식품의약품안전처 공고 제2013-166호

축산물의 가공기준 및 성분규격

일부개정고시안 행정예고

2013.  9. 5.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2013-166호

「축산물의 가공기준 및 성분규격」(식품의약품안전처고시 제2013-137호, 2013. 4. 5)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 「행정절차법」 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2013년   9월   5일

식품의약품안전처장

축산물의 가공기준 및 성분규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

축산물가공품에 식품원료로 사용가능한 유산균을 첨가하여 다양한 축산물을 생산 및 수입을 할 수 있는 여건을 마련하였으며, 아이스크림(믹스)류 및 알가공품의 대장균군 기준·규격에 3군법의 시료채취법을 도입하여 검사결과의 신뢰성을 높였으며, 조제유류 중 엔테로박터 사카자키균 시료채취 기준 및 시험법을 개정하여 영유아 식품의 관리 효율성을 높이고자 함.

축산물 중 조제유류의 비타민, 무기질 등 일부 영양성분의 기준이 식품이나 코덱스 기준과 상이한 부분이 있어 수출․입 무역 시 통상문제 발생의 우려가 있고, 국내 영․유아의 성장 발달에 필요한 영양성분의 균형을 위하여 국내 영․유아의 영양섭취기준 및 국내․외 영양성분기준과 조화시킬 수 있도록 조제유류의 일부 영양성분의 기준․규격을 개선하고자 함.

조제유류의 비타민류 시험법이 오래되고 전처리 및 기기분석이 복잡하여 검사 소요시간이 길고 검사 시 어려움이 많아 최신 검사법을 도입한 연구결과를 통하여 일부 비타민 시험법의 전처리 및 기기분석법을 개선하여 검사의 효율성 및 신뢰성을 높이고자 함.

도축장(도계장)에서 세균수 및 대장균의 검사에 자동화된 검사법을 적용하여 검사자에게 편의 제공 뿐만 아니라 검사의 효율성을 증대시킴

2. 주요 내용

가. 공통기준 중 유산균 단서조항 신설 [안 제1, 6, 가, (4)]

- 축산물가공품에 식품원료로 사용가능한 유산균을 첨가하여 다양한 축산물을 생산 및 수입을 할 수 있어 산업체 활성 및 소비자 욕구 충족

나. 조제분유․조제우유의 영양성분 기준 및 규격 개정 [안 제2. 1. 더. (4) (라), (바), (사), (아), (자), (차), (카), (타), (파), (하), (너)(더), (머), (버), (서), (어), (저), (처), (커), (터), (퍼), (허), (고)]

- 조제분유․조제우유의 비타민, 무기질 등 일부 영양성분 기준을 국내․외 기준과 조화시킬 수 있도록 리놀레산, 비타민 A․D․C․B1․B2․B6․E, 니코틴산, 엽산, 판토텐산, 칼륨, 염소, 칼슘, 인, 마그네슘, 철, 요오드, 구리, 아연, 망간 기준을 개정, 셀레늄의 기준을 신설 및 니코틴산의 명칭을 나이아신으로 변경하여 개정하고자 함

다. 성장기용 조제분유․성장기용 조제우유의 영양성분 기준 및 규격 개정 [안 제2. 1. 더. (4) (라), (바), (사), (카), (타), (더), (어), (고)]

- 성장기용 조제분유․성장기용 조제우유의 일부 영양성분의 기준을 국내․외 기준과 조화시킬 수 있도록 리놀레산, 비타민 A․B6․D․E, 인 기준을 개정, 셀레늄의 기준을 신설 및 니코틴산의 명칭을 나이아신으로 변경하여 개정하고자 함

라. 기타조제분유․기타조제우유의 영양성분 기준 및 규격 개정 [안 제2. 1. 더. (4) (카), (고)]

- 기타조제분유․기타조제우유의 일부 영양성분의 기준을 국내․외 기준과 조화시킬 수 있도록 셀레늄의 기준을 신설 및 니코틴산의 명칭을 나이아신으로 변경하여 개정하고자 함

마. 조제유류 중 엔테로박터 사카자키균 시료채취기준 및 시험법 개정[안 제2, 1, 더, (4), (보) 및 제3, Ⅲ, 9, 머, (3)]

1) 영유아 식품은 영유아의 특성(빠른 흡수, 장기 미성숙, 고민감도)을 고려한 안전관리가 필요하며, 시료의 대표성과 검사신뢰도 확보를 위해 통계적 기법을 이용한 시료채취법 도입

2) 영유아가 섭취하는 식품의 안전관리를 강화하고, 국내·외 규격과의 조화

바. 아이스크림(믹스)류 및 알가공품의 대장균군에 통계적 개념의 미생물 기준·규격 도입[안 제2, 1, 러, (4), (라) 및 제2, 1, 버, (4), (라) 및 제2, 3, (4), (라)]

- 아이스크림(믹스)류 및 알가공품의 대장균군에 국제식품규격위원회(Codex), 미국, EU 등 제외국에서 운영하고 있는 통계적 개념(3군법, n, c, m, M))의 미생물 기준·규격 도입하여 미생물 검사의 대표성과 신뢰도을 확보함에 따라 국민건강보호 및 수출입 시 무역마찰 감소

사. 조제유류의 비타민류 시험법 개정 [안 제3. Ⅲ. 3, 바, 사, 아]

- 조제유류의 비타민류 시험법에 대하여 최신 검사법을 도입한 연구결과를 반영하여 비타민 D․E․K1 시험법의 전처리 및 기기분석법으로 개정하고, 비타민 B1․B2․B6, 엽산, 니코틴산아미드에 대한 수용성비타민 동시분석법을 신설하고자 함

아. 세균수 및 대장균 시험법 중 자동화된 최확수법 검사대상 확대[안 제3, Ⅲ, 9, 다, (1), (다) 및 제3, Ⅲ, 9, 바, (3), (라)]

1) 도축장(도계장)에서 세균수 및 대장균의 검사에 자동화된 검사법을 적용함으로써 검사물량으로 인한 어려움 해소하여 검사자에게 편의 제공

2) 검사 효율성의 증대로 도축장(도계장)의 위생관리를 강화

3. 의견 제출

「축산물의 가공기준 및 성분규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는 단체 또는 개인은 2013년 10월 7일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처(우편번호 : 363-700, 주소 : 충청북도 청원군 오송읍 오송생명2로 187(연제리 643번지) 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 축산물기준과, 전화 043-719-3860, 팩스 043-719-3850)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2013- 호

「축산물위생관리법」 제4조제2항의 규정에 따른 「축산물의 가공기준 및 성분규격」(식품의약품안전처 고시 2013-137호, 2013.4.5.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2013년   월   일

식품의약품안전처장

축산물의 가공기준 및 성분규격 일부개정고시(안) 행정예고

축산물의 가공기준 및 성분규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1, 6, 가 중 “(4)” 및 “(5)”를 각각 “(5)” 및 “(6)”으로 하고, “(4)”를 다음과 같이 신설한다.

(4) 유산균을 첨가한 축산물가공품에서 일반세균수 산정은 총세균수에서 유산균수를 제외한다

제2, 1, 더 중 (4)를 다음과 같이 한다.

(4) 성분규격

유 형 항 목	조제분유‧조제우유		성장기용조제분유‧ 성장기용 조제우유		기타조제분유‧ 기타조제우유
		최대권장기준
(가) 성상	고유의 색택과 향미를 가지고 이미·이취가 없어야 한다.		고유의 색택과 향미를 가지고 이미·이취가 없어야 한다.		고유의 색택과 향미를 가지고 이미·이취가 없어야 한다.
(나) 수분(%)	5.0이하 (단, 액상제품 제외)		5.0이하 (단, 액상제품 제외)		5.0이하 (단, 액상제품 제외)
(다) 조단백질 (g/100kcal)	1.8∼4.0		2.4∼5.5		-
(라) 조지방 (g/100kcal) 리놀레산(mg/100kcal)	3.0∼6.0		3.0∼6.0 300 이상		-
	300 이상	1400
(마) 유성분 (g/100kcal)	12.0이상		12.0이상		-
(바) 비타민A (㎍/100kcal 또는 IU/100kcal )	60～180 또는 200～600		250∼750 또는 75∼225		-
(사) 비타민D (㎍/100kcal 또는 IU/100kcal )	1.0～2.5 또는 40～100		40～120 또는 1.0～3.0		-
(아) 비타민C (㎎/100kcal)	10.0 이상		8.0이상		-
(자) 비타민B1 (㎍/100kcal)	60 이상	300	40이상		-
(차) 비타민B2 (㎍/100kcal)	80 이상	500	60이상		-
(카) 나이아신 (㎍/100kcal)	300 이상	1500	250이상		-
(타) 비타민B6 (㎍/100kcal) <단서 신설>	35이상	175	45이상 (다만, 단백질 3.0g 이상인 경우 초과 단백질 1g 당 비타민 B6 15㎍의 비율 이어야 한다)		-
	(다만, 단백질 2.3g 이상인 경우 초과 단백질 1g 당 비타민 B6 15㎍의 비율이어야 한다)
(파) 엽산 (㎍/100kcal)	10.0 이상	50	4.0이상		-
(하) 판토텐산 (㎍/100kcal)	400 이상	2000	300이상		-
(거) 비타민B12 (㎍/100kcal)	0.1이상		0.15이상		-
(너) 비타민K1 (㎍/100kcal)	4.0이상	27	4.0이상		-
(더) 비타민E (mg α-TE/100kcal 또는 IU/100kcal) <단서 신설>	0.7이상 또는 0.5이상	5.0 또는 7.0	0.7이상 또는 0.5이상 (다만, 리놀레산 1g 이상인 경우 리놀레산 1g 당 최소한 0.5mg α-TE 또는 0.7IU의 비율이어야 한다)		-
	(다만, 리놀레산 1g 이상인 경우 리놀레산 1g 당 최소한 0.5mg α-TE 또는 0.7IU의 비율이어야 한다)
(러) 나트륨 (mg/100kcal)	20 ∼ 60			20 ∼ 85	-
(머) 칼륨 (㎎/100kcal)	60～180		80이상		-
(버) 염소 (㎎/100kcal)	50～160		55이상		-
(서) 칼슘 (㎎/100kcal)	50이상	140	90이상		-
(어) 인 (㎎/100kcal) <단서 신설>	25이상	100	60이상 (다만, 칼슘과 인의 비율이 1:1～2:1이어야 한다)		-
	(다만, 칼슘과 인의 비율이 1:1～2:1이어야 한다)
(저) 마그네슘 (㎎/100kcal)	5.0 이상	15	6.0이상		-
(처) 철 (㎎/100kcal)	0.45 이상 (철분강화제품의 경우 1.0이상)		1.0∼2.0		-
(커) 요오드 (㎍/100kcal)	10.0 이상	60	5.0이상		-
(터) 구리 (㎍/100kcal)	35 이상		-		-
(퍼) 아연 (㎎/100kcal)	0.5이상	1.5	0.5이상		-
(허) 망간 (㎍/100kcal)	1.0 이상	100	5.0이상		-
(고) <신 설> 셀레늄 (㎍/100kcal)	1.0～9.0		9.0 이하		9.0 이하
(노) 인공감미료	검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다
(도) 타르색소	검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다
(로) 세균수	n=5, c=2, m=1,000/g, M=10,000/g(조제우유는 음성이어야한다) (단, 유산균 첨가 제품의 경우 유산균수를 제외한다)		n=5, c=2, m=1,000/g, M=10,000/g(성장기용 조제우유는 음성이어야한다) (단, 유산균 첨가 제품의 경우 유산균수를 제외한다)		n=5, c=2, m=1,000/g, M=10,000/g(기타조제우유는 음성이어야한다) (단, 유산균 첨가 제품의 경우 유산균수를 제외한다)
(모) 대장균군	n=5, c=1, m<3, M=10		n=5, c=1, m<3, M=10		n=5, c=1, m<3, M=10
(보) 엔테로박터 사카자키	n=5, c=0, m=0/60g (조제분유에 한한다)		-		n=5, c=0, m=0/60g (기타조제분유에 한한다)
(소) 탄화물 (scorched particle)	100g당 7.5mg이하		100g당 7.5mg이하		100g당 7.5mg이하
(오) 바실러스 세레우스	1g당 100이하(멸균제품의 경우 음성이어야한다)		1g당 100이하(멸균제품의 경우 음성이어야한다)		1g당 100이하(멸균제품의 경우 음성이어야한다)

※ 비타민A 1IU=0.30㎍, 비타민D 1IU=0.025㎍ 비타민E 1mg=1.49IU, 1mg α-TE(alpha-tocopherol equivalent)=1mg d-α-tocopherol

※ 기타조제분유, 기타조제우유의 경우 영양소는 표시량이상어야 한다. 다만, 제한할 필요가 있는 영양소는 표시량 이하 도는 표시량 범위이내 이어야 한다.

주) 조제우유 및 성장기용조제우유의 성분규격 적용은 조제분유 및 성장기용 조제분유의 수분 규격(5.0%)을 기준으로 하여 각각의 성분규격을 환산적용한다.

제2, 1, 러, (4) 중 (라) 대장균군란을 다음과 같이 한다.

유형 구분	아이스크림 저지방아이스크림	아이스밀크, 샤베트, 비유지방아이스크림
(라) 대장균군	n=5, c=2, m=10, M=100	n=5, c=2, m=10, M=100

제2, 1, 버, (4) 중 (라) 대장균군란을 다음과 같이 한다.

유형 구분	아이스크림믹스 저지방아이스크림믹스	아이스밀크믹스, 샤베트믹스, 비유지방아이스크믹스림
(라) 대장균군	n=5, c=2, m=10, M=100	n=5, c=2, m=10, M=100

제2, 3, (4)중 (라)를 다음과 같이 한다.

(라) 대장균군 : 살균제품은 n=5, c=1, m=10, m=100, 비살균제품은 n=5, c=1, m=100, m=1000이어야 한다(피단의 경우에는 n=5, c=0, m=0이어야 한다)

제3, Ⅲ, 3, 바, (1) 중 “고속액체크로마토그래피에 의한 정량”을  “고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제1법)"으로 하고, “(2)”를 “(3)”으로 하며, (2)를 다음과 같이 신설한다.

(2) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제2법)

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 비타민 E를 에탄올과 피로갈롤에탄올 용액으로 비누화시키고 석유에테르로 추출 후 감압건조시켜 역상칼럼으로 분리한 후 고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)

② 기구

㉮ 환류냉각장치

㉯ 감압농축기

㉰ 용매여과장치

㉱ 초자기구 : 분액깔대기, 농축 플라스크(갈색, 125 mL 또는 250 mL)

㉲ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정이 가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 에탄올, 메탄올, 석유에테르 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 피로갈롤, 수산화칼륨, 페놀프탈레인, 무수황산나트륨 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

④ 10% 피로갈롤에탄올용액 : 피로갈롤 10 g을 에탄올에 녹여 100 mL이 되게 한다.

⑤ 90 % 수산화칼륨용액 : 수산화칼륨 9 g을 증류수에 녹여 10 mL이 되게 한다.

⑥ 이동상 : 메탄올 950 mL에 증류수 50 mL를 혼합하고 0.45 μm 나일론 필터로 여과하고 탈기하여 사용한다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액: 토코페롤 (α, β, γ, δ)를 각각 50 mg을 채취하여 50 mL 용량플라스크에 넣고 메탄올로 용해하면서 용량을 맞춘다.

② 표준용액: 표준원액을 1 mL 취하여 메탄올로 10 mL까지 채워 100 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : 표준용액을 0.2, 0.5, 1, 2 및 5 mL를 각각 취하여 10 mL까지 메탄올로 채워 2, 5, 10, 20 및 50 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

시료 약 1 g을 정밀히 달아 농축 플라스크에 넣고 에탄올 30 mL 및 10% 피로갈롤에탄올 용액 1 mL를 가하고 이에 90% 수산화칼륨용액 3 mL를 가해 환류냉각기를 이용하여 90℃ 비등 수욕조 중에서 30분간 비누화한다. 비누화 후 즉시 실온으로 냉각한 후 물 30 mL를 가해 분액깔대기에 옮긴다. 플라스크는 물 10 mL로 씻고 이어서 석유에테르 30 mL로 씻은 후 분액깔대기에 합한다. 분액깔대기를 세게 흔들고, 10분간 방치한 후 하층(물층)을 다른 분액깔대기에 옮긴다. 물층을 석유에테르 30 mL로 2회 추출하고 추출액을 합하여 페놀프탈레인 지시약 1∼2방울 넣는다. 분액깔대기에 물 10 mL 넣어 1회 씻고 뒤이어 물 50 mL를 넣어 세게 흔들고, 여러 차례 반복하여 분홍색이 없어질 때까지 석유에테르층을 씻는다. 분액깔대기 중에서 물을 충분히 분리한 후 무수황산나트륨을 가해 탈수한 후 석유에테르층을 플라스크에 옮긴다. 잔존하는 황산나트륨은 다시 석유에테르 10 mL씩으로 2회 씻고 씻은 액을 플라스크에 모두 합한다. 이 액을 40～50℃에서 감압건조한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해시키고 0.2 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C8(4.6×150 mm, 5 μm) 또는 C18(3.9×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 30 ℃

- 이동상 : 95 % 메탄올

- 유  속 : 1.0 mL/min

- 검출파장 : UV 298 nm

- 주입량 : 10 μL

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하고 피크의 머무름 시간을 비교하여 동일 물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 E의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 E의 함량(mg/100 g)을 산출한다.

비타민 E 함량(mg/100 g) = C × V/S × [eqn: {100} over {1000}]

C : 검량선에서 구한 α, β, γ, δ-토코페롤의 농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

[eqn: {100} over {1000}] : 단위환산

제3, Ⅲ, 3, 사, (1) 중 “고속액체크로마토그래프를 이용한 정량”을 “고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제1법)”으로 하고,  (2)를 다음과 같이 신설한다.

(2) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제2법)

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 비타민 D3를 수산화칼륨에탄올 용액으로 비누화시키고 헥산 추출 및 고체상 카트리지로 정제하여 역상칼럼으로 분리한 후 고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)

② 기구

㉮ 환류냉각장치

㉯ 감압농축기

㉰ 용매여과장치

㉱ 고체상추출장치

㉲ 진공펌프

㉳ 실리카 카트리지 (500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

㉴ 초자기구 : 분액깔대기, 농축 플라스크(갈색, 125 mL 또는 250 mL)

㉵ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정이 가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 아세트산, 아세토나이트릴, 에틸아세테이트, 디클로르메탄, 에탄올, 이소프로판올, 헥산, 메탄올 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 수산화칼륨, 페놀프탈레인, 무수황산나트륨 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

④ 10% 아세트산용액 : 아세트산 10 mL를 100 mL 용량플라스크에 넣은 후 증류수로 용량을 맞춘다.-

⑤ 이소프로판올용액 A : 이소프로판올용액 2 mL를 1 L 용량플라스크에 넣은 후 디클로르메탄으로 용량을 맞추고 잘 혼합한다.

⑥ 이소프로판올용액 B : 이소프로판올용액 200 mL를 1 L 용량플라스크에 넣은 후 디클로르메탄으로 용량을 맞추고 잘 혼합한다.

⑦ 에탄올수산화칼륨용액 : 에탄올 310 mL에 수산화칼륨 140 g을 녹인 후 증류수 50 mL을 넣고 혼합한다.

⑧ 1% 페놀프탈레인용액 : 페놀프탈레인 1 g을 100 mL 용량플라스크에 넣은 후 에탄올로 용량을 맞춘다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액: 비타민 D2(내부표준물질) 및 D3를 각각 30 ㎎을 채취하여 200 mL 용량플라스크에 넣고 에탄올로 용해하면서 용량을 맞춘다.

② 표준용액: 표준원액을 각각 4 mL 취하여 에탄올로 200 mL까지 채워 3 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : 표준용액을 각각 4 mL를 취하여 에탄올로 200 mL까지 채워 0.06 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

① 비누화 및 추출

시료 약 2 g을 정밀히 달아 농축 플라스크에 넣고 증류수 15 mL 로 용해한다. (비타민 D3 표준용액을 4 mL 취하여 농축 플라스크에 넣고 증류수 15 mL를 첨가하여 시료와 동일하게 전처리한다.) 시험용액 및 표준용액에 내부표준물질 비타민 D2를 4 mL 씩 첨가하고 에탄올수산화칼륨용액 15 mL를 가한 후 환류냉각기를 이용하여 60℃ 비등 수욕조 중에서 30분간 비누화한다. 비누화후 즉시 실온으로 냉각한 후 분액깔대기에 옮긴다. 농축 플라스크에 증류수 15 mL를 넣고 잘 헹군 후 분액깔대기로 옮기고 이어서 헥산 60 mL로 잘 헹군 후 분액깔대기에 합한다. 분액깔대기를 90초간 격렬하게 진탕한 후 10분간 방치하여 층을 분리시킨다. 물층(하층)을 버리고, 증류수 15 mL를 넣고 다시 90초간 격렬하게 진탕한 후 하층을 버린다. 남아있는 헥산층에 1% 페놀프탈레인용액 1방울과 증류수 15 mL를 넣고 분액깔대기를 흔들면서 중성(무색)이 될 때까지 10% 아세트산용액을 넣은 후 층이 분리되면 물층(하층)을 버린다. 상층인 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 농축 플라스크에 넣어 40～50℃에서 감압건조한 후 이소프로판올용액 A 2 mL에 녹인다.

② 정제

실리카 카트리지에 이소프로판올용액 B 4 mL를 흘려주고, 뒤이어 이소프로판올용액 A 5 mL를 흘려 카트리지를 활성화시킨 후 ①의 추출용액을 통과시킨다. 농축플라스크의 잔류물을 이소프로판올용액 A 1 mL로 세척하고 카트리지에 통과시킨 후 이소프로판올용액 A 2 mL로 카트리지를 세척하고, 이소프로판올용액 A 7 mL로 용출하여 질소하 건조한다. 건조 잔류물에 아세토나이트릴 1 mL를 가하여 용해시키고 0.45 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 분석칼럼 : C18(6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 가드칼럼 : C18(4.6×10 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 30℃

- 검출파장 : UV 265 nm

- 주입량 : 250 μL

- 이동상 : 아세토나이트릴(A), 메탄올(B), 에틸아세테이트(C)

시간(분)	유속(mL/min)	A(%)	B(%)	C(%)
0	0.7	91	9	0
33	0.7	91	9	0
33.5	1.5	0	0	100
36	1.5	0	0	100
36.5	1.5	91	9	0
38	1.5	91	9	0
45	0.7	91	9	0

＊이동상 A와 B를 각각 또는 91:9로 혼합하여 사용한다.

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하여 피크의 머무름 시간을 비교하고 동일 물질인지 정성 확인 후 내부표준법으로 농도비에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 D3의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 D3의 함량(㎍/100 g)을 산출한다.

비타민 D3 함량 (㎍/100 g) = C × V/S × 100

C : 내부표준법으로 구한 비타민 D3의 농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

100 : 단위환산

제3, Ⅲ, 3, 아, (1) 중 “고속액체크로마토그래피에 의한 정량”을 “고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제1법)”으로 하고, (2)를 다음과 같이 신설한다.

(2) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제2법)

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 비타민 K1을 분해효소로 처리한 후 헥산으로 추출하여 역상칼럼으로 분리하고 포스트칼럼으로 환원시켜 고속액체크로마토그래프/형광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/형광검출기(HPLC/FLD)

② 기구

㉮ 항온수조

㉯ 질소농축기

㉰ pH meter

㉱ 원심분리기

㉲ 교반기

㉳ 진탕기

㉴ 용매여과장치

㉵ 초자기구 : 유리시험관, 비이커

㉶ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정이 가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 에탄올, 디클로르메탄, 에틸아세테이트, 헥산, 이소프로판올, 메탄올 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 탄산칼륨, 수산화칼륨, 인산칼륨, 무수초산나트륨, 염화아연 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 초산 : Glacial 급

④ Lipase : Candida rugosa를 기원으로 하는 것으로써 약 1000 unit/mg의 활성이 있는 것 또는 동등한 효소 활성을 가진 것으로써 Pseudomonas와 Rhizopus를 기원으로 하는 것

⑤ 아연분말 : 입자 60 ㎛ 이하인 것 또는 이와 동등한 것

⑥ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

⑦ 40% 수산화칼륨용액 : 수산화칼륨 40 g을 100 mL 용량플라스크에 넣은 후 증류수로 녹여 용량을 맞춘다.

⑧ 0.8 M 인산완충용액 : 인산칼륨 55 g을 500 mL 비이커에 넣은 후 증류수 350 mL로 녹인 후 40% 수산화칼륨용액을 이용해 pH를 7.9∼8.0으로 맞춘 후 500 mL 용량플라스크에 옮긴 후 증류수로 용량을 맞춘다.

⑨ 알콜혼합용매 : 에탄올과 메탄올을 95:5의 부피비로 혼합하여 조제한다.

⑩ 이동상 : 디클로르메탄 900 mL에 메탄올 100 mL을 혼합한 용매에 메탄올 5 mL에 녹인 염화아연 1.37 g과 초산 0.3 g 및 무수초산나트륨 0.41 g을 넣고 혼합한 후 0.2 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하고 탈기하여 사용한다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액: Vitamin K1 0.025 g을 50 mL 용량플라스크에 넣은 후 이소프로판올로 녹여 조제한다.

② 표준용액: 표준원액을 1 mL 취하여 메탄올로 100 mL까지 채워 5 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : 표준용액을 0.2, 0.5, 1, 2 및 4 mL를 각각 취하여 100 mL까지 메탄올로 채워 10, 25, 50, 100 및 200 ng/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

① 분해

시료 약 1 g을 시험관에 넣고, 38℃ 증류수 15 mL을 넣은 후 잘 흔들어 녹인다. 여기에 0.8 M 인산완충용액 5 mL을 넣고, 분해 효소인 lipase 1 g을 넣고 교반기를 이용하여 녹인 후, 마개로 시험관을 막고 세게 흔들어 lipase 가 충분히 분산되도록 한다. 38℃ 항온수조에서 20분 간격으로 15초간 흔들면서 120분간 효소처리를 한 다음, 알콜혼합용액 10 mL을 넣고 흔든 후 탄산칼륨 1 g을 넣고 흔든다.

② 추출

시험관에 헥산 30 mL을 넣고 10분 이상 진탕기를 이용하여 세게 흔든다. 이를 냉암소에 10분 이상 정치하여 두 층으로 분리되는 것을 확인하고(층분리가 완전하지 않으면 1000 rpm에서 10분간 원심분리한다.), 상층액 1 mL을 별도의 유리시험관으로 옮겨 질소농축기를 이용하여 건조한 후 다시 메탄올 1 mL을 넣고 진탕기를 이용하여 용해한 후 0.45 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 분석칼럼 : C18(4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 포스트칼럼 : C18(4.6×30 mm) 또는 이와 동등한 것

※ 분석 전 아연분말을 채우고 분석칼럼과 형광검출기 사이에 장착한다.

- 칼럼온도 : 30℃

- 이동상 유속 : 1.1 mL/min

- 검출파장 : 여기파장 265 nm, 측정파장 430 nm

- 주입량 : 10 μL

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하여 피크의 머무름 시간을 비교하고 동일 물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 K1의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 K1의 함량(㎍/100 g)을 산출한다.

비타민 K1 함량 (㎍/100 g) = C × V/S × 100

C : 검량선에서 구한 비타민 K1의 농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

100 : 단위환산

제3, Ⅲ, 3에 타를 다음과 같이 신설한다.

타. 비타민 B군 동시분석법

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 수용성 비타민 B군 5종(B1, B2, B6, 니코틴아미드, 엽산)을 헥산설폰산나트륨이 함유된 초산용액으로 추출 정제하여 역상칼럼으로 분리한 후 고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)

② 기구

㉮ 원심분리기

㉯ 진탕기

㉰ 용매여과장치

㉱ 원심분리관

㉲ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정이 가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 메탄올: 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 초산, 수산화나트륨, 헥산설폰산나트륨 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

④ 이동상

㉮ 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 0.1% 초산용액 : 초산 1 mL을 1 L 용량플라스크에 넣은 후 증류수로 약 900 mL까지 채우고, 헥산 설폰산나트륨을 5 mM 농도가 되도록 넣고 혼합한 후 증류수로 1 L를 맞춘다.

㉯ 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 메탄올 : 메탄올을 약 900 mL까지 채우고, 헥산설폰산나트륨을 5 mM 농도가 되도록 넣고 혼합한 후 메탄올로 1 L를 맞춘다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액

㉮ Vitamin B1, Vitamin B6, 니코틴아미드,  : B1 0.01 g, B6 0.01 g, 니코틴아미드 0.1 g을 100 mL 용량플라스크에 넣고 이동상 ㉮의 용액으로 용해하면서 용량을 맞춘다.

㉯ Vitamin B2, 엽산 : B2 0.01 g, 엽산 0.01 g을 100 mL 용량플라스크에 넣고 0.1 N 수산화나트륨 용액으로 용량을 맞춘다.

② 표준용액: Vitamin B1, B2, B6, 엽산 표준원액은 1 mL, 니코틴아미드의 표준원액은 1 mL을 취하여 100 mL 용량플라스크에 넣고 이동상 ㉮의 용액으로 용량을 맞추어 각각 1 ㎍/mL 및 10 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : Vitamin B1, B2, B6, 엽산 표준용액은 이동상 ㉮로 희석하여 0.05, 0.10, 0.25, 0.5 및 1 ㎍/mL이 되도록 조제한고, 니코틴아미드 표준용액은 이동상 ㉮로 희석하여 0.5, 1, 2.5, 5 및 10 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

시료 약 1 g을 정밀히 달아 원심분리관에 넣고 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 0.1% 초산용액을 20 mL를 넣어 녹인다. 15분간 진탕기로 잘 섞은 후, 이어서 15분간 초음파 추출하고 15,000 rpm, -10 ℃에서 10분간 원심 분리한다. 상층액의 일부를 0.2 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 30℃

- 유  속 : 0.6 mL/min

- 검출파장 : UV 270 nm

- 주입량 : 50 μL

- 이동상 : 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 0.1 % 초산용액(A)

5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 메탄올(B)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
8.0	80	20
16.0	40	60
18.0	20	80
18.1	0	100
30.0	0	100
30.1	80	20
35	80	20

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하여 피크의 머무름 시간을 비교하고 동일 물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 B군의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 B군의 함량(㎍/100 g)을 산출한다.

비타민 B군 개별 함량 (㎍/100 g) = C × V/S × 100

C : 검량선에서 구한 비타민 B군의 개별 농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

100 : 단위환산

＊비타민 B1은 첨가된 형태만 정량 가능하며, 부적합 시 개별 정량법으로 확인검사를 실시한다.

제3, Ⅲ, 9, 다, (1), (다) 중 “분유류에 한한다”를 “분유류, 소, 돼지, 닭(오리)도체에 한한다”로 한다.

제3, Ⅲ, 9, 바, (3), (라) 중 “식육추출가공품에 한한다”를 “식육추출가공품, 닭(오리)도체에 한한다”로 한다.

제3, Ⅲ, 9, 머, (3), (가) 중 “시료 100g을 무균적으로 채취하여 900mL의 멸균증류수에 접종하여”를 “시료 60g을 무균적으로 채취하여 540mL의 멸균증류수에 접종하여”로 한다.

부칙 <제2013-   호, 2013. .   .>

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제2. 1. 더. (4)의 개정규정(셀레늄, 엔테로박터 사카자키 관련 부분 제외)은 2014년 5월 1일부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 고시 시행 후 최초로 제조·가공 또는 수입(선적일 기준)하는 축산물부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시 시행 당시 접수되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

신․ 구조문 대비표

현    행

개정안

제 1. 축산물에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 5. (생  략)

6. 축산물의 성분규격

가. 일반규격

(1) ∼ (3) (생  략)

<신  설>

(4) (생  략)

(5) (생  략)

나. ～ 바. (생  략)

7. ～ 8.  (생  략)

제 2. 축산물별 기준 및 규격

1. 유가공품

가. ∼ 너. (생  략)

더. 조제유류

(1) ∼ (3) (생  략)

유 형 항 목	조제분유‧ 조제우유	성장기용조제분유‧ 성장기용 조제우유	기타조제분유‧ 기타조제우유
(가) ～ (다) (생 략)
(라) 조지방 (g/100kcal) 리놀레산(mg/100kcal)	(생 략) 270 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략) 270 이상	(생 략)
(마) 유성분 (생 략)
(바) 비타민A (IU/100kcal 또는 ㎍/100kcal)	250～500 또는 75～150	(생 략)	(생 략)
(사) 비타민D (IU/100kcal 또는 ㎍/100kcal)	40～80 또는 1.0～2.0	(생 략)	(생 략)
(아) 비타민C (㎎/100kcal)	8.0 이상	(생 략)	(생 략)
(자) 비타민B1 (㎍/100kcal)	40 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(차) 비타민B2 (㎍/100kcal)	60 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(카) 니코틴산 (㎍/100kcal)	250 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(타) 비타민B6 (㎍/100kcal)	(생 략) <최대권장기준 신설> <단서 신설>	(생 략) <단서 신설>	(생 략)
(파) 엽산 (㎍/100kcal)	4.0 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(하) 판토텐산 (㎍/100kcal)	300 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(거) (생 략)
(너) 비타민K1 (㎍/100kcal)	(생 략) <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(더) 비타민E (IU/100kcal 또는 mg α-TE/100kcal)	(생 략) <최대권장기준 신설> <단서 신설>	(생 략) <단서 신설>	(생 략)
(러) (생 략)
(머) 칼륨 (㎎/100kcal)	80～200	(생 략)	(생 략)
(버) 염소 (㎎/100kcal)	55～150	(생 략)	(생 략)
(서) 칼슘 (㎎/100kcal)	(생 략) <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(어) 인 (㎎/100kcal)	(생 략) <최대권장기준 신설> <단서 신설>	(생 략) <단서 신설>	(생 략)
(저) 마그네슘 (㎎/100kcal)	6.0 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(처) 철 (㎎/100kcal)	0.25 이상 (생 략)	(생 략)	(생 략)
(커) 요오드 (㎍/100kcal)	5.0 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(터) 구리 (㎍/100kcal)	60 이상	(생 략)	(생 략)
(퍼) 아연 (㎎/100kcal)	(생 략) <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
(허) 망간 (㎍/100kcal)	5.0 이상 <최대권장기준 신설>	(생 략)	(생 략)
<신 설>	<신 설>	<신 설>	<신 설>
(고) ～ (로) (생 략)
(모) 엔테로박터 사카자키	음성이어야한다 (생 략)	-	음성이어야한다 (생 략)
(보) ∼ (소) (생 략)

(4) 성분규격

※ (생 략)

※ (생 략)

주) (생 략)

(5) (생 략)

러. 아이스크림류

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 성분규격

유형 구분	아이스크림 저지방아이스크림	아이스밀크, 샤베트, 비유지방아이스크림
(가)∼(다) (생 략) (라) 대장균군 (마) (생 략)	(생 략) 1ml당 10이하 (생 략)	(생 략) 1ml당 10이하 (생 략)

(5) (생  략)

머. (생  략)

버. 아이스크림믹스류

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 성분규격

유형 구분	아이스크림 저지방아이스크림	아이스밀크, 샤베트, 비유지방아이스크림
(가)∼(다) (생 략) (라) 대장균군 (마) (생 략)	(생 략) 1ml당 10이하 (단, 멸균제품은 음성이어야 한다) (생 략)	(생 략) 1ml당 10이하 (단, 멸균제품은 음성이어야 한다) (생 략)

(5) (생  략)

2. (생 략)

3. 알가공품

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 성분규격

(가) ∼ (다) (생  략)

(라) 대장균군: 살균제품은 1g당 10이하, 비살균제품은 100이하이어야한다(피단의경우에는 음성이어야 한다)

(마) (생  략)

(5) (생  략)

제 3. 축산물 시험방법

Ⅰ.～ Ⅱ. (생  략)

Ⅲ. 일반시험법

1.～ 2. (생  략)

3. 비타민류

가. ∼ 마. (생  략)

바. 비타민 E

(1) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량

<신   설>

(2) (생   략)

사. 비타민 D

(1) 고속액체크로마토그래프를 이용한 정량

<신   설>

아. 비타민 K1

(1) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량

<신   설>

자. ∼ 카. (생   략)

<신   설>

4. ∼ 8. (생  략)

9. 미생물시험법

가. ∼ 나. (생  략)

다. 세균수

(1) 일반세균수

(가) ∼ (나) (생  략)

(다) 자동화된 최확수법

(Automated MPN)

우유류, 저지방우유류, 유당분해우유, 가공유류(유음료 제외), 조제유류, 분유류에 한한다.

라. ∼ 마. (생  략)

바. 대장균수(Generic E. coli)

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 시험방법

(가) ∼ (다) (생  략)

(라) 자동화된 최확수법(Automated MPN)

자연치즈, 식육추출가공품에 한한다.

사. ～ 러 (생  략)

머. 엔테로박터 사카자키

[Enterobacter(Cronobacter) sakazakii]

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 시험방법

(가) 증균배양

시료 100g을 무균적으로 채취하여 900mL의 멸균증류수에 접종하여 36℃에서 18시간 증균배양한다. 증균배양액 10 mL를 90 mL의 Enterobacteriaceae enrichment broth(EE broth)에 첨가하여 36℃에서 18시간 증균배양한다.

(나) ～ (다) (생  략)

버. ～ 서. (생  략)

10. ～ 16. (생  략)

Ⅳ. ～ Ⅸ. (생  략)

제 1. 축산물에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 5. (현행과 같음)

6. 축산물의 성분규격

가. 일반규격

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 유산균을 첨가한 축산물가공품에서 일반세균수 산정은 총세균수에서 유산균수를 제외한다.

(5) (현행과 같음)

(6) (현행과 같음)

나. ～ 바. (현행과 같음)

7. ～ 8.  (현행과 같음)

제 2. 축산물별 기준 및 규격

1. 유가공품

가. ∼ 너. (현행과 같음)

더. 조제유류

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 성분규격

유 형 항 목	조제분유‧조제우유		성장기용조제분유‧ 성장기용 조제우유	기타조제분유‧ 기타조제우유
		최대권장기준
(가) ～ (나) (현행과 같음)
(라) 조지방 (g/100kcal) 리놀레산(mg/100kcal)	(현행과 같음)		(현행과 같음) 300 이상	(현행과 같음)
	300 이상	1400
(마) 유성분 (현행과 같음)
(바) 비타민A (㎍/100kcal 또는 IU/100kcal )	60～180 또는 200～600		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(사) 비타민D (㎍/100kcal 또는 IU/100kcal )	1.0～2.5 또는 40～100		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(아) 비타민C (㎎/100kcal)	10.0 이상		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(자) 비타민B1 (㎍/100kcal)	60 이상	300	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(차) 비타민B2 (㎍/100kcal)	80 이상	500	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(카) 나이아신 (㎍/100kcal)	300 이상	1500	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(타) 비타민B6 (㎍/100kcal)	(현행과 같음)	175	(현행과 같음) (다만, 단백질 3.0g 이상인 경우 초과 단백질 1g 당 비타민 B6 15㎍의 비율 이어야 한다)	(현행과 같음)
	(다만, 단백질 2.3g 이상인 경우 초과 단백질 1g 당 비타민 B6 15㎍의 비율이어야 한다)
(파) 엽산 (㎍/100kcal)	10.0 이상	50	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(하) 판토텐산 (㎍/100kcal)	400 이상	2000	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(거) (현행과 같음)
(너) 비타민K1 (㎍/100kcal)	(현행과 같음)	27	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(더) 비타민E (mg α-TE/100kcal 또는 IU/100kcal)	(현행과 같음)	5.0 또는 7.0	(현행과 같음) (다만, 리놀레산 1g 이상인 경우 리놀레산 1g 당 최소한 0.5mg α-TE 또는 0.7IU의 비율이어야 한다)	(현행과 같음)
	(다만, 리놀레산 1g 이상인 경우 리놀레산 1g 당 최소한 0.5mg α-TE 또는 0.7IU의 비율이어야 한다)
(러) (현행과 같음)
(머) 칼륨 (㎎/100kcal)	60～180		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(버) 염소 (㎎/100kcal)	50～160		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(서) 칼슘 (㎎/100kcal)	(현행과 같음)	140	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(어) 인 (㎎/100kcal)	(현행과 같음)	100	60이상 (다만, 칼슘과 인의 비율이 1:1～2:1이어야 한다)	(현행과 같음)
	(다만, 칼슘과 인의 비율이 1:1～2:1이어야 한다)
(저) 마그네슘 (㎎/100kcal)	5.0 이상	15	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(처) 철 (㎎/100kcal)	0.45 이상 (현행과 같음)		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(커) 요오드 (㎍/100kcal)	10.0 이상	60	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(터) 구리 (㎍/100kcal)	35 이상		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(퍼) 아연 (㎎/100kcal)	(현행과 같음)	1.5	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(허) 망간 (㎍/100kcal)	1.0 이상	100	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(고) 셀레늄 (㎍/100kcal)	1.0～9.0		9.0 이하	9.0 이하
(노) ～ (모) (현행과 같음)
(보) 엔테로박터 사카자키	n=5, c=0, m=0/60g (현행과 같음)		-	n=5, c=0, m=0/60g (현행과 같음)
(소) ∼ (오) (현행과 같음)

※ (현행과 같음)

※ (현행과 같음)

주) (현행과 같음)

(5) (현행과 같음)

러. 아이스크림류

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 성분규격

(5) (현행과 같음)

유형 구분	아이스크림 저지방아이스크림	아이스밀크, 샤베트, 비유지방아이스크림
(가)∼(다) (현행과 같음) (라) 대장균군 (마) (현행과 같음)	(현행과 같음) n=5, c=2, m=10, M=100 (현행과 같음)	(현행과 같음) n=5, c=2, m=10, M=100 (현행과 같음)

머. (현행과 같음)

버. 아이스크림믹스류

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 성분규격

유형 구분	아이스크림 저지방아이스크림	아이스밀크, 샤베트, 비유지방아이스크림
(가)∼(다) (현행과 같음) (라) 대장균군 (마) (현행과 같음)	(현행과 같음) n=5, c=2, m=10, M=100 (단 멸균제품은 n=5, c=0, m=0이어야 한다) (현행과 같음)	(현행과 같음) n=5, c=2, m=10, M=100 (단 멸균제품은 n=5, c=0, m=0이어야 한다) (현행과 같음)

(5) (현행과 같음)

2. (현행과 같음)

3. 알가공품

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 성분규격

(가) ∼ (다) (현행과 같음)

(라) 대장균군: 살균제품은 n=5 c=1 m=10 M=100, 비살균제품은 n=5, c=1, m=100, M=1000이어야한다(피단의 경우에는 n=5, c=0, m=0이어야 한다)

(마) (현행과 같음)

(5) (현행과 같음)

제 3. 축산물 시험방법

Ⅰ.～ Ⅱ. (현행과 같음)

Ⅲ. 일반시험법

1.～ 2. (현행과 같음)

3. 비타민류

가. ∼ 마. (현행과 같음)

바. 비타민 E

(1) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제1법)

(2) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제2법)

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 비타민 E를 에탄올과 피로갈롤에탄올 용액으로 비누화시키고 석유에테르로 추출 후 감압건조시켜 역상칼럼으로 분리한 후 고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)

② 기구

㉮ 환류냉각장치

㉯ 감압농축기

㉰ 용매여과장치

㉱ 초자기구 : 분액깔대기, 농축 플라스크(갈색, 125 mL 또는 250 mL)

㉲ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정이      가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 에탄올, 메탄올, 석유에테르 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 피로갈롤, 수산화칼륨, 페놀프탈레인, 무수황산나트륨 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ        이상인 것

④ 10% 피로갈롤에탄올용액 : 피로갈롤 10 g을 에탄올에 녹여 100 mL이 되게 한다.

⑤ 90 % 수산화칼륨용액 : 수산화칼륨 9 g을 증류수에 녹여 10 mL이 되게 한다.

⑥ 이동상 : 메탄올 950 mL에 증류수 50 mL를 혼합하고 0.45 μm 나일론 필터로 여과하고 탈기하여 사용한다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액: 토코페롤 (α, β, γ, δ)를 각각 50 mg을 채취하여 50 mL 용량플라스크에 넣고 메탄올로 용해하면서 용량을 맞춘다.

② 표준용액: 표준원액을 1 mL 취하여 메탄올로 10 mL까지 채워 100 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : 표준용액을 0.2, 0.5, 1, 2 및 5 mL를 각각 취하여 10 mL까지 메탄올로 채워 2, 5, 10, 20 및 50 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

시료 약 1 g을 정밀히 달아 농축 플라스크에 넣고 에탄올 30 mL 및 10% 피로갈롤에탄올 용액 1 mL를 가하고 이에 90% 수산화칼륨용액 3 mL를 가해 환류냉각기를 이용하여 90℃ 비등 수욕조 중에서 30분간 비누화한다. 비누화 후 즉시 실온으로 냉각한 후 물 30 mL를 가해 분액깔대기에 옮긴다. 플라스크는 물 10 mL로 씻고 이어서 석유에테르 30 mL로 씻은 후 분액깔대기에 합한다. 분액깔대기를 세게 흔들고, 10분간 방치한 후 하층(물층)을 다른 분액깔대기에 옮긴다. 물층을 석유에테르 30 mL로 2회 추출하고 추출액을 합하여 페놀프탈레인 지시약 1∼2방울 넣는다. 분액깔대기에 물 10 mL 넣어 1회 씻고 뒤이어 물 50 mL를 넣어 세게 흔들고, 여러 차례 반복하여 분홍색이 없어질 때까지 석유에테르층을 씻는다. 분액깔대기 중에서 물을 충분히 분리한 후 무수황산나트륨을 가해 탈수한 후 석유에테르층을 플라스크에 옮긴다. 잔존하는 황산나트륨은 다시 석유에테르 10 mL씩으로 2회 씻고 씻은 액을 플라스크에 모두 합한다. 이 액을 40～50℃에서 감압건조한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해시키고 0.2 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C8(4.6×150 mm, 5 μm) 또는 C18(3.9×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 30℃

- 이동상 : 95% 메탄올

- 유  속 : 1.0 mL/min

- 검출파장 : UV 298 nm

- 주입량 : 10 μL

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하고 피크의 머무름 시간을 비교하여 동일 물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 E의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 E의 함량(mg/100 g)을 산출한다.

비타민 E 함량(mg/100 g)

= C × V/S × [eqn: {100} over {1000}]

C : 검량선에서 구한 α, β, γ, δ -토코페롤 합의 농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

[eqn: {100} over {1000}] : 단위환산

(3) (현행과 같음)

사. 비타민 D

(1) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제1법)

(2) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제2법)

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 비타민 D3를 수산화칼륨에탄올 용액으로 비누화시키고 헥산 추출 및 고체상 카트리지로 정제하여 역상칼럼으로 분리한 후 고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)

② 기구

㉮ 환류냉각장치

㉯ 감압농축기

㉰ 용매여과장치

㉱ 고체상추출장치

㉲ 진공펌프

㉳ 실리카 카트리지 (500 mg, 6      mL) 또는 이와 동등한 것

㉴ 초자기구 : 분액깔대기, 농축 플라스크(갈색, 125 mL 또는 250 mL)

㉵ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정      이 가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 아세트산, 아세토나이트릴, 에틸아세테이트, 디클로르메탄, 에탄올, 이소프로판올, 헥산, 메탄올 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 수산화칼륨, 페놀프탈레인, 무수황산나트륨 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

④ 10% 아세트산용액 : 아세트산 10 mL를 100 mL 용량플라스크에 넣은 후 증류수로 용량을 맞춘다.

⑤ 이소프로판올용액 A : 이소프로판올용액 2 mL를 1 L 용량플라스크에 넣은 후 디클로르메탄으로 용량을 맞추고 잘 혼합한다.

⑥ 이소프로판올용액 B : 이소프로판올용액 200 mL를 1 L 용량플라스크에 넣은 후 디클로르메탄으로 용량을 맞추고 잘 혼합한다.

⑦ 에탄올수산화칼륨용액 : 에탄올 310 mL에 수산화칼륨 140 g을 녹인 후 증류수 50 mL을 넣고 혼합한다.

⑧ 1% 페놀프탈레인용액 : 페놀프탈레인 1 g을 100 mL 용량플라스크에 넣은 후 에탄올로 용량을 맞춘다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액: 비타민 D2(내부표준물질) 및 D3를 각각 30 ㎎을 채취하여 200 mL 용량플라스크에 넣고 에탄올로 용해하면서 용량을 맞춘다.

② 표준용액: 표준원액을 각각 4 mL 취하여 에탄올로 200 mL까지 채워 3 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : 표준용액을 각각 4 mL를 취하여 에탄올로 200 mL까지 채워 0.06 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

① 비누화 및 추출

시료 약 2 g을 정밀히 달아 농축 플라스크에 넣고 증류수 15 mL 로 용해한다. (비타민 D3 표준용액을 4 mL 취하여 농축 플라스크에 넣고 증류수 15 mL를 첨가하여 시료와 동일하게 전처리한다.) 시험용액 및 표준용액에 내부표준물질 비타민 D2를 4 mL 씩 첨가하고 에탄올수산화칼륨용액 15 mL를 가한 후 환류냉각기를 이용하여 60℃ 비등 수욕조 중에서 30분간 비누화한다. 비누화후 즉시 실온으로 냉각한 후 분액깔대기에 옮긴다. 농축 플라스크에 증류수 15 mL를 넣고 잘 헹군 후 분액깔대기로 옮기고 이어서 헥산 60 mL로 잘 헹군 후 분액깔대기에 합한다. 분액깔대기를 90초간 격렬하게 진탕한 후 10분간 방치하여 층을 분리시킨다. 물층(하층)을 버리고, 증류수 15 mL를 넣고 다시 90초간 격렬하게 진탕한 후 하층을 버린다. 남아있는 헥산층에 1% 페놀프탈레인용액 1방울과 증류수 15 mL를 넣고 분액깔대기를 흔들면서 중성(무색)이 될 때까지 10% 아세트산용액을 넣은 후 층이 분리되면 물층(하층)을 버린다. 상층인 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 농축 플라스크에 넣어 40～50℃에서 감압건조한 후 이소프로판올용액 A 2 mL에 녹인다.

② 정제

실리카 카트리지에 이소프로판올용액 B 4 mL를 흘려주고, 뒤이어 이소프로판올용액 A 5 mL를 흘려 카트리지를 활성화시킨 후 ①의 추출용액을 통과시킨다. 농축플라스크의 잔류물을 이소프로판올용액 A 1 mL로 세척하고 카트리지에 통과시킨 후 이소프로판올용액 A 2 mL로 카트리지를 세척하고, 이소프로판올용액 A 7 mL로 용출하여 질소하 건조한다. 건조 잔류물에 아세토나이트릴 1 mL를 가하여 용해시키고 0.45 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 분석칼럼 : C18(6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 가드칼럼 : C18(4.6×10 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 30℃

- 검출파장 : UV 265 nm

- 주입량 : 250 μL

- 이동상 : 아세토나이트릴(A), 메탄올(B), 에틸아세테이트(C)

시간(분)	유속 (mL/min)	A(%)	B(%)	C(%)
0	0.7	91	9	0
33	0.7	91	9	0
33.5	1.5	0	0	100
36	1.5	0	0	100
36.5	1.5	91	9	0
38	1.5	91	9	0
45	0.7	91	9	0

＊이동상 A와 B를 각각 또는 91:9로 혼합하여 사용한다.

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하여 피크의 머무름 시간을 비교하고 동일 물질인지 정성 확인 후 내부표준법으로 농도비에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 D3의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 D3의 함량(㎍/100 g)을 산출한다.

비타민 D3 함량 (㎍/100 g)

= C × V/S × 100

C : 내부표준법으로 구한 비타민         D3의 농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

100 : 단위환산

아. 비타민 K1

(1) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제1법)

(2) 고속액체크로마토그래피에 의한 정량(제2법)

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 비타민 K1을 분해효소로 처리한 후 헥산으로 추출하여 역상칼럼으로 분리하고 포스트칼럼으로 환원시켜 고속액체크로마토그래프/형광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/형광검   출기(HPLC/FLD)

② 기구

㉮ 항온수조

㉯ 질소농축기

㉰ pH meter

㉱ 원심분리기

㉲ 교반기

㉳ 진탕기

㉴ 용매여과장치

㉵ 초자기구 : 유리시험관, 비이커

㉶ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정이      가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 에탄올, 디클로르메탄, 에틸아세테이트, 헥산, 이소프로판올, 메탄올 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 탄산칼륨, 수산화칼륨, 인산칼륨, 무수초산나트륨, 염화아연 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 초산 : Glacial 급

④ Lipase : Candida rugosa를 기원으로 하는 것으로써 약 1000 unit/mg의 활성이 있는 것 또는 동등한 효소 활성을 가진 것으로써 Pseudomonas와 Rhizopus를 기원으로 하는 것

⑤ 아연분말 : 입자 60 ㎛ 이하인 것 또는 이와 동등한 것

⑥ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

⑦ 40% 수산화칼륨용액 : 수산화칼륨 40 g을 100 mL 용량플라스크에 넣은 후 증류수로 녹여 용량을 맞춘다.

⑧ 0.8 M 인산완충용액 : 인산칼륨 55 g을 500 mL 비이커에 넣은 후 증류수 350 mL로 녹인 후 40% 수산화칼륨용액을 이용해 pH를 7.9∼8.0으로 맞춘 후 500 mL 용량플라스크에 옮긴 후 증류수로 용량을 맞춘다.

⑨ 알콜혼합용매 : 에탄올과 메탄올을 95:5의 부피비로 혼합하여 조제한다.

⑩ 이동상 : 디클로르메탄 900 mL에 메탄올 100 mL을 혼합한 용매에 메탄올 5 mL에 녹인 염화아연 1.37 g과 초산 0.3 g 및 무수초산나트륨 0.41 g을 넣고 혼합한 후 0.2 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하고 탈기하여 사용한다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액: Vitamin K1 0.025 g을 50 mL 용량플라스크에 넣은 후 이소프로판올로 녹여 조제한다.

② 표준용액: 표준원액을 1 mL 취하여 메탄올로 100 mL까지 채워 5 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : 표준용액을 0.2, 0.5, 1, 2 및 4 mL를 각각 취하여 100 mL까지 메탄올로 채워 10, 25, 50, 100 및 200 ng/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

① 분해

시료 약 1 g을 시험관에 넣고, 38℃ 증류수 15 mL을 넣은 후 잘 흔들어 녹인다. 여기에 0.8 M 인산완충용액 5 mL을 넣고, 분해 효소인 lipase 1 g을 넣고 교반기를 이용하여 녹인 후, 마개로 시험관을 막고 세게 흔들어 lipase 가 충분히 분산되도록 한다. 38℃ 항온수조에서 20분 간격으로 15초간 흔들면서 120분간 효소처리를 한 다음, 알콜혼합용액 10 mL을 넣고 흔든 후 탄산칼륨 1 g을 넣고 흔든다.

② 추출

시험관에 헥산 30 mL을 넣고 10분 이상 진탕기를 이용하여 세게 흔든다. 이를 냉암소에 10분 이상 정치하여 두 층으로 분리되는 것을 확인하고(층분리가 완전하지 않으면 1000 rpm에서 10분간 원심분리한다.), 상층액 1 mL을 별도의 유리시험관으로 옮겨 질소농축기를 이용하여 건조한 후 다시 메탄올 1 mL을 넣고 진탕기를 이용하여 용해한 후 0.45 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 분석칼럼 : C18(4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 포스트칼럼 : C18(4.6×30 mm) 또는 이와 동등한 것

※ 분석 전 아연분말을 채우고 분석칼럼과 형광검출기 사이에 장착한다.

- 칼럼온도 : 30℃

- 이동상 유속 : 1.1 mL/min

- 검출파장 : 여기파장 265 nm, 측정파장 430 nm

- 주입량 : 10 μL

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하여 피크의 머무름 시간을 비교하고 동일 물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 K1의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 K1의 함량(㎍/100 g)을 산출한다.

비타민 K1 함량 (㎍/100 g)

= C × V/S × 100

C : 검량선에서 구한 비타민 K1의          농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

100 : 단위환산

자. ∼ 카. (현행과 같음)

타. 비타민 B군 동시분석법

(가) 시험법 적용범위

조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유 및 성장기용 조제우유 등 조제유류에 적용한다.

(나) 분석원리

시료 중의 수용성 비타민 B군 5종(B1, B2, B6, 니코틴산아미드, 엽산)을 헥산설폰산나트륨이 함유된 초산용액으로 추출 정제하여 역상칼럼으로 분리한 후 고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

(다) 장치 및 기구

① 장치

고속액체크로마토그래프/자외부   흡광검출기(HPLC/UV)

② 기구

㉮ 원심분리기

㉯ 진탕기

㉰ 용매여과장치

㉱ 원심분리관

㉲ 분석저울 : 0.1 mg까지 측정이       가능한 것

(라) 시약 및 시액

① 메탄올: 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

② 초산, 수산화나트륨, 헥산설폰산나트륨 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

③ 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ  이상인

④ 이동상

㉮ 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 0.1% 초산용액 : 초산 1 mL을 1 L 용량플라스크에 넣은 후 증류수로 약 900 mL까지 채우고, 헥산 설폰산 나트륨을 5 mM 농도가 되도록 넣고 혼합한 후 증류수로 1 L를 맞춘다.

㉯ 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 메탄올 : 메탄올을 약 900 mL까지 채우고, 헥산설폰산나트륨을 5 mM 농도가 되도록 넣고 혼합한 후 메탄올로 1 L를 맞춘다.

(마) 표준용액 조제

① 표준원액

㉮ Vitamin B1, Vitamin B6, 니코틴산아미드,  : B1 0.01 g, B6 0.01 g, 니코틴산아미드 0.1 g을 100 mL 용량플라스크에 넣고 이동상 ㉮의 용액으로 용해하면서 용량을 맞춘다.

㉯ Vitamin B2, 엽산 : B2 0.01 g, 엽산 0.01 g을 100 mL 용량플라스크에 넣고 0.1 N 수산화나트륨 용액 용액으로 용량을 맞춘다.

② 표준용액: Vitamin B1, B2, B6, 엽산 표준원액은 1 mL, 니코틴산아미드의 표준원액은 1 mL을 취하여 100 mL 용량플라스크에 넣고 이동상 ㉮의 용액으로 용량을 맞추어 각각 1 ㎍/mL 및 10 ㎍/mL이 되도록 조제한다.

③ 검량곡선표준용액 : Vitamin B1, B2, B6, 엽산 표준용액은 이동상 ㉮로 희석하여 0.05, 0.10, 0.25, 0.5 및 1 ㎍/mL이 되도록 조제한고, 니코틴산아미드 표준용액은 이동상 ㉮로 희석하여 0.5, 1, 2.5, 5 및 10  ㎍/mL이 되도록 조제한다.

(바) 시험용액 조제

시료 약 1 g을 정밀히 달아 원심분리관에 넣고 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 0.1% 초산용액을 20 mL를 넣어 녹인다. 15분간 교반기로 잘 섞은 후, 이어서 15분간 초음파 추출하고 15,000 rpm, -10 ℃에서 10분간 원심 분리한다. 상층액의 일부를 0.2 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

(사) 시험조작

① 고속액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 30 ℃

- 유  속 : 0.6 mL/min

- 검출파장 : UV 270 nm

- 주입량 : 50 μL

- 이동상 : 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 0.1 % 초산용액(A) 5 mM 헥산설폰산나트륨이 함유된 메탄올(B)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
8.0	80	20
16.0	40	60
18.0	20	80
18.1	0	100
30.0	0	100
30.1	80	20
35	80	20

② 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 주입하여 피크의 머무름 시간을 비교하고 동일 물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중의 비타민 B군의 농도(㎍/mL)를 구하고, 검사시료 중 비타민 B군의 함량(㎍/100 g)을 산출한다.

비타민 B군 개별 함량 (㎍/100 g)

= C × V/S × 100

C : 검량선에서 구한 비타민 B군 개별 농도 (㎍/mL)

V : 시험용액의 최종부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

100 : 단위환산

＊비타민 B1은 첨가된 형태만 정량 가능하며, 부적합 시 개별 정량법으로 확인검사를 실시한다.

4. ∼ 8. (현행과 같음)

9. 미생물시험법

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 세균수

(1) 일반세균수

(가) ∼ (나) (현행과 같음)

(다) 자동화된 최확수법

(Automated MPN)

-------------------      ------------------------------------------------------분유류, 소, 돼지, 닭(오리)도체에 한한다.

라. ∼ 마. (현행과 같음)

바. 대장균수(Generic E. coli)

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 시험방법

(가) ∼ (다) (현행과 같음)

(라) ---------------------

----------식육추출가공품, 닭(오리)도체에 한한다.

사. ～ 러. (현행과 같음)

머. 엔테로박터 사카자키

[Enterobacter sakazakii(Cronobacter spp.)]

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 시험방법

(가) 증균배양

시료 60g을 무균적으로 채취하여 540mL의 멸균증류수에 접종하여-------------------------  ------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------.

(나) ～ (다) (현행과 같음)

버. ～ 서. (현행과 같음)

10. ～ 16. (현행과 같음)

Ⅳ. ～ Ⅸ. (현행과 같음)