시험관내의 배지의 색깔이 노란색으로 되었을 때 추정시험 양성으로 하며 확정시험을 실시한다.

(3) 확정시험

추정시험에서 양성으로 확인된 MMGM 시험관 배양액을 BCIG 한천배지(배지 73)에 분리 배양한다. 44±1℃에서 24±2시간 배양 후 청녹색의(blue-green) 전형적인 집락이 발생되면 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표 1 최확수표에 따라 검체 100 g중의 대장균수를 산출한다.

나. (현행과 같음)

3.9 ～ 3.15 (현행과 같음)

3.16 장출혈성 대장균

본 시험법은 대장균 O157:H7과 대장균 O157:H7이 아닌  베로독소 생성 대장균(VTEC)을 모두 검출하는 시험법이다. 장출혈성대장균의 낮은 최소감염량을 고려하여 검출 민감도 증가와 신속 검사를 위한 스크리닝 목적으로 증균 배양 후 배양액(1〜2 mL)에서 베로독소 유전자 확인시험을 우선 실시한다. 베로독소(VT1 그리고/또는 VT2) 유전자가 확인되지 않을 경우 불검출로 판정할 수 있으나, 베로독소 유전자가 확인된 경우에는 반드시 순수 분리하여 분리된 균의 베로독소 유전자 보유 유무를 재확인한다. 베로독소가 확인된 집락에 대하여 생화학적 검사를 통하여 대장균으로 동정된 경우 장출혈성대장균으로 판정한다.

1) 증균배양

검체 25 g(25 mL)을 취하여 225 mL mTSB(배지 74)를 가한 후 35～37℃에서 24시간 증균배양한다.

2) 분리배양

장출혈성대장균의 분리를 위해 TC-SMAC 배지(배지 66)와 BCIG 한천배지(배지 73)에 각각 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 배양한다.

3) 확인시험

TC-SMAC배지에서는 sorbitol을 분해하지 않은 무색집락을, BCIG 한천배지에서는 청록색 집락 각 5개 이상을 취하여 보통한천배지에 옮겨 35～37℃에서 18～24시간 배양한다. 전형적인 집락이 5개 이하일 경우 취할 수 있는 모든 집락에 대하여 확인시험을 실시한다. 배양 후 집락에 대하여 다음의 베로독소 유전자 PCR 확인 시험을 수행한 후 베로독소 양성 집락을 대상으로 그람음성간균을 확인하고 생화학시험을 실시하여 대장균으로 확인된 경우 장출혈성대장균으로 판정한다.

4) 베로독소 유전자 확인실험

베로독소 유전자는 다음의 PCR법에 따라 실시한다.

(1) 주형유전자 준비

전형적인 집락을 취하여 멸균증류수 200 μL에 현탁한 후, 10분간 끓여 원심분리하고, 상등액 5 μL를 취하여 시료로 사용한다.

(2) PCR 프라이머 염기서열

유전자	염기서열(5‘→3’)	결과확인
VT1	(F) CTG GAT TTA ATG TCG CAT AGT G (R) AGA ACG CCC ACT GAG ATC ATC	150bp
VT2	(F) ATC CTA TTC CCG GGA GTT TAC G (R) GCG TAT CGT ATA CAC AGG AGG	584bp

(3) PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
완충액	1×	10×	5 μL
MgCl2	2.5mM	25mM	5 μL
dNTPs	200uM	2.5mM	4 μL
VT1 프라이머(F)	20 pmol/tube	20 pmol/μL	1 μL
VT1 프라이머(R)	20 pmol/tube	20 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(F)	20 pmol/tube	20 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(R)	20 pmol/tube	20 pmol/㎕	1 μL
주형 DNA	25～50ng 또는 5μL	-	5 μL
Taq	2.5U/tube	5U/μL	0.5 μL
증류수	-	-	26.5 μL
총량	-	-	50 μL

(4) PCR 반응조건

구분	온도	시간	반응회수
초기변성	95℃	5분	1회
변성(denaturation)	95℃	30초	35회
결합(annealing)	50℃	40초
신장(extension)	72℃	1분
최종신장(elongation)	72℃	10분	1회
보존(store)	4℃	-	-

(5) 결과 확인

최종산물의 반응액 5 μL를 취하여 2.0% agarose로 100V에서 25분간 전기영동하고 EtBr(1ug/mL)로 염색한후 UV를 이용하여 반응생성물을 확인한다. 이때, DNA 크기를 알 수 있도록 100bp Ladder를 동시에 전기영동 한다. VT1 유전자는 150bp, VT2 유전자는 584bp에서 반응생성물을 확인할 수 있다. VT1 또는 VT2 유전자가 확인된 것은 장출혈성대장균이 검출된 것으로 판정한다.

5) 장출혈성대장균 중 대장균 O157:H7의 확정이 필요할 경우 분리배양 시 TC-SMAC(배지66) 배지를 사용하여 sorbitol을 분해하지 않는 무색집락에 대하여 최종적으로 베로독소 보유 및 대장균 동정 확인한다. 양성균주에 대하여 O157과 H7 혈청형의 결정은 제조사가 제시하는 방법에 따라 시험한다. 최종적으로 베로독소 유전자(VT1 또는/그리고 VT2) 양성, O157 및 H7 혈청 확인, 대장균으로 확인되었을 때 O157:H7으로 판정한다.

3.17 ～ 3.25 (현행과 같음)

< 삭  제 >

4. ～ 9. (현행과 같음)

제11. ～ 12. (현행과 같음)

[별표 1] ～ [별표 3] ( 현행과 같음 )

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (71) (현행과 같음)

(72) 아세토클로르(Acetochlor)

(현행과 같음)

대두	0.03

※ 밀, 수수, 옥수수, 대두는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임.

(73) ∼ (162) (현행과 같음)

(163) 펜디메타린(Pendimethalin)

(현행과 같음)

<삭  제>

(164) ∼ (431) (현행과 같음)

신․구조문 대비표