식품의약품안전처 고시 제2013-261호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2013.12.31.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 고시 제2013-261호

식품의 기준 및 규격 일부 개정고시

1. 개정 이유

더 이상 가공, 가열하지 않고 바로 섭취하는 식품 및 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품에 대하여 캠필로박터 콜리 규격을 추가로 신설하여 안전관리를 강화하며, 미생물 규격의 과학적·합리적인 관리를 위해 위생지표균(삼군법) 및 고위해 식중독균(이군법) 규격에 통계적 개념을 도입하고자 함

인삼 등 다년생 근채류는 단년생과 달리 토양 재배시 작물체내 중금속 함량이 지속적으로 축적될 가능성이 있어 별도의 중금속 기준을 마련하고, 혈중 납 농도와 높으면 지능지수가 감소한다는 과학적 증거자료가 보고되고 있어(JECFA, 2010) 납 등 중금속 독성에 더욱 민감한 영․유아 대상 식품에 중금속 기준을 신설하여 식품 안전관리를 강화하고자 함

현행 식품공전에서는 냉동 수산물을 당일에 한하여 해동과 판매를 허용하고 있으나, 수산물에 따라 장시간의 해동이 필요한 실정이므로 냉동 수산물의 보존 및 유통기준을 개정하여 업계의 현실 여건을 반영하고자 함

아울러, 국·내외적으로 사용되는 농약 및 동물용의약품들에 대한 잔류허용기준과 잔류농약 시험법을 신설 및 개정하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.

2. 주요 내용

가. 식품 중 캠필로박터 콜리 규격 신설 [제 2, 5, 4), 제 7, 4, 가), (5) 및 5, 9)]

1) 캠필로박터에 의한 식중독 사고는 대부분 캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)에 의해 주로 발생하였으나 최근 캠필로박터 콜리Campylobacter coli)에 대한 식중독 발생이 증가하고 있으며, 캠필로박터 콜리는 소량의 균수로도 인체감염을 나타낸다고 알려져 있어 이에 대한 안전관리 필요

2) 캠필로박터 콜리의 규격을 신설하고, 캠필로박터 콜리 검출을 위한 시험법 개정

3) 캠필로박터 콜리의 규격을 신설하여 국·내외 식품에 대한 안전관리 강화

나. 인삼 등 다년생 근채류의 중금속 기준 개정[제 2. 5. 5)]

1) 인삼 등 다년생 근채류에 대한 국내 오염도를 고려하여 중금속 기준을 합리적으로 관리하고자 함

2) 인삼, 산양삼, 도라지, 더덕의 중금속 기준 신설

3) 근채류의 중금속 기준․규격의 합리적 관리

다. 영·유아 식품의 중금속 기준 신설[제 2. 5. 5)]

1) JECFA에서 혈중 납 농도와 지능지수 감소간의 상관관계가 있다는 과학적 증거가 보고되고 있어 특히, 중금속 등 독성에 대해 민감한 영․유아를 대상으로 영․유아 식품에 중금속 기준을 설정하여 관리하고자 함

2) 특수용도식품 및 조제유류 등 영․유아 식품의 중금속 기준 신설

※ 영·유아 식품의 분류

□ ｢식품위생법｣ 관리대상

- 특수용도식품 : 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 특수의료용도등식품(영·유아용 특수조제식품)

□ ｢축산물위생관리법｣ 관리대상

- 분유류 : 전지분유, 탈지분유, 가당분유, 혼합분유

- 조제유류 : 조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유, 기타조제분유, 기타조제우유

3) 영․유아 식품의 안전관리

라. 냉동 수산물의 보존 및 유통기준 개정[제 2. 6. 8)〕

1) 냉동 수산물의 해동판매 기한 초과로 ‘보존 및 유통기준’의 위반 사례 급증에 따른 업계 현실을 반영한 기준 개정 필요

2) 냉동 수산물을 별도의 해동 시간을 거쳐 24시간 내에 냉장으로 판매할 수 있도록 보존 및 유통기준을 개정하고자 함

3) 기준․규격의 합리적 관리 및 업계 현실 반영

마. 장기보존식품의 제조·가공 기준 냉동식품의 미생물 규격 개정[제 3, 1, 1), 2, 1), 3, 1), (1), 3, 2)]

1) 통·병조림 및 레토르트 식품의 제조·가공기준을 Codex 등의 국제기준과 일치되도록 일부 문구를 수정하고, ‘살균제품’을 ‘냉동전가열제품’으로 규정하고 있어 이에 대한 혼란을 방지하기 위해 제조·가공기준의 문구 수정 및 가열하여 섭취하는 냉동식품의 소분류 간소화 필요

2) 통·병조림, 레토르트 및 냉동식품의 제조·가공기준 개정, 가열하여 섭취하는 냉동식품의 소분류 개정

3) 제조·가공기준의 국제기준과 조화를 통한 수출입 시 무역마찰 감소, 냉동식품의 미생물 규격 적용 시 혼란 감소

바. 식품 중 미생물 기준·규격에 통계적 개념 도입 [제 3, 3, 1) 및 2), 제 5, 2, 5), (6), 3, 5), (7), 11, 5) (6) 및 (7), 18-1, 5), (6), 19-4, 5), (6), 21-5, 5), (7) 및 6), (7), 21-6, 5), (3) 및 (4), 25, 5), (1), (2) 및 (6), 6), (6), 28, 5), (2), 29-1, 5), (2), 29-18, 5), (2), (4) 및 (7)]

1) 미생물의 특성상 제품 중 오염이 균일하지 않음에도 불구하고 하나의 시료를 검사하여 판정하는 제도를 개선하기 위하여 국제식품규격위원회(Codex), 미국, EU 등 제외국에서 운영하고 있는 통계적 개념의 미생물 기준·규격 도입 필요

2) 미생물 기준·규격에 통계적 개념(이군법(n, c, m) 및 삼군법(n, c, m, M))을 도입

3) 미생물 검사의 대표성과 신뢰도가 확보됨에 따라 식품산업활성, 국민건강보호 및 수출입 시 무역마찰 감소

사. 일반시험법 개정

1) 캠필로박터 제주니 시험법 개정[제 9, 3, 3.4, 3.4.1, 72)～75) 및 3.19]

- 캠필로박터 콜리 검출을 위한 배지 추가 및 시험법 개정

아. 잔류농약시험법 신설 및 개정

1) 신규 농약의 잔류허용기준 설정에 따른 시험법 마련 및 분석대상 성분 개정에 따른 시험법 개선이 필요

2) 제 9, 4.1.3.21 디메칠디치오카바메이트(Dimethyldithiocarbamates),에틸렌비스디치오카바메이트[Ethylenebis(dithiocarbamate)s] 및 프로피네브 분석법을 디치오카바메이트계 농약 분석법으로 개정

3) 사이안트라닐리프롤 등 7종 농약에 대한 잔류농약분석법 신설

- 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole) [제 9, 4.1.4.166]

- 에폭시코나졸(Epoxiconazole)[제 9, 4.1.4.167]

- 펜피라자민(Fnpyrazamine)[제 9, 4.1.4.168]

- 플루티아닐(Flutianil)[제 9, 4.1.4.169]

- 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)[제 9, 4.1.4.170]

- 피리오페논(Pyriofenone)[제 9, 4.1.4.171]

- 스피로테트라맷(Spirotetramat)[제 9, 4.1.4.172]

4) 식품 중 농약분석법의 신설 및 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급

자. 밀감에 대한 명칭 개정[[별표 4] 중 (21), (22), (33), (39), (63), (68), (81), (82), (96), (98), (100), (143), (157), (175), (194), (195), (215), (219), (234), (260), (262), (294), (298), (315), (415)]

1) 밀감에 대한 명칭을「농약관리법」과 조화를 이루기 위해 디크로보스 등 25종 농약에 대하여 밀감에 대한 명칭을 감귤로 개정

2) 용어를 통일함으로써 국민에게 혼돈을 최소화하고자 함

차. 축산물의 농약 잔류허용기준 개정 [[별표6] 중 (23)]

1) 식품 중 동물용의약품(아미트라즈, 살충제) 잔류허용기준 신설로 축산물의 농약 잔류허용기준과 중복된 항목의 기준 개정 필요

2) 아미트라즈(살충제)에 대한 농약 잔류허용기준 삭제

3) 축산물의 농약 잔류허용기준 개정으로 국민의 불안감 해소

카. 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준 신설 [[별표7] 중 (52)]

1) 축산물에 대한 동물용의약품 잔류허용기준 설정에 따른 잔류허용기준 신설 및 개정 필요

2) 아미트라즈(살충제)에 대한 잔류허용기준 개정

3) 축산물에 대한 동물용의약품 잔류허용기준 개정(합리화)을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조 제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

가) 2013.7.16.～2013.9.15(공고 제2013-113호, 2013.7.16.)

나) 2013.9.26.～2013.11.2(공고 제2013-188호, 2013.9.26.)

2) 식품위생심의위원회 관련

가) 2013.  3. 13. 잔류물질분과 심의(1차)

나) 2013.  8. 22. 잔류물질분과 심의(2차)

다) 2013. 10. 10. 유해오염물질분과 심의

라) 2013. 10. 24. 미생물분과 심의

3) 규제심사

가) 행정예고 제2013-113호

- 국무총리실 규제개혁위원회 규제심사 : 비중요 규제(2013.12.21)

나) 행정예고 제2013-188호

- 국무총리실 규제심사 : 비규제(2013.12. 5)

식품의약품안전처 고시 제2013-261호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2013-233호, 2013. 11. 12.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2013년 12월 31일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시안

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제 2, 5, 4) 중 “캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)"를 “캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)”로 한다.

제 2, 5, 5) 중 “(1)~(4)”를 “(3)”으로 하고 다음과 같이 한다.

(3) 수산물의 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)	수은(mg/kg)	메틸수은(mg/kg)
어류	0.5 이하	-	0.5 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류는 제외한다)	1.0 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류에 해당된다)
연체류	2.0 이하 (다만, 내장을 포함한 낙지는 2.0 이하)	2.0 이하 (다만, 내장을 포함한 낙지는 3.0 이하)	0.5 이하	-
갑각류	1.0 이하 [다만, 내장을 포함한 꽃게류(꽃게과에 속하는 꽃게 종)는 2.0 이하]	1.0 이하 [다만, 내장을 포함한 꽃게류(꽃게과에 속하는 꽃게 종)는 5.0 이하]	-	-
해조류	-	0.3 이하 [김(조미김을 포함하며, 생물 기준 적용)에 해당된다]	-	-

제 2, 5, 5) 중 “(5)”를 “(1)”로 하고 다음과 같이 한다.

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
곡류(현미 제외)	0.2 이하	0.1 이하(밀, 쌀은 0.2 이하)
서류	0.1 이하	0.1 이하
콩류	0.2 이하	0.1 이하(대두는 0.2 이하)
과일류	0.1 이하 (사과, 귤, 장과류는 0.2 이하)	-
엽채류 (결구 엽채류 포함)	0.3 이하	0.2 이하
엽경채류	0.1 이하	0.05 이하
근채류	0.1 이하 (인삼, 산양삼, 도라지, 더덕은 2.0 이하)	0.1 이하 (양파는 0.05 이하, 인삼, 산양삼, 도라지, 더덕은 0.2 이하)
과채류	0.1 이하 (고추, 호박은 0.2 이하)	0.05 이하 (고추, 호박은 0.1 이하)
버섯류	0.3 이하(양송이버섯, 느타리버섯, 새송이버섯, 표고버섯, 송이버섯, 팽이버섯, 목이버섯에 한한다)	0.3 이하(양송이버섯, 느타리버섯, 새송이버섯, 표고버섯, 송이버섯, 팽이버섯, 목이버섯에 한한다)
참깨	0.3 이하	0.2 이하

(1) 농산물의 중금속 기준

제 2, 5, 5) 중 “(6)”과 “(7)”을 “(2)”로 하고 다음과 같이 한다.

(2) 축산물의 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
가금류고기*	0.1 이하	-
돼지간	0.5 이하	0.5 이하
돼지고기**	0.1 이하	0.05 이하
돼지신장	0.5 이하	1.0 이하
소간	0.5 이하	0.5 이하
소고기**	0.1 이하	0.05 이하
소신장	0.5 이하	1.0 이하
원유 및 우유류	0.02 이하	-

*가금류고기 : 부착된 지방 및 표피를 포함하는 가금류 도체의 근육조직으로 닭, 오리, 꿩, 거위, 칠면조, 메추리 등의 고기를 말한다.

**소고기, 돼지고기 : 근육 내 지방 및 피하지방과 같이 부착된 지방조직을 포함하는 도체(혹은 이를 자른 덩어리)의 근육조직을 말한다.

제 2, 5, 5) 중 “(8)”을 “(5)”로 한다.

제 2, 5, 5) 중 “(9)”를 “(4)”로 하고 다음과 같이 한다.

(4) 가공식품의 중금속 기준

대 상 식 품	납(mg/kg)	비소(mg/kg)
○ 식용유지류	0.1 이하	0.1 이하
○ 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 영·유아용 특수조제식품, 조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유, 기타조제분유, 기타조제우유	0.01 이하 [분말제품의 경우 희석하여 섭취하는 형태(제조사가 제시한 섭취방법)를 반영하여 기준적용]	-

제 2, 6, 8) 중 “다만, 냉동어패류를 즉석에서 당일 판매를 목적으로 냉장하는 것은 그러하지 아니할 수 있으며, 이때 재냉동하여서는 아니 된다.”를 삭제하고, 9)를 다음과 같이 신설한다.

9) 냉동 수산물은 해동 후, 24시간 이내에 냉장으로 유통할 수 있다. 이때 해동된 수산물을 재냉동하여서는 아니 된다.

제 2, 6, 9)부터 18)까지를 각각 10)부터 19)까지로 한다.

제 3, 1, 1) 중 (2)부터 (4)까지를 각각 다음과 같이 한다.

(2) pH 4.6을 초과하는 저산성식품(low acid food)은 제품의 내용물, 가공장소, 제조일자를 확인할 수 있는 기호를 표시하고 멸균공정 작업에 대한 기록을 보관하여야 한다.

(3)  pH가 4.6 이하인 산성식품은 가열 등의 방법으로 살균처리 할 수 있다.

(4) 제품은 저장성을 가질 수 있도록 그 특성에 따라 적절한 방법으로 살균 또는 멸균 처리하여야 하며 내용물의 변색이 방지되고 호열성 세균의 증식이 억제될 수 있도록 적절한 방법으로 냉각하여야 한다.

제 3, 2, 1), (1) 및 (2)를 다음과 같이 한다.

(1) 멸균은 제품의 중심온도가 120℃ 4분간 또는 이와 같은 수준 이상의 효력을 갖는 방법으로 열처리하여야 한다. pH 4.6을 초과하는 저산성식품(low acid food)은 제품의 내용물, 가공장소, 제조일자를 확인할 수 있는 기호를 표시하고 멸균공정 작업에 대한 기록을 보관하여야 한다. pH가 4.6 이하인 산성식품은 가열 등의 방법으로 살균처리 할 수 있다.

(2) 제품은 저장성을 가질 수 있도록 그 특성에 따라 적절한 방법으로 살균 또는 멸균 처리하여야 하며 내용물의 변색이 방지되고 호열성 세균의 증식이 억제될 수 있도록 적절한 방법으로 냉각하여야 한다.

제 3, 3, 1), (1) 및 2)를 다음과 같이 한다.

1) 제조·가공기준

(1) 살균제품은 그 중심부의 온도를 63℃ 이상에서 30분 가열하거나 이와 같은 수준 이상의 효력이 있는 방법으로 가열 살균하여야 한다.

2) 규격

(1) 가열하지 않고 섭취하는 냉동식품

① 세균수 : n=5, c=2, m=100,000, M=500,000(다만, 발효제품, 발효제품 첨가 또는 유산균 첨가제품은 제외한다)

② 대장균군 : n=5, c=2 m=10, M=100

③ 유산균수 : 표시량 이상(유산균 첨가제품에 해당된다)

(2) 가열하여 섭취하는 냉동식품

① 세균수 : n=5, c=2, m=1,000,000, M=5,000,000(살균제품은 n=5, c=2, m=100,000, M=500,000, 다만, 발효제품, 발효제품 첨가 또는 유산균 첨가품은 제외한다)

② 대장균군 : n=5, c=2 m=10, M=100(살균제품에 해당된다)

③ 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10(다만, 살균제품은 제외한다)

④ 유산균수 : 표시량 이상(유산균 첨가제품에 해당된다)

제 5, 2, 5) 중 (6)을 다음과 같이 한다.

(6) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/10 g(다만, 크림을 도포 또는 충전한 것에 해당된다.)

제 5, 3, 5) 중 (7)을 다음과 같이 한다.

(7) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25 g

제 5, 11, 5) 중 (6) 과 (7)을 다음과 같이 한다.

(6) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25 g(살균제품에 해당된다.)

(7) 장출혈성 대장균 : n=5, c=0, m=0/25 g(원료용 분쇄육에 해당된다.)

제 5, 18-1, 5) 중 (6)을 다음과 같이 한다.

(6) 장출혈성 대장균 : n=5, c=0, m=0/25 g(가열하지 아니한 제품 또는 가열하지 아니한 원료 함유제품에 해당된다.)

제 5, 19, 19-4, 5) 중 (6)을 “삭제” 하고, “(7)부터 (10)”까지를 “(6)부터(9)”까지로 한다.

제 5, 21-5, 5) 중 (7) 과 6) 중 (7)을 다음과 같이 신설한다.

5) 규격

(7) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10

6) 시험방법

(7) 대장균

제10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

제 5, 21-6, 5) 중 (3) 과 (4)를 다음과 같이 한다.

(3) 대장균군 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품에 해당된다.)

(4) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10(다만, 살균제품 또는 건조제품은 제외한다.)

제 5, 25, 5) 중 (1) 과 (2)를 다음과 같이 하고, (6)을 다음과 같이 신설하며, 6) 중 (6)을 다음과 같이 신설한다.

5) 규격

(1) 세균수 : n=5, c=0, m=0(멸균제품에 해당된다.)

(2) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품에 해당된다.)

(6) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(6) 대장균

제 9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

제 5, 28, 5) 중 (2)를 다음과 같이 한다.

(2) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10

제 5, 29-1, 5) 중 (2)를 다음과 같이 한다.

(2) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25 g

제 5, 29-18, 5) 중 (2), (4) 및 (7)을 다음과 같이 한다.

(2) 세균수 : 1 g당 100,000 이하(즉석조리식품에 해당하며, 발효제품, 발효제품 첨가 또는 유산균 첨가제품은 제외한다.)

(4) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25 g

(7) 장출혈성 대장균 : n=5, c=0, m=0/25 g(신선편의식품에 해당된다.)

제 7, 4, 가) 중 (5) 와 5 중 9)의 “캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)"를 “캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)”로 한다.

제 9, 3, 3.4, 3.4.1, 72)부터 75)까지를 다음과 같이 신설한다.

72) Preston 한천배지(Preston Agar)

Lab-Lemcopowder                                      10.0 g

Peptone                                                 10.0 g

Sodium chloride                                          5.0 g

Agar                                                    12.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분 37.0 g을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

PolymyxinB                                          5,000 IU

Rifampicin                                             10 mg

Trimethoprim                                          10 mg

Cycloheximide                                         100 mg

73) Campy Cefex 한천배지(Campy Cefex Agar(CCA))

Brucella Agar(Difco)                                 44.0 g

Ferrous sulfate                                      0.5 g

Sodium pyruvate                                     0.5 g

Sodium bisulfite                                     0.25 g

위의 성분을 증류수로 990 mL되게 용해하고 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 Cefoperazone 10 mL 및 Cycloheximide(200 mg/L)을 첨가한다.

74) Blaser's Campylobacter 한천배지(Blaser's Campylobacter Agar(BCA))

Yeast extract             5.0 g

Peptone                    15.0 g

NaCl                    5.0 g

Agar                   12.0 g

Liver digest             2.5 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL되게 용해하여 pH 7.0로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 용혈된 말혈구 50 mL과 Campylobacter Supplement (A) (유제품의 경우 사용가능)를 권장량이 되게 첨가한다.

75) Preston 배지(Preston broth)

Lab-Lemco powder                       10.0 g

Peptone                            10.0 g

Sodium chloride                      5.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

Polymyxin B                               5,000 IU

Rifampicin                                 10.0 mg

Trimethoprim                              10.0 mg

Cycloheximide                              100.0 mg

제 9, 3, 3.19 "캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)"를 "캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)"로 하고, 1) 중 “HUNT 배지 또는 Bolton 배지(배지 68)”를 “HUNT 배지, Bolton 배지(배지 68) 또는 Preston 배지(배지 75)” 로 하며, 2) 중 “modified Campy blood free 한천배지(배지 48) 또는 Abeyta-Hunt 한천배지((배지 49)”를 “modified Campy blood free 한천배지(배지 48),  Abeyta-Hunt 한천배지(배지 49), Preston 한천배지(배지 72), CCA 한천배지(배지 73) 또는 BCA 한천배지(배지 74)” 로 하고, 3)을 다음과 같이 한다.

3) 확인시험

Modified Campy blood free 한천배지상에서 원형 또는 불규칙한 형태로서 반투명한 흰색 또는 투명한 집락, Abeyta-Hunt 한천배지(배지 49)상에서 무지개빛 광택 집락, CCA 및 BCA 한천배지에서는 불규칙한 가장자리를 가지고 점액이 있으며 회색인 평평한 집락(24～48시간 배양 후 용혈은 나타나지 않으며 분홍색이나 노란-회색집락이 나타나기도 한다), Preston 한천배지에서는 부드러운 모서리를 가진 불규칙한 원모양을 형성하는 반투명의 흰색집락(일부 균주는 황갈색 또는 약한 핑크색 집락을 형성)을 선별하여 항생제를 넣지 않은 Abeyta-Hunt 한천배지 등 분리배양에 사용한 한천배지에 신속히 접종하여 42℃에서 24～48시간 배양한다. 배양된 집락을 취하여, 암시야 또는 위상차현미경으로 검경하거나 또는 대비 염색하여 지그재그 모양을 관찰한다. 이 때 대비염색은 10 mL 식염수에 2방울의 crystal violet을 혼합한 용액을 이용한다. 현미경상으로 확인된 균에 대하여 catalase 및 oxidase 양성임을 확인한다. 확인된 균에 대하여, 캠필로박터 제주니는 hippurate 분해 양성, 황화수소 비생성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등을 확인하며, 캠필로박터 콜리는 hippurate분해 음성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등 생화학시험을 실시한다.

제 9, 4. 4.1.3.21의 “디메칠디치오카바메이트(Dimethyldithiocarbamates), 에틸렌비스디치오카바메이트[Ethylenebis(dithocarbamate)s] 및 프로피네브(Propineb)”를 “디치오카바메이트계(Dithiocarbamates) 농약 분석법”으로 하고,  다음과 같이 한다.

1) 분석법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 견과종실류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디치오카바메이트계 농약을 강한 산성 조건하에서 100℃ 이상의 열로 가열하고 이로부터 발생되는 이황화탄소 가스를 이황화탄소 트랩에 포집하여 쿨렌(Cullen) 발색시약으로 발색시켜 분광광도법(435 nm)으로 분석한다.

3) 장치

가) 분광광도계(UV-Vis spectrophotometer)

나) 이황화탄소 발생 장치

이황화탄소 발생 장치

다) 공기압축기(Air Compressor)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 쿨렌 발색시약： 초산구리(cupric acetate) 500 mg과 디에탄올아민 100 g을 에탄올에 용해시켜 100 mL로 조제한 후 냉암소에서 보관하면서 7일마다 다시 제조하여 사용하여야 한다.

라) 40% 염화주석(SnCl2·H2O) 용액：97% 염화주석 103.1 g을 진한 황산에 용해시켜 250 mL로 조제한다.

마) 이황화탄소 표준용액：디치오카바메이트계 농약을 분광광도계를 이용하여 정량분석하고자 할 때 표준검량선 작성 시 사용하는 표준용액으로 HPLC급 이상의 에탄올에 이황화탄소를 용해하여 제조한 후 밀봉하여 냉암소에 보관하면서 사용한다. 이황화탄소는 휘발성이 큰 물질이므로 무게를 달 때 주의하며 신속하게 수행하여야 한다.

※  회수율 시험용 디치오카바메이트계 농약 표준용액：디치오카바메이트계 농약의 표준품은 10% EDTA에 완전히 용해시킨 후 2M 염산을 사용하여 pH를 7.0으로 조절하고 100 mg/mL 농도로 조제하여 즉시 사용해야 한다. 반드시 사용 시마다 표준용액을 조제하여야 하며 보관하여 사용할 수 없다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

디치오카바메이트계 농약은 100℃ 이상에서 이황화탄소로 분해되는데 이 가스를 포집하기 위해 3)나)의 이황화탄소 발생장치와 같이 장치 A, B와 삼구플라스크를 설치한다. 500 mL 삼구플라스크에 시료 100 g과 물 200 mL, 40% 염화주석 용액 5 mL, 진한 염산 10 mL를 차례로 가하고, 장치 A (황화수소 트랩)에 10% 수산화나트륨 용액 10 mL와 디클로로메탄 5 mL, 장치 B (이황화탄소 트랩)에 쿨렌 발색시약 15 mL를 넣어 모든 장치를 연결한다. 삼구플라스크의 한쪽 구멍은 마개로 막고 다른 쪽 구멍은 공기 튜브를 연결하여 분당 약 50 mL의 공기를 주입한다. 각 장치들이 새지 않음을 확인한 후 냉각관에 냉각수를 흘려보내고 멘틀로 가열하여 플라스크 내의 시료가 끓은 후 30분간 더 반응시킨다. 반응이 완료되면 약 5분간 방냉한 후 25 mL 용량의 플라스크에 장치 B의 액을 받아 에탄올로 25 mL 표선까지 채운 후 8분간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 분광광도계의 측정 조건

435 nm에서 흡광도를 측정한다.

나) 검량선의 작성

분광광도계를 미리 켜두고 30분간 안정화시킨다. 쿨렌 발색시약을 15 mL 씩 25 mL 매스플라스크 10개에 나누어 담고 에탄올에 용해한 이황화탄소 표준품을 원하는 농도로 희석한 후 희석액 10 mL를 각각의 매스플라스크에 넣어주고, 에탄올을 이용하여 25 mL까지 채운다. 매스플라스크의 마개를 막고 잘 흔들어 섞고 8분 동안 반응시킨 후 435 nm 파장에서 차례대로 흡광도를 측정한다. 측정된 흡광도를 이용하여 표준검량선과 회귀방정식을 작성한다. 에탄올로 채운 후 10분 이내에 모든 측정을 마무리하도록 한다.

다) 정량한계

0.1 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 측정된 흡광도를 미리 작성한 표준검량선에 대입하여 발생된 이황화탄소 양을 계산하고 이를 통해 시료 중 디치오카바메이트계 농약의 잔류량을 확인한다.

제 9, 4. 4.1.4 중 4.1.4.166에서 4.1.4.172까지를 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.166 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 사이안트라닐리프롤을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 사이안트라닐리프롤 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다.

(* 대파의 경우 : 간섭물질 제거를 위해 pH 10 염기상태로 만든 후 추출을 실시한다.

* 감자의 경우 : 전분의 추출 억제 및 제거를 위하여 pH 2로 산성화하여 원심분리 과정을 거쳐서 제거한 다음 단계 분석을 수행한다.)

이를 물 80 mL로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 포화식염수 20 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 수용액층을 별도의 1 L 용량의 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버린 다음 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/에틸아세테이트(90/10, v/v) 10 mL로 유출시켜 버린 다음 디클로로메탄/에틸아세테이트(60/40, v/v) 10 mL로 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 아세토니트릴 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(45/55, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 264 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

사이안트라닐리프롤(8.1분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 사이안트라닐리프롤을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액

머무름시간 (min)	0.1% 포름산 함유 물 (%)	0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 (%)
0	80	20
2.5	80	20
3.0	50	50
4.0	10	90
4.5	10	90
5.0	80	20
15.0	80	20

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
5.6	473.7	474	475

4.1.4.167 에폭시코나졸(Epoxiconazole)

1) 분석법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 에폭시코나졸을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD, Gas Chromatograph- Electron Capture Detector)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph- Mass Spectrometer)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 에폭시코나졸 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 플로리실(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과한 후 20 g, 채소류, 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 취하고  40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 용매를 날려버린 후 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 재용해한다.

나) 정제

미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울정도의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하의 항온수조 중에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(50 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : split mode(20:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에폭시코나졸(25.8분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 에폭시코나졸을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.8 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼400 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
19.4	329.8	192, 138, 165

4.1.4.168 펜피라자민(Fenpyrazamine)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜피라자민을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜피라자민 표준품을 메탄올에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 60% 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다. 이를 물 50 mL, 포화식염수 20 mL 및 디클로로메탄 100 mL로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 4 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/아세톤(95/5, v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 헥산/아세톤(85/15, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 60% 메탄올 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 메탄올/물(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 243 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜피라자민(14.1분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜피라자민을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 메탄올(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

(8) Cone voltage : 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
9.9	331.4	331	332

4.1.4.169 플루티아닐(Flutianil)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루티아닐을 아세토니트릴로 추출한 후 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루티아닐 표준품을 아세톤에 녹여 1000 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한다. 이를 분액깔대기에 옮기고 아세토니트릴 농축액이 들어있던 수기를 물 250 mL, 포화식염수 30 mL 및 디클로로메탄 150 mL를 차례로 씻어 분액깔대기에 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 디클로로메탄 50 mL 첨가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 2 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 3 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/아세톤(95/5, v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 헥산/아세톤(70/30, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축하고 아세톤 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1 mL/분

(3) 오븐 온도 : 200℃에서 검체를 주입하고 5℃/분의 비율로 290℃까지 온도를 향상시켜 10분간 유지한다.

(4) 주입부 : split mode(20:1), 260℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루티아닐(18.0분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플루티아닐을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1 mL/분

(3) 오븐 온도 : 200℃에서 검체를 주입하고 5℃/분의 비율로 290℃까지 온도를 향상시켜 10분간 유지한다.

(4) 주입부 : split mode(20:1), 260℃

(5) Interface 온도 : 280℃

(6) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

(7) 주입량 : 1 μL

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
17.2	426.5	426	200, 231

4.1.4.170 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 견과종실류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플룩사피록사드를 아세토니트릴로 추출한 후 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플룩사피록사드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 견과종실류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다. 이를 물 100 mL, 포화식염수 10 mL 및 디클로로메탄 100 mL로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 3 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 3 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 10 mL를 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄(5/95, v/v) 2 mL를 유출시켜 버린 후 에틸아세테이트/디클로로메탄(5/95, v/v) 15 mL를 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 50% 아세토니트릴 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

( *감귤의 경우 위와 동일한 정제과정을 수행하되 아미노프로필 카트리지와 실리카 카트리지를 차례로 연결하여 사용하고, 에틸아세테이트/디클로로메탄(5/95, v/v) 2 mL를 유출시켜 버리는 과정을 생략한다.)

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

분	A (%)	B (%)
0	20	80
10.5	70	30
30	70	30

(2) 이동상 : 아세토니트릴(A)과 물(B)을 농도 구배조건에 따라 사용한다.

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 230 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플룩사피록사드(13.1분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플룩사피록사드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.2% 포름산 함유 물/0.2% 포름산 함유 메탄올(10/90, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

(8) Cone voltage : 25V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
4.3	381.3	381	382

4.1.4.171 피리오페논(Pyriofenone)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리오페논을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리오페논 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 50% 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다. 이를 물 100 mL, 포화식염수 20 mL 및 디클로로메탄 100 mL로 차례로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고 남은 물층에 디클로로메탄 50 mL를 추가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 4 mL로 재용해한다.[곡류 및 두류(지방성 검체)의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 4 mL로 녹인다.]

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산 10 mL를 유출시켜 버리고 헥산/아세톤(90/10, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 50% 아세토니트릴 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 214 nm

(6) 주입량 : 10 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

피리오페논(12.4분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리오페논을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

(8) Cone voltage : 40 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
4.2	365.8	365	366

4.1.4.172 스피로테트라맷(Spirotetramat)

1) 분석법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 스피로테트라맷 및 스피로테트라맷 엔올을 포름산을 이용하여 pH 3∼5의 산성으로 조절한 아세토니트릴로 추출한 후 다시 디클로로메탄으로 액-액 분배하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 스피로테트라맷 및 스피로테트라맷 엔올을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 포름산을 이용하여 pH 3∼5의 산성으로 조절한 아세토니트릴 50 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 분액깔때기로 옮긴다. 여기에 물 150 mL와 포화식염수 30 mL를 첨가한 다음 디클로로메탄 100 mL를 첨가하여 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층을 취하고 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 첨가한 다음 위와 같이 되풀이하여 디클로메탄층을 합한다. 디클로로메탄은 무수황산나트륨을 이용하여 탈수, 여과하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 다음 잔류물을 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(45/55, v/v)로 재용해 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물(A)과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(B)을 농도 구배조건에 따라 사용한다.

시간(분)	A(%)	B(%)
0	100	0
3	100	0
3.5	70	30
4	45	55
15	45	55

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 10∼30 V

(8) Collision energy : 10∼40 eV

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 302(스피로테트라맷), 216(스피로테트라맷 엔올)  m/z 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

A-1

A-2

B-1

B-2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

A-1; Spirotetramat(8.4분) 374>302, A-2; Spirotetramat(8.4분) 374>330,

B-1; Spirotetramat-enol(6.4분) 302>216, B-2; Spirotetramat-enol(6.4분) 302>270

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 스피로테트라맷 및 스피로테트라맷 엔올을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

	머무름 시간(분)	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy(eV)
스피로테트라맷	8.4	374	302 330	17 17
스피로테트라맷 엔올	6.4	302	216 270	27 25

[별표 4] (21) 디크로보스(Dichlorvos : DDVP), (22) 디크로프루아니드(Dichlofluanid), (33) 말레익하이드라자이드(Maleic hydrazide), (39) 메타미도포스(Methamidophos), (63) 세톡시딤(Sethoxydim), (68) 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), (81) 에세폰(Ethephon), (82) 에치오펜카브(Ethiofencarb), (96) 옥사밀(Oxamyl), (98) 올쏘-페닐 페놀[Ortho-Phenyl Phenol(OPP)], (100) 이마자릴(Imazalil), (143) 트리아조포스(Triazophos), (157) 퍼메쓰린[Permethrin(Permetrin)], (175) 포사론(Phosalone), (194) 피레쓰린(Pyrethrins), (195) 피리미카브(Pirimicarb), (215) 피프로닐(Fipronil), (219) 디아펜치우론(Diafenthiuron), (234) 펜피록시메이트(Fenpyroximate), (260) 할펜프록스(Halfenprox), (262) 헥사프루무론(Hexaflumuron), (294) 터부틸라진(Terbuthylazine), (298) 티아조피르(Thiazopyr), (315) 피리미디펜(Pyrimidifen), (415) 크로마페노자이드(Chromafenozide) 중 “밀감"을 “감귤”로 한다.

[별표 6] 중 “(23) 아미트라즈(Amitraz)”를 삭제하고, “(24)부터 (83)”까지를 “(23)부터 (82)”까지로 한다.

[별표 7] 중 (52) 아미트라즈(Amitraz) : 살충제 중 다음 항목을 각각 신설한다.

소근육	0.05

소간	0.2

소신장	0.2

소지방	0.2

돼지근육	0.05

돼지간	0.2

돼지신장	0.2

돼지지방	0.4

양근육	0.05

양간	0.1

양신장	0.2

양지방	0.4

유	0.01

부  칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시 후 30일이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조․가공 또는 수입(선적일 기준)한 식품부터 적용한다.

제3조(검사가 진행중인 식품등에 관한 경과조치) 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

제4조(이미 제조된 식품등에 관한 경과조치) 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 제조·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품 및 유통 중인 농산물을 포함한다)은 해당 식품의 유통기한까지 판매하거나 판매의 목적으로 진열 또는 운반하거나 영업상 사용할 수 있다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개 정 안

제 1. 총칙

제 2. 식품일반에 대한 공통기준          및 규격

1. ∼ 4. (생  략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (생  략)

4) 식중독균

식육(제조, 가공용원료는 제외한다), 살균 또는 멸균처리하였거나 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공식품에서는 특성에 따라 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 장출혈성 대장균(Enterohemorrhagic Escherichiacoli), 캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni), 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 등 식중독균이 검출되어서는 아니되며, 또한 식육 및 식육제품에 있어서는 결핵균, 탄저균, 브루셀라균이 검출되어서는 아니된다. 다만, ‘제 5. 식품별 기준 및 규격’에서 식중독균에 대한 규격이 정하여진 식품에는 해당식품의 규격을 적용하며, 그 외의 가공식품 중 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)와 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)는 다음과 같이 적용한다.

(1) (생  략)

(2) (생  략)

5) 중금속 기준

(1)～(4) (생  략)

(5) 농산물의 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
근채류	(생 략)	(생 략) (양파는 0.05 이하)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)

(6)〜(7) (생  략)

(8) (생  략)

(9) 식용유지류의 중금속 기준

① 납 : 0.1 mg/kg 이하

② 비소 : 0.1 mg/kg 이하

< 신  설 >

6) ～ 22) (생  략)

6. 보존 및 유통기준

1) 〜 7) (생  략)

8) 냉동제품을 해동시켜 실온 또는 냉장제품으로 유통시켜서는 아니되며, 실온 또는 냉장제품을 냉동시켜 냉동제품으로 유통시켜서는 아니된다. 다만, 냉동어패류를 즉석에서 당일 판매를 목적으로 냉장하는 것은 그러하지 아니할 수 있으며, 이때 재냉동하여서는 아니 된다. 또한, 제조업자가 냉동제품인 빵류, 떡류 및 젓갈류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

9) <신  설>

9) 〜 18) (생  략)

제 3. 장기보존식품의 기준 및 규격

1. 통·병조림식품

(생  략)

1) 제조·가공기준

(1) (생  략)

(2) pH 4.6 이상의 저산성식품(low acid food)은 제품의 내용물, 가공장소, 제조일자를 확인할 수 있는 기호를 표시하고 멸균공정 작업에 대한 기록을 보관하여야 한다.

(3) 산성식품은 pH가 4.6미만인 것으로 보통 90℃ 이하로 살균처리할 수 있다.

(4) 제품은 저장성을 가질 수 있도록 그 특성에 따라 적절한 방법으로 살균 또는 멸균 처리하여야 하며 제품의 특성에 따라 살균 또는 멸균한 후 제품은 내용물의 변색이 방지되고 호열성 세균의 증식이 억제될 수 있도록 적절한 방법으로 냉각하여야 한다.

2) (생  략)

2. 레토르트 식품

(생  략)

1) 제조·가공기준

(1) 밀봉이 끝나면 제품의 저장성을 확보할 수 있도록 그 특성에 맞는 적절한 방법으로 살균하여야 한다. 다만, pH가 4.5이상이고 수분활성도가 0.94 이상인 제품은 중심부의 온도를 120℃에서 4분 또는 이와 동등이상의 효력이 있는 방법으로 멸균하여야 한다.

(2) 멸균 후 제품은 내용물의 변색이 방지되고 호열성 세균의 증식이 억제될 수 있도록 적절한 방법으로 냉각시켜야 한다.

(3) (생  략)

3. 냉동식품

(생  략)

(1) (생  략)

(2) (생  략)

1) 제조·가공기준

(1) 냉동하기 전에 가열하는 제품은 그 중심부의 온도를 63℃ 이상에서 30분간 가열하거나 이와 동등이상의 효력이 있는 방법으로 가열 살균하여야 한다.

2) 규격

유 형 항 목	가열하지 않고 섭취하는 냉동식품	가열하여 섭취하는 냉동식품
		냉동전 가열제품	냉동전 비가열제품
(1) 세균수	1 g당 100,000 이하 (다만, 발효제품 또는 유산균 첨가제품은 제외한다)	1 g당 100,000 이하 (다만, 발효제품 또는 유산균 첨가제품은 제외한다)	1 g당 3,000,000 이하 (다만, 발효제품 또는 유산균 첨가제품은 제외한다)
(2) 대장균군	1 g당 10 이하	1 g당 10 이하	—
(3) 대장균	—	—	음성
(4) 유산균수	표시량 이상(유산균 첨가제품에 한한다)

제 4. (생  략)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. (생  략)

2. 빵 또는 떡류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (5) (생  략)

(6) 살모넬라 : 음성이어야 한다(다만, 크림을 도포 또는 충전한 것에 한한다).

(7) (생  략)

6) (생  략)

3. 코코아가공품류 또는 초콜릿류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (6) (생  략)

(7) 살모넬라 : 음성이어야 한다.

6) (생  략)

4. ～ 10. (생  략)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (5) (생  략)

(6) 살모넬라균 : 음성이어야 한다   (살균제품에 한한다).

(7) 장출혈성대장균 : 음성이어야 한다(원료용 분쇄육에 한한다).

(8) (생  략)

6) (생  략)

12. ～ 17. (생  략)

18. 음료류

18-1 과일·채소류음료

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (5) (생  략)

(6) 장출혈성대장균 : 음성이어야 한다(가열하지 아니한 제품 또는 가열하지 아니한 원료 함유제품에 한한다).

(7) (생  략)

6) (생  략)

18-2 ～ 18-6 (생  략)

19. 특수용도식품

19-1 ～ 19-3 (생  략)

19-4 기타 영․유아식

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (5) (생  략)

(6) 납(mg/kg) : 0.1 이하(액상       제품에 한한다)

(7) ～ (10) (생  략)

19-5～19-7 (생략)

20. (생략)

21. 조미식품

21-1 ～ 21-4 (생  략)

21-5 고춧가루 또는 실고추

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (6) (생  략)

<신  설>

6) 시험방법

(1) ～ (6) (생  략)

<신  설>

21-6 향신료가공품

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (2) (생  략)

(3) 대장균군 : 음성이어야 한다(살균제품에 한한다).

(4) 대장균∶음성이어야 한다(다만, 살균제품 또는 건조제품은 제외한다).

(5) (생  략)

6) (생  략)

21-7 (생  략)

22. ～ 24. (생  략)

25. 절임식품

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) 세균수 : 음성이어야 한다(멸균제품에 한한다).

(2) 대장균군∶음성이어야 한다(살균 또는 멸균제품에 한한다).

(3) ～ (5) (생  략)

<신  설>

6) 시험방법

(1) ～ (5) (생  략)

<신  설>

26.∼27.  (생  략)

28. 건포류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) (생  략)

(2) 대장균 : 음성이어야 한다(다만, 조미건어포류에 한한다).

(3) ～ (4) (생  략)

6) (생  략)

29. 기타 식품류

29-1 땅콩 또는 견과류 가공품류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) (생  략)

(2) 살모넬라 : 음성이어야 한다.

6) (생  략)

29-2 ～ 29-17 (생  략)

29-18 즉석섭취·편의식품류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) (생  략)

(2) 세균수 : 1 g당 100,000 이하(즉석조리식품에 한하며, 발효제품, 또는 유산균 첨가제품은 제외한다.)

(3) (생  략)

(4) 살모넬라 : 음성이어야 한다.

(5) ～ (6) (생  략)

(7) 장출혈성 대장균 : 음성이어야 한다(신선편의식품에 한한다).

(8) (생  략)

6) (생  략)

29-19 ～ 29-24 (생  략)

제 6. (생  략)

제 7. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. ～ 3. (생  략)

4. 규격

가) 조리식품 등

(1) ～ (4) (생  략)

(5) 식중독균 : 식품접객업소(집단급식소 포함)에서 조리된 식품은 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 장출혈성 대장균(Enterohemorrhagic Escherichiacoli), 캠필로박터 제주니(Camplyobacter jejuni), 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 등 식중독균이 검출되어서는 아니되며, 장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens) g당 100 이하, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) g당 10,000 이하이어야 한다. 다만, 조리과정 중 가열처리를 하지 않거나 가열 후 조리한 식품의 경우 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 g당 100 이하이어야 한다.

(6) (생  략)

나) ～ 다) (생  략)

5. 시험방법

1) ～ 8) (생  략)

9) 캠필로박터 제주니

(생  략)

10) ～ 16) (생  략)

제 8. (생  략)

제 9. 일반시험법

1. ∼ 2. (생  략)

3. 미생물시험법

3.1 ～ 3.3 (생  략)

3.4 배지 및 시액

1) ～ 71) (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

3.5 ～ 3.18 (생  략)

3.19 캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)

1) 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 supplement A가 첨가된 HUNT 배지(배지 47) 또는 Bolton 배지(배지 68) 100 mL에 넣고 균질화한 후 35～37℃에서 4～5시간 동안 미호기적(5% O2, 10% CO2, 85% N2)으로 1차 증균하고 42℃에서 24∼48시간 미호기적으로 2차 증균한다. 다만, HUNT 배지를 사용할 경우, 일반식품은 2차 증균시 cefoperazone 용액(0.8 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하고 유제품은 1차 증균시 supplement B, 2차 증균시에는 rifampicin용액(0.125 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하여 배양한다.

2) 분리배양

증균배양액을 modified Campy blood free 한천배지(배지 48) 또는 Abeyta-Hunt 한천배지(배지 49)에 각각 접종하여 42℃에서 24～48시간 미호기적으로 암소에서 배양한다.

3) 확인시험

Modified Campy blood free 한천배지상에서 원형 또는 불규칙한 형태로서 반투명한 흰색 또는 투명한 집락, Abeyta-Hunt 한천배지(배지 49)상에서 무지개빛 광택 집락을 선별하여 항생제를 넣지 않은 Abeyta-Hunt 한천배지에 신속히 접종하여 42℃에서 24～48시간 배양한다. 배양된 집락을 취하여, 암시야 또는 위상차현미경으로 검경하거나 또는 대비 염색하여 지그재그 모양을 관찰한다. 이 때 대비염색은 10 mL 식염수에 2방울의 crystal violet을 혼합한 용액을 이용한다. 현미경상으로 확인된 균에 대하여 catalase 및 oxidase 양성임을 확인한다. 확인된 균에 대하여, hippurate분해 양성, 황화수소 비생성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육하는 것 등 생화학시험을 실시한다.

3.20 ～ 3.26 (생  략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 식품일반

4.1.1 ∼ 4.1.2 (생    략)

4.1.3 다성분 분석법(multiresidue methods)

4.1.3.1. ∼ 4.1.3.20 (생    략)

4.1.3.21 디메칠디치오카바메이트(Dimethyldithiocarbamates), 에틸렌비스디치오카바메이트[Ethylenebis (dithiocarbamate)s] 및 프로피네브(Propineb)

1) 시험법 적용범위

고추, 감, 감자, 고추, 구기자, 당근, 땅콩, 마늘, 멜론, 배, 복숭아, 사과, 수박, 오이, 옥수수, 양파, 참깨, 참외, 토마토, 포도 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 EDTA가 함유된 수산화나트륨 수용액에 염산을 첨가하여 추출한 후 유도체화 반응을 거쳐 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프：자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：치람(thiram) 표준품은 메탄올에 녹이고, 나밤(nabam)과 프로피네브(propineb) 표준품은 검체 추출용매(0.25M EDTA가 함유된 0.45M NaOH 수용액 100 mL에 L-cysteine-HCl 0.5 g이 첨가된 액)로 완전히 용해시킨 후 2M 염산을 사용하여 pH를 7.0으로 조절하고 100 mg/mL 농도로 조제하여 즉시 사용한다.

라) 표준용액：상기 표준원액을 pH를 7.0으로 조절된 추출용매를 사용하여 적당한 농도로 희석한 다음 1 mL 취하여 5) 시험용액의 조제 가) 추출 및 나) 유도체화 과정과 동일하게 거친 후 적당한 농도로 희석하여 사용하고, 희석한 농도에 치람 유도체는 1.78, 나밤 유도체는 1.07을 곱하여 최종농도로 한다.

마) 기타시약：Methyl iodide, tetrabutyl ammonium hydrogen sulfate, EDTA(tetra sodium), L-cysteine-HCl 등 잔류농약시험용 또는 특급시약

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 추출 용기에 넣을 수 있을 정도로 간략히 썰거나 절단하고 약 20 g을 정밀히 달아 삼각플라스크에 넣는다. 이에 0.25 M EDTA가 함유된 0.45 M NaOH 수용액(pH를 9.5～9.6으로 정밀조정) 80 mL에 L-cysteine-HCl 0.5 g을 넣고 마개를 하여 즉시 진탕기에서 10분간 흔들어 추출한다.  이를 유리여과기로 여과하고 삼각플라스크와 잔사를 상기 추출액 10 mL씩으로 수회 씻고 이 씻은 액은 여액과 합친다.  여기에 0.41 M tetrabutyl ammonium hydrogen sulfate 수용액 5 mL 및 NaCl 10 g을 넣어 잘 흔들어 섞고 2 M 염산을 사용하여 pH를 7.0부근으로 신속히 조절하고 이를 300 mL 분액깔때기에 옮긴다.

주1) 검체를 갈거나 분쇄하여 균질화시키면 디치오카바메이트계 농약은 급속히 분해되며, 이 농약은 알카리 조건에서 불안정하여 추출용매로 추출 직후부터 급속히 분해되므로 추출단계의 과정은 15분 이내로 하고 세척 및 여과시간을 최소화하여야 하고 pH7.0으로 신속히 조절하여야 한다.

나) 유도체화

위의 분액깔때기에 0.05 M methyl iodide가 함유되어 있는 디클로로메탄 및 헥산의 혼합액(1:1) 30 mL를 넣고 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 방치한다.  물층(아래층)은 다른 분액깔때기에 옮기고 여기에 0.05 M methyl iodide가 함유되어 있는 디클로로메탄 및 헥산의 혼합액(1:1) 10 mL를 넣고 위와 같이 되풀이 한 후 유기용매층(윗층)을 앞의 분액깔때기에 합친다. 적당량의 무수황산나트륨을 사용하여 합한 추출액을 탈수하고 약 30분간 실온에서 방치하고 20% 1,2-propanediol을 함유한 디클로로메탄 5 mL를 넣고 30℃ 이하의 수욕중에서 감압하에 1,2-propanediol을 제외한 용매를 모두 날려 보낸 즉시, 잔류물을 메탄올로 정용한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18(150 mm × 4.6 mm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출기 및 파장：자외부흡광검출기(272nm)

(3) 이동상：아세토니트릴：물：메탄올 (25：60：15)

(4) 이동상 유량：1.0 mL/분

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크를 표준용액의 피이크와 비교할 때 어느 측정조건에서도 그 머무름시간이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

주2) 액체크로마토그래프 크로마토그램상에서 피이크 3개를 얻을 수 있으며 첫 번째 피이크는 ferbam, thiram, ziram의 통합 피이크이며, 두 번째 피이크는 mancozeb, maneb, metiram, nabam, zineb의 통합피이크이고 세 번째 피이크는 propineb의 피이크 이다.

4.1.3.22 ∼ 4.1.3.42 (생    략)

4.1.4 단성분 분석법(individual residue methods)

4.1.4.1 ∼ 4.1.4.165 (생    략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

4.2 ∼ 4.3 (생    략)

5.～ 9. (생  략)

제 10. (생  략)

[별표1]∼[별표 3] (생  략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (20) (생 략)

(21) 디크로보스(Dichlorvos:DDVP)

(생   략)

밀감	0.1

(22) 디크로프루아니드(Dichlofluanid)

(생   략)

밀감	15.0

(23) ∼ (32) (생 략)

(33) 말레익하이드라자이드(Maleic hydrazide)

(생   략)

밀감	40.0

(34) ∼ (38) (생 략)

(39) 메타미도포스(Methamidophos)

(생   략)

밀감	0.5

(40) ∼ (62) (생 략)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(생   략)

밀감	1.0

(64) ∼ (67) (생 략)

(68) 싸이할로쓰린(Cyhalothrin)

(생   략)

밀감	0.5

(69) ∼ (80) (생 략)

(81) 에세폰(Ethephon)

(생   략)

밀감	0.5

(82) 에치오펜카브(Ethiofencarb)

(생   략)

밀감	5.0

(83) ∼ (95) (생 략)

(96) 옥사밀(Oxamyl)

(생   략)

밀감	5.0

(97) (생 략)

(98) 올쏘-페닐 페놀(Ortho-Phenyl Phenol(OPP))

(생   략)

밀감	10.0

(99) (생 략)

(100) 이마자릴(Imazalil)

(생   략)

밀감	5.0

(101) ∼ (142) (생 략)

(143) 트리아조포스(Triazophos)

(생   략)

밀감	0.2

(144) ∼ (156) (생 략)

(157) 퍼메쓰린(Permethrin)

(생   략)

밀감	0.5

(158) ∼ (174) (생 략)

(175) 포사론(Phosalone)

(생   략)

밀감	1.0

(176) ∼ (193) (생 략)

(194) 피레쓰린(Pyrethrins)

(생   략)

밀감	1.0

(195) 피리미카브(Pirimicarb)

(생   략)

밀감	0.05

(196) ∼ (214) (생 략)

(215) 피프로닐(Fipronil)

(생   략)

밀감	0.05

(216) ∼ (218) (생 략)

(219) 디아펜치우론(Diafenthiuron)

(생   략)

밀감	0.5

(220) ∼ (233) (생 략)

(234) 펜피록시메이트(Fenpyroximate)

(생   략)

밀감	0.5

(235) ∼ (259) (생 략)

(260) 할펜프록스(Halfenprox)

(생   략)

밀감	1.0

(261) (생 략)

(262) 헥사프루무론(Hexaflumuron)

(생   략)

밀감	0.7

(263) ∼ (293) (생 략)

(294) 터부틸라진(Terbuthylazine)

(생   략)

밀감	0.1

(295) ∼ (297) (생 략)

(298) 티아조피르(Thiazopyr)

(생   략)

밀감	0.05

(299) ∼ (314) (생 략)

(315) 피리미디펜(Pyrimidifen)

(생   략)

밀감	0.2

(316) ∼ (414) (생 략)

(415)크로마페노자이드(Chromafenozide)

(생   략)

밀감	2.0

(416) ∼ (439) (생   략)

[별표 5] (생  략)

[별표 6] 축산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (22) (생  략)

(23) 아미트라즈(Amitraz)

(24) ∼ (83) (생  략)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (51) (생  략)

(52) 아미트라즈(Amitraz) :        살충제

(생  략)

<신  설>

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(53) ∼ (124) (생  략)

제 1. 총칙

제 2. 식품일반에 대한 공통기준          및 규격

1. ∼ 4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식중독균

--------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacterjejuni/coli),---------------------------------------------------------------

--------------------------- ---------------------------  ---------------------------

--------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

(1) (현행과 같음)

(2) (현행과 같음)

5) 중금속 기준

(3) 수산물의 중금속 기준

대상 식품	납 (mg/kg)	카드뮴 (mg/kg)	수은 (mg/kg)	메틸수은 (mg/kg)
어류	0.5 이하	-	0.5 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류는 제외한다)	1.0 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류에 해당된다)
연체류	2.0 이하 (다만, 내장을 포함한 낙지는 2.0 이하)	2.0 이하 (다만, 내장을 포함한 낙지는 3.0 이하)	0.5 이하	-
갑각류	1.0 이하 [다만, 내장을 포함한 꽃게류(꽃게과에 속하는 꽃게 종)는 2.0 이하]	1.0 이하 [다만, 내장을 포함한 꽃게류 (꽃게과에 속하는 꽃게 종)는 5.0 이하]	-	-
해조류	-	0.3 이하 [김(조미김을 포함하며, 생물 기준 적용)에 해당된다]	-	-

(1) 농산물의 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
근채류	(현행과 같음) (인삼, 산양삼, 도라지, 더덕 2.0 이하)	(현행과 같음) (양파 0.05 이하, 인삼, 산양삼, 도라지, 더덕 0.2 이하)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

(2) 축산물의 중금속 기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
가금류고기*	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
돼지고기**	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
소고기**	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

*가금류고기 : 부착된 지방 및 표피를 포함하는 가금류 도체의 근육조직으로 닭, 오리, 꿩, 거위, 칠면조, 메추리 등의 고기를 말한다.

**소고기, 돼지고기 : 근육 내 지방 및 피하지방과 같이 부착된 지방조직을 포함하는 도체(혹은 이를 자른 덩어리)의 근육조직을 말한다.

(5) (현행 (8)과 같음)

대 상 식 품	납(mg/kg)	비소(mg/kg)
○ 식용유지류	0.1 이하	0.1 이하
○ 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 영·유아용 특수조제식품, 조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유, 기타조제분유, 기타조제우유	0.01 이하 [분말제품의 경우 희석하여 섭취하는 형태(제조사가 제시한 섭취방법)를 반영하여 기준적용]	-

(4) 가공식품의 중금속 기준

6) ～ 22) (현행과 같음)

6. 보존 및 유통기준

1) 〜 7) (현행과 같음)

8) -----------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-----------------<삭  제>

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

------------------.

9) 냉동수산물은 해동 후, 24시간 이내에 냉장으로 유통할 수 있다. 이때 해동된 수산물을 재냉동하여서는 아니 된다.

10) 〜 19) (현행 9) ～ 18)과 같음)

제 3. 장기보존식품의 기준 및 규격

1. 통·병조림식품

(현행과 같음)

1) 제조·가공기준

(1) (현행과 같음)

(2) pH 4.6을 초과하는 ----     ------------------------ -------------------------------------------------------------------------------------.

(3) pH가 4.6 이하인 산성식품은 가열 등의 방법으로 ---------

-----------.

(4) ------------------------

------------------------- ---------------------------------------------(삭 제) ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

2) (현행과 같음)

2. 레토르트 식품

(현행과 같음)

1) 제조·가공기준

(1) 멸균은 제품의 중심온도가 120℃ 4분간 또는 이와 같은 수준 이상의 효력을 갖는 방법으로 열처리하여야 한다. pH 4.6을 초과하는 저산성식품(low acid food)은 제품의 내용물, 가공장소, 제조일자를 확인할 수 있는 기호를 표시하고 멸균공정 작업에 대한 기록을 보관하여야 한다. pH가 4.6 이하인 산성식품은 가열 등의 방법으로 살균처리 할 수 있다.

(2) 제품은 저장성을 가질 수 있도록 그 특성에 따라 적절한 방법으로 살균 또는 멸균 처리하여야 하며 내용물의 변색이 방지되고 호열성 세균의 증식이 억제될 수 있도록 적절한 방법으로 냉각하여야 한다.

(3) (현행과 같음)

3. 냉동식품

(현행과 같음)

(1) (현행과 같음)

(2) (현행과 같음)

1) 제조·가공기준

(1) 살균제품은 그 중심부의 온도를 63℃ 이상에서 30분 가열하거나 이와 같은 수준 이상의 효력이 있는 방법으로 가열 살균하여야 한다.

2) 규격

(1) 가열하지 않고 섭취하는 냉동식품

① 세균수 : n=5, c=2, m=100,000, M=500,000(다만, 발효제품, 발효제품 첨가 또는 유산균 첨가제품은 제외한다)

② 대장균군 : n=5, c=2 m=10, M=100

③ 유산균수 : 표시량 이상(유산균 첨가제품에 해당된다)

(2) 가열하여 섭취하는 냉동식품

① 세균수 : n=5, c=2, m=1,000,000, M=5,000,000(살균제품은 n=5, c=2, m=100,000, M=500,000, 다만, 발효제품, 발효제품 첨가 또는 유산균 첨가제품은 제외한다)

② 대장균군 : n=5, c=2 m=10, M=100(살균제품에 해당된다)

③ 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10(다만, 살균제품은 제외한다)

④ 유산균수 : 표시량 이상(유산균 첨가제품에 해당된다)

제 4. (현행과 같음)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. (현행과 같음)

2. 빵 또는 떡류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(6) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/10g(다만, 크림을 도포 또는 충전한 것에 해당된다)

(7) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

3. 코코아가공품류 또는 초콜릿류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25g

6) (현행과 같음)

4. ～ 10. (현행과 같음)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(6) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25g    (살균제품에 해당된다)

(7) 장출혈성대장균 : n=5, c=0, m=0/25 g (원료용 분쇄육에 해당된다).

(8) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

12. ～ 17. (현행과 같음)

18. 음료류

18-1 과일·채소류음료

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(6) 장출혈성대장균 : n=5, c=0, m=0/25 g(가열하지 아니한 제품 또는 가열하지 아니한 원료 함유제품에 해당된다)

(7) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

18-2 ～ 18-6 (현행과 같음)

19. 특수용도식품

19-1 ～ 19-3 (현행과 같음)

19-4 기타 영․유아식

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(6) < 삭  제 >

(6) ∼ (9) (현행 (7) ～ (10)과 같음)

19-5～19-7 (현행과 같음 )

20. (현행과 같음)

21. 조미식품

21-1 ～ 21-4 (현행과 같음)

21-5 고춧가루 또는 실고추

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10

6) 시험방법

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 대장균

제10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

21-6 향신료가공품

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 대장균군 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품에 해당된다.)

(4) 대장균∶n=5, c=2, m=0, M=10(다만, 살균제품 또는 건조제품은 제외한다.)

(5) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

21-7 (현행과 같음)

22. ～ 24. (현행과 같음)

25. 절임식품

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) 세균수 : n=5, c=0, m=0(멸균제품에 한한다.)

(2) 대장균군 ∶ n=5, c=1, m=0, M=10(살균 제품에 해당된다)

(3) ～ (5) (현행과 같음)

(6) 대장균 ∶ n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(7) 대장균

제10. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

26.∼27. (현행과 같음)

28. 건포류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10

(3) ～ (4) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

29. 기타 식품류

29-1 땅콩 또는 견과류 가공품류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25 g

6) (현행과 같음)

29-2 ～ 29-17 (현행과 같음)

29-18 즉석섭취·편의식품류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 세균수 : ----------------

(즉석조리식품에 해당하며, 발효제품, 발효제품 첨가, 또는 --------

-----.)

(3) (현행과 같음)

(4) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/25 g

(5) ～ (6) (현행과 같음)

(7) 장출혈성 대장균 : n=5, c=0, m=0/25 g(신선편의식품에 한한다.)

(8) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

29-19 ～ 29-24 (현행과 같음)

제 6. (현행과 같음)

제 7. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. ～ 3. (현행과 같음)

4. 규격

가) 조리식품 등

(1) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 식중독균 : ---------------

------------------------ ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli),-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

(6) (현행과 같음)

나) ～ 다) (현행과 같음)

5. 시험방법

1) ～ 8) (현행과 같음)

9) 캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)

(현행과 같음)

10) ～ 16) (현행과 같음)

제 8. (현행과 같음)

제 9. 일반시험법

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 미생물 시험법

3.1 ～ 3.3 (현행과 같음)

3.4 배지 및 시액

1) ～ 71) (현행과 같음)

72) Preston 한천배지(Preston Agar)

Lab-Lemcopowder        10.0 g

Peptone                  10.0 g

Sodium chloride           5.0 g

Agar                    12.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분 37.0 g을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

PolymyxinB           5,000 IU

Rifampicin               10 mg

Trimethoprim            10 mg

Cycloheximide          100 mg

73) Campy Cefex 한천배지 (Campy Cefex Agar(CCA))

Brucella Agar(Difco)     44.0 g

Ferrous sulfate           0.5 g

Sodium pyruvate         0.5 g

Sodium bisulfite          0.25 g

위의 성분을 증류수로 990 mL되게 용해하고 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 Cefoperazone 10 mL 및 Cycloheximide(200 mg/L)을 첨가한다.

74) Blaser's Campylobacter 한천배지(Blaser's Campylobacter Agar(BCA))

Yeast extract          5.0 g

Peptone               15.0 g

NaCl                  5.0 g

Agar                  12.0 g

Liver digest          2.5 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL되게 용해하여 pH 7.0로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 용혈된 말혈구 50 mL과  Campylobacter Supplement (A) (유제품의 경우 사용가능)를 권장량이 되게 첨가한다.

75) Preston 배지(Preston broth)

Lab-Lemco powder          10.0 g

Peptone                 10.0 g

Sodium chloride           5.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

Polymyxin B                5,000 IU

Rifampicin             10.0 mg

Trimethoprim         10.0 mg

Cycloheximide        100.0 mg

3.5 ～ 3.18 (현행과 같음)

3.19 캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)

1) 증균배양

-------------------------- ----------------------------------------------, Bolton 배지(배지 68) 또는 Preston 배지(배지 75)-------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

2) 분리배양

--------------------------

-------------------------,  Abeyta-Hunt 한천배지(배지 49), Preston 한천배지(배지 72), CCA 한천배지(배지 73) 또는 BCA 한천배지(배지 74)에----------.

3) 확인시험

--------------------------

-------------------------- -------------------------------------------------------------------- 광택 집락, CCA 및 BCA 한천배지에서는 불규칙한 가장자리를 가지고 점액이 있으며 회색인 평평한 집락(24～48시간 배양 후 용혈은 나타나지 않으며 분홍색이나 노란-회색집락이 나타나기도 한다), Preston 한천배지에서는 부드러운 모서리를 가진 불규칙한 원모양을 형성하는 반투명의 흰색집락(일부 균주는 황갈색 또는 약한 핑크색 집락을 형성)을 선별하여 항생제를 넣지 않은 Abeyta-Hunt 한천배지 등 분리배양에 사용한 한천배지에 ---------------------------------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 캠필로박터 제주니는 hippurate 분해 양성,  황화수소 비생성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등을 확인하며, 캠필로박터 콜리는 hippurate분해 음성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등 생화학시험을 실시한다.

3.20 ～ 3.26 (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 식품일반

4.1.1 ∼ 4.1.2 (현행과 같음)

4.1.3 다성분 분석법(multiresidue methods)

4.1.3.1 ∼ 4.1.3.20 (현행과 같음)

4.1.3.21 디치오카바메이트계(Dithiocarbamates) 농약 분석법

1) 분석법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 견과종실류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디치오카바메이트계 농약을 강한 산성 조건하에서 100℃이상의 열로 가열하고 이로부터 발생되는 이황화탄소 가스를 이황화탄소 트랩에 포집하여 쿨렌(Cullen) 발색시약으로 발색시켜 분광광도법(435 nm)으로 분석한다.

3) 장치

가) 분광광도계(UV-Vis spectrophotometer)

나) 이황화탄소 발생 장치

이황화탄소 발생 장치

다) 공기압축기(Air Compressor)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 쿨렌 발색시약： 초산구리(cupric acetate) 500 mg과 디에탄올아민 100 g을 에탄올에 용해시켜 100 mL로 조제한 후 냉암소에서 보관하면서 7일마다 다시 제조하여 사용하여야 한다.

라) 40% 염화주석(SnCl2·H2O) 용액：97% 염화주석 103.1 g을 진한 황산에 용해시켜 250 mL로 조제한다.

마) 이황화탄소 표준용액：디치오카바메이트계 농약을 분광광도계를 이용하여 정량분석하고자 할 때 표준검량선 작성 시 사용하는 표준용액으로 HPLC급 이상의 에탄올에 이황화탄소를 용해하여 제조한 후 밀봉하여 냉암소에 보관하면서 사용한다. 이황화탄소는 휘발성이 큰 물질이므로 무게를 달 때 주의하며 신속하게 수행하여야 한다.

※ 회수율 시험용 디치오카바메이트계 농약 표준용액：디치오카바메이트계 농약의 표준품은 10% EDTA에 완전히 용해시킨 후 2 M 염산을 사용하여 pH를 7.0으로 조절하고 100 mg/mL 농도로 조제하여 즉시 사용해야 한다. 반드시 사용 시마다 표준용액을 조제하여야 하며 보관하여 사용할 수 없다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

디치오카바메이트계 농약은 100℃ 이상에서 이황화탄소로 분해되는데 이 가스를 포집하기 위해 3)나)의 이황화탄소 발생장치와 같이 장치 A, B와 삼구플라스크를 설치한다. 500 mL 삼구플라스크에 시료 100 g과 물 200 mL, 40% 염화주석 용액 5 mL, 진한 염산 10 mL를 차례로 가하고, 장치 A (황화수소 트랩)에 10% 수산화나트륨 용액 10 mL와 디클로로메탄 5 mL, 장치 B (이황화탄소 트랩)에 쿨렌 발색시약 15 mL를 넣어 모든 장치를 연결한다. 삼구플라스크의 한쪽 구멍은 마개로 막고 다른 쪽 구멍은 공기 튜브를 연결하여 분당 약 50 mL의 공기를 주입한다. 각 장치들이 새지 않음을 확인한 후 냉각관에 냉각수를 흘려보내고 멘틀로 가열하여 플라스크 내의 시료가 끓은 후 30분간 더 반응시킨다. 반응이 완료되면 약 5분간 방냉한 후 25 mL 용량의 플라스크에 장치 B의 액을 받아 에탄올로 25 mL 표선까지 채운 후 8분간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 분광광도계의 측정 조건

435 nm에서 흡광도를 측정한다.

나) 검량선의 작성

분광광도계를 미리 켜두고 30분간 안정화시킨다. 쿨렌 발색시약을 15 mL 씩 25 mL 매스플라스크 10개에 나누어 담고 에탄올에 용해한 이황화탄소 표준품을 원하는 농도로 희석한 후 희석액 10 mL를 각각의 매스플라스크에 넣어주고, 에탄올을 이용하여 25 mL까지 채운다. 매스플라스크의 마개를 막고 잘 흔들어 섞고 8분 동안 반응시킨 후 435 nm 파장에서 차례대로 흡광도를 측정한다. 측정된 흡광도를 이용하여 표준검량선과 회귀방정식을 작성한다. 에탄올로 채운 후 10분 이내에 모든 측정을 마무리 하도록 한다.

다) 정량한계

0.1 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 측정된 흡광도를 미리 작성한 표준검량선에 대입하여 발생된 이황화탄소 양을 계산하고 이를 통해 시료 중 디치오카바메이트계 농약의 잔류량을 확인한다.

4.1.3.22 ∼ 4.1.3.42 (현행과 같음)

4.1.4 단성분 분석법(individual residue methods)

4.1.4.1 ∼ 4.1.4.165 (현행과 같음)

4.1.4.166 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 사이안트라닐리프롤을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 사이안트라닐리프롤 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다.

(* 대파의 경우 : 간섭물질 제거를 위해 pH 10 염기상태로 만든 후 추출을 실시한다.

* 감자의 경우 : 전분의 추출 억제 및 제거를 위하여 pH 2로 산성화하여 원심분리 과정을 거쳐서 제거한 다음 단계 분석을 수행한다.)

이를 물 80 mL로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 포화식염수 20 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 수용액층을 별도의 1 L 용량의 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버린 다음 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/에틸아세테이트(90/10, v/v) 10 mL로 유출시켜 버린 다음 디클로로메탄/에틸아세테이트(60/40, v/v) 10 mL로 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 아세토니트릴 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(45/55, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 264 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

사이안트라닐리프롤(8.1분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 사이안트라닐리프롤을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액

머무름시간 (min)	0.1% 포름산 함유 물 (%)	0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 (%)
0	80	20
2.5	80	20
3.0	50	50
4.0	10	90
4.5	10	90
5.0	80	20
15.0	80	20

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
5.6	473.7	474	475

4.1.4.167 에폭시코나졸(Epoxiconazole)

1) 분석법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 에폭시코나졸을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD, Gas Chromatograph-Electron Capture Detector)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph-Mass Spectrometer)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 에폭시코나졸 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 플로리실(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과한 후 20 g, 채소류, 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 취하고  40℃이하의 수욕 중에서 감압농축하여 용매를 날려버린 후 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 재용해한다.

나) 정제

미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울정도의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다.  용출액은 40℃ 이하의 항온수조 중에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(50 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : split ratio(20:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에폭시코나졸(25.8분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 에폭시코나졸을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.8 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼400 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
19.4	329.8	192, 138, 165

4.1.4.168 펜피라자민(Fenpyrazamine)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜피라자민을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜피라자민 표준품을 메탄올에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 60% 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다. 이를 물 50 mL, 포화식염수 20 mL 및 디클로로메탄 100 mL로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 4 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/아세톤(95/5, v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 헥산/아세톤(85/15, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 60% 메탄올 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 메탄올/물(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 243 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜피라자민(14.1분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜피라자민을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 메탄올(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

(8) Cone voltage : 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
9.9	331.4	331	332

4.1.4.169 플루티아닐(Flutianil)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루티아닐을 아세토니트릴로 추출한 후 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루티아닐 표준품을 아세톤에 녹여 1000 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한다. 이를 분액깔대기에 옮기고 아세토니트릴 농축액이들어있던 수기를 물 250 mL, 포화식염수 30 mL 및 디클로로메탄 150 mL를 차례로 씻어 분액깔대기에 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 디클로로메탄 50 mL 첨가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 3 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 3 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/아세톤(95/5, v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 헥산/아세톤(70/30, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕 상에서 감압농축하고 아세톤 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1 mL/분

(3) 오븐 온도 : 200 ℃에서 검체를 주입하고 5 ℃/분의 비율로 290 ℃까지 온도를 향상시켜 10분간 유지한다.

(4) 주입부 : split mode(20:1), 260℃

(5) 검출기 온도 : 280 ℃

(6) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루티아닐(18.0분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플루티아닐을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1 mL/분

(3) 오븐 온도 : 200 ℃에서 검체를 주입하고 5 ℃/분의 비율로 290 ℃까지 온도를 향상시켜 10분간 유지한다.

(4) 주입부 : split mode(20:1), 260℃

(5) Interface 온도 : 280 ℃

(6) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

(7) 주입량 : 1 μL

표. 기체크로마토그래프- 질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
17.2	426.5	426	200, 231

4.1.4.170 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 견과종실류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플룩사피록사드를 아세토니트릴로 추출한 후 다시 디클로로메탄으로 액-액 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플룩사피록사드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 견과종실류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다. 이를 물 100 mL, 포화식염수 10 mL 및 디클로로메탄 100 mL로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 3 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 3 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 10 mL를 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄(5/95, v/v) 2 mL를 유출시켜 버린 후 에틸아세테이트/디클로로메탄(5/95, v/v) 15 mL를 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 50% 아세토니트릴 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

( *감귤의 경우 위와 동일한 정제과정을 수행하되 아미노프로필 카트리지와 실리카 카트리지를 차례로 연결하여 사용하고, 에틸아세테이트/디클로로메탄(5/95, v/v) 2 mL를 유출시켜 버리는 과정을 생략한다.)

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 :

분	아세토니트릴(%)	물(%)
0	20	80
10.5	70	30
30	70	30

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 230 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플룩사피록사드(13.1분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플룩사피록사드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.2% 포름산 함유 물/0.2% 포름산 함유 메탄올(10/90, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

(8) Cone voltage : 25V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
4.3	381.3	381	382

4.1.4.171 피리오페논(Pyriofenone)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리오페논을 아세토니트릴로 추출하고 다시 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리오페논 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 50% 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축을 실시한다. 이를 물 100 mL, 포화식염수 20 mL 및 디클로로메탄 100 mL로 차례로 씻어서 500 mL 분액깔대기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고 남은 물층에 디클로로메탄 50 mL를 추가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 4 mL로 재용해한다.[곡류 및 두류(지방성 검체)의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 4 mL로 녹인다.]

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 씻어 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산 10 mL를 유출시켜 버리고 헥산/아세톤(90/10, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 50% 아세토니트릴 2 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 214 nm

(6) 주입량 : 10 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

피리오페논(12.4분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리오페논을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

(8) Cone voltage : 40 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
4.2	365.8	365	366

4.1.4.172 스피로테트라맷(Spirotetramat)

1) 분석법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 스피로테트라맷 및 스피로테트라맷 엔올을 포름산을 이용하여 pH 3∼5의 산성으로 조절한 아세토니트릴로 추출한 후 다시 디클로로메탄으로 액-액 분배하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 스피로테트라맷 및 스피로테트라맷 엔올을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 분쇄한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 포름산을 이용하여 pH 3∼5의 산성으로 조절한 아세토니트릴 50 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내어 앞의 여액과 합한 후 분액깔때기로 옮긴다. 여기에 물 150 mL와 포화식염수 30 mL를 첨가한 다음 디클로로메탄 100 mL를 첨가하여 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층을 취하고 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 첨가한 다음 위와 같이 되풀이하여 디클로메탄층을 합한다. 디클로로메탄은 무수황산나트륨을 이용하여 탈수, 여과하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 다음 잔류물을 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(45/55, v/v)로 재용해 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물(A)과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(B)을 농도 구배조건에 따라 사용한다.

시간(분)	A	B
0	100	0
3	100	0
3.5	70	30
4	45	55
15	45	55

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 10∼30 V

(8) Collision energy : 10∼40 eV

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 302(스피로테트라맷), 216(스피로테트라맷 엔올)  m/z 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

A-1

A-2

B-1

B-2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

A-1; Spirotetramat(8.4분) 374>302, A-2; Spirotetramat(8.4분) 374>330,

B-1; Spirotetramat-enol(6.4분) 302>216, B-2; Spirotetramat-enol(6.4분) 302>270

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 스피로테트라맷 및 스피로테트라맷 엔올을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

	머무름 시간 (분)	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
스피로테트라맷	8.4	374	302 330	17 17
스피로테트라맷 엔올	6.4	302	216 270	27 25

4.2 ∼ 4.3 (현행과 같음)

5.～ 9. (현행과 같음)

제 10. (현행과 같음)

[별표1]∼ [별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (20) (현행과 같음)

(21) 디크로보스(Dichlorvos:DDVP)

(현행과 같음)

감귤	0.1

(22) 디크로프루아니드(Dichlofluanid)

(현행과 같음)

감귤	15.0

(23) ∼ (32) (현행과 같음)

(33) 말레익하이드라자이드(Maleic hydrazide)

(현행과 같음)

감귤	40.0

(34) ∼ (38) (현행과 같음)

(39) 메타미도포스(Methamidophos)

(현행과 같음)

감귤	0.5

(40) ∼ (62) (현행과 같음)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(현행과 같음)

감귤	1.0

(64) ∼ (67) (현행과 같음)

(68) 싸이할로쓰린(Cyhalothrin)

(현행과 같음)

감귤	0.5

(69) ∼ (80) (현행과 같음)

(81) 에세폰(Ethephon)

(현행과 같음)

감귤	0.5

(82) 에치오펜카브(Ethiofencarb)

(현행과 같음)

감귤	5.0

(83) ∼ (95) (현행과 같음)

(96) 옥사밀(Oxamyl)

(현행과 같음)

감귤	5.0

(97) (현행과 같음)

(98) 올쏘-페닐 페놀(Ortho-Phenyl Phenol(OPP))

(현행과 같음)

감귤	10.0

(99) (현행과 같음)

(100) 이마자릴(Imazalil)

(현행과 같음)

감귤	5.0

(101) ∼ (142) (현행과 같음)

(143) 트리아조포스(Triazophos)

(현행과 같음)

감귤	0.2

(144) ∼ (156) (현행과 같음)

(157) 퍼메쓰린(Permethrin)

(현행과 같음)

감귤	0.5

(158) ∼ (174) (현행과 같음)

(175) 포사론(Phosalone)

(현행과 같음)

감귤	1.0

(176) ∼ (193) (현행과 같음)

(194) 피레쓰린(Pyrethrins)

(현행과 같음)

감귤	1.0

(195) 피리미카브(Pirimicarb)

(현행과 같음)

감귤	0.05

(196) ∼ (214) (현행과 같음)

(215) 피프로닐(Fipronil)

(현행과 같음)

감귤	0.05

(216) ∼ (218) (현행과 같음)

(219) 디아펜치우론(Diafenthiuron)

(현행과 같음)

감귤	0.5

(220) ∼ (233) (현행과 같음)

(234) 펜피록시메이트(Fenpyroximate)

(현행과 같음)

감귤	0.5

(235) ∼ (259) (현행과 같음)

(260) 할펜프록스(Halfenprox)

(현행과 같음)

감귤	1.0

(261) (현행과 같음)

(262) 헥사프루무론(Hexaflumuron)

(현행과 같음)

감귤	0.7

(263) ∼ (293) (현행과 같음)

(294) 터부틸라진(Terbuthylazine)

(현행과 같음)

감귤	0.1

(295) ∼ (297) (현행과 같음)

(298) 티아조피르(Thiazopyr)

(현행과 같음)

감귤	0.05

(299) ∼ (314) (현행과 같음)

(315) 피리미디펜(Pyrimidifen)

(현행과 같음)

감귤	0.2

(316) ∼ (414) (현행과 같음)

(415) 크로마페노자이드(Chromafenozide)

(현행과 같음)

감귤	2.0

(416) ∼ (439) (현행과 같음)

[별표 5] (현행과 같음)

[별표 6] 축산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (22) (현행과 같음)

<삭   제>

(23) ∼ (82) (현행과 같음)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (51) (현행과 같음)

(52) 아미트라즈(Amitraz) :         살충제

(현행과 같음)

소근육	0.05

소간	0.2

소신장	0.2

소지방	0.2

돼지근육	0.05

돼지간	0.2

돼지신장	0.2

돼지지방	0.4

양근육	0.05

양간	0.1

양신장	0.2

양지방	0.4

유	0.01

(53) ∼ (124) (현행과 같음)